CN106343578A - 肠溶性双层无缝实心益生菌微球及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了肠溶性双层无缝实心益生菌微球，所述益生菌微球以活性微生物为囊材，以海藻酸钙‑壳聚糖凝胶为壁材，并提供了其制备方法和应用。本发明的有益效果为：本发明提供的肠溶性双层无缝实心益生菌微球及其制备方法和应用，是以益生菌为芯材，以海藻酸钠和氯化钙为第一层囊材，以壳聚糖为第二层囊材，利用滴制法或挤压法制作的直径为0.5mm‑10mm的球，其所用的囊材耐酸性强，能使包埋的乳酸菌顺利通过胃酸到达肠道中定植，并在肠道中释放出益生菌。
Description
技术领域
本发明涉及微生物制剂技术领域，具体涉及肠溶性双层无缝实心益生菌微球及其制备方法和应用。
背景技术
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。益生菌的益生作用与其在肠道中的存活数量和生存质量有关, 其活菌制剂进入人或动物消化道后多难以经受低pH 值的盐酸、胆汁酸等的作用, 难以有足够的活菌数量到达肠道或定植肠道而发挥作用。目前市场上奶制品和饮料中添加的益生菌大多是采用冷冻干燥、喷雾干燥、流化床干燥等技术生产的粉状产品, 这些产品在食品中是完全释放的, 在产品的环境中或通过胃肠道的过程中得不到有效的保护。
海藻酸是存在于褐藻类海洋天然多糖，海藻酸钠可减缓脂肪糖和胆盐的吸收，具有降低血清胆固醇、血中甘油三酯和血糖的作用，可预防高血压、糖尿病、肥胖症等现代病。它在肠道中能抑制有害金属如锶、镉、铅等在体内的积累，正是因为褐藻酸钠这些重要作用，在国内外已日益被人们所重视。日本人把富含有褐藻酸钠的食品称为“长寿食品”，美国人则称其为“奇妙的食品添加剂”。壳聚糖是甲壳素经1,4键连接而成的线性聚合物，是迄今所发现的唯一天然碱性多糖，,壳聚糖分子链中存在大量伯氨基,在稀酸溶液中(如乙酸)因氨基质子化而溶解,并荷正电成为阳离子聚合物,表现出良好的生物黏附性,利于其黏附并跨越表面负电的疏水性细胞膜。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了肠溶性双层无缝实心益生菌微球及其制备方法和应用。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：肠溶性双层无缝实心益生菌微球，所述益生菌微球以活性微生物为囊材，以海藻酸钙-壳聚糖凝胶为壁材。
进一步的，上述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球，所述活性微生物为食用菌种。
进一步的，上述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球，所述益生菌微球中添加有食用色素或食用香精。
进一步的，上述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球，所述益生菌微球的直径为0.5mm-10mm。
本发明的第二个目的是提供了上述肠溶性双层无缝实心益生菌微球的制备方法，包括以下步骤：
1）益生菌菌株经发酵、离心、收集菌体后，与PBS按照质量比1：（3-10）的比例混合，重悬菌体并再次离心得到洗涤后菌体，菌体以生理盐水按质量比1:1的比例重悬，得到菌悬液；
2）配制质量百分比为1-5%的海藻酸钠溶液，115℃灭菌20min，得到灭菌海藻酸钠溶液；
3）将步骤1）得到的菌悬液与步骤2）得到的灭菌海藻酸钠溶液按照质量比1：（2-10）的比例混合均匀，得到混合液；
4）将步骤3）得到的混合液制成直径0.5-10mm的液滴，滴入质量百分浓度2%-5%的无菌氯化钙溶液中，静置得到一次包埋微球颗粒；
5）收集步骤4）得到的一次包埋微球颗粒，加入至质量百分浓度0.3%-2.0%的无菌壳聚糖溶液中进行二次包埋，一次包埋微球颗粒与无菌壳聚糖溶液的比例为质量比1：（1-5），得到二次包埋微球；
6）按照益生菌微球的直径，即0.5mm-10mm选择适合滤网对步骤5）得到的二次包埋微球进行过滤，并收集得到益生菌微球，置于生理盐水中，4℃保存备用。
本发明的第三个目的是提供了上述肠溶性双层无缝实心益生菌微球在制备食品中的应用。
进一步的，上述的应用，所述食品为酸乳、发酵乳、乳酸菌饮料、果汁、发酵果汁、蔬菜汁、发酵蔬菜汁、豆乳、发酵豆乳、果冻、布丁、纯净水、矿泉水、茶饮料、功能性饮料或碳酸饮料。
本发明的有益效果为：本发明提供的肠溶性双层无缝实心益生菌微球及其制备方法和应用，是以益生菌为芯材，以海藻酸钠和氯化钙为第一层囊材，以壳聚糖为第二层囊材，利用滴制法或挤压法制作的直径为0.5mm-10mm的球，其所用的囊材耐酸性强，能使包埋的乳酸菌顺利通过胃酸到达肠道中定植，并在肠道中释放出益生菌。
附图说明
图1显示为植物乳杆菌微球在生理盐水中的活菌数变化。
图2显示为植物乳杆菌微球在酸奶货架期内的活菌数变化。
图3显示为干酪乳杆菌微球在生理盐水中的活菌数变化。
图4显示为干酪乳杆菌微球在乳酸菌饮料货架期内的活菌数变化。
具体实施方式
实施例1：
植物乳杆菌微球的制备与应用：
（1）配制2%海藻酸钠100ml、0.5%壳聚糖200ml、生理盐水100ml、PBS溶液500ml，115℃灭菌20min。
（2）将1000ml植物乳杆菌发酵液离心去上清，收集菌体约10g，加50gPBS重悬后再次离心得菌体。
（3）菌体与生理盐水按1:1混合，重悬菌体。
（4）2%海藻酸钠中添加0.05%（质量体积比）栀子黄色素，形成黄色海藻酸钠溶液。
（5）菌体重悬液与（4）中2%海藻酸钠按1:3混合均匀。
（6）用无菌注射器将混合溶液挤成液滴，滴入3%氯化钙中，钙化30min形成微球。
（7）过滤出微球，加到200ml的0.5%壳聚糖溶液中，在摇床中60rpm/min匀速摇动20min。
（8）过滤出微球，用生理盐水浸泡，4℃保存备用。
（9）制作搅拌型酸乳：鲜牛奶加6%白砂糖，均质后进行巴氏杀菌；发酵剂接种到牛奶中，42℃发酵酸度70°T 左右终止发酵。
（10）微球过滤，用无菌水洗涤去除生理盐水的咸涩味后加入酸乳中，搅拌均匀后放冰箱后熟即可食用。
植物乳杆菌微球的活菌数变化如图1、图2所示。
实施例2：
干酪乳杆菌微球的制备与应用：
（1）配制1.5%海藻酸钠100ml、1.0%壳聚糖200ml、生理盐水100ml、PBS溶液200ml，115℃灭菌20min。
（2）将1000ml干酪乳杆菌发酵液离心去上清，收集菌体约10g，加100gPBS重悬后再次离心得菌体。
（3）菌体与生理盐水按1:1混合，重悬菌体。
（4）1.5%海藻酸钠溶液中加入0.15%（质量体积比）甜橙香精与0.1%（质量体积比）β-胡萝卜素。
（5）菌体重悬液与（4）中1.5%海藻酸钠按1:5混合均匀。
（6）用无菌注射器将混合溶液挤成液滴，滴入4%氯化钙中，钙化30min形成微球。
（7）过滤出微球，加到200ml的1.0%壳聚糖溶液中，在摇床中60rpm/min匀速摇动20min。
（8）过滤出微球，用生理盐水浸泡，4℃保存备用。
（9）添加入乳酸菌饮料中。
干酪乳杆菌微球的活菌数变化如图3、图4所示。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.肠溶性双层无缝实心益生菌微球，其特征在于，所述益生菌微球以活性微生物为囊材，以海藻酸钙- 壳聚糖凝胶为壁材。
2.根据权利要求1所述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球，其特征在于，所述活性微生物为食用菌种。
3.根据权利要求2所述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球，其特征在于，所述益生菌微球中添加有食用色素或食用香精。
4.根据权利要求3所述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球，其特征在于，所述益生菌微球的直径为0.5mm-10mm。
5.根据权利要求1-4任一所述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）益生菌菌株经发酵、离心、收集菌体后，与PBS按照质量比1：（3-10）的比例混合，重悬菌体并再次离心得到洗涤后菌体，菌体以生理盐水按质量比1:1的比例重悬，得到菌悬液；
2）配制质量百分比为1-5%的海藻酸钠溶液，115℃灭菌20min，得到灭菌海藻酸钠溶液；
3）将步骤1）得到的菌悬液与步骤2）得到的灭菌海藻酸钠溶液按照质量比1：（2-10）的比例混合均匀，得到混合液；
4）将步骤3）得到的混合液制成直径0.5-10mm的液滴，滴入质量百分浓度2%-5%的无菌氯化钙溶液中，静置得到一次包埋微球颗粒；
5）收集步骤4）得到的一次包埋微球颗粒，加入至质量百分浓度0.3%-2.0%的无菌壳聚糖溶液中进行二次包埋，一次包埋微球颗粒与无菌壳聚糖溶液的比例为质量比1：（1-5），得到二次包埋微球；
6）按照益生菌微球的直径，即0.5mm-10mm选择适合滤网对步骤5）得到的二次包埋微球进行过滤，并收集得到益生菌微球，置于生理盐水中，4℃保存备用。
6.根据权利要求1-4任一所述的肠溶性双层无缝实心益生菌微球在制备食品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述食品为酸乳、发酵乳、乳酸菌饮料、果汁、发酵果汁、蔬菜汁、发酵蔬菜汁、豆乳、发酵豆乳、果冻、布丁、纯净水、矿泉水、茶饮料、功能性饮料或碳酸饮料。
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