CN106420768B - 赪酮甾醇作为p-糖蛋白抑制剂的应用 - Google Patents
赪酮甾醇作为p-糖蛋白抑制剂的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106420768B CN106420768B CN201510496667.XA CN201510496667A CN106420768B CN 106420768 B CN106420768 B CN 106420768B CN 201510496667 A CN201510496667 A CN 201510496667A CN 106420768 B CN106420768 B CN 106420768B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cheng
- glycoprotein
- ketone sterol
- sterol
- ketone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了赪酮甾醇作为P‑糖蛋白抑制剂的应用。体外试验发现,赪酮甾醇可显著增加P糖蛋白高表达HEK293细胞中P糖蛋白底物罗丹明B的摄取,且效果与经典P糖蛋白抑制剂维拉帕米效果相当,但不影响正常HEK293细胞中P糖蛋白底物秋水仙碱的摄取,毒性研究显示,赪酮甾醇的毒性很小,不影响HEK293细胞的增殖,也不抑制正常细胞的P糖蛋白功能,因此,赪酮甾醇可用于制备抑制P糖蛋白活性的药物。
Description
技术领域
本发明涉及赪酮甾醇新的药物用途。
背景技术
癌症患者药物化疗仍是目前治疗癌症的重要手段,然而肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药是肿瘤治疗的主要障碍,多药耐药性产生主要机制是具有药物外排功能的P-糖蛋白过量表达,因此通过应用P-糖蛋白抑制剂逆转多药耐药,提高抗癌药物的生物利用度是近年来抗肿瘤药物研究的热点。
目前报道的三代P-糖蛋白抑制剂均因毒性和其他问题而限制了其临床使用,近年来科研人员致力于从天然草本类成分中寻找新的P-糖蛋白抑制剂,特别是大量应用于日常饮食中的草药成分,其安全性得到了肯定。(参见Varma,M.,Ashokraj,Y.,Dey,C.S.,andPanchagnula,R.P-glycoprotein inhibitors and their screening:a perspectivefrom bioavailability enhancement.Pharmacol[J].Res.,48:347-359,2003.和Huang,J.,Si,L.,Jiang,L.,Fan,Z.,Qiu,J.,and Li,G.Effect of pluronic F68blockcopolymer on P-glycoprotein transport and CYP3A4metabolism[J].Int J Pharm,356:351-353,2008.)。
赪酮甾醇是一种植物甾醇,植物甾醇是植物体内的天然活性成分,毒性研究表明其没有明显毒副作用,且近年来欧盟欧盟食品科学委员会(SCF)、美国食品药物管理局(FDA)和中国卫生部均将植物甾醇列为食品或功能性食品添加剂。(参见张志旭,昌超,刘东波.天然植物甾醇的来源、功效及提取研究进展[J].食品与机械,2014,30(5):288-298)。
发明内容
本发明的目的是公开赪酮甾醇作为P-糖蛋白抑制剂的应用。
体外试验发现,赪酮甾醇可显著增加P糖蛋白高表达HEK293细胞中P糖蛋白底物罗丹明B的摄取,且效果与经典P糖蛋白抑制剂维拉帕米效果相当,但显著降低正常HEK293细胞中P糖蛋白底物秋水仙碱的摄取,而维拉帕米对正常细胞中秋水仙碱的摄取有显著增加作用,可见与维拉帕米比较,赪酮甾醇具有选择性抑制高表达P-糖蛋白细胞的P-糖蛋白的功能;而对正常细胞中P-糖蛋白的功能有促进(增强其解毒功能)的优势。
毒性研究显示,赪酮甾醇的毒性很小,不影响HEK293细胞的增殖,因此,赪酮甾醇可用于制备抑制P糖蛋白活性的药物;
所述的赪酮甾醇,其化学结构式如下:
本发明还涉及一种药物组合物,包括治疗有效量的赪酮甾醇和医药学上可接受的载体,所述载体如淀粉、乳糖,羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素或乙基纤维素等药用辅料。
本发明所说的药物组合物可以单独,在抗癌剂的给药之前或之后,或与抗癌剂结合给药。
所述的药物组合物为注射液、口服液或者是片剂、胶囊、滴丸等剂型;
所述的赪酮甾醇可通过口服或注射途径施加于需要治疗的患者,使用剂量一般为0.1-50mg/体重天,具体可根据患者的年龄病情由医师决定。
其理化性能为:白色针状结晶,与硫酸或其它强酸可产生颜色反应;不溶于水、碱和酸,可溶于乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二硫化碳和石油醚等有机溶剂中;既具亲水性又具亲油性使得它具有调节和控制反相膜流动性的能力,具有良好的抗氧化、抗腐败作用。
本发明的有益效果是:
与传统P糖蛋白抑制剂相比,赪桐甾醇毒性很小,不影响HEK293细胞的增殖,与维拉帕米比较,赪酮甾醇具有选择性抑制高表达P-糖蛋白细胞的P-糖蛋白的功能;而对正常细胞中P-糖蛋白的功能无明显影响。
具体实施方式
实施例1
赪酮甾醇的制备
1.药材的提取
醋柴胡10kg,置于提取锅中,加体积浓度为80%乙醇的50克,浸泡0.5h后,煎煮2h,滤过,滤渣加体积浓度为80%乙醇,继续煎煮2h,滤过,如此重复,共煎煮三次,合并三次所得滤液。滤液用旋转蒸发器减压浓缩成浸膏,置冰箱备用。
2.乙酸乙酯部位的提取
将醋柴胡浓浸膏,置5000ml锥形瓶中,加入2500克乙酸乙酯,用力振摇,静置沉淀,取上层溶液,在旋转蒸发仪上浓缩,回收乙酸乙酯。重复上述程序至沉淀不再溶解。得到乙酸乙酯部位的浓浸膏。
3.硅胶色谱柱分离
硅胶粒径:160-200目;
硅胶质量/浸膏质量=1.8:1;
石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,收集石油醚-乙酸乙酯(10:1)洗脱部位,静置,析出结晶(主要含赪酮甾醇)。
4.重结晶
析出的结晶,用乙酸乙酯溶解,并在常温下让溶剂挥发,让其析出结晶。用石油醚洗涤晶体,抽气过滤得到较纯的白色针状晶体即为赪酮甾醇。
实施例2
赪酮甾醇对正常HEK293细胞摄取秋水仙碱活性影响研究
秋水仙碱为Pgp和MRP1共有底物,为排除MRP1的干扰;研究醋柴胡对HEK293细胞摄取秋水仙碱的影响时,加入MRP1抑制剂MK571与赪酮甾醇共孵育。HEK293细胞接种于六孔板中,于对数生长期时加入赪酮甾醇(50μg·mL-1)与MK571(50μmol·L-1)共同培养;细胞经药物处理48h后,移除药液,PBS清洗1次;后加入秋水仙碱(50μmol·L-1)与细胞共孵育60min。随后收集细胞,PBS清洗3次,加入超纯水重悬细胞,-80℃冻融裂解;15000g离心15min,移取上清,保存于-80℃冰箱备用。以上所有操作除特定条件外,均在冰浴中进行。每一实验重复3次。
培养基的组分和含量如下:
DMEM高糖培养基 89%
胎牛血清{FBS} 10%
青-链霉素双抗 1%
精密吸取样品175μl,再加入三倍量的甲醇涡旋混匀,经15000rpm离心15min后,吸取上清液于一新EP管中,挥干,再用175μl流动相复溶,15000rpm离心15min,取上清液进样于高效液相色谱仪进行定量分析。Diamonsil C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(55:45),流速为1mL/min,柱温为25℃,检测波长为353nm,进样量为25μl。
结果见表1
表1赪酮甾醇对HEK293细胞摄取秋水仙碱的影响(n=3)
注:*表示与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.05;**表示与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.01。结果显示赪桐甾醇促进正常细胞P糖蛋白的外排作用,有利于正常细胞的保护.
实施例3
赪酮甾醇对Pgp高表达HEK293(HEK293-Pgp)细胞摄取秋水仙碱活性影响研究
实验分为空白组(正常细胞)、对照组(Pgp高表达细胞)、赪酮甾醇组和维拉帕米组。hPgp-HEK293细胞接种于六孔板中,于对数生长期时加入赪酮甾醇处理24h后,移除药液,PBS清洗1次,随后加入罗丹明B(200nmol·L-1),与细胞避光孵育30min;收集细胞于样品管中,PBS清洗并重悬细胞;于流式细胞仪检测hPgp-HEK293细胞上RB的相对荧光强度(检测细胞数固定为10000个细胞)。实验重复3次。
结果见表2
表1赪酮甾醇对HEK293-Pgp细胞摄取秋水仙碱的影响(n=3)
注:*表示与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.05;**表示与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.01,结果提示赪桐甾醇对于可显著增加P糖蛋白过表达细胞中抗肿瘤药物的摄取,其强度甚至稍高于传统P糖蛋白抑制剂维拉帕米.
实施例4
片剂:
赪酮甾醇 200克
淀粉 300克
硬脂酸镁 5克
将上述的组分混合,采用本领域公知的方法制备成为片剂。
实施例5
赪桐甾醇 300克
乳糖 200克
羧甲基纤维素钠 5克
将上述组分混合,采用本领域公知的方法制备为胶囊剂
实施例6
赪桐甾醇 5克
注射用水 500克
吐温-80 2g
将上述组分混合,采用本领域公知的方法制备为注射剂
实施例7
赪桐甾醇 100克
聚乙二醇6000 400克
将上述组分混合,采用本领域公知的方法制备成滴丸剂
实施例8
赪桐甾醇 40克
蒸馏水 500克
吐温80 20克
将上述组分混合,采用本领域公知的方法制备成口服液。
Claims (5)
1.赪酮甾醇(C29H48O)在制备P-糖蛋白抑制剂中的应用,所述P-糖蛋白抑制剂用于逆转抗癌剂的多药耐药,提高抗癌剂的生物利用度。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所说的抑制剂单独,在抗癌剂的给药之前或之后,或与抗癌剂结合给药。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的赪酮甾醇通过口服途径施加于需要治疗的患者,使用剂量一般为5-200mg/天。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的P-糖蛋白抑制剂包括治疗有效量的赪酮甾醇(C29H48O)和药学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,为注射液、口服液或者是片剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510496667.XA CN106420768B (zh) | 2015-08-13 | 2015-08-13 | 赪酮甾醇作为p-糖蛋白抑制剂的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510496667.XA CN106420768B (zh) | 2015-08-13 | 2015-08-13 | 赪酮甾醇作为p-糖蛋白抑制剂的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106420768A CN106420768A (zh) | 2017-02-22 |
CN106420768B true CN106420768B (zh) | 2018-12-28 |
Family
ID=58092896
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510496667.XA Active CN106420768B (zh) | 2015-08-13 | 2015-08-13 | 赪酮甾醇作为p-糖蛋白抑制剂的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106420768B (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1874780A (zh) * | 2003-09-26 | 2006-12-06 | 福布斯梅迪泰克公司 | 抑制多抗药性基因表达并抑制由该基因表达导致的蛋白质产生从而提高化学治疗剂治疗癌症有效性的方法 |
CN104000835A (zh) * | 2013-02-26 | 2014-08-27 | 广东省中医院 | P糖蛋白抑制剂 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100098755A1 (en) * | 2008-10-22 | 2010-04-22 | Forbes Medi-Tech Inc. | Process of producing directly compressed tablets of sterols and/or stanols |
-
2015
- 2015-08-13 CN CN201510496667.XA patent/CN106420768B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1874780A (zh) * | 2003-09-26 | 2006-12-06 | 福布斯梅迪泰克公司 | 抑制多抗药性基因表达并抑制由该基因表达导致的蛋白质产生从而提高化学治疗剂治疗癌症有效性的方法 |
CN104000835A (zh) * | 2013-02-26 | 2014-08-27 | 广东省中医院 | P糖蛋白抑制剂 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
P-糖蛋白抑制剂的研究进展;康恺 等;《药学进展》;20041231;第28卷(第9期);405-408 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106420768A (zh) | 2017-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102977114B (zh) | 桑黄中单体成分-纤孔菌素a及其制备方法和应用 | |
Ju et al. | Chemical constituents of Cyperus rotundus L. and their inhibitory effects on uterine fibroids | |
CN101791365A (zh) | 穿龙薯蓣提取物及其在制备抗自由基、降血脂药物中的应用 | |
CN104370871B (zh) | 从紫红獐牙菜中分离的口山酮类及抑制乙型肝炎病毒的应用 | |
CN104622865A (zh) | 巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN103599144B (zh) | 蜘蛛香环氧环烯醚萜酯有效部位的制备方法 | |
CN104873570B (zh) | 一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法及其应用 | |
CN108125993B (zh) | 一种能逆转肿瘤多药耐药性的茯苓提取物的制备 | |
CN103356736B (zh) | 一种具有抗肿瘤作用的化香果多酚提取物及其制备方法 | |
CN101028322B (zh) | 毛裂蜂斗菜提取物用于制备防治肿瘤疾病药物的用途 | |
CN104926773B (zh) | 皂角刺中黄烷酮骨架类化合物的提取方法及化合物的应用 | |
CN106420768B (zh) | 赪酮甾醇作为p-糖蛋白抑制剂的应用 | |
CN102030813B (zh) | 一种具有高效抗癌活性的黄姜盾叶新苷的制备方法及其用途 | |
CN108452009A (zh) | 一种包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物在制备治疗肝癌的药物中的应用 | |
CN109867649B (zh) | 一种双黄酮类化合物及其制备方法与应用 | |
Yang et al. | Study onin vitro anti-tumor activity of Bidens bipinnata L. extract | |
CN103610682B (zh) | 3α-羟基-30-齐墩果-12,20(29)-二烯-28-酸的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN106749124B (zh) | 具有抗肿瘤活性的邻双四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物及其制备方法与应用 | |
CN102764320B (zh) | 山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用 | |
CN106543117B (zh) | 具有抗肿瘤活性的间双四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物及其制备方法与应用 | |
Duan et al. | Study on the inhibitory effect of Radix Semiaquilegiae extract on human hepatoma HepG-2 and SMMC-7721 cells | |
CN108452008A (zh) | 一种包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物在制备抑制肝癌术后复发的药物中的应用 | |
CN108164574B (zh) | 小花清风藤中的一种化合物及其制备方法与应用 | |
CN102670698B (zh) | 千斤拔提取物在制备防治糖尿病药物中的应用 | |
CN102028722A (zh) | 翼首草总皂苷有效部位提取物及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |