CN106389533A - 一种治疗帕金森症的药物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗帕金森症的药物。由0.3份～99.7重量份的工业大麻火麻仁提取物和99.7份～0.3重量份的工业大麻火麻素混匀制成。实验证明该药物具有清除自由基、抑制脂质过氧化，使氧自由基产生和清除处于动态平衡中，从而延缓PD的病情进展的作用。在治疗帕金森病方面具有良好的应用前景。

Description

一种治疗帕金森症的药物
技术领域
本发明属于帕金森症治疗药物领域，具体地说是涉及一种以工业大麻为主要原料制备的治疗帕金森症的药物组合物。
背景技术
大麻的种植历史悠久，古代大麻主要用于制作加工绳索、渔网、服装和造纸原料，以及油脂、食品等。随着社会的发展和进步，人们发现大麻中含有一种毒性成分(四氢大麻酚)可使人致幻成瘾，欧美许多国家曾在相当长时期内禁种大麻。由于大麻的经济利用价值高，到20世纪80年代，一些欧洲国家研究培育出了低毒大麻品种并获得推广种植。1990年欧共体率先紧急修订农业政策，废除了禁种大麻的禁令，开始恢复大麻的生产和研究。随后美国、加拿大、澳大利亚等国解除了大麻种植的禁令，全球大麻种植面积和纤维产量有了迅速增长，欧美国家对工业大麻的开发利用再次掀起，国际市场对生态大麻的需求也在迅速增长。根据大麻的经济属性，为充分利用其为人类服务，1988年联合国明确规定不具备提取毒性成分(四氢大麻酚THC)价值或直接作为毒品吸食的，专供工业用途的原料大麻，工业大麻(其生长期大麻花叶中的四氢大麻酚含量小于0.3％)，可以合法进行规模化种植与工业化开发利用。
工业大麻是独具特色、比较优势突出的生物资源。工业大麻与传统有毒大麻具有本质差别，工业大麻是一类无毒化的工业原料产品，具有极高的经济利用价值。到2003年末世界各国先后一共选育出25个工业大麻品种，而且欧盟的法、德、英等七国也都成为工业大麻主要种植生产国，以工业大麻纤维和麻籽及其花、叶、根、茎为原料进行系列产品研发与产业化综合开发，已在工业大麻初级加工主产品麻皮纤维、秆芯纤维、麻籽油脂和籽粕蛋白、药用标准化提取物实现产业化生产的基础上，进一步进行深加工利用，派生出来的产品已达到二万五千种以上，包含了人类的衣、食、住、行、用各大类产品。工业大麻产业的研究、开发和生产主要集中在欧洲、加拿大、美国等技术发达国家。工业大麻产业的发展，首先是从选育无毒或低毒化的工业大麻新品种开始的，并以此为基础实现了规模化的种植和高技术产业化的综合开发利用，形成了一个“新兴绿色产业群”和新型工业经济的快速增长点。
火麻仁为大麻干燥成熟果实，古代通常将火麻仁入药，食疗亦有记载。国家卫生部已将火麻仁纳入“既是药品又是食品”——“药食两用”名单。火麻仁的药性及药理为：甘，平。归脾、胃、大肠经。功能主治：润燥，滑肠，通淋，活血。治肠燥便秘，消渴，热淋，风痹，痢疾。月经不调，疥疮，癣癞。在医书中有详细疗效记载，如《本经》：“补中益气。”；《唐本草》：“主五劳。”；《肘后方》：“治大渴，日食数斗，小便赤涩者：麻子一升，水三升，煮三、四沸，取汁饮之。”；《日华子本草》：“补虚劳，长肌肉，下乳，止消渴，催生。治横逆产。”；《本草拾遗》：“下气，利小便，去风痹皮顽，炒令香捣碎，小便浸取汁服；妇人倒产吞二七枚。”；《食疗本草》：“取汁煮粥，去五脏风、润肺。治关节不通、发落，通血脉。”。
大麻的花叶均供药用。麻叶的药性及药理为：辛；有毒。归肺；膀胱；大肠经。功能主治：止痛，定喘，驱蛔。主治气喘，跌扑疼痛，蛔虫病。麻花的药性及药理为：苦；辛；性温；有毒。功能主治：祛风；活血；生发。主风病肢体麻木；遍身瘙痒；妇女经闭。
随着人类平均寿命的逐年增加，世界正步入全球老龄化时代。与年龄有关的神经退化性疾病也随之增加，在中枢神经系统方面，主要表现为兴奋与抑制过程减弱，大脑功能降低，记忆力减退和丧失，随后出现识别功能的进行性减退和情绪紊乱的加重等。帕金森病(PD)是一种以黑质多巴胺能神经元(NDN)特征性缺失为主要病理改变的神经系统变性疾病，临床上以静止性震颤、肌僵直、运动迟缓和姿势调节障碍为主要特征，其发病率可随年龄的增加而提高。50岁以上为500人/10万，60岁以上则达每年1000人/10万，患病率之高，使之成为仅次于脑血管病的神经系统常见病。帕金森病对患者、家庭和社会都带来巨大的压力，使得全世界对其给予众多的关注，帕金森病的治疗药物研究成为老年医学领域中的一个重要课题。
大麻二酚(CBD)是从大麻花叶中萃取的一种无毒的可用于药品、化妆品、保健食品的一种高附加值的酚类物质。目前，以色列、美国、英国等发达国家已用其做原料并开发出多种特效药品和化妆品。CBD是大麻中的非成瘾性成分，能阻碍THC对人体神经系统影响，并具有抗痉挛、抗风湿性关节炎、抗焦虑等药理活性，亦有在治疗帕金森症方面的报道，但单独使用大麻二酚(CBD)的治疗效果并不理想。因此开发新的活性高，毒副作用小的治疗药物显得非常必要。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种以工业大麻为主要原料制备的治疗帕金森症的药物组合物。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现。
除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。
一种治疗帕金森症的药物，其特征在于，由下述重量份的原料混匀制成：工业大麻火麻仁提取物0.3份～99.7份，工业大麻火麻素99.7份～0.3份。
所述的治疗帕金森症药物的原料组成优选为工业大麻火麻仁提取物40份和工业大麻火麻素60份。
其中，所述的工业大麻火麻仁提取物通过以下方法制备而成：
(1)取成熟的工业大麻火麻仁，经烘干、除杂，粉碎后备用；
(2)在20～85℃条件下，用乙醇对粉碎火麻仁料进行提取，乙醇浓度为95％～100％(V/V)，料液比为1:5～1:20；
(3)滤出浸提液，减压浓缩后即为工业大麻火麻仁提取物。
在用乙醇对工业大麻火麻仁进行提取时，可采用以下多种方式进行：如室温下浸提，每批物料浸提2次，每次7～10天；在60～85℃条件下，加热提取2次，每次1～3小时；超声波辅助提取，超声波频率30～60kHz，功率100～1000W，提取时间30～60min，浸提温度25～50℃；亦可采用微波辅助提取等其它现有技术。
所述的工业大麻火麻素通过以下方法制备而成：
(1)取工业大麻的花、叶、麻糠或三者的混合物，经烘干、除杂、粉碎至10～60目；
(2)超临界二氧化碳萃取：将上述粉碎好的工业大麻原料投入超临界二氧化碳萃取装置中，控制萃取温度40～50℃，萃取时间30～90min，萃取压力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分离釜出口收集萃取物；
(3)萃取物用0.2～10倍体积的95％～100％(V/V)的乙醇洗脱，洗脱次数为1～3次；
(4)收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，粉碎后即得工业大麻火麻素。
所述的工业大麻的花、叶、麻糠三者混合物的优选配比为1:3:2。
普通的麻叶、麻花均具有毒性(含有四氢大麻酚THC—毒品大麻的至幻物质)。为排除原料药的毒性，本发明优选采用云南生长的工业大麻品种——“云麻1号”的花、叶、麻糠和火麻仁作为原料。按我国相关法律文件规定，“云麻1号”只能在云南境内种植，并且其花、叶、麻糠只能在云南境内加工。
本发明的药物组合物可进一步制成不同的药物制剂，包括口服剂和针剂，其中口服剂包括胶囊剂、口服液、片剂、滴丸、颗粒剂等，针剂包括注射液剂型及注射用冻干粉针剂型等。在制备口服制剂时可选用的辅型剂可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂。冻干粉针剂可以通过无菌喷雾干燥、低温真空干燥、冷冻干燥等方法制备。各制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。
本发明的药物组合物具有明确的治疗帕金森症的作用。实验发现，该药物能明显减少6-OHDA制备的PD模型大鼠的旋转次数，并随给药时间的延长，有一定效果增强的趋势；能明显改善MPTP诱导的小鼠PD模型小鼠的转杆活动能力，并增加小鼠的运动。本发明药物可明显降低鼠脑组织的氧化应激水平，使PD模型鼠脑组织MDA含量显著降低，明显提高SOD的活力，表现出明显的抗氧化活性。结果提示该药物的作用机制就是清除自由基、抑制脂质过氧化，使氧自由基产生和清除处于动态平衡中，从而延缓PD的病情进展。故本发明所述的药物具有明确的治疗帕金森作用，效果优于大麻二酚。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定。
实施例1
采用云南生长的工业大麻品种——“云麻1号”的花、叶、麻糠和火麻仁作为原料。取成熟的工业大麻火麻仁，经烘干、除杂，粉碎后备用；用乙醇对粉碎火麻仁料进行提取(在60～85℃条件下，加热提取2次，每次1～3小时)，乙醇浓度为95％～100％(V/V)，料液比为1:5～1:20；滤出浸提液，减压浓缩后即为工业大麻火麻仁提取物。
取工业大麻的花、叶、麻糠1:3:2质量比的混合物，经烘干、除杂、粉碎至10～60目；超临界二氧化碳萃取：将上述粉碎好的工业大麻原料投入超临界二氧化碳萃取装置中，控制萃取温度40～50℃，萃取时间30～90min，萃取压力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分离釜出口收集萃取物；萃取物用0.2～10倍体积的95％～100％(V/V)的乙醇洗脱，洗脱次数为1～3次；收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，粉碎后获得工业大麻火麻素。
取工业大麻火麻仁提取物40份，工业大麻火麻素60份，混匀，得本发明药物B。
实施例2
重复实施例1，有以下不同点：在用乙醇对工业大麻火麻仁进行提取时，室温下浸提，每批物料浸提2次，每次7～10天。取工业大麻的花、叶、麻糠1:1:1质量比的混合物作为工业大麻火麻素的提取原料。
取工业大麻火麻仁提取物0.3份，工业大麻火麻素99.7份，混匀，得本发明药物A。
实施例3
重复实施例1，有以下不同点：在用乙醇对工业大麻火麻仁进行提取时，采用超声波辅助提取，超声波频率30～60kHz，功率100～1000W，提取时间30～60min，浸提温度25～50℃。取工业大麻的花、叶、麻糠3:2:1质量比的混合物作为工业大麻火麻素的提取原料。
取工业大麻火麻仁提取物99.7份，工业大麻火麻素0.3份，混匀，得本发明药物C。
实施例4
取实施例1所得药物100克(过80目筛)，加入60克微晶纤维素，过80目筛三遍，混合均匀，喷入95％乙醇溶液，制软材，过40目筛制粒，60℃干燥半小时，分装于3#胶囊中，铝塑复合包装，制得治疗帕金森症药物胶囊剂。
实施例5
取实施例2所得药物，加入物料量5～20％的干淀粉及1～5％的硬脂酸镁等，经混合，制粒，干燥，压片，制得治疗帕金森症药物片剂。
实施例6
取实施例3所得药物，加入蔗糖水及常规量的防腐剂，稳定剂等辅料。过滤、灭菌，分装入10mL瓶中，制成治疗帕金森症药物口服液。
实施例7
取实施例1所得药物，加入注射用水溶解，加入2.0‰活性炭，搅拌，过滤，继以用0.45μm、0.22μm微孔滤膜分级过滤，补充注射用水，分装于西林瓶中，冷冻干燥，回充高纯度氮气，加塞，压盖，包装，制得治疗帕金森症药物注射液。
应用实施例1本发明对6-羟多巴(6-OHDA)制备的PD大鼠模型的保护作用。
1、6-OHDA损毁大鼠黑质制作帕金森病(PD)模型
选取体重200-250g SD雄性大鼠，10％的水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉后，将大鼠固定于立体定向仪，齿棒低于耳间线水平，使前后囟位于同一水平上，剪去颅顶的鼠毛，碘酒擦拭后，正中切开皮肤，暴露前后囟，纯双氧水擦拭颅骨表面，使前后囟充分显示，用牙科钻在颅骨表面注药点处钻1个约2mm的小孔。调整微量注射器针尖的位置，参照包新民等的《大鼠脑立体定向图谱》，在前囟4.4mm，矢状缝(右)1.3mm，颅骨下8.5mm点注射8μg/4μl含0.2％抗坏血酸的6-OHDA盐溶液。注射速度为0.5μL/min，术毕留针10min后以1mm/min的速度退针，磺胺粉封闭颅孔，缝合头皮，碘酒擦拭缝合处，置笼喂养。毁损术后7天，腹腔注射阿朴吗啡0.5mg/kg诱发大鼠稳定的向毁损对侧作旋转运动，给药10min后观察其行为，记录30min的旋转情况，每分钟旋转次数至少7次以上，被视为达到PD模型要求。
2、抗氧化指标检测——SOD活性和MDA含量测定
鼠断头开颅，取脑组织标本，以滤纸吸干表面残血，去除嗅脑、脑干、小脑。脑组织标本分别置于玻璃匀浆器，用冰生理盐水按质量与体积比为1∶9的比例冰浴下制备成10％的脑组织匀浆，立即放入-30℃冰箱中保存，待测。试验前以考马斯亮蓝法测定脑组织蛋白定量。按试剂盒说明书要求，自复融后脑组织匀浆中取样品采用722型光栅分光光度计分别测定脑组织中SOD活性、MDA含量。
3、本发明对PD模型的治疗作用
(1)大鼠脑室内微量注射6-OHDA前，本发明A、B、C(20mg/kg)，大麻二酚(20mg/kg)，分别灌服给药。分别在给药的7d，14d，21d，28d分别腹腔注射0.5mg/kg阿朴吗啡，观察大鼠向毁损对侧的旋转运动，结果显示本发明能明显减少PD模型大鼠的旋转次数，并随给药时间的延长，有一定效果增强的趋势，且各时间点效果均优于大麻二酚(表1)。
表1本发明对6-OHDA制备的PD大鼠模型的保护作用(n＝10)
注：与模型组比较，*P＜0.05。
(2)在本发明给药14d后，处死5组大鼠，取脑皮层，测定SOD活力和MDA含量，表2显示本发明能明显降低6-OHDA毁损大鼠脑组织的氧化应激水平，本发明使PD模型大鼠脑组织MDA含量显著降低，明显提高SOD的活力，优于大麻二酚，表现出抗氧化活性。
表2本发明对6-OHDA损毁大鼠脑组织MDA水平和SOD活力的影响(n＝10)
组别 例数 MDA(mol/L) SOD(mmol/L)
模型组 10 11.03±3.39 90.12±10.37
大麻二酚组 10 7.95±2.03* 134.56±19.86*
本发明A组 10 5.68±1.35*** 160.18±14.88**
本发明B组 10 4.95±1.12*** 176.43±18.17***
本发明C组 10 6.73±1.68** 150.79±16.56**
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
应用实施例2本发明对MPTP诱导的PD小鼠模型的保护作用
1、皮下注射MPTP诱导C57/BL小鼠PD模型
选取体重25-27g 8w龄雄性C57/BL小鼠随机分为5组，分别为模型组、本发明A组(20mg/kg)、本发明B组(20mg/kg)、本发明C组(20mg/kg)和大麻二酚组(20mg/kg)。对照组和模型组预先给予灌胃生理盐水，给药组给予上述剂量的药物，第8d模型组和各给药组皮下注射MPTP 40mg/kg，给药容量0.1ml/10g，一天一次，连续7天，第15d观察小鼠的行为学指标和进行生化指标检测。
2、行为学检测
(1)自主活动计数参照Kawai H测试方法，自制30cm×30cm×15cm的有机玻璃盒，底部刻出6cm×6cm的格子，在安静、光线较暗的环境中检测。小鼠适应环境10min后，计数5min内小鼠移动的格子数，连续测5次取平均值。
(2)Rotarod检测Rotarod实验需要动物在滚轴上保持平衡并连续运动，是广泛采用的检测运动协调性的实验。C57/BL小鼠末次给药1小时后把小鼠置于旋转的转棒仪上(滚轴直径6cm，转速为13r/min)，使之不断地调整四肢，以保持身体平衡，若从转杆跌落下来即自动记录在转杆的时间(最长检测时间180s，超过者仍记为180s)。
3、抗氧化指标检测——SOD活性和MDA含量测定
鼠断头开颅，取脑组织标本，以滤纸吸干表面残血，去除嗅脑、脑干、小脑。脑组织标本分别置于玻璃匀浆器，用冰生理盐水按质量与体积比为1∶9的比例冰浴下制备成10％的脑组织匀浆，立即放入-30℃冰箱中保存，待测。试验前以考马斯亮蓝法测定脑组织蛋白定量。按试剂盒说明书要求，自复融后脑组织匀浆中取样品采用722型光栅分光光度计分别测定脑组织中SOD活性、MDA含量。
4、本发明对MPTP诱导的PD小鼠模型的保护作用
(1)MPTP使小鼠的转杆时间明显缩短和自发活动时间缩短，而本发明A、B、C(20mg/kg)在给药14d后均能延长小鼠的转杆时间，并增加小鼠的自发活动次数，显示本发明和大麻二酚一样能明显改善PD模型小鼠的转杆活动能力，并增加小鼠的运动，且效果优于大麻二酚(表3、4)。
表3本发明对MPTP诱导的PD小鼠转杆活动能力的影响
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4本发明对MPTP诱导的PD小鼠自发活动的影响
组别 例数 时间(分)
模型组 10 71.93±12.18
大麻二酚组(20mg/kg) 10 111.53±16.28**
本发明A组(20mg/kg) 10 135.11±14.63**
本发明B组(20mg/kg) 10 137.07±15.13**
本发明C组(20mg/kg) 10 130.53±16.48**
注：与模型组比较，**P＜0.01。
(2)在本发明给药14d后，处死5组小鼠，取脑皮层，测定SOD活力和MDA含量，表5显示本发明能明显降低MPTP诱导小鼠脑组织的氧化应激水平，本发明使PD模型小鼠脑组织MDA含量显著降低，明显提高SOD的活力，优于大麻二酚，表现出明显的抗氧化活性。
表5本发明对MPTP诱导的PD模型小鼠脑组织MDA水平和SOD活力的影响
组别 例数 MDA(mol/L) SOD(mmol/L)
模型组 10 8.11±1.63 70.76±12.85
大麻二酚组(20mg/kg) 10 5.05±1.96* 114.87±15.37**
本发明A组(20mg/kg) 10 3.07±0.83** 143.64±10.04**
本发明B组(20mg/kg) 10 2.57±0.79*** 154.18±19.69***
本发明C组(20mg/kg) 10 3.83±1.28** 134.02±11.54**
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.01。

Claims (6)

1.一种治疗帕金森症的药物，其特征在于，由下述重量份的原料混匀制成：工业大麻火麻仁提取物0.3份～99.7份，工业大麻火麻素99.7份～0.3份。
2.根据权利要求1所述的治疗帕金森症的药物，其特征在于：所述药物的原料组成优选为工业大麻火麻仁提取物40份和工业大麻火麻素60份。
3.根据权利要求1所述的治疗帕金森症的药物，其特征在于：所述的工业大麻火麻仁提取物通过以下方法制备而成：
(1)取成熟的工业大麻火麻仁，经烘干、除杂，粉碎后备用；
(2)在20～85℃条件下，用乙醇对粉碎火麻仁料进行提取，乙醇浓度为95％～100％(V/V)，料液比为1∶5～1∶20；
(3)滤出浸提液，减压浓缩后即为工业大麻火麻仁提取物。
4.根据权利要求1所述的治疗帕金森症的药物，其特征在于：所述的工业大麻火麻素通过以下方法制备而成：
(1)取工业大麻的花、叶、麻糠或三者的混合物，经烘干、除杂、粉碎至10～60目；
(2)超临界二氧化碳萃取：将上述粉碎好的工业大麻原料投入超临界二氧化碳萃取装置中，控制萃取温度40～50℃，萃取时间30～90min，萃取压力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分离釜出口收集萃取物；
(3)萃取物用0.2～10倍体积的95％～100％(V/V)的乙醇洗脱，洗脱次数为1～3次；
(4)收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，粉碎后即得工业大麻火麻素。
5.根据权利要求4所述的治疗帕金森症的药物，其特征在于：所述的工业大麻的花、叶、麻糠三者混合物的优选配比为1∶3∶2。
6.根据权利要求1或2或3或4或5所述的治疗帕金森症的药物，其特征在于：所述的工业大麻的品种优选为″云麻1号″。
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