CN106353498A - 辅助诊断乳腺癌的脂质化合物及其相关试剂盒 - Google Patents
辅助诊断乳腺癌的脂质化合物及其相关试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106353498A CN106353498A CN201610724794.5A CN201610724794A CN106353498A CN 106353498 A CN106353498 A CN 106353498A CN 201610724794 A CN201610724794 A CN 201610724794A CN 106353498 A CN106353498 A CN 106353498A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phosphatidylcholines
- lipid
- lpc
- blood plasma
- lyso
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 59
- -1 Lipid compound Chemical class 0.000 title claims abstract description 37
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 21
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 48
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 30
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 14
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 14
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 claims description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 12
- 238000001972 liquid chromatography-electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 claims description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 8
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 8
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical group ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 claims description 5
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 4
- IHNKQIMGVNPMTC-UHFFFAOYSA-N (2-hydroxy-3-octadecanoyloxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C IHNKQIMGVNPMTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 208000011803 breast fibrocystic disease Diseases 0.000 description 9
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 8
- 238000012549 training Methods 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000000107 tumor biomarker Substances 0.000 description 3
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 2
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 208000030270 breast disease Diseases 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000037058 blood plasma level Effects 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004146 energy storage Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 201000005577 familial hyperlipidemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000011227 neoadjuvant chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002545 neutral loss scan Methods 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005186 women's health Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
一种乳腺癌血浆脂质分子标记物、包含该化合物的试剂盒、以及对所述脂质化合物进行定性或定量检测的方法。通过脂质组学鉴定出15个脂质分子的表达差异会影响乳腺癌的发生及发展。所述15个脂质分子的血浆水平与乳腺癌的患病率呈正比，通过测定特定脂质分子的血浆水平能够方便快捷有效地在分子水平上实现对乳腺癌的检测。
Description
技术领域
本发明属于生物标记物体外检测领域，具体涉及一组区分高风险患者与乳腺癌患者的脂类分子标记物，特别是涉及一组辅助诊断乳腺癌的脂质化合物、包含该化合物的试剂盒、以及对所述脂质化合物进行定性或定量检测的方法。
背景技术
乳腺癌(Breast Cancer)是女性中常见并且高度致命的一种的癌症，也是女性癌症死亡的第二大主要原因。据美国癌症协会(American Cancer Society，ACS)估计，2015年有231840例新诊断的乳腺癌患者，占所有新诊断女性癌症患者的29％。此外乳腺癌死亡人数40290例，占女性癌症相关死亡人数的15％，给女性健康造成巨大的威胁。
目前乳腺癌的临床诊断比较复杂，主要包括近红外乳腺扫描、乳腺B超扫描、乳腺X摄片等。而目前乳房X光检查诊断乳腺癌假阳性率很高甚至达到30％，而乳房X光检查后异常的女性患者需要进行额外的昂贵的筛查即磁共振成像以及组织抽样通过细针(通过细针穿刺活检，核心活检，或切除活检)。此外，筛选检查的女性大约有10％还需进行进一步测试，而其中只有5％的女性是真正罹患乳腺恶性肿瘤的人，其他的均为良性。这就给家庭及社会带来不必要的资源浪费，并给患者带来巨大的经济损失及负担。所以良性患者急需一个更好的辅助诊断方法避免不必要的昂贵费用和侵入性检查，寻找乳腺癌相关的标志物已经成为目前研究的热点。
越来越多的医学研究机构重视并开展乳腺癌的病因学及机制研究，而且研究也主要集中在抗肿瘤联合化疗、血液肿瘤标志物等，然而目前研究成果很少应用于临床试验，有限的肿瘤标志物如CA15.3和BR27.29敏感性较低，因此它们还没有被用于乳腺癌的筛查，因此迫切需要一种微创方法筛选有效标准品用于对恶性乳腺病变的早期诊断及预防甚至预后判断。
脂质参与调节许多生理活动，诸如能源存储、结构、细胞凋亡、信号传导等。许多研究报道，脂质是代谢综合征的一个主要组成部分，血脂异常在各种癌症的癌变中起着重要的作用，包括前列腺癌、卵巢癌和肾癌。代谢组学或脂质组学已经表明，脂质具有被用于乳腺癌诊断及追踪的潜力。然而，已有的相关脂质的研究大多数只是集中在癌症患者中脂类的含量与正常人之间的差异研究，其中只有少数研究涉及良性乳房疾病患者，其中杨等人进行的包含良性乳腺疾病患者的血浆脂质图谱的综合评价，只涉及5例乳腺癌病例和6例良性病人，样本量少对问题的研究力度不足。此外单一脂质物种没有良好的诊断效率来区分良性患者与乳腺癌患者。
目前，国内外还没有公开关于用于辅助诊断乳腺癌病的脂质化合物标准品，尤其是一组涉及区分高风险女性与乳腺癌患者的有效的标准品。
发明内容
针对现有技术中的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一组可用于诊断并区分乳腺癌病及高危潜在患者的脂质因子标记物，通过脂质组学研究从数百个血浆参照因子鉴定出与乳腺癌的患病率呈正相关的脂质分子、建立相应的检测方法、并用于乳腺癌的辅助诊断。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：可用于检测乳腺癌病及高危潜在患者的多个脂质化合物作为组合的一组标准品。该标准品涉及一个组合包括15个血浆脂类分子，其中下调的因子：LPC(18：3)，LPC(20：2)，LPC(20：1)，LPC(20：0)，C19：1CE，C19：0CE，C20：0CE；上调的因子：PC(32：1)，PC(34：4)，PC(38：3)，PC(40：5)，PC(40：3)，PC(44：11)，ePC(32：2)，ePC(38：3)。
脂质分析是通过三重四极质谱LC-ESI-MS/MS(API 4000，应用生物系统公司，福斯特市，CA)分析，这一结构识别基于碰撞-诱导离解(CID)，样本导入靠电喷雾电离(ESI)。复杂的脂质经ESI生成简单的带电离子，通过CID的可以产生碎片离子，它可以减少光谱拥堵引起的电离抑制效应，并对所监测的信号实现定量分析具有很好的灵敏度和选择性。
一方面，本发明提供一种乳腺癌血浆分子标记物，其特征在于：所述诊断标记物包含一种、两种或三种脂质化合物，所述脂质化合物选自由38：3磷脂酰胆碱(38：3PC)、C19：0胆固醇酯(C19：0CE)、20：0溶血磷脂酰胆碱(20：0LPC)组成的组。
第二方面，本发明提供一种在乳腺癌患者中下调的血浆分子标记物，其特征在于所述诊断标记物包含一种或多种脂质化合物，所述脂质化合物选自由18：3溶血磷脂酰胆碱(18：3LPC)、20：2溶血磷脂酰胆碱(20：2LPC)、20：1溶血磷脂酰胆碱(20：1LPC)、20：0溶血磷脂酰胆碱(20：0LPC)、C19：1胆固醇酯(C19：1CE)、C19：0胆固醇酯(C19：0CE)、C20：0胆固醇酯(C20：0CE)组成的组。
第三方面，本发明提供一种在乳腺癌患者中上调的血浆分子标记物，其特征在于所述诊断标记物包含一种或多种脂质化合物，所述脂质化合物选自由32：1磷脂酰胆碱(32：1PC)、34：4磷脂酰胆碱(34：4PC)、38：3磷脂酰胆碱(38：3PC)、40：5磷脂酰胆碱(40：5PC)、40：3磷脂酰胆碱(40：3PC)、44：11磷脂酰胆碱(44：11PC)、32：2卵磷脂(32：2ePC)、38：3卵磷脂(38：3ePC)组成的组。
第四方面，本发明提供一种乳腺癌血浆分子标记物，其特征在于：所述诊断标记物包含一种或多种脂质化合物，所述脂质化合物选自由18：3溶血磷脂酰胆碱(18：3LPC)、20：2溶血磷脂酰胆碱(20：2LPC)、20：1溶血磷脂酰胆碱(20：1LPC)、20：0溶血磷脂酰胆碱(20：0LPC)、C19：1胆固醇酯(C19：1CE)、C19：0胆固醇酯(C19：0CE)、C20：0胆固醇酯(C20：0CE)、32：1磷脂酰胆碱(32：1PC)、34：4磷脂酰胆碱(34：4PC)、38：3磷脂酰胆碱(38：3PC)、40：5磷脂酰胆碱(40：5PC)、40：3磷脂酰胆碱(40：3PC)、44：11磷脂酰胆碱(44：11PC)、32：2卵磷脂(32：2ePC)、38：3卵磷脂(38：3ePC)组成的组。
第五方面，本发明提供一种用于乳腺癌检测的试剂盒，其本发明所述的血浆分子标记物，所述分子标记物作为检测标准品。
本发明所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还包含对本发明所述的血浆分子标记物进行定性或定量检测的试剂。
本发明所述的试剂盒，其特征在于所述的定性或定量检测的方法为LC-ESI-MS/MS。
第六方面，本发明提供一种对本发明所述的血浆分子标记物进行定性或定量检测的方法，所述方法不用做诊断目的。
本发明所述的方法，包括以下步骤
(1)样本提取：提取血浆中的脂质物质，溶解到溶剂中；
(2)HPLC：将步骤(1)的样本注入高效液相色谱，溶剂为氯仿∶甲醇∶300mM醋酸铵＝360∶840∶44；
(3)质谱：采用三重四极LC-ESI-MS/MS进行分析。
本发明所述的方法，其还包括对获得LC-ESI-MS/MS脂质图谱进行数据分析的步骤。
所述数据分析可通过SPSS软件进行统计分析。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明首次公开了可用于检测乳腺癌病及乳腺良性增生疾病的一组脂质化合物。脂质组学的研究已经被证明是相关作用机制研究的有用工具，15个脂质分子的表达差异会影响乳腺癌的发生及发展。因此所述特定脂质分子的血浆水平与乳腺癌的患病率呈正比，通过测定特定脂质分子的表达情况可以方便快捷有效地在分子水平上实现对乳腺癌的检测。
(2)以脂质因子组合为基础的诊断标准品可以方便快捷地在分子水平上实现对乳腺癌的辅助诊断，具有检测效率高，检测准确度高，针对性强的特点，检测脂质因子是乳腺癌患者及乳腺良性增生疾病辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。
(3)本发明采用大量临床确诊的乳腺癌患者样本和良性乳腺疾病患者样本，经过实验、数据分析、验证从367种血浆脂质中筛选出15种乳腺癌脂质标记物，特别是其中的三种38：3磷脂酰胆碱(38：3PC)、C19：0胆固醇酯(C19：0CE)、20：0溶血磷脂酰胆碱(20：0LPC)在乳腺癌和良性乳腺疾病中差异极显著，具有较高的临床价值。
附图说明
图1为乳腺癌患者和良性乳腺疾病患者的C19：1CE的质谱图。
图2为15个脂质物质的组合预测乳腺癌的ROC曲线，A：训练组中乳腺癌与良性乳腺病人的比较；B：验证组中乳腺癌与良性乳腺病人的比较；C：全集中乳腺癌与良性乳腺病人的比较。
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1：患者的选择
训练集包括39例乳腺癌和51例良性乳腺病样本，这些样本从本公司乳腺癌存储库获得。样本挑选需遵循以下标准：(1)所有患者都确诊并经病理学证实；(2)根据临床分期方法，乳腺癌患者需在早期阶段(阶段0，I，II)；(3)病人没有其他可能会影响脂质代谢的疾病，如高脂血症，糖尿病，和其他癌症；(4)所有患者是女性；(5)患者没有进行术前辅助化疗或放疗。乳腺良性病变被定义为增生，纤维肿瘤、囊肿和一些不明的乳腺诊断。对照组血液样本来源于没有历史的恶性疾病和炎症的健康女性。
根据这些标准，从广西柳州工人医院收集45例早期乳腺癌患者(0-II阶段)和59例良性乳腺疾病血浆样本。所有癌症患者组织病理学结果经手术切除肿瘤进行临床组织活检从而临确诊，肿瘤病理特点和分期的评估基于组织切片结果。纳入本研究的癌症患者没有进行术前化疗或放疗。所有这些癌症，良性和对照样本年龄和种族匹配，IRB书面同意支持这项研究使用的所有信息和生物学样本。乳腺癌及良性乳腺疾病患者信息如表1
实施例2：血浆样本的采集
病人至少禁食12小时后采集血浆样本。简单地说，血浆收集即静脉穿刺后血液被收集到真空采血EDTA抗凝管中，2小时内，4℃，2600g离心10分钟，取上层清液，以同样的方式离心第二次，血浆分成0.5毫升/小份-80℃储藏。所有血浆样本用干冰运送到堪萨斯脂质组学研究中心进行脂质分析。
表1.训练集及验证集中乳腺癌及良性乳腺疾病病人信息表
实施例3：LC-ESI-MS/MS脂质图谱
每个样本分析采用3μL血浆，检测前离心20分钟，在表管单位内球化蛋白质。此外为了对所有脂质准确识别，需精确的添加内部标准物，其中每一类脂质物质采用两个内标物。离心20分钟后，脂质提取物再溶解到溶剂中，注入高效液相色谱。溶剂混合比率为氯仿/甲醇/300mM醋酸铵(μL)360/840/44溶解于水中。所有溶剂使用高效液相色谱级。
脂质是由三重四极LC-ESI-MS/MS(API 4000，应用生物系统公司，福斯特市，CA)分析，可以区分他们的极性头和链的长度。样本导入靠电喷雾电离(ESI)。它可以减少光谱拥堵引起的电离抑制效应。复杂的脂质经ESI生成简单的带电离子，通过CID的可以产生碎片离子。两种类型的扫描用来获得极性脂质：前体和中性丢失扫描。脂质一个类的确定是根据前体，或离子进行中损失，一个共同的头部片段。自定义脚本和应用生物系统公司分析软件被用于色谱峰的分辨率。质量过滤器后，校准，内部标准规范化，数据量化以nmol/uL为单位。
从194例血浆样本(84例乳腺癌和110例良性乳腺疾病)中，检测到13类磷脂和1类胆甾醇酯CE共367种血浆脂质。由于我们的测试采用脂质微提取方法，脂质水平小于0.0007nmol/uL被认为是不可靠的。为了保证脂质物质的质量，我们移除40％以上丢失数据或异常平均值表达的脂质。因此，367种脂质减少到191种脂质。
实施例4：数据分析
使用SPSS 17.0软件进行统计分析，两组血浆样本之间的差异通过T-检验进行评估。所有p值来自双侧检验。当p值小于0.05及倍增大于1.5被认为具有统计显著性差异。
二元逻辑回归分析，用于预测所选脂质物的诊断效率。并绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)，从而对敏感性和特异性的关系进行评估，并计算ROC曲线下面积(AUC)，AUC越大则诊断价值越高，散点图由GraphPad 5.0生成。
我们分析了乳腺癌和良性血浆标本中脂质物质的浓度。在训练集，平均血浆浓度的最显著差异为PC(38：3)(p＝2.50297E-08)。存在显著倍数变化的是LPC(20：0)(倍数变化＝4.08)。在验证集中，平均血浆浓度的最显著差异为PC(38：3)(p＝2.50297E-08)。显著倍数变化是C 19：0CE(倍数变化＝4.39)。在全部样本中，平均血浆浓度存在最显著差异的是PC(38：3)(p＝1.00749E-17)。显著倍数变化的是C 19：0CE(倍数变化＝3.73)。这些数据表明，血浆脂质可能是诊断乳腺癌的生物标志物。
根据筛选条件(p＜0.05和倍数变化>1.5)，只有15种脂质物质被选为诊断乳腺癌的生物标志物，包含4个LPC，6个PC，2个ePC，及3个CE(表2、表3)。与良性患者相比，癌症患者中两类LPC和CE的血浆浓度减少，而其他脂质物质增加(表2、表3)。
表2乳腺癌早期诊断生物标志物脂质物质的检测(训练集)
SN：敏感性；SP：特异性；PPV：阳性预测值；NPV：阴性预测值；AUC：ROC曲线下面积；
↑：上调；↓：下调。
表2乳腺癌早期诊断生物标志物脂质物质的检测(验证集)
SN：敏感性；SP：特异性；PPV：阳性预测值；NPV：阴性预测值；AUC：ROC曲线下面积；
↑：上调；↓：下调。
15个脂质物质组合有较好的诊断性能，其中训练集中，15种脂质物种组合的敏感性，特异性，阳性预测值(PPV)以及阴性预测值(NPV)分别为83.3％，92.7％，89.7％，和87.9％。训练集的AUC为0.926，95％可信区间(0.869，0.982)。验证集也发现类似的结果，敏感性，特异性，PPV和NPV分别为81.0％，94.5％，91.9％和86.7％。验证集中AUC为0.938，95％可信区间(0.889，0.986)(图2A)。全集中(训练集和验证集的组合)，敏感性，特异性，PPV和NPV分别是81.0％，90.0％，86.1和86.1％，AUC为0.916，95％可信区间(0.874，0.957)(图2C)。
上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。
Claims (10)
1.一种乳腺癌血浆分子标记物，其特征在于：所述诊断标记物包含一种、两种或三种脂质化合物，所述脂质化合物选自由38∶3磷脂酰胆碱(38∶3 PC)、C19∶0胆固醇酯(C19∶0 CE)、20∶0溶血磷脂酰胆碱(20∶0 LPC)组成的组。
2.一种在乳腺癌患者中下调的血浆分子标记物，其特征在于所述诊断标记物包含一种或多种脂质化合物，所述脂质化合物选自由18∶3溶血磷脂酰胆碱(18∶3 LPC)、20∶2溶血磷脂酰胆碱(20∶2 LPC)、20∶1溶血磷脂酰胆碱(20∶1 LPC)、20∶0溶血磷脂酰胆碱(20∶0 LPC)、C19∶1胆固醇酯(C19∶1 CE)、C19∶0胆固醇酯(C19∶0 CE)、C20∶0胆固醇酯(C20∶0 CE)组成的组。
3.一种在乳腺癌患者中上调的血浆分子标记物，其特征在于所述诊断标记物包含一种或多种脂质化合物，所述脂质化合物选自由32∶1磷脂酰胆碱(32∶1 PC)、34∶4磷脂酰胆碱(34∶4 PC)、38∶3磷脂酰胆碱(38∶3 PC)、40∶5磷脂酰胆碱(40∶5 PC)、40∶3磷脂酰胆碱(40∶3PC)、44∶11磷脂酰胆碱(44∶11 PC)、32∶2卵磷脂(32∶2 ePC)、38∶3卵磷脂(38∶3 ePC)组成的组。
4.一种乳腺癌血浆分子标记物，其特征在于：所述诊断标记物包含一种或多种脂质化合物，所述脂质化合物选自由18∶3溶血磷脂酰胆碱(18∶3 LPC)、20∶2溶血磷脂酰胆碱(20∶2LPC)、20∶1溶血磷脂酰胆碱(20∶1 LPC)、20∶0溶血磷脂酰胆碱(20∶0 LPC)、C19∶1胆固醇酯(C19∶1 CE)、C19∶0胆固醇酯(C19∶0 CE)、C20∶0胆固醇酯(C20∶0 CE)、32∶1磷脂酰胆碱(32∶1 PC)、34∶4磷脂酰胆碱(34∶4 PC)、38∶3磷脂酰胆碱(38∶3 PC)、40∶5磷脂酰胆碱(40∶5PC)、40∶3磷脂酰胆碱(40∶3 PC)、44∶11磷脂酰胆碱(44∶11 PC)、32∶2卵磷脂(32∶2 ePC)、38∶3卵磷脂(38∶3 ePC)组成的组。
5.一种用于乳腺癌检测的试剂盒，其包含权利要求1-4任一项所述的血浆分子标记物，所述分子标记物作为检测标准品。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还包含对权利要求1-4任一项所述的血浆分子标记物进行定性或定量检测的试剂。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述的定性或定量检测的方法为LC-ESI-MS/MS。
8.一种对权利要求1-4任一项所述的血浆分子标记物进行定性或定量检测的方法，所述方法不用做诊断目的。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于包括以下步骤
(1)样本提取：提取血浆中的脂质物质，溶解到溶剂中；
(2)HPLC：将步骤(1)的样本注入高效液相色谱，溶剂为氯仿∶甲醇∶300mM醋酸铵＝360∶840∶44；
(3)质谱：采用三重四极LC-ESI-MS/MS进行分析。
10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于还包括对获得LC-ESI-MS/MS脂质图谱进行数据分析的步骤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610724794.5A CN106353498A (zh) | 2016-08-25 | 2016-08-25 | 辅助诊断乳腺癌的脂质化合物及其相关试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610724794.5A CN106353498A (zh) | 2016-08-25 | 2016-08-25 | 辅助诊断乳腺癌的脂质化合物及其相关试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106353498A true CN106353498A (zh) | 2017-01-25 |
Family
ID=57856206
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610724794.5A Pending CN106353498A (zh) | 2016-08-25 | 2016-08-25 | 辅助诊断乳腺癌的脂质化合物及其相关试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106353498A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107085061A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-08-22 | 天津市第三中心医院 | 基于hplc‑ms/ms检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法 |
| CN115762801A (zh) * | 2022-05-13 | 2023-03-07 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 一种预测乳腺癌新辅助治疗反应的外周血脂质代谢生物标志物及应用 |
-
2016
- 2016-08-25 CN CN201610724794.5A patent/CN106353498A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| XIAOLI CHEN 等: "Plasma lipidomics profiling identified lipid biomarkers distinguishing early-stage breast cancer from benign lesions", 《ONCOTARGET》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107085061A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-08-22 | 天津市第三中心医院 | 基于hplc‑ms/ms检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法 |
| CN107085061B (zh) * | 2017-05-22 | 2019-03-15 | 天津市第三中心医院 | 基于hplc-ms/ms检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法 |
| CN115762801A (zh) * | 2022-05-13 | 2023-03-07 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 一种预测乳腺癌新辅助治疗反应的外周血脂质代谢生物标志物及应用 |
| CN115762801B (zh) * | 2022-05-13 | 2024-01-23 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 一种预测乳腺癌新辅助治疗反应的外周血脂质代谢生物标志物及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Eberlin et al. | Discrimination of human astrocytoma subtypes by lipid analysis using desorption electrospray ionization imaging mass spectrometry | |
| Zhang et al. | Mass spectrometry imaging enables discrimination of renal oncocytoma from renal cell cancer subtypes and normal kidney tissues | |
| CN109239210A (zh) | 一种胰腺导管腺癌标志物及其筛选方法 | |
| CN108680745A (zh) | 血清脂质生物标志物在nsclc早期诊断中的应用方法 | |
| Meng et al. | Performance value of high risk factors in colorectal cancer screening in China | |
| CN109557311B (zh) | 结直肠癌诊断标志物及结直肠癌的检测产品及其应用 | |
| CN105738526A (zh) | 筛选三阴性乳腺癌特异性血清代谢标志物的方法 | |
| Navaneethan et al. | Volatile organic compounds in urine for noninvasive diagnosis of malignant biliary strictures: a pilot study | |
| KR20180041556A (ko) | 유방암의 조기 진단을 위한 지질 마커 | |
| CN109307764B (zh) | 一组代谢标志物在制备胶质瘤诊断试剂盒方面的应用 | |
| CN112151121A (zh) | 一种食管癌诊断的诊断标志物、试剂盒及筛选方法和食管癌诊断模型的构建方法 | |
| CN115932277A (zh) | 一种乳腺癌诊断标志物及其筛选方法、定量方法、诊断模型的构建方法及应用 | |
| CN105092627B (zh) | 用于检测胃癌相关代谢小分子的核磁共振模型及制备方法 | |
| CN106353498A (zh) | 辅助诊断乳腺癌的脂质化合物及其相关试剂盒 | |
| CN116413432A (zh) | 基于肠道菌群代谢组学的胰腺癌诊断标志物及其筛选方法和应用 | |
| CN117250354A (zh) | 十一种代谢标志物的检测试剂在制备乳腺癌诊断和预后产品中的应用 | |
| Navaneethan et al. | Vascular endothelial growth factor levels in bile distinguishes pancreatic cancer from other etiologies of biliary stricture: a pilot study | |
| Zhong et al. | Multiplatform metabolomics studies of human cancers with NMR and mass spectrometry imaging | |
| Chen et al. | Establishment and clinical application of time-resolved immunofluorescence assay of lipoprotein-associated phospholipase A2 | |
| Ossoliński et al. | Targeted and untargeted urinary metabolic profiling of bladder cancer | |
| CN105116000B (zh) | 用于检测胃癌相关代谢小分子的核磁共振模型及制备方法 | |
| CN102662012B (zh) | 筛查结直肠腺瘤的试剂盒 | |
| JP2013246080A (ja) | 大腸がん検査方法 | |
| CN115762801B (zh) | 一种预测乳腺癌新辅助治疗反应的外周血脂质代谢生物标志物及应用 | |
| CN102324001A (zh) | 一种基于hplc/ms代谢组学数据分析预测胃癌的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20170303 Address after: 201207 Shanghai Zu Pudong New Area Free Trade Zone Road No. 865 building 4 Applicant after: Shanghai Hui Sheng Biotechnology Co., Ltd. Address before: Suzhou City, Jiangsu Province, Suzhou Industrial Park 215000 Xinghu Street No. 218 building B2 room 610 Applicant before: Deng Youping Applicant before: Wang Hongwei |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170125 |