CN106290166A - 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 - Google Patents
一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106290166A CN106290166A CN201610832730.7A CN201610832730A CN106290166A CN 106290166 A CN106290166 A CN 106290166A CN 201610832730 A CN201610832730 A CN 201610832730A CN 106290166 A CN106290166 A CN 106290166A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- circular dichroism
- atp
- dimer
- cell
- intracellular
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/19—Dichroism
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
一种细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法,属于材料化学技术领域。本发明包括ATP适配体ATP aptamer序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器,ATP错配mismatch DNA序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器,两种大小金二聚体修饰穿膜肽,两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化,基于大小金二聚体的圆二色信号实现胞内ATP实时检测,建立标准曲线等步骤实现。本发明提供了能够通过圆二色信号实时检测胞内ATP含量的方法,制备出了圆二色性能高,生物相容性好的金纳米粒子二聚体。
Description
技术领域
本发明涉及一种细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法,属于材料化学技术领域。
背景技术
三磷酸腺苷(Adenosine-5’-triphosphate,ATP)是体内组织细胞所需能量的主要来源,作为能量货币,其参与基因复制,蛋白质或脂类的激酶活性,膜离子通道泵,免疫和神经介导的反应,药物传递等生物活性调节。同时,细胞中ATP的含量的变化可以反映细胞的变异和损伤,以及与贫血、低血糖、心血管疾病以及癌症等疾病的发生关系密切。因此ATP作为重大疾病的标志物之一得到了广泛的关注和研究。
传统上ATP检测的方法主要有:高效液相色谱、毛细管电泳和核磁共振波谱分析等,但这些利用细胞裂解液的分析方法存在有ATP潜在的降解,并且分析时间长,使实时检测很难实现;近年来,荧光分析法、化学发光和电化学跟踪技术等都用于胞内ATP的实时检测中,但这些方法操作繁琐,样品消耗量大,检测时间长、性能不稳定,难以微型化。
近几年来,利用自组装纳米材料构建圆二色传感器进行生物传感得到了广泛的关注。圆二色光谱(CD)是一种已被广泛应用于化学和生物传感的分析方法,相比于荧光技术检测,由于纳米粒子之间的等离子体−等离子体耦合、诱导等离子体CD通过激子−等离子体耦合、混合偶极−偶极之间的耦合和最小矩阵干扰,使得CD能够收集样品足够多的信息,并达到灵敏度低的检测水平,具有更大的潜在生物标志物分析应用能力。但是通过自组装的手性大小金二聚体的纳米传感器实现细胞内ATP含量的实时检测还未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法。
本发明的技术方案,一种细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法,步骤为:
(1)ATP 适配体序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬后修饰巯基ATP aptamer序列;15nm金纳米粒子GNP修饰与适配体部分互补的巯基序列ATP CS1,将得到的GNP-aptamer及GNP- CS1复合体混匀,得到ATP适配体序列组装的圆二色大小金二聚体aptamer-dimer;
(2)ATP错配序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬后修饰巯基mismatch DNA序列;15nm金纳米粒子GNP修饰与ATP错配序列部分互补的巯基ATP CS2序列,将得到的GNP-mismatch及GNP- CS2复合体混匀,得到ATP错配序列组装的圆二色大小金二聚体mismatch-dimer;
(3)两种大小金二聚体修饰穿膜肽:将步骤(1)及(2)得到大小金二聚体分别与SH-PEG-5000和穿膜肽TAT混匀,偶联12h,分别得到表面修饰有穿膜肽的圆二色性TAT-aptamer-dimer及 TAT-mismatch-dimer;
(4)两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化:分别将步骤(3)得到两种穿膜肽修饰的圆二色大小金二聚体与一定数量的细胞共同培养不同时间点后,用胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同量的圆二色aptamer-dimer及mismatch-dimer的细胞悬液;将细胞悬液进行圆二色性表征,记录不同时间点的圆二色信号,绘制散点图,得到胞内最佳检测时间。
(5)基于大小金二聚体的圆二色信号实现胞内ATP实时检测:将步骤(3)得到穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与添加不同抑制剂和促进剂的细胞及未处理的细胞分别共同孵育,当存在待测物ATP时,组装体逐渐解散,导致圆二色信号的变化,进而进行检测,建立胞内ATP浓度与圆二色光谱的标准曲线。
具体步骤如下:
(1)ATP 适配体序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100 μL 2nM 25nm金纳米粒子将其与巯基ATP aptamer序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀;将柠檬酸还原法合成的15nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100 μL 2nM 15nm金纳米粒子与适配体部分互补的巯基ATP CS1序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀,分别加入终浓度为50mM的NaCl溶液,充分混合后,室温孵育过夜后,离心3次除去溶液中未反应的DNA,分别重悬于100μL的5mM PB缓冲液中,取100μL GNP-aptamer及50μL GNP-CS1复合体混匀,加入NaCl溶液至终浓度为50mM进行老化,室温下孵育12h,得到ATP适配体序列组装的圆二色大小金二聚体aptamer-dimer,待用;
(2)ATP错配序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM PH 7.4的pB缓冲液,取100μL 2nM 25nm金纳米粒子将其与巯基mismatch DNA序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀;将柠檬酸还原法合成的15nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100μL 2nM 15nm金纳米粒子与适配体部分互补的巯基ATP CS2序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀,分别加入终浓度为50mM的NaCl溶液中,充分混合后,室温孵育过夜,离心3次除去溶液中未反应的DNA,分别重悬于100μL的5 mM PB缓冲液中;取100μL GNP-mismatch及50μL GNP-CS2复合体混匀,加入NaCl溶液至终浓度为50mM进行老化,室温下孵育12h,得到ATP错配序列组装的圆二色大小金二聚体mismatch-dimer,待用;
(3)两种大小金二聚体修饰穿膜肽:将步骤(1)及(2)得到大小金二聚体分别与SH-PEG5000和穿膜肽TAT以1︰1000︰100的摩尔浓度混匀,室温孵育12h后,7500rpm离心20min,去除上清液,沉淀重悬于细胞培养液中,得到稳定的表面修饰有穿膜肽的圆二色TAT-aptamer-dimer及 TAT-mismatch-dimer;
(4)两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化:将细胞接种于24孔培养板中,使每孔中的细胞数量为104个,培养24h后去掉培养液,取8个孔加入终浓度为5nM的穿膜肽修饰的圆二色TAT-aptamer-dimer分别与104个细胞共同培养0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h;取8个孔加入终浓度为5nM的穿膜肽修饰的圆二色性TAT-mismatch-dimer分别与104个细胞共同培养0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h;之后分别用胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同量的圆二色aptamer-dimer及 mismatch-dimer的细胞悬液。将细胞悬液进行圆二色性表征,记录不同时间点的圆二色信号,绘制散点图,得到胞内最佳检测时间;
(5)基于大小金二聚体的圆二色信号实现胞内ATP实时检测:在将步骤(3)得到穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与不同量寡霉素A抑制细胞中ATP浓度、不同量依托泊苷促进细胞中ATP浓度及未经处理的细胞分别共孵育6h后,当存在待测物ATP时,组装体逐渐解散,导致圆二色信号的变化,进而进行检测,然后用1mL胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同解散程度的圆二色性aptamer-dimer的细胞悬液,将细胞悬液进行圆二色性表征,并建立胞内ATP浓度与圆二色信号的标准曲线。
所述ATP aptamer序列如SEQ ID NO. 1所示,ATP CS1序列如SEQ ID NO. 2所示,mismatch DNA序列如SEQ ID NO. 3所示,ATP CS2序列如SEQ ID NO. 4所示, TAT 多肽序列如SEQ ID NO. 5所示,具体如表1所示。
表1
本发明的有益效果:本发明制备出了组装产率高,性质稳定,在细胞中分散性好的的金纳米粒子二聚体,提供了能够通过圆二色光谱实时检测胞内ATP含量的方法,建立了细胞内ATP浓度与圆二色信号强度两者之间的标准曲线,具有灵敏度高、选择性好,省时省力的优点,具有非常好的实际应用前景。
附图说明
图1是本发明的金纳米粒子二聚体在细胞中的生物透射电镜图。
图2是本发明中两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化,绘制散点图。
图3是本发明中穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与添加不同抑制剂和促进剂的细胞及未处理的细胞分别共同孵育后圆二色信号的变化谱图。
图4是胞内ATP浓度与圆二色信号的标准曲线。
具体实施方式
以下实施例中序列材料购自生工生物工程(上海)股份有限公司。
实施例1
所有的玻璃仪器都用王水浸泡24h,并用双蒸水清洗,晾干备用。实验中使用的水均为18.2MΩ 的Milli-Q超纯水。
(1)ATP 适配体序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100 μL 2nM 25nm金纳米粒子将其与巯基ATP aptamer序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀;15nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100 μL 2nM 15nm金纳米粒子与适配体部分互补的巯基序列ATP CS1以摩尔浓度1︰5的比例混匀,分别加入终浓度为50mM的NaCl溶液,充分混合后,室温孵育过夜后,离心3次除去溶液中未反应的DNA,分别重悬于100μL的5mM PB缓冲液中,取100μL GNP-aptamer及50μL GNP-CS1复合体混匀,加入NaCl溶液至终浓度为50mM进行老化,室温下孵育12 h,得到ATP适配体序列组装的圆二色大小金二聚体aptamer-dimer,待用;
(2)ATP错配序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液,取100μL 2nM 25nm金纳米粒子将其与巯基mismatch DNA序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀;15nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH7.4的PB缓冲液中,取100μL 2nM 15nm金纳米粒子与ATP适配体部分互补的巯基ATP CS2序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀,分别加入终浓度为50 mM的NaCl溶液,充分混合后,室温孵育过夜后,离心3次除去溶液中未反应的DNA,分别重悬于100μL的5 mM PB缓冲液中,取100μLGNP-mismatch及50μL GNP-CS2复合体混匀,加入NaCl溶液至终浓度为50mM进行老化,室温下孵育12h,得到ATP错配序列组装的圆二色大小金二聚体mismatch-dimer,待用;
(3)两种大小金二聚体修饰穿膜肽:将步骤(1)及(2)得到大小金二聚体分别与SH-PEG5000和穿膜肽TAT以1︰1000︰100的摩尔浓度混匀,室温孵育12h后,7500 rpm离心20min,去除上清液,沉淀重悬于细胞培养液中,得到稳定的表面修饰有穿膜肽的圆二色性TAT-aptamer-dimer及 TAT-mismatch-dimer,金纳米粒子二聚体在细胞中的生物透射电镜图如图1所示。
(4)两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化:将细胞接种于24孔培养板中,使每孔中的细胞数量为104个,培养24h后去掉培养液,取8个孔加入终浓度为5nM的穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer分别与104个细胞共同培养0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h;取8个孔加入终浓度为5nM的穿膜肽修饰的圆二色性TAT-mismatch-dimer分别与104个细胞共同培养0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h;之后分别用胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同量的圆二色性aptamer-dimer及 mismatch-dimer的细胞悬液;将细胞悬液进行圆二色性表征,记录不同时间点的圆二色信号,绘制散点图如图2所示,得到胞内最佳检测时间。
(5)基于大小金二聚体的圆二色信号实现胞内ATP实时检测:将不同量寡霉素A抑制后、不同量依托泊苷促进后及未经抑制的细胞裂解液用ELISA标准曲线进行胞内ATP的定量。在将步骤(3)得到穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与不同量寡霉素A抑制后、不同量依托泊苷促进后及未经抑制的细胞分别共孵育6h后,当存在待测物ATP时,组装体逐渐解散,导致圆二色信号的变化,进而进行检测,然后用胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同解离程度的圆二色性aptamer-dimer的细胞悬液,穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与添加不同抑制剂和促进剂的细胞及未处理的细胞分别共同孵育后圆二色信号的变化谱图如图3所示;对细胞悬液进行圆二色性表征,并建立胞内ATP浓度与圆二色信号的标准曲线,具体如图4所示。
SEQ ID NO. 1:
ATP aptamer:5’-TTTTTTTTTA CCTGGGGGAG TATTGCGGAG GAAGGT-3’;
SEQ ID NO. 2:
ATP CS1:5’-TTTTTTTCCT ACCTCAGCAA TACTCCTCCA GGA-3’;
SEQ ID NO. 3:
mismatch DNA:5’-TTTTTTTTTA CGTGGGAGAG TATTGCGGAG GAAGGT-3’;
SEQ ID NO. 4:
ATP CS2:5’-TTTTTTACCT ACCTCCGCAA TACTCCTCCA GGA-3’;
SEQ ID NO. 5:
TAT:5’-YGRKKRRQRR RC-3’。
Claims (3)
1.一种细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法,其特征在于步骤为:
(1)ATP 适配体序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬后修饰巯基ATP aptamer序列;15nm金纳米粒子GNP修饰与适配体部分互补的巯基ATP CS1序列;将得到的GNP-aptamer及GNP- CS1复合体混匀,得到ATP适配体序列组装的圆二色大小金二聚体aptamer-dimer;
(2)ATP错配序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬后修饰巯基mismatch DNA序列;15nm金纳米粒子GNP修饰与ATP错配序列部分互补的巯基ATP CS2序列;将得到的GNP-mismatch及GNP- CS2复合体混匀,得到ATP错配序列组装的圆二色大小金二聚体mismatch-dimer;
(3)两种大小金二聚体修饰穿膜肽:将步骤(1)及(2)得到大小金二聚体分别与SH-PEG-5000和穿膜肽TAT混匀,偶联12h,分别得到表面修饰有穿膜肽的圆二色性TAT-aptamer-dimer及 TAT-mismatch-dimer;
(4)两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化:分别将步骤(3)得到两种穿膜肽修饰的圆二色大小金二聚体与一定数量的细胞共同培养不同时间点后,用胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同量的圆二色aptamer-dimer及 mismatch-dimer的细胞悬液;将细胞悬液进行圆二色性表征,记录不同时间点的圆二色信号,绘制散点图,得到胞内最佳检测时间;
(5)基于大小金二聚体的圆二色信号实现胞内ATP实时检测:将步骤(3)得到穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与添加不同抑制剂和促进剂的细胞及未处理的细胞分别共同孵育,当存在待测物ATP时,组装体逐渐解散,导致圆二色信号的变化,进而进行检测,建立胞内ATP浓度与圆二色光谱的标准曲线。
2.根据权利要求1所述细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法,其特征在于具体步骤如下:
(1)ATP 适配体序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100 μL 2nM 25nm金纳米粒子将其与巯基ATP aptamer序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀;将柠檬酸还原法合成的15nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100 μL 2nM 15nm金纳米粒子与适配体部分互补的巯基ATP CS1序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀,分别加入终浓度为50mM的NaCl溶液,充分混合后,室温孵育过夜后,离心3次除去溶液中未反应的DNA,分别重悬于100μL的5mM PB缓冲液中;取100μL GNP-aptamer及50μL GNP-CS1复合体混匀,加入NaCl溶液至终浓度为50mM进行老化,室温下孵育12h,得到ATP适配体序列组装的圆二色大小金二聚体aptamer-dimer,待用;
(2)ATP错配序列组装构建的圆二色大小金二聚体传感器:柠檬酸还原法合成的25nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液,取100μL 2nM 25nm金纳米粒子将其与巯基mismatch DNA序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀;将柠檬酸还原法合成的15nm金纳米粒子GNP离心重悬于5mM pH 7.4的PB缓冲液中,取100μL 2nM 15nm金纳米粒子与适配体部分互补的巯基ATP CS2序列以摩尔浓度1︰5的比例混匀,分别加入终浓度为50mM的NaCl溶液中,充分混合后,室温孵育过夜,离心3次除去溶液中未反应的DNA,分别重悬于100μL的5 mM PB缓冲液中;取100μL GNP-mismatch及50μL GNP-CS2复合体混匀,加入NaCl溶液至终浓度为50mM进行老化,室温下孵育12h,得到ATP错配序列组装的圆二色大小金二聚体mismatch-dimer,待用;
(3)两种大小金二聚体修饰穿膜肽:将步骤(1)及(2)得到大小金二聚体分别与SH-PEG5000和穿膜肽TAT以1︰1000︰100的摩尔浓度混匀,室温孵育12h后,7500rpm离心20min,去除上清液,沉淀重悬于细胞培养液中,得到稳定的表面修饰有穿膜肽的圆二色TAT-aptamer-dimer及TAT-mismatch-dimer;
(4)两种大小金二聚体传感器在细胞内圆二色信号随时间的变化:将细胞接种于24孔培养板中,使每孔中的细胞数量为104个,培养24h后去掉培养液,取8个孔加入终浓度为5nM的穿膜肽修饰的圆二色TAT-aptamer-dimer分别与104个细胞共同培养0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h;取8个孔加入终浓度为5nM的穿膜肽修饰的圆二色性TAT-mismatch-dimer分别与104个细胞共同培养0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h;之后分别用胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同量的圆二色aptamer-dimer及 mismatch-dimer的细胞悬液;将细胞悬液进行圆二色性表征,记录不同时间点的圆二色信号,绘制散点图,得到胞内最佳检测时间;
(5)基于大小金二聚体的圆二色信号实现胞内ATP实时检测:在将步骤(3)得到穿膜肽修饰的圆二色性TAT-aptamer-dimer与不同量寡霉素A抑制细胞中ATP浓度、不同量依托泊苷促进细胞中ATP浓度及未经处理的细胞分别共孵育6h后,当存在待测物ATP时,组装体逐渐解散,导致圆二色信号的变化,进而进行检测,然后用1mL胰蛋白酶消化细胞,分别得到细胞内含有不同解散程度的圆二色性aptamer-dimer的细胞悬液,将细胞悬液进行圆二色性表征,并建立胞内ATP浓度与圆二色信号的标准曲线。
3.根据权利要求1所述细胞内ATP的圆二色光谱实时检测方法,其特征在于:所述ATPaptamer序列如SEQ ID NO. 1所示,ATP CS1序列如SEQ ID NO. 2所示,mismatch DNA序列如SEQ ID NO. 3所示,ATP CS2序列如SEQ ID NO. 4所示,TAT多肽序列如SEQ ID NO. 5所示。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610832730.7A CN106290166A (zh) | 2016-09-20 | 2016-09-20 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
PCT/CN2017/108923 WO2018054391A1 (zh) | 2016-09-20 | 2017-11-01 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610832730.7A CN106290166A (zh) | 2016-09-20 | 2016-09-20 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106290166A true CN106290166A (zh) | 2017-01-04 |
Family
ID=57713120
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610832730.7A Pending CN106290166A (zh) | 2016-09-20 | 2016-09-20 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106290166A (zh) |
WO (1) | WO2018054391A1 (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106872595A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-06-20 | 中国计量科学研究院 | 基于圆二色光谱技术的手性分子含量的测定方法 |
CN107290284A (zh) * | 2017-06-09 | 2017-10-24 | 江南大学 | 一种制备刺状铂包裹的金纳米棒手性二聚体用于dna损伤的检测方法 |
CN107805657A (zh) * | 2017-09-11 | 2018-03-16 | 杨蕾 | 一种手性金纳米粒子二聚体检测atp的方法 |
WO2018054391A1 (zh) * | 2016-09-20 | 2018-03-29 | 江南大学 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
CN108344863A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-31 | 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 | 一种基于适配体-纳米金传感的纳米孔检测微囊藻毒素的新方法 |
CN109187446A (zh) * | 2018-07-20 | 2019-01-11 | 江南大学 | 一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体 |
CN116814249A (zh) * | 2023-06-25 | 2023-09-29 | 江南大学 | 一种基于钴离子和铜纳米发光团簇构建手性纳米探针的方法及应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102890061A (zh) * | 2012-10-12 | 2013-01-23 | 江南大学 | 一种运用圆二光谱高灵敏检测银离子的方法 |
CN103058133A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-04-24 | 江南大学 | 一种基于非手性小分子组装手性纳米材料的制备方法 |
CN103103275A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-05-15 | 江南大学 | 一种基于手性四面体构象改变对目标dna浓度进行检测的方法 |
CN103412081A (zh) * | 2013-08-21 | 2013-11-27 | 江南大学 | 基于大小银二聚体手性信号的超灵敏检测磺胺二甲氧嘧啶的方法 |
CN103468810A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-25 | 江南大学 | 一种基于手性纳米材料对dna进行检测的方法 |
CN103760332A (zh) * | 2014-01-16 | 2014-04-30 | 江南大学 | 一种基于适配体的手性传感器检测双酚a的方法 |
CN103983488A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-08-13 | 江南大学 | 一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9910811D0 (en) * | 1999-05-10 | 1999-07-07 | Medical Res Council | Assays |
US20040018515A1 (en) * | 2002-04-03 | 2004-01-29 | Diener John L. | Compositions selective for adenosine diphosphate and methods of using same |
CN102367589B (zh) * | 2011-09-15 | 2013-02-27 | 王利兵 | 一种二元金纳米粒子Janus组装体的制备方法 |
CN106290166A (zh) * | 2016-09-20 | 2017-01-04 | 江南大学 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
CN106434852B (zh) * | 2016-09-20 | 2019-11-12 | 江南大学 | 一种基于手性自组装纳米传感器实现胞内端粒酶活性检测的方法 |
-
2016
- 2016-09-20 CN CN201610832730.7A patent/CN106290166A/zh active Pending
-
2017
- 2017-11-01 WO PCT/CN2017/108923 patent/WO2018054391A1/zh active Application Filing
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102890061A (zh) * | 2012-10-12 | 2013-01-23 | 江南大学 | 一种运用圆二光谱高灵敏检测银离子的方法 |
CN103058133A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-04-24 | 江南大学 | 一种基于非手性小分子组装手性纳米材料的制备方法 |
CN103103275A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-05-15 | 江南大学 | 一种基于手性四面体构象改变对目标dna浓度进行检测的方法 |
CN103412081A (zh) * | 2013-08-21 | 2013-11-27 | 江南大学 | 基于大小银二聚体手性信号的超灵敏检测磺胺二甲氧嘧啶的方法 |
CN103468810A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-25 | 江南大学 | 一种基于手性纳米材料对dna进行检测的方法 |
CN103760332A (zh) * | 2014-01-16 | 2014-04-30 | 江南大学 | 一种基于适配体的手性传感器检测双酚a的方法 |
CN103983488A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-08-13 | 江南大学 | 一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PAN FU ET AL: "A self-assembled chiral-aptasensor for ATP activity detection", 《NANOSCALE》 * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018054391A1 (zh) * | 2016-09-20 | 2018-03-29 | 江南大学 | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 |
CN106872595A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-06-20 | 中国计量科学研究院 | 基于圆二色光谱技术的手性分子含量的测定方法 |
CN106872595B (zh) * | 2017-02-20 | 2019-04-16 | 中国计量科学研究院 | 基于圆二色光谱技术的手性分子含量的测定方法 |
CN107290284A (zh) * | 2017-06-09 | 2017-10-24 | 江南大学 | 一种制备刺状铂包裹的金纳米棒手性二聚体用于dna损伤的检测方法 |
CN107290284B (zh) * | 2017-06-09 | 2019-07-26 | 江南大学 | 刺状铂包裹的金纳米棒手性二聚体用于dna损伤检测的方法 |
CN107805657A (zh) * | 2017-09-11 | 2018-03-16 | 杨蕾 | 一种手性金纳米粒子二聚体检测atp的方法 |
CN108344863A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-31 | 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 | 一种基于适配体-纳米金传感的纳米孔检测微囊藻毒素的新方法 |
CN109187446A (zh) * | 2018-07-20 | 2019-01-11 | 江南大学 | 一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体 |
CN116814249A (zh) * | 2023-06-25 | 2023-09-29 | 江南大学 | 一种基于钴离子和铜纳米发光团簇构建手性纳米探针的方法及应用 |
CN116814249B (zh) * | 2023-06-25 | 2024-03-26 | 江南大学 | 一种基于钴离子和铜纳米发光团簇构建手性纳米探针的方法及应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018054391A1 (zh) | 2018-03-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106290166A (zh) | 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法 | |
Liang et al. | The surface-plasmon-resonance effect of nanogold/silver and its analytical applications | |
He et al. | Reusable and dual-potential responses electrogenerated chemiluminescence biosensor for synchronously cytosensing and dynamic cell surface N-glycan evaluation | |
CN105738345B (zh) | 基于g-C3N4电致化学发光增强效应的蛋白激酶活性检测方法 | |
Andrade et al. | Evaluation of glycophenotype in breast cancer by quantum dot-lectin histochemistry | |
Kumar et al. | A biocompatible serine functionalized nanostructured zirconia based biosensing platform for non-invasive oral cancer detection | |
CN107253961B (zh) | 一种可比率检测半胱氨酸的水溶性荧光传感器的制备及应用 | |
Feng et al. | Ratiometric electrochemiluminescence detection of circulating tumor cells and cell-surface glycans | |
CN107132260B (zh) | 一种基于纳米材料检测莱克多巴胺的电化学传感器 | |
CN104977277B (zh) | 一种可同时检测细胞内野生型和变异p53蛋白的纳米囊泡 | |
CN108375616A (zh) | 一种检测碱性磷酸酶的液晶生物传感器及其制备方法和应用 | |
Zhang et al. | Recent progress in electrochemiluminescence microscopy analysis of single cells | |
CN104865247A (zh) | 基于纳米金聚集的显色方法在免疫检测中的应用 | |
CN110927238A (zh) | 一种检测前列腺特异性抗原的夹心型光电化学传感器的制备方法及应用 | |
CN102706836B (zh) | 一种局域表面等离子体共振芯片的原位制备方法和装置 | |
CN110456055A (zh) | 一种检测ps外泌体的生物传感器及其制备方法 | |
Han et al. | Cytosensing and dynamic monitoring of cell surface carbohydrate expression by electrochemiluminescence of quantum dots | |
Zhang et al. | Label-free amperometric immunosensor based on prussian blue as artificial peroxidase for the detection of methamphetamine | |
Zhou et al. | A novel “off-on-off” fluorescent sensor based on inner filter effect for ultrasensitive detection of protamine/trypsin and subcellular colocalization | |
Ding et al. | Surface-sensitive imaging analysis of cell–microenvironment interactions by electrochemiluminescence microscopy | |
Zhang et al. | An electrochemiluminescence biosensor for the detection of soybean agglutinin based on carboxylated graphitic carbon nitride as luminophore | |
Li et al. | Tailoring of a bionic bifunctional cellulose nanocrystal-based gold nanocluster probe for the detection of intracellular pathological biomarkers | |
Tseng et al. | Fluorescence sensing of heparin and heparin-like glycosaminoglycans by stabilizing intramolecular charge transfer state of dansyl acid-labeled AG73 peptides with glutathione-capped gold nanoclusters | |
Tang et al. | Recent advances in detection for breast-cancer-derived exosomes | |
CN106434852A (zh) | 一种基于手性自组装纳米传感器实现胞内端粒酶活性检测的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20170104 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |