CN106434440B - 一株辣椒溶杆菌zst1-2及其应用 - Google Patents

一株辣椒溶杆菌zst1-2及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明具体涉及一株辣椒溶杆菌ZST1‑2及其应用；该辣椒溶杆菌ZST1‑2可制成水剂或可湿性粉剂，作用于十字花科植物或烟草上，用于防治十字花科根肿病和烟草黑胫病病害。

Description

一株辣椒溶杆菌ZST1-2及其应用
技术领域
本发明涉及生防菌剂技术领域，具体涉及一株辣椒溶杆菌ZST1-2 及其应用。
背景技术
十字花科根肿病是由原生生物界芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicaeWoron)侵染引起的世界范围内的土传病害。具有传播速度快、途径多、浸染性强和防治困难等特点。近年来，根肿病在我国东北、山东、长江中上游以及西南等地迅速扩大，常年危害面积高达320-400 万hm2，占十字花科作物种植面积的1/3以上。世界范围内每年由根肿病造成的十字花科蔬菜经济损失可达10％-15％。在环境条件适合时，可对十字花科作物产量造成严重影响，甚至绝收。目前，根肿病已成为十字花科蔬菜生产中重要的病害，严重影响了十字花科作物产业的发展。
烟草黑胫病(Phytophtora parasitica var.nicotanae Tucker)又称“黑疯”、“黑根”，是世界烟草生产中最重要的土传病害之一。中国于1950 年首次报道了黑胫病的发生，之后遍及全国，在华南、华东、华中和西北的热带、亚热带和温带烟草主产区发病情况较重。烟草黑胫病分布范围广、危害程度重，在很大程度上威胁着我国烟草的生产。烟草黑胫病平均发病率为10％～15％，发病率高的田块可达到75％,发病严重的烟田甚至造成绝收。目前，黑胫病在我国每年发病面积约为 76372hm2，每年造成烟产量损失约2869.26Kg，经济损失达1.3亿元人民币以上。
目前，生产中还没有控制十字花科根肿病和烟草黑胫病的特效化学药剂。如我国目前防治十字花科根肿病的主要药剂为多菌灵、氰霜唑、百菌清等化学药剂；防治烟草黑胫病的主要药剂为甲霜灵系列、乙磷铝及乙磷铝锰锌、敌克松、恶霜灵锰锌、代森锌、福美双、代森锰锌等；这些化学药剂在高效、经济、安全性方面均不够令人满意，同时长期使用该类化学药剂很容易使病原菌产生耐药性，从而引起药效下降。另外，滥用化学农药可导致其在自然界和食物链中长期残留，造成污染环境、破坏生态平衡、威胁人类健康等严重后果。随着科学技术的发展和人民生活水平的提高，农药残留等农产品品质问题和农产品的产量问题已经成为当今我国农业发展的两大主要问题，特别是农药残留的问题已经引起了几乎全体国民的忧患意识。
微生物农药具有对非靶标生物安全、毒副作用小、对环境兼容性好等特点，在控制植物病虫害方面等倍受青睐。特别在人类环保意识增强的今天，采用高效、无毒、安全无残留、使用简便的微生物农药替代目前副作用大的化学农药已逐步成为世界各国的共识。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种生防细菌——辣椒溶杆菌ZST1-2。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
本发明提供了一株辣椒溶杆菌ZST1-2，所述辣椒溶杆菌ZST1-2 保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号中国科学院微生物研究所， 保藏号为 CGMCC NO.12228，保藏时间为2016年03月21日。
进一步的，本发明所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，可制成水剂或可湿性粉剂中的其中一种。
进一步的，所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，使用方法为喷雾、灌根、浸种中的其中一种。
进一步的，所述的辣椒溶杆菌ZST1-2水剂，其制备方法包括如下步骤：
(1)菌种培养
a.试管种培养：将NA培养基放入试管中，用蒸馏水补足到1000mL，灭菌，做成斜面，接种辣椒溶杆菌ZST1-2菌株，26℃培养 24-48h；
所述NA培养基的配制方法为：葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，琼脂粉17g，用蒸馏水补足到1000mL，121℃灭菌30min；
b.菌种摇床扩大培养：将斜面种子接种茄瓶斜面NA培养基上， 26℃下培养24-48h，获得茄瓶种子；
(2)发酵
a.种子悬浮液的制备：用灭菌水洗下茄瓶斜面上的菌苔，得到种子悬浮液；
b.接种：将种子悬浮液通过接种口，利用压差接入发酵罐培养基上；
所述发酵罐培养基的配制方法为：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸镁1.5％，磷酸氢二钾1.5％，甘油10％，用蒸馏水补足到 1000mL，灭菌前pH 8.0，121℃灭菌30min；
c.液体发酵：在接种到发酵罐培养基后，培养36-48h。
进一步的，所述步骤(2)中在接种时，发酵罐培养基的罐温为 25-32℃，罐压为0.5kg/cm2，罐内搅拌速度为200r/min。
进一步的，所述步骤(2)中在利用反差接入发酵罐培养基过程中，罐压不超过1.5kg/cm2。
本发明所述的生防菌剂辣椒溶杆菌ZST1-2具有以下形态和生理生化特征：
辣椒溶杆菌ZST1-2菌落为圆形，呈不透明稀液状，有滑移性，培养初期为淡黄色，培养后期菌落产生黄色色素，菌体成短杆状，两端钝圆、无鞭毛、单生。
革兰氏染色阴性，氧化酶和过氧化氢酶阳性，硝酸盐不还原，明胶液化、淀粉和吐温80不水解，吲哚和精氨酸双水解酶和脲酶阴性。能利用用葡萄糖产酸，可水解酪蛋白；常规和Biolog生理生化特征：能利用D-麦芽糖、D-海藻糖、龙胆二糖、D-纤维二糖、水苏糖、α-D- 乳糖、蜜二糖、D-水杨苷、N-乙酰-D-葡萄糖胺、α-D-葡糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖、乳酸钠、醋竹桃霉素、利福霉素SV、明胶、 E-氨基乙酰-L-脯氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-丝氨酸、林肯霉素、四唑紫、四唑兰、柠檬酸、α-酮-戊二酸、L-苹果酸、溴-丁二酸、吐温40、β-羟基-D,L丁酸、乙酰乙酸、乙酸；不能利用蜜三糖、N-乙酰 -β-D-甘露糖胺、N-乙酰神经氨酸、梭链孢酸、D-丝氨酸、D-山梨酸、 D-甘露醇、D-阿拉伯醇、L-半乳糖醛酸内酯、D-葡糖酸、奎宁酸、糖质酸、万古霉素、P-羟基-苯乙酸、L-乳酸、D-苹果酸、γ-氨基-丁酸等。
本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的生防菌剂抑菌谱广、抑菌能力强，可在十字花科作物、烟草、辣椒和黄豆等作物的根际长时间定殖，辣椒溶杆菌 ZST1-2的菌株或代谢产物对十字花科根肿病和烟草黑胫病病害具有明显、稳定的防病效果，对十字花科根肿病的相对防治效果达到51.75- 54.14％；对烟草黑胫病的相对防治效果达到56.25％-58.44％。此外，对辣椒疫霉菌、三七疫霉菌、稻瘟病菌、立枯丝核菌和尖孢镰刀菌引起的根腐病也有较好的抑菌效果。
(2)本发明提供的辣椒溶杆菌ZST1-2属于植物根围促生菌(Plant growth-promoting rhizobacteria，简称PGPR)，对病原菌有拮抗作用，对十字花科作物和烟草等有很好的促生作用。PGPR的主要作用机理是：(1)PGPR菌可以分泌植物促生类物质，如植物激素、维生素、氨基酸、其它活性有机小分子及衍生物等，从而促进作物的生长。(2) PGPR菌具有减轻、降低许多作物病害发生的作用。PGPR的生物病害调控机制主要是能够产生胞外酶、溶菌酶、几丁质及其它次生代谢物来抑制病原菌的休眠孢子或游动孢子萌发。
(3)辣椒溶杆菌ZST1-2可以在无副作用的前提下与其他的杀真菌或杀细菌农药、植物生长调节剂混合使用。
(4)辣椒溶杆菌ZST1-2不仅活菌控病、促生效果较好，其代谢产物粗提物的离体抑菌效果也较突出，该菌株综合性状较好，易于工业化生产。
本发明提供的辣椒溶杆菌ZST1-2对十字花科根肿病和烟草黑胫病病害的防病效果显著，且无毒无残留，使用更安全，有助于减少化学药剂在农产品中的使用量和残留量，降低生产成本。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
辣椒溶杆菌ZST1-2水剂的制备
(1)分离菌种：从云南省曲靖市富源县中安镇的紫马铃薯根际土上分离出辣椒溶杆菌ZST1-2，辣椒溶杆菌ZST1-2保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.12228，保藏时间为2016年03月21日。
(2)菌种培养
a.试管种培养(以下均为重量百分比)：
将NA培养基(蛋白胨5g，蔗糖10g，酵母粉1g，牛肉浸膏3g，琼脂17-20g)放入试管中，用蒸馏水补足到1000mL，灭菌，做成斜面，接种辣椒溶杆菌ZST1-2菌株，26℃培养24h。
b.菌种摇床扩大培养：
将上述步骤中获得的种子接种茄瓶斜面培养基上(培养基为NA 培养基，其配方与前述试管种培养相同)，26℃培养48h，获得茄瓶种子；
(3)发酵：
具体发酵生产过程如下：
a.种子悬浮液的制备：用灭菌水洗下茄瓶斜面上的菌苔，得到种子悬浮液；
b.接种：将种子悬浮液通过接种口，利用压差接入发酵罐(发酵罐的培养基配方为：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸镁1.5％，磷酸氢二钾1.5％，甘油10％，灭菌前pH 8.0；发酵罐的罐温为25-32℃，罐压为0.5kg/cm2，罐内搅拌速度为200r/min)，注意避免污染；升压时罐压不能超过1.5kg/cm2；
c.液体发酵：
发酵罐在接种后，培养36小时，至菌数不再增加，立即放罐，经平板计数测定含菌量，含菌量达180亿CFU/mL；
实施例2：
辣椒溶杆菌ZST1-2可湿性粉剂的制备
(1)制备液体生防菌剂：同实施例1，得发酵液；
(2)添加填充剂：将发酵液压入贮罐，根据以下计算公式加入硅藻土(轻质碳酸钙)作为填充剂，搅拌30min；
填充剂的加入量(公斤)＝[发酵液菌数(亿/毫升)X放罐体积(升) X收率]/成品菌数—发酵液中的残存物(公斤)。然后经、板框压滤、打浆、干燥、粉碎、制成可湿性粉剂，供大田用。
(3)板框过滤：用2kg/cm2的压力，将物料由贮罐压入板框，通过7号滤布过滤，压力随时调节，使滤液中的含菌量不超过0.2亿/毫升，得滤饼和滤液；
(4)打浆：将滤饼卸入打浆罐中，按加入碳酸钙量的8％加入浓乳100号，或按3％加入SDS，加入适量的滤液均匀搅拌30min；
(5)干燥：将浆液置于60℃以下的烘干房内通风干燥至含水量为 5％-8％，得半成品；
(6)粉碎：将半成品进行粉碎，粉碎时出料温度≤60℃；
(7)成品质量指标测定：含菌量、含水量、悬浮率、细度的测定均参照国家企业标准(Q/KWL02-2003)进行，含菌量18亿/克，其余各项指标均符合标准。
实施例3：
辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2对烟草黑胫病的抑菌试验
抑菌试验所用供试试剂和培养基如下：
KB培养基(蛋白胨20g，磷酸氢二钾1.5g，七水硫酸镁1.5g，甘油10mL，蒸馏水1000mL；pH7.0)；
PDA培养基(马铃薯200g，琼脂15g，葡萄糖15g，水1000mL)；
NA培养基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，蔗糖10g，琼脂17g，水1000mL，pH7.0)；
乙酸乙酯、丙酮、甲醇、石油醚等，均为分析纯。
1.辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2的代谢产物对烟草黑胫病的离体抑菌试验
1.1供试病原菌
包括丝核菌(Rhizoctonia solani)、烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica)、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、三七疫霉菌(Phytophthora cactorum)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，以上病原菌由云南农业大学植保学院植物病理试验室提供。
1.2辣椒溶杆菌ZST1-2代谢产物粗提物的制备
在1000mL锥形瓶中装入500mL已灭菌的KB液体培养基，然后接种辣椒溶杆菌ZST1-2，在26℃条件下培养5天终止发酵。将发酵液离心10min(10000rpm/min)收集上清液，于上清液中加入等体积乙酸乙酯萃取3次，旋转蒸发浓缩，再用乙酸乙酯(或者丙酮、甲醇)洗下蒸馏瓶中的粗提物，获得代谢产物粗提物。
1.3辣椒溶杆菌ZST1-2代谢产物粗提物对病原菌的离体抑菌力测定
采用管碟法，用丙酮将乙酸乙酯提取物稀释至5000μg/mL。在各浓度下重复3次试验，测量抑菌圈大小，取平均值。
1.4试验结果与分析
试验结果见表1。
表1 不同浓度粗提物对不同病原真菌生长抑制效果测定(菌落平均直径)
注：菌落平均直径为接种后第5天观察结果。
由表1可知，辣椒溶杆菌菌株ZST1-2代谢产物粗提物对6种真菌都有明显的抑制作用，对烟草黑胫病的抑制效果最强，在浓度为 2mg/mL时，抑菌圈直径达到2.8cm，在浓度为0.25mg/mL时，抑菌直径仍大于1cm；对丝核菌的抑制作用次之，在浓度为2mg/mL时，抑菌圈直径为2.2cm，在浓度为0.25mg/mL时，抑菌直径仍大于0.5cm；对尖镰孢菌、三七疫霉菌和辣椒疫霉菌的抑制作用中等，在浓度为 2mg/mL时，抑菌圈直径为1.3-1.4cm，在浓度为0.25mg/mL时，抑菌直径为0.3-0.5cm；对稻瘟病菌的抑制作用较差，在浓度为2mg/mL时，在浓度为2mg/mL时，抑菌圈直径为1.5cm，在浓度为0.25mg/mL时，无抑菌作用。
2.辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2对烟草黑胫病的盆栽防效试验
2.1供试作物：曲靖二号烟草
2.2防治对象：烟草黑胫病
2.3试验地点：云南省昆明市云南农业大学植保学院温室
2.4病原菌和生防菌剂的制备
烟草黑胫病菌悬液的制备：将在燕麦培养基上长势较好的新生烟草疫霉菌菌丝切块(2×2mm)，取8-10块移入10％V8培养液(V8果汁100g，CaCO3 3.0g，加蒸馏水定容至1000mL)中，在25℃下、黑暗培养2-3天，使其产生大量孢子囊。将产生有大量孢子囊的菌丝块放入装有10mL左右自来水的培养皿中，置于5-10℃冰箱中放置10-15 分钟，取出室温静置30分钟，随即便会有大量游动孢子产生，将孢子浓度稀释成为3×108/mL的孢子悬浮液，供接种用。
生防菌剂的制备：将辣椒溶杆菌ZST1-2接种于装有500mL KB液体培养基三角瓶中，在摇床中(26℃，160rpm)振荡培养3d，用分光光度计在600nm波长下调OD值到0.5，菌悬液浓度相当于 3X108CFU/mL。
2.5接种方法：
在烟草植株6-8叶期或团棵前期进行黑胫病菌接种，每株于植株茎基部接种0.1mL孢子悬浮液，在28℃，相对湿度80％-90％下培养，接种病原菌的同时，将制备好的生防菌剂一同施入，以空白培养液作为空白对照。并于3天和6天后再灌2次生防菌菌悬液。于接种病原菌后20天进行病情调查，记录烟草黑胫病的发病等级，统计生防菌对烟草黑胫防效及病情指数，计算并分析结果。
烟草黑胫病病情分级标准如下：
0级：全株无病。
1级：茎部病斑不超过茎围的1/2，或1/2以下叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑。
2级：茎部病斑超过茎围的1/2，或1/2以上叶片凋萎。
3级：茎部病斑环绕茎围，或2/3以上凋萎。
4级：病株全部叶片凋萎或枯死。
病情指数％＝[∑(病级×该级病株数)/总株数×最高病级数值]×100
相对防效＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数× 100％
2.6试验结果与分析
试验结果见表2。
表2 温室生防菌ZST1-2盆栽测试结果(20d)
从表2可知：施用生防菌ZST1-2生物制剂对烟草黑胫病防治效果明显，防治效果达58.44％。与对照及生产中常用的防治该病害的农药甲霜灵相比，施用生物制剂ZST1-2的各个处理的发病率和病情指数都有显著降低，该生物制剂的防效显著，显示了该菌株潜在的应用开发前景。
3.辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2对烟草黑胫病的田间控病试验
3.1供试作物：曲靖二号烟草
3.2防治对象：烟草黑胫病
3.3试验地点：云南省曲靖市马龙县马过河乡烟草试验田(该试验田肥力中等，小区为单行区，面积60平方米，每处理设3个重复，随机排列，共9各小区，四周设保护行，按烟草栽培措施规范化管理)
3.4病原菌和生防菌剂的制备
同2.4。
3.5接种方法：
同2.5。
3.6试验结果与分析
试验结果见表3。
表3 马龙县试验田生防菌ZST1-2测试结果(20d)
由表3可知：施用生防菌ZST1-2生物制剂对烟草黑胫病防治效果明显，防治效果达56.25％。与对照及生产中常用的防治该病害的农药甲霜灵相比，施用生物制剂ZST1-2的各个处理的发病率和病情指数都有减轻。
将三次防效试验结合，都说明生物制剂ZST1-2对烟草黑胫病有很好的防治效果，并且此防效试验具有可重复性。以上田间试验，进一步说明该生物试剂ZST1-2对烟草黑胫病具有稳定、较好的防治效果，也具备了生产上大量推广的基本条件。
实施例4：
辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2对十字花科蔬菜(白菜)根肿病的抑菌试验
影响试验所用供试试剂和培养基如下：
KB培养基(蛋白胨20g，磷酸氢二钾1.5g，七水硫酸镁1.5g，甘油10mL，蒸馏水1000mL；pH7.0)；
PDA培养基(马铃薯200g，琼脂15g，葡萄糖15g，水1000mL)；
NA培养基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，蔗糖10g，琼脂17g，水1000mL，pH7.0)；
乙酸乙酯、丙酮、甲醇、石油醚等，均为分析纯。
1.辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2的代谢物对根肿病孢子萌发的影响试验
1.1供试病原菌：根肿菌(Plasmodiophora brassicae Woron)
1.2白菜根肿病孢子悬浮液和生防菌剂代谢产物粗提物的制备
白菜根肿病孢子悬浮液的制备：称取30g病组织，切碎，加蒸馏水于搅碎机内搅成匀浆，8层纱布过滤。滤液置于50mL离心管中，500 rpm离心5min。取上清，转入另外一支新灭菌的50mL离心管中，4000 rpm离心10min。去上清，向沉淀中加入5mL 50％蔗糖，震荡混匀，2000rpm离心10min。轻轻吸取上清，转移至另一支50mL离心管中，加入20mL灭菌蒸馏水，震荡混匀后4000rpm离心10min。去上清，30mL 灭菌蒸馏水重新悬浮沉淀，4000rpm离心10min。去上清，沉淀溶于 5mLddH2O。即为白菜根肿菌休眠孢子。
生防菌剂代谢产物粗提物的制备：在装500mL已灭菌的KB液体培养基的1000mL锥形瓶中接种辣椒溶杆菌ZST1-2，在26℃条件下培养5天终止发酵。将发酵液离心10min(10000rpm/min)收集上清液，于上清液中加入等体积乙酸乙酯萃取3次。旋转蒸发浓缩，再用乙酸乙酯(或者丙酮、甲醇)洗下蒸馏瓶中的粗提物，获得代谢产物粗提物。
1.3试验方法
分别取0.5mL(108个/mL)休眠孢子和0.5mL辣椒溶杆菌ZST1-2 的发酵液于灭菌的瓶中，以加入培养液为对照，在25℃且黑暗的条件下培养，5d后于光学显微镜下观察休眠孢子的萌发。取10μL处理后的休眠孢子悬浮液，均匀涂抹在载玻片上，自然干燥后滴加1％地衣红染液染色3min，然后用95％的酒精进行冲洗以便除去残余的染液，待其干燥后加10％的甘油作为浮载剂并盖上盖玻片进行观察，显微镜下未萌发的休眠孢子为黑色，已萌发的休眠孢子不着色。
休眠孢子萌发率＝处理后孢子萌发率-处理前孢子萌发率
休眠孢子萌发抑制率＝[(对照组孢子萌发率-处理组孢子萌发率)]/ 对照组孢子萌发率
1.4试验结果与分析
试验结果见表4：
表4 代谢物对根肿病孢子萌发的抑制作用
由表4可知，辣椒溶杆菌菌株ZST1-2对根肿病菌休眠孢子萌发的抑制率很高，达到67.98％。
2.辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)ZST1-2对白菜根肿病的温室盆栽防效试验
2.1供试作物：白菜品种83-1(鲁春白1号)
2.2防治对象：白菜根肿病
2.3试验地点：云南省昆明市云南农业大学植保学院温室
2.4根肿病孢子接种液和生防菌剂的制备
根肿病孢子接种液的制备：取根肿组织搅碎，8层纱布过滤后离心，先2000r/min离心5min，弃上清液，沉淀用蒸馏水悬浮后再4000r/min 离心10min，2次重复。弃上清液，用蒸馏水悬浮沉淀物，将悬浮液的孢子浓度调至1×107个孢子/mL，4℃保存备用。
生防菌剂的制备：将辣椒溶杆菌ZST1-2接种于装有500mLKB液体培养基三角瓶中，在摇床中(26℃，160rpm)振荡培养3d，菌悬液浓度调至1X107CFU/mL。
2.5接种方法：
使用播种基质用消毒干净的培养土按普通土壤：草炭∶蛭石∶珍珠岩＝1V∶2V∶1V∶1V配制，采用(90×210mm)培养盆，每盆5穴，每穴3粒种子，每个处理6盆。出苗后1周接种根肿病孢子悬浮液(浓度为1×107个孢子/mL)，每穴10mL。12h后将辣椒溶杆菌ZST1-2 培养液(浓度1×107cfu/mL)浇灌在白菜根部，每棵10mL，之后于第7 天和第14天再浇灌两次ZST1-2培养液。于播种后45d进行病情调查。
白菜根肿病病情分级标准如下：
0级：根部无肿瘤；
1级：侧根有小肿瘤；
3级：主根肿大，其直径小于2倍茎基部；
5级：主根肿大，其直径是茎基部的2-3倍；
7级：主根肿大，其直径是茎基部的3-4倍；
9级：主根肿大，其直径是茎基部的4倍以上后肿大的根部出现变黑。
病情指数＝Σ(各级病株数×相对级数值)×100/(调查总株数×最高级数值)
相对防效＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数× 100％
2.6试验结果与分析
试验结果见表5：
表5 辣椒溶杆菌对根肿病的防效
由表5温室试验表明辣椒溶杆菌ZST1-2的病情指数显著低于对照，辣椒溶杆菌ZST1-2的相对防效高达54.14％，因此，辣椒溶杆菌 ZST1-2可有效防治白菜根肿病。
此外，辣椒溶杆菌ZST1-2对辣椒疫霉菌、三七疫霉菌、稻瘟病菌、立枯丝核菌和尖孢镰刀菌引起的根腐病也有较好的抑菌效果。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一株辣椒溶杆菌ZST1-2，其特征在于，所述辣椒溶杆菌ZST1-2保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.12228，保藏时间为2016年03月21日。
2.如权利要求1所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，其特征在于，可制成水剂或可湿性粉剂中的其中一种。
3.如权利要求1所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，其特征在于，使用方法为喷雾、灌根、浸种中的其中一种。
4.如权利要求2所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，其特征在于，其水剂的制备方法包括如下步骤：
(1)菌种培养
a.试管种菌培养：将NA培养基放入试管中，灭菌，做成斜面，接种辣椒溶杆菌ZST1-2菌株，26℃培养24-48h；
所述NA培养基的配制方法为：葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，琼脂粉17g，用蒸馏水补足到1000mL，121℃灭菌30min；
b.菌种摇床扩大培养：将斜面种子接种茄瓶斜面NA培养基上，26℃下培养24-48h，获得茄瓶种子；
(2)发酵
a.种子悬浮液的制备：用灭菌水洗下茄瓶斜面上的菌苔，得到种子悬浮液；
b.接种：将种子悬浮液通过接种口，利用压差接入发酵罐培养基上；
所述发酵罐培养基的配制方法为：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸镁1.5％，磷酸氢二钾1.5％，甘油10％，用蒸馏水补足到1000mL，灭菌前pH 8.0，121℃灭菌30min；
c.液体发酵：在接种到发酵罐培养基后，培养36-48h。
5.如权利要求4所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，其特征在于，水剂的制备方法中所述步骤(2)中在接种时，发酵罐培养基的罐温为25-32℃，罐压为0.5kg/cm2，罐内搅拌速度为200r/min。
6.如权利要求4所述的辣椒溶杆菌ZST1-2，其特征在于，水剂的制备方法中所述步骤(2)中在利用反差接入发酵罐培养基过程中，罐压不超过1.5kg/cm2。
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