CN106233143A - 癌症治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明公开对于预测人类肿瘤是否对阿西替尼治疗敏感之诊断方法及治疗人类肿瘤的方法。这些方法系基于对源自肿瘤的组织样品中CD68多肽表达水平的测量。可以使用免疫组织化学测量CD68表达水平，其中可以测定肿瘤中CD68阳性细胞的百分比及CD68阳性细胞的密度。

Description

癌症治疗
技术领域
本发明的领域涉及分子生物学、肿瘤学及临床诊断学。
背景技术
大部分的癌症药物对某些患者有效，但对其他患者无效。这可能因为肿瘤之间的基因变异，并甚至可在同一名患者体内的肿瘤之间观察到基因变异。关于靶向治疗，具体判断各种患者反应。因此，没有对测定哪些患者将受益于哪种药物之合适测试，不能够了解靶向治疗的所有潜力。根据美国国立卫生研究院(NIH)，用语“生物标记”定义为“作为正常生物过程或致病过程或对治疗干预的药理反应之指标客观地测量及评估之特征”。
基于生物标记的发现之改善的诊断学之发展具有藉由预先鉴定最可能对特定药物产生临床反应的患者以加速新药开发之潜力。这种诊断学具有显著地减少临床测试的规模、时间长度及费用之潜力。技术如基因组学、蛋白质组学及分子成像目前能够快速、敏感且可靠地检测特定基因突变、特定基因的表达水平、及其它分子生物标记。尽管对肿瘤的分子特性分析的多种技术之可用性，因已经发现的癌症生物标记相对少数，仍不了解大部分癌症生物标记之临床效用。例如，最近的评论文章表示：
挑战为发现癌症生物标记。虽然使用分子靶向剂在数种肿瘤类型—如慢性粒细胞白血病、胃肠道基质肿瘤、肺癌及胶质母细胞瘤—之靶向分子定义的子集合中已经有临床的成功，因缺乏在患者体内评估标靶试剂的有效策略而严重地限制在更广泛的情况下应用此成功之能力。问题主要在于不能够对临床测试选择具有分子定义的癌症的患者以评估这些激动人心的新药物。解决方式需要可靠地鉴定最可能受益于特定药剂的患者之生物标记(Sawyers,2008,Nature 452:548-552，第548页)。
如上述的评论阐明认识到对发现临床可用的生物标记及基于这些生物标记的诊断方法之需要。
癌症生物标记有三种不同的型：(1)预后性生物标记，(2)预测性生物标记，及(3)药效性(PD)生物标记。预后性生物标记用于根据侵略性，即生长及/或转移速度，及对治疗的反应度分类癌症，例如实体瘤。这有时被称为区别“坏的结果”的肿瘤和“好的结果”的肿瘤。预测性生物标记用于评估特定患者将会受益于特定药物治疗之可能性。例如，ERBB2(HER2或NEU)基因增强的乳癌患者为可能受益于曲妥珠单抗治疗，而无ERBB2基因增强的患者为不太可能受益于曲妥珠单抗治疗。药效性生物标记为当患者使用药物时药物对患者的影响之指标。因此，当在新药临床开发的早期阶段时，经常使用药效性生物标记以指引剂量及用药频率。对癌症生物标记的讨论，见，如Sawyers,2008,Nature 452:548-552。
阿西替尼(亦名为)为作用于血管内皮生长因子受体(VEGFR)之口服施用的小分子受体酪胺酸激酶抑制剂。阿西替尼被认为藉由抑制血管新生以降低肿瘤生长及转移，及藉由直接作用于表达及依赖这些受体的细胞以降低肿瘤生长及造成肿瘤退行。多个国家许可在疾病进展或对细胞因子或舒尼替尼(亦名为)为抗药性之后，对转移性肾细胞癌(mRCC)以阿西替尼治疗。
尽管大量的临床前或临床研究专注于VEGFR抑制剂，这种抑制剂之抗肿瘤活性的负责机制没有被完全了解。特别的是，肿瘤浸润淋巴球在影响mRCC患者的预后及对抗血管新生剂的敏感性/抗药性中的角色没有被彻底了解(如，见Polimeno et al.,2013,BJU Int112:686-696)。如同靶向治疗的其它类型，某些，但非所有的患者受益于阿西替尼治疗。因此，需要可使用于鉴定有可能(或较不可能)对阿西替尼治疗反应的肿瘤的患者之基于预测性生物标记的诊断方法。
发明内容
如同本文中将更详细讨论的，本发明部分涉及以下发现，来自哺乳动物肿瘤的组织样品中的肿瘤髓(即分化簇68，“CD68”)浸润(如，就CD68阳性细胞的百分比及CD68阳性细胞的密度而言升高的CD68的水平)与用VEGFR抑制剂(如阿西替尼)之改善的无进展存活期相关。因此，本发明提供鉴定较可能对VEGFR抑制剂(如阿西替尼)治疗正面地反应的肿瘤之方法，及治疗具有已经被鉴定为较可能对VEGFR抑制剂(如阿西替尼)反应的肿瘤的对象之方法。
例如，在一实施方式中，本发明涉及一种鉴定对以VEGFR抑制剂治疗敏感的肿瘤之方法，其包括：(a)测量取自考虑以VEGFR抑制剂治疗之人类患者的肿瘤之组织样品中CD68多肽表达水平；及(b)将步骤(a)中CD68表达水平与藉由测量取自先前以VEGFR抑制剂治疗且表现对VEGFR抑制剂为抗药性之人类患者及先前以VEGFR抑制剂治疗且表现对VEGFR抑制剂敏感之人类患者的肿瘤之组织样品中CD68多肽表达而测定之临界CD68表达水平比较，其中高于该临界水平的CD68表达水平表示该肿瘤对以VEGFR抑制剂治疗敏感。在一实施方式中，VEGFR抑制剂为阿西替尼。在另一实施方式中，测量CD68多肽表达的步骤是藉由免疫组织化学而进行的。在另一实施方式中，测量CD68多肽表达的步骤是藉由自全切片扫描之影像分析而进行的，其中测定样品中CD68阳性细胞的百分比。在另一实施方式中，此方法进一步包含测定样品中CD68阳性细胞的密度的步骤。在另一实施方式中，这些方法中任一方法之肿瘤选自乳腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、结肠直肠肿瘤、及胰脏肿瘤。
在另一实施方式中，本发明提供一种治疗mRCC方法，包括给根据本文描述的任一方法测定具有对VEGFR抑制剂敏感的mRCC肿瘤的患者施用VEGFR抑制剂。在一实施方式中，所述VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中本发明提供一种治疗癌症的方法，包括：a)测定对象的肿瘤中CD68阳性细胞的百分比；及b)若该百分比为至少2％、至少3％、至少4％、至少4.5％、至少4.6％、至少4.7％、至少4.8％、至少4.9％、至少5.0％、至少5.1％、至少5.2％、至少5.3％、至少5.4％、至少5.5％、至少5.6％、至少5.7％、至少5.8％、至少5.9％、至少6.0％、至少6.5％、至少7.0％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、或至少20％，给对象施用VEGFR抑制剂。在一实施方式中，所述VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中，本发明提供一种治疗癌症的方法，包括：a)测定对象的肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度；及b)若该细胞密度为至少0.05细胞/mm2、至少0.06细胞/mm2、至少0.07细胞/mm2、至少0.08细胞/mm2、至少0.09细胞/mm2、至少1.0细胞/mm2、至少1.1细胞/mm2、至少1.2细胞/mm2、至少1.3细胞/mm2、至少1.4细胞/mm2、或至少1.5细胞/mm2，给对象施用阿西替尼。在一实施方式中，所述VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中，本发明提供一种治疗癌症的方法，包括给有肿瘤的对象施用VEGFR抑制剂，其中在该肿瘤中细胞至少2％、至少3％、至少4％、至少4.5％、至少4.6％、至少4.7％、至少4.8％、至少4.9％、至少5.0％、至少5.1％、至少5.2％、至少5.3％、至少5.4％、至少5.5％、至少5.6％、至少5.7％、至少5.8％、至少5.9％、至少6.0％、至少6.5％、至少7.0％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、或至少20％为CD68阳性。在一实施方式中，所述VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中，本发明提供一种治疗癌症的方法，包括给有肿瘤的对象施用VEGFR抑制剂，其中在该肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度为至少0.05细胞/mm2、至少0.06细胞/mm2、至少0.07细胞/mm2、至少0.08细胞/mm2、至少0.09细胞/mm2、至少1.0细胞/mm2、至少1.1细胞/mm2、至少1.2细胞/mm2、至少1.3细胞/mm2、至少1.4细胞/mm2、或至少1.5cells/mm2。在一实施方式中，VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中本发明提供一种治疗癌症的方法，包括：a)测定对象的肿瘤中CD68阳性细胞的百分比；b)测定肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度；及c)若该百分比为至少2％、至少3％、至少4％、至少4.5％、至少4.6％、至少4.7％、至少4.8％、至少4.9％、至少5.0％、至少5.1％、至少5.2％、至少5.3％、至少5.4％、至少5.5％、至少5.6％、至少5.7％、至少5.8％、至少5.9％、至少6.0％、至少6.5％、至少7.0％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、或至少20％；且该细胞密度为至少0.05细胞/mm2、至少0.06细胞/mm2、至少0.07细胞/mm2、至少0.08细胞/mm2、至少0.09细胞/mm2、至少1.0细胞/mm2、至少1.1细胞/mm2、至少1.2细胞/mm2、至少1.3细胞/mm2、至少1.4细胞/mm2、或至少1.5细胞/mm2，给对象施用VEGFR抑制剂。在一实施方式中，VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中，本发明提供一种治疗癌症的方法，包括给有肿瘤的对象施用VEGFR抑制剂，其中在该肿瘤中细胞至少2％、至少3％、至少4％、至少4.5％、至少4.6％、至少4.7％、至少4.8％、至少4.9％、至少5.0％、至少5.1％、至少5.2％、至少5.3％、至少5.4％、至少5.5％、至少5.6％、至少5.7％、至少5.8％、至少5.9％、至少6.0％、至少6.5％、至少7.0％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、或至少20％为CD68阳性；及其中在该肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度为至少0.05细胞/mm2、至少0.06细胞/mm2、至少0.07细胞/mm2、至少0.08细胞/mm2、至少0.09细胞/mm2、至少1.0细胞/mm2、至少1.1细胞/mm2、至少1.2细胞/mm2、至少1.3细胞/mm2、至少1.4细胞/mm2、或至少1.5细胞/mm2。在一实施方式中，VEGFR抑制剂为阿西替尼。
在另一实施方式中，本发明提供本文公开之任何方法，其中该肿瘤选自乳腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、结肠直肠肿瘤、及胰脏肿瘤。在一实施方式中，本发明提供本文公开之任何方法，其中癌症或肿瘤为mRCC。
在另一实施方式中，进行本文公开的方法，其中测量CD68阳性细胞的百分比或细胞密度的步骤使用免疫组织化学进行，及进一步其中利用肿瘤样品的全切片扫描之影像分析。
在本发明的一些实施方式中，测量巨噬细胞含量是藉由测量巨噬细胞标记蛋白的存在或量而进行的。在另一实施方式中，测量巨噬细胞含量是藉由测定既定细胞群中巨噬细胞的数量而进行的。例如，测量巨噬细胞含量可藉由涉及检测巨噬细胞标记蛋白之免疫组织化学而进行。在另一实施方式中，测量巨噬细胞含量是藉由测量编码巨噬细胞标记蛋白的mRNA的存在或量而进行的。巨噬细胞标记蛋白的实例包括CCR2、CD14、CD68、CD163、CSF1R及MSR1。临界测定分析可包括接收者操作特征曲线分析。本发明的方法对测试多种肿瘤类型是有用的，包括，如乳腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、结肠直肠肿瘤、及胰脏肿瘤。
附图说明
图1显示在A4061032研究中包括之对象的人口学及基线特征。
图2显示生物标记CD3及CD68的阳性细胞的百分比及密度之归纳，切片对块，其作为A4061032研究的部分而收集。
图3显示比较生物标记CD68的阳性细胞的百分比及密度小于中位数及大于或等于中位数值之PFS的Kaplan-Meier图。
图4显示比较先前以治疗的患者体内的生物标记CD68的阳性细胞的百分比及密度小于中位数及大于或等于中位数值之PFS的Kaplan-Meier图。
图5显示比较生物标记CD3的阳性细胞的百分比及密度小于中位数及大于或等于中位数值之PFS的Kaplan-Meier图。
图6显示比较先前以治疗的患者体内的生物标记CD3的阳性细胞的百分比及密度小于中位数及大于或等于中位数的值之PFS的Kaplan-Meier图。
图7显示小于及大于或等于生物标记CD3及CD68各者的阳性细胞的百分比及密度的中位数分界点(cut point)层之OS的归纳。
图8显示小于及大于或等于先前以治疗的患者体内的生物标记CD3及CD68各者的阳性细胞的百分比及密度的中位数分界点层之OS的归纳。
图9显示比较小于大于或等于先前以治疗的患者体内的生物标记CD3及CD68的阳性细胞的百分比及密度的中位数之OS的Kaplan-Meier图。
图10显示依反应种类生物标记CD3及CD68阳性细胞的百分比及密度之归纳。
图11显示依反应种类先前以治疗的患者体内的生物标记CD3及CD68阳性细胞的百分比及密度之归纳。
发明详述
定义
如本文所用，“AG-13736”及“阿西替尼”意指6-[2-(甲基胺甲酰基)苯基磺酰基]-3-E-[2-(吡啶-2-基)乙烯基]吲唑，其具有下列化学结构(包括其盐及多形体(polymorph))：
如本文所用，“巨噬细胞标记蛋白”意指巨噬细胞细胞表面蛋白，检测到所述巨噬细胞细胞表面蛋白对在来自肿瘤的组织样品中存在的其它细胞类型之中鉴定巨噬细胞是有用的。示范的人类巨噬细胞标记蛋白为CCR2、CD14、CD68、CD163、CSFIR及MSRl。其它巨噬细胞标记蛋白可在本发明的实行中利用。
如本文所用，“接收者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)”曲线意指对二元分类系统，假阳性率(敏感性)对真阳性率(特异性)之图。在构建ROC曲线时，应用下列定义：
假阴性率“FNR”＝1-TPR
真阳性率“TPR”＝真阳性/(真阳性+假阴性)
假阳性率“FPR”＝假阳性/(假阳性+真阴性)
如本文所用，对治疗“反应”或“响应”意指，关于被治疗的肿瘤，肿瘤呈现：(a)生长趋缓、(b)停止生长、或(c)退行。
如本文所用，“临界测定分析”意指代表特定肿瘤类型(如人类肾细胞恶性肿瘤)的数据库之分析，以测定对特定肿瘤类型的临界分数。对于来自这些肿瘤的群的各种肿瘤，代表特定肿瘤类型的数据库可包括：(a)实际肿瘤反应数据(对治疗(如阿西替尼)反应或无反应)，及(b)巨噬细胞含量及/或CD68表达水平。
如本文所用，“临界分数”意指这样的分数，超过其被分类为可能对治疗(如阿西替尼)敏感的肿瘤。
如本文所用，“CD68表达水平”或“CD68多肽表达水平”意指在肿瘤样品中表达的CD68蛋白的量，并可藉由任何合适的分析性技术如免疫组织化学而测定。此外，“CD68表达水平”能以多种用语而表达，包括在特定样品中经测定为“CD68阳性”的细胞的百分比，及在特定样品中经测定为“CD68阳性”的细胞的密度。
如本文所用，“CCR2”(趋化激素(C-C基序)受体2，亦名为CD 192、CKR2、CMKBR2、MCP-l-R、CC-CKR-2、FLJ78302、MGC103828、MGC111760及MGC168006)意指由以EntrezGenelD No.729230鉴定的基因及其等位基因变体编码的人类蛋白。
如本文所用，“CD14”意指由以Entrez GenelD No.929鉴定的基因及其等位基因变体编码的人类蛋白。
如本文所用，“CD68”(亦名为GP110；SCARD1；及DKFZp686M 18236)意指由以EntrezGenelD No.968鉴定的基因及其等位基因变体编码的人类蛋白。
如本文所用，“CD68阳性”细胞为藉由任何合适的分析性技术(如免疫组织化学)检测到CD68存在之细胞。
如本文所用，“CD163”(亦名为Ml 30及MM 130)意指由以Entrez GenelD No.9332鉴定的基因及其等位基因变体编码的人类蛋白。
如本文所用，“CSF1R”(群落刺激因子1受体，亦名为CSFR、FMS、FIM2、C-FMS、及CD115)意指由以Entrez GenelD No.1436鉴定的基因及其等位基因变体编码的人类蛋白。
如本文所用，“MSR1”(巨噬细胞清道夫(scavenger)受体1，亦称为CD204、SCARA1、SR-A、phSRl及phSR2)意指由以Entrez GenelD No.4481鉴定的基因及其等位基因变体编码的人类蛋白。
如本文所用，“HR”意指风险比(hazard ratio)。在图3、4、5、6及9中，假设比例风险，风险比大于1表示支持<中位数的风险比减少；风险比少于1表示支持≧中位数的风险比减少；及只有当比较群两者都是N>＝10时产生对数秩p-值。在图7及8中，假设比例风险，风险比大于1表示支持<中位数的风险比减少；风险比少于1表示支持>＝中位数的风险比减少；及只有当比较群两者都是N>＝10时产生对数秩p-值；及只有当比较群两者都是N>＝5时产生风险比统计；然而，当在任一群观察到零事件，移除对数秩p-值及风险比。
临床研究
下文意指阿西替尼，为作用于血管内皮生长因子受体(VEGFR)之口服的小分子受体酪胺酸激酶抑制剂。阿西替尼被认为藉由抑制血管新生以降低肿瘤生长及转移，及藉由直接作用于表达及依赖这些受体的细胞以降低肿瘤生长及造成肿瘤退行。多个国家许可在疾病进展之后，或对细胞因子或舒尼替尼为抗药性，对转移性肾细胞癌(mRCC)以阿西替尼治疗。
研究A4061032(ClinicalTrials.gov识别码：NCT00678392)是标题为“阿西替尼(AG-013736)作为用于转移性肾细胞癌第二线药物：轴测试”之第3期登记测试。设计测试以展现在第一线方案失败之后在mRCC的患者身上阿西替尼延迟肿瘤进展较索拉非尼优良。总共计划650位患者参与，且最后有723位对象参与研究。
如实施例中所更详细描述的，从参与A4061032的患者及特别同意提供肿瘤样品采集者收集福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)的肿瘤样品。肿瘤髓(分化簇68，“CD68”)或淋巴细胞(分化簇3，“CD3”)浸润在52位以阿西替尼治疗的患者的肿瘤样品中藉由免疫组织化学(IHC)评估。目标是调查这些生物标记与功效的潜在关联，与髓浸润造成对目标为VEGF-VEGFR2路径的抗血管新生试剂为抗药性的假说一致(见Shojaei et al.(2007)Nat.Biotechnol.25(8):911-920；及Lin et al.(2010)Eur.J.Cancer Suppl.8(7):191)。
藉由全切片扫描的影像分析进行CD3及CD68的评估。圈起目标区域，并运行影像分析算法。测量阳性细胞的百分比(阳性细胞/总细胞数的数目)及阳性细胞的密度(如阳性细胞/mm2的数目)。一些患者捐赠FFPE块，而一些捐赠块的切片。无论提供的是切片或块，分析所有患者的样品。
对IHC数据，有52位可评估的患者，其中33位先前以(舒尼替尼)治疗。CD3数据与测量的任何端点之间无关联。如实施例中所更详细描述的，对CD68阳性细胞的百分比及细胞密度为高度相关且有目标物有反应的患者对有目标物没有反应的患者高出两倍。
不论先前治疗，有≧中位数的CD68值(分界＝5.21％阳性细胞或0.08细胞/mm2的细胞密度)的患者中无进展存活期(PFS)的中位数对两个分界点均为12.0个月，而有<中位数的生物标记值的患者，分别为3.7及3.8个月(风险比[HR]＝0.42，对数秩p-值≦0.01)。预先以治疗的患者，观察到PFS有相似趋势，有边际统计显著性(对于阳性细胞％及细胞密度p-值分别为0.066及0.056)。对有相对较高CD68细胞数的患者之目标反应及整体存活期(overall survival,OS)观察到良好的功效之相似趋势，虽然当所有患者一同评估或当只评估预先以治疗的患者时这些差异无统计显著性。
进行另外的接收者操作特征(ROC)分析以更好地了解基线肿瘤CD68水平之敏感性及特异性，及从最初选择的CD68的值的中位数优化CD68分界点的定义。选择2、4、6、8个月PFS的默认分界值，及在四个PFS时间点的每一者上，再次观察到有较高CD68阳性细胞及细胞密度的患者对PFS具有较长的值(或相当于较小的疾病进展或死亡机会)。
如实施例中所更详细描述的，在2个月PFS观察到最高的观察到的敏感性、特异性及曲线下面积(AUC)的值，其中ROC曲线的AUC对CD68阳性细胞及细胞密度分别为0.776及0.809，其表示，使用CD68表达水平，对于PFS的令人信服的(compelling)整体诊断精确度。用于预测6个月的PFS的最佳分界点对CD68百分比及阳性细胞密度分别为4.41％及0.06细胞/mm2。对预先以治疗的患者数值是相似的。
ROC分析亦用于评估CD68对ORR。如实施例中所更详细描述的，AUC对于CD68阳性细胞的百分比及细胞密度分别为0.791及0.784，这再次表示使用CD68表达水平预测ORR的令人信服的整体诊断精确度。用于预测ORR的最佳分界点对于CD68阳性细胞的百分比及细胞密度分别为9.42％及0.13细胞/mm2。对预先以治疗的患者数值为相似的。对在21个月的存活机率，对测试的中位数值，ROC分析没有显示统计上的显著关联(AUC为0.559)。
总之，不论先前的治疗，对有较高肿瘤CD68水平的患者观察到优良的PFS。有＞中位数的CD68值的患者的PFS中位数对于两个分界点都是12.0个月，而对有<中位数的生物标记的值的患者则为3.7和3.8个月(HR＝0.42，对数秩p-值≦0.01)。ROC分析表示对此数据在2、4、6及8个月令人信服的预测值，及改善分界点(在6个月—对CD68阳性细胞的百分比及细胞密度为4.41％及0.06细胞/mm2)。
于是，本发明涉及对以VEGFR抑制剂(如阿西替尼)治疗的患者较高的CD68表达与较高的ORR及较长的PFS相关之发现。与OS不相关可能是因为在于阿西替尼进展之后混杂的进展后治疗。这些观察结果与增加的VEGF生产的机制一致，并且使血管新生状态与较高巨噬细胞浸润相关，并因此与对阿西替尼的治疗效果之较高的敏感性相关。PFS的ROC分析，登记的端点，在治疗两个月之后显示最高的敏感性及特异性。
之前报道CD68表达与接受tivozanib治疗的患者的成果相关(Lin et al.(2010)Eur.J.Cancer Suppl.8(7):191)。之前亦显示髓(CD11b Gr+)细胞在肺动物模型中造成对贝伐单抗为抗药性(Shojaei et al.(2007)Nat Biotechnol.25(8):911-920)。这些数据应与对有较高CD68肿瘤水平的患者之较差的成果一致。然而，这在此研究中没有被观察到。
对RCC患者，预后生物标记的鉴定已有显著的进展，但目前没有鉴定出目标VEGFR抑制剂(如阿西替尼)功效的预测性标记。根据最近的评论(Tonini G et al.(2011)ExperRev Anticancer Ther 11(6):921-930)，对RCC患者最合适的疗法的选择仍取决于风险标准(MSKCC)及其它预后标准。此外，作者们宣称这些综合的标准提供RCC患者成果的信息，及需要对mRCC疗法反应的预测性因子。在随机的临床测试中需要潜在标记的验证(Id.)。亦引用组织采集与分析的标准化作为在研发分子生物标记以潜在指导疗法中的主要挑战(Sonpavde G及Choueiri T,(2012)Br j Cancer 107(7):1009-1016)。
进行本发明可使用的方法及分析性技术于下文进一步公开。
组织样品
人类患者的肿瘤的组织样品可作为RNA来源、蛋白来源、或用于免疫组织化学(IHC)的切片的来源而使用，这样可如本发明所述测定样品中CD68表达水平。组织样品可藉由使用常规肿瘤活体组织切片工具及程序而取得。可由本领域技术人员使用而获得肿瘤样品的认可的医疗程序的实例是内窥镜活检、切除式活检、切开式活检、细针活检、钻取式活检、刮取式活检及皮肤活检。肿瘤组织样品应该足够大以提供充足的RNA、蛋白或切片，用于测量标记基因，如，CD68表达水平或藉由IHC可视化巨噬细胞，如CD68阳性细胞表示。
肿瘤组织样品可为允许测量巨噬细胞含量或特别是CD68的任何型态。换言之，所述组织样品必须足够用于RNA提取、蛋白质提取、或切片的制备。于是，组织样品可为新鲜的、经由合适的低温技术保存、或经由非低温技术保存。处理临床活检样本的标准方法为在福尔马林中固定组织样品及接着将其包埋入石蜡。这种形式的样品普遍称作福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织。本领域技术人员熟知用于后续分析之组织制备的合适的技术。
巨噬细胞含量
在本发明的实施中，可藉由任何合适的方法(有多种)进行在组织样品(如，来自肿瘤)中测定巨噬细胞含量水平(如，巨噬细胞数目或巨噬细胞标记如CD68的表达，如巨噬细胞标记蛋白的表达或编码巨噬细胞标记蛋白如CD68的mRNA的表达)。例如，可藉由测量已知作为巨噬细胞标记(如CD68)使用的一或多个基因的表达而完成间接测量巨噬细胞含量。测量基因表达的多种方法已知于本技术领域。这些方法可应用于测定巨噬细胞标记蛋白或编码巨噬细胞标记蛋白的mRNA的量。示范性人类巨噬细胞标记基因为CCR2、CD14、CD68、CD163、CSF1R及MSR1。其它巨噬细胞标记也可使用。
RNA分析
常规的微阵列分析及定量聚合酶链反应(QPCR)为用于以mRNA水平测定巨噬细胞标记基因表达水平之方法的实例。在本发明的一些实施方式中，使用标准方案自细胞、肿瘤或目标组织提取RNA。在其它实施方式中，使用不要求分离RNA的技术进行RNA分析。
RNA分离
从组织样品提取真核生物的mRNA(如聚(a)RNA)快速且高效率的方法是完善的且是本领域技术人员已知的。见，如，Ausubel et al.,1997，Current Protocols ofMolecular Biology,John Wiley and Sons。组织样品可为新鲜的、冷冻的或固定的石蜡包埋(FFPE)样品如临床研究肿瘤样本。总体上，从新鲜或冷冻组织样品分离的RNA较从FFPE样品分离的RNA倾向于较少破碎。然而，肿瘤材料的FFPE样品为较易取得的，且FFPE样品为用于本发明的方法的RNA的合适来源。对FFPE样品作为RNA来源藉由RT-PCR记录基因表达之讨论，见，如Clark-Langone et al.,2007,BMC Genomics 8:279。亦见，De Andres et al.,1995,Biotechniques 18:42044；及Baker et al.,美国申请专利No.2005/0095634。商业上可取得的试剂盒与厂商对RNA提取及制备的指示之使用为广泛且普遍的。多种RNA提取产品及完整试剂盒的商业上厂商包括Qiagen(Valencia,CA)、Invitrogen(Carlsbad,CA)、Ambion(Austin,TX)及Exiqon(Woburn,MA)。
总体而言，以组织/细胞瓦解开始RNA分离。当组织/细胞瓦解时将由RNase分解的RNA最小化是被需求的。在RNA分离过程中限制RNase活性的方法为确保当细胞瓦解时变性剂立刻接触细胞内容物。其它常见的方法为在RNA分离过程中包括一或多个蛋白酶。任选地，在收集后立刻于室温下在RNA稳定溶液中浸泡新鲜组织样品。稳定溶液快速地渗透细胞，使RNA保存在摄氏4度时稳定，用于后续的分离。
在某些方案中，总RNA为藉由氯化铯密度梯度离心而自瓦解的肿瘤材料分离。总体而言，mRNA占总细胞的RNA的约1百分比至5百分比。固化的Oligo(dT)，如普遍使用oligo(dT)纤维素以从核醣体RNA(ribosomal RNA)和转运RNA(transfer RNA)分离mRNA。若在分离后保存，必须在无RNase的环境下保存RNA。分离的RNA稳定保存的方法已知于本技术领域。可取得用于稳定保存RNA的多种商业产品。
微阵列
编码巨噬细胞标记蛋白(如CD68)的一或多个基因的mRNA表达水平可使用常规DNA微阵列表达谱技术而测量。DNA微阵列为特定DNA片段或附着在固体表面或基质如玻璃、塑料或硅的探针之集合，其中各个特定DNA片段占据数组中的已知位置。以标记RNA的样品杂交，通常在严格的杂交条件下，允许与数组中各个探针相合的RNA分子之检测及量化。在严格冲洗以移除非特异性结合的样品材料之后，微阵列藉由共焦雷射显微镜或其它合适的检测方法而扫描。现代商业DNA微阵列，常称作DNA芯片，典型包含数以万计的探针，及因此能够同时测量数以万计基因的表达。这种微阵列可用于实施本发明。或者，订制芯片仅包含测量编码巨噬细胞标记蛋白(如CD68)一或多个基因加上必要的对照或标准(如，用于数据标准化)所需的少数探针，可用于实施本发明。
为了促进数据标准化，可使用双色的微阵列读取机。在双色(双频)系统中，样品能以发出第一波长的第一荧光标记，而以第二荧光标记的RNA或cDNA标准发出不同的波长。例如，Cy3(570nm)及Cy5(670nm)常在双色微阵列系统中一起利用。
DNA微阵列技术是完善研发、商业上可取得、及广泛利用的。因此，进行本文公开的方法时，本领域技术人员可使用微阵列技术以测量编码巨噬细胞标记蛋白(如CD68)的基因表达水平而不需过多的实验。DNA微阵列芯片、试剂(如用于RNA或cDNA制备、RNA或cDNA标记、杂交及冲洗溶液之试剂)、仪器(如微阵列读取机)及方案熟知于本技术领域且可取自多种商业上的来源。微阵列系统之商业上的厂商包括Agilent Technologies(Santa Clara,CA)及Affymetrix(Santa Clara,CA)，但亦可使用其它PCR系统。
定量RT-PCR
mRNA的量代表编码巨噬细胞标记蛋白(如CD68)的个别基因可使用常规的定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptase polymerase chainreaction,qRT-PCR)技术而测量。qRT-PCR的优点包括敏感、弹性、定量精确性、及分辨高度相关的mRNA的能力。关于用于定量PCR的组织样品处理的指导手册可取自多种来源，包括qRT-PCR商业产品的制造商及厂商(如，Qiagen(Valencia,CA)及Ambion(Austin,TX))。用于qRT-PCR自动化进行的仪器系统为商业上可取得且在许多实验室中例行地使用。广为人知的商业系统的实例为应用生命系统7900HT快速实时聚合酶链反应系统(AppliedBiosystems,Foster City,CA)。
一旦mRNA被分离，藉由RT-PCR而记录基因表达的第一步骤为将mRNA模板反转录成cDNA，其中接着在PCR反应中呈指数放大。两种普遍使用的反转录酶为禽类成髓细胞瘤病毒反转录酶(AMV-RT)及莫洛尼鼠类白血病病毒反转录酶(MMLV-RT)。反转录反应典型是以特异引物、随机六聚体、或oligo(dT)引物而启动。得到的cDNA产物可在接续的聚合酶链反应中作为模板使用。
使用热稳定的DNA依赖的DNA聚合酶进行PCR步骤。在PCR系统中最普遍使用的聚合酶为海栖热袍菌(Thermus aquaticus,Taq)聚合酶。与用于放大之目标DNA区域互补(即，自编码巨噬细胞标记蛋白(如CD68)的基因反转录的cDNA区域)的引物之使用导致PCR的选择性。因此，当在本发明中利用qRT-PCR时对各个标记基因为特异性的引物是基于基因的cDNA序列。商业上的科技如SYBR(R)绿或TaqMan(R)(Applied Biosystems,Foster City,CA)可根据厂商的指示而使用。藉由比较管家基因(如β-肌动蛋白或GAPDH)的量可在加入的样品之间标准化信使RNA量的差异。mRNA表达水平可相对任何单对照样品(如取自正常、非肿瘤组织或细胞的mRNA)而表达。或者，可相对取自肿瘤样品库、或肿瘤细胞株、或商业上可取得的对照mRNA组之mRNA而表达。
用于PCR分析编码巨噬细胞标记蛋白(如CD68)的基因的表达水平之合适的引物组可由本领域技术人员设计及合成而无需过多实验。或者，用于实行本发明的PCR引物组可购自商业上的来源(如应用生命系统)。PCR引物优选长为约17至25核苷酸。引物可设计成具有特定熔解温度(Tm)，使用常规算法以估计Tm。用于引物设计的软件及估计Tm为商业上可取得的，如，Primer ExpressTM(Applied Biosystems)，及亦可取自于网络，如，Primer3(Massachusetts Institute of Technology)。藉由应用PCR引物设计之建立的原理，可使用大量不同的引物以测量任何给定基因的表达水平，包括巨噬细胞标记蛋白如CD14、CD68、MSR1、CSFR1、CD163及CCR2。
在本发明的一些实施方式中，使用不涉及RNA提取或分离的技术以进行RNA分析。这种技术的其中一种是定量核酸酶保护分析，其在qNPATM(High Throughput Genomics,Inc.,Tucson,AZ)名下是商业上可取得的。当要分析的肿瘤组织样品是FFPE材料型态时此技术可为有利的。见，如，Roberts et al.,2007,Laboratory Investigation 87:979-997。
蛋白质分析
在本发明的方法中，可于蛋白质水平检测到巨噬细胞标记基因表达(如CD68)。用于在蛋白质水平测量巨噬细胞标记基因表达水平的方法之实施例包括酶联免疫吸附分析法(ELISA)及IHC分析。
ELISA
进行巨噬细胞标记蛋白ELISA，如，CD68ELISA，需要至少一种抗巨噬细胞标记蛋白抗体，即，检测抗体。在示范性实施方式中，CD68是巨噬细胞标记蛋白。将要分析之来自样品的CD68蛋白于固体支撑物(如聚苯乙烯微价盘)上固化。固化可藉由CD68的非特异结合，如经由吸附于表面。或者，固化可藉由特异性结合，如，在“三明治法”ELISA中，经由藉由捕捉抗体(不同于检测抗体之抗CD68抗体)结合来自样品的CD68。在固化CD68之后，加入检测抗体，且检测抗体与结合的CD68形成复合物。检测抗体直接或间接地(如经由特异性地鉴定检测抗体之二抗)连结至酶。通常在各步骤之间，结合CD68的盘以温和的洗涤剂溶液洗涤。典型的ELISA方案亦包括一或多个阻挡步骤，其涉及使用非特异性结合蛋白如牛血清白蛋白以阻挡不想要的蛋白试剂非特异性结合至盘。在最终洗涤步骤之后，藉由加入合适的酶基质以发展盘，以产生可见的信号，其标记样品中CD68的量。基质可为，如，产色基质或荧光基质。ELISA方法、试剂及设备熟知于本领域且为商业上可取得的。
了解其它巨噬细胞标记蛋白(如，CCR2、CD14、CD163、CSF1R、及MSR1)的表达水平，及可藉由使用对各巨噬细胞标记蛋白为特异性的检测抗体ELISA测量其它巨噬细胞特异蛋白。
免疫组织化学(IHC)
在一给定的细胞群中巨噬细胞的数目可藉由免疫组织化学法测定(如，可视化的)。另外，在样品中对一给定的生物标记蛋白(如CD68)为阳性的细胞的百分比及密度，可藉由免疫组织化学法测定。藉由IHC鉴定巨噬细胞标记蛋白，如，CD68IHC，需要至少一种抗巨噬细胞标记蛋白抗体，如，至少一种抗CD68抗体。适于IHC之多种抗CD68抗体为商业上可取得的。例如，合适的抗体可购自Dako North America,Inc.(Carpinteria,CA)、abeam(Cambridge,MA)、Abnova(Walnut,CA),R and D Systems(Minneapolis,MN)或Invitrogen(Carlsbad,CA)。使用标准技术，抗CD68抗体可用于检测切片中CD68的存在，如5微米的切片，取自肿瘤，包括石蜡包埋且冷冻的肿瘤切片。通常，肿瘤切片最初以收回在采集及保存肿瘤材料的初始过程固定之蛋白的抗原性结构方式施用。切片接着被阻挡以防止由抗CD68检测抗体的非特异性结合。CD68蛋白的存在接着藉由抗CD68抗体结合至CD68蛋白而检测。检测(一)抗直接或间接地(如经由特异性识别检测(一)抗之二抗或聚合物)连结至酶。通常，在步骤之间清洗并以非特异性蛋白如牛血清白蛋白封闭肿瘤切片。使用合适的酶基质发展切片已产生可见的信号。样品能以苏木素(hematoxylin)复染。
应理解，其它巨噬细胞标记蛋白(如，CCR2、CD14、CD163、CSF1R、及MSR1)的表达，及可使用对各巨噬细胞标记蛋白为特异性的抗体藉由IHC以相似的方式检测其它巨噬细胞特异标记蛋白。
数据解读
对肿瘤的巨噬细胞分数可相对临界分数而解读。巨噬细胞分数，或特定生物标记(如CD68)的表达水平，相等于或高于临界分数可解读成肿瘤可能对以VEGFR抑制剂(如以阿西替尼)的治疗敏感(有反应的)之预测。或者，巨噬细胞分数，或或特定生物标记(如CD68)的表达水平，相等于或低于临界分数可解读成肿瘤可能对以VEGFR抑制剂(如以阿西替尼)的治疗为抗药性(无反应的)之预测。
最佳的临界巨噬细胞分数，或CD68表达水平，可藉由进行临界测定分析而经验性地(或至少大约地)检测。优选的是，临界测定分析包括接收者操作特征(ROC)曲线分析。ROC曲线分析为建立的统计技术，其应用于非熟习本技术领域者。对ROC曲线分析的讨论，见总体上Zweig et al.,1993,“Receiver operating characteristic(ROC)plots:afundamental evaluation tool in clinical medicine”,Clin.Chem.39:561-577；及Pepe,2003,The statistical evaluation of medical tests or classification andprediction,Oxford Press,New York。
巨噬细胞分数，CD68表达水平，及最佳临界分数可能随着肿瘤类型不同而变化。因此，临界测定分析优选为使用本发明进行于代表将要测试的任何给定的肿瘤之一或多个数据库。用于临界测定分析的数据库包括：(a)实际反应数据(有反应或无反应)，及(b)巨噬细胞分数或对来自一肿瘤群的各个肿瘤样品的CD68表达水平。一旦巨噬细胞分数或CD68临界表达水平相对一给定的肿瘤类型而测定，临界表达水平可应用于解读此肿瘤类型的肿瘤的巨噬细胞分数或CD68表达水平。
ROC曲线分析可依照下文进行。将任何巨噬细胞分数或CD68表达水平高于或等于临界之样品作为有反应者(敏感)鉴定。或者，将任何巨噬细胞分数或CD68表达水平低于或等于临界之样品作为无反应者(抗药性)鉴定。对所有来自样品的测试的集之巨噬细胞分数或CD68表达水平，“有反应者”及“非反应者”(推测性称呼)使用此分数作为临界而分类。此方法经由对数据库之推测性称呼对实际反应数据之比较，使对各潜在临界能够计算TPR(y向量)及FPR(x向量)。接着ROC曲线藉由使用TPR向量、及FPR向量做出点曲线而建构。若ROC曲线是在对角线之上从点(0,0)至点(1.0,0.5)，显示巨噬细胞测试结果是较随机为佳的测试。
可使用ROC曲线以鉴定最佳操作点。最佳操作点为在衡量的假阳性的成本对假阴性的成本之间产生最佳平衡的点。这些成本不需为相等的。在ROC空间中于点x、y分类之平均预期成本藉由下式测定。
C＝(1-p)α*x+p*β(l-y)
其中：
α＝假阳性的成本，
β＝缺失的阳性(假阴性)的成本，及
p＝阳性案例的比例。
假阳性及假阴性可藉由对α及β分配不同值而不同地加权。例如，若决定在非反应者的患者治疗的成本包括更多患者于有反应者群中，可将α的量增多。在这情况下，假设假阳性及假阴性的成本是相同的(α等于β)。因此，在ROC空间中点x、y分类的平均预期成本为：
C’＝(l-p)*x+p*(l-y)。
在使用所有假阳性及假阴性(x,y)对之后可计算最小的C’。最佳临界分数计算成在C’的(x,y)分数。
除了预测肿瘤是否将会对VEGFR抑制剂(如阿西替尼)敏感或有抗药性之外，巨噬细胞分数或CD68表达水平提供大约但有用之肿瘤会是敏感或抗药性的可能程度的指标。
测试试剂盒
本发明包括包含用于进行本发明之方法的特定组分之诊断性测试试剂盒。诊断性测试试剂盒在进行诊断性鉴定中提高便利性、速度及再现性。例如，在本文的基于qRT-PCR的示范性实施方式中，基本的诊断性测试试剂盒包括用于分析巨噬细胞标记(如CD68)的表达之PCR引物。在其它的实施方式中，更精巧的测试试剂盒不仅包含PCR引物，但亦包含缓冲剂及用于使用PCR技术测量CD68表达水平的详细指示。在某些实施方式中，试剂盒包括测试方案及测试所需的所有消耗性组件((复数个)RNA样品除外)。
在本文的基于DNA微阵列的示范性实施方式中，测试试剂盒包括设计成与特定设备一起使用之微流体卡(阵列)。任选地，微流体卡为设计成用于测量巨噬细胞标记基因表达水平之客制的装置。这种客制的微流体卡为商业上可取得的。例如，TaqMan鉴定为设计成使用于Applied Biosystems 7900HT Fast Real Time PCR System(Applied Biosystems,Foster City,CA)之384槽的微流体卡(鉴定)。示范性流体卡可能包括任何用于测量CCR2、CD14、CD68、CD163、CSF1R及/或MSR1加上必要的对照或标准(如，用于数据标准化)的引物组合。亦可在用于实行本发明之流体卡上包括其它巨噬细胞标记蛋白。
在本发明的一些实施方式中，测试试剂盒包含用于藉由IHC测定肿瘤巨噬细胞含量的材料。IHC试剂盒，例如，可能包含抗人类巨噬细胞标记的一抗，如，小鼠抗人类CD68抗体，及与报告酶缀合的二抗，如，山葵过氧化酶(horseradish peroxidase)。在一些实施方式中，以特异性识别一抗的缀合聚合物取代二抗。
实施例
本发明由以下实施例进一步说明，其不应以任何方式被理解为限制发明范畴或内容。
实施例1-切片对块之CD3和CD68阳性细胞的百分比及密度
本研究为双臂、随机、双盲、多中心的第3期研究，阿西替尼对索拉菲尼，在转移性肾细胞癌(mRCC)患者中进行，在一包含一或多种以下药剂的在先系统性第一线方案失败之后进行：舒尼替尼、贝伐单抗+IFNα、替西罗莫司(temsirolimus)，或一或多种细胞因子。总体上，将723位mRCC患者随机化并参与本研究，其中52位阿西替尼治疗的患者以免疫组织化学(IHC)分析而评估；另外，52位患者中的33位先前以治疗。
如图1所示，在IHC分析中包括的主要患者为白人(患者的90.4％)、男性(患者的69.2％)及来自北美(患者的57.7％)及欧洲(32.7％)。总平均(标准差)年龄、身高及体重分别为58.3(11.0)岁、173.0(10.0)cm、及84.6(19.1)kg。所有患者具有0(患者的51.9％)或1(患者的48.1％)的ECOG表现状态。总体上，对Memorial Sloan-Kettering Cancer Center(MSKCC)存活之预后群因子模型，23.1％的患者归类为有利的，及34.6％及42.3％的患者分别为中等及不佳的。另外，MSKCC风险群使用以下四种风险因子而衍生：高的乳酸脱氢酶(>1.5倍正常上限)、低的血清血红素(低于正常下限)、高的修正血清钙(>10mg/dL)及先前无肾切除术。
对CD3及CD68评估所有52位患者。在52位可评估CD3及CD68的患者当中，26位捐赠福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)肿瘤块，及26位捐赠的切片用于分析。MosaicLaboratories提供代表正常人类及人类癌症的FFPE材料。依按照由人类研究保护办公室定义的“人类测试研究豁免”的准则用于体外分析允许使用残留的、去除个人讯息的、或匿名的人类样品之IRB评论的方案(MOS001)处理样本。CD68小鼠单克隆KP1抗体(Catalog#M0814，Lot#46406，保存期限：2011年九月)购自Dako(Carpinteria,California,UnitedStates)并依照附带的文件保存在2-8℃。小鼠IgG同型对照抗体(Lot#37211，保存期限：2010年七月)购自Dako并依照附带的文件保存在2-8℃。依照Mosaic Laboratories的SOP进行IHC。CD68之IHC鉴定被设计成且经验证与用于“自制”的第一级测试验证之CLIA准则相合。
由病理学家及涉及以下组合之反应性的评估而评估染色：CD68染色的细胞局部化；染色强度；次细胞局部化；及目标组织类型的主要组成物中细胞染色的百分比。显微照相(20倍放大)以附接于Nikon Eclipse 50i显微镜的Spot Insight QE Model 4.2致冷电荷耦合装置相机(cooled charge-coupled device camera)(Diagnostic Instruments,Sterling Heights,Michigan,United States)取得。
CD3及CD68阳性细胞的平均百分比在组织切片中较在组织块中为稍低；对CD3为13.61％比17.95％及对CD68为5.83％比8.21％。相似地，在组织切片中观察到较组织块中为稍低的平均细胞密度；对CD3为489.15细胞/mm2比590.50细胞/mm2，及对CD68为0.08细胞/mm2比0.13细胞/mm2(图2)。
实施例2-较高的CD68表达水平与良好的ORR及PFS(但非OS)呈正相关
对IHC生物标记分析，使用生物标计分析组，其包括所有接受至少一剂研究治疗的患者。分析以下功效端点：PFS、OS、及客观反应率(objective response rate,ORR)。总结的统计依照反应类别(对各标记，完全反应[CR]+部分反应[PR]对稳态疾病[SD]+进展疾病[PD])提供于阳性细胞的百分比及密度。对反应类别之间的差异进行Wilcoxon秩和检验。Fisher’s精确测试用于测试使用中位数值作为分界点之反应类别与生物标记层之间的关联。OS及PFS的分布使用Kaplan-Meier法藉由生物标记中位数值作为分界点而在生物标记层之间比较；在任何层中当N<10时不显示p-值。估计的风险比(HR)及其2侧的95％置信区间(CI)，及报告事件时间中位数及其2侧的95％置信区间。使用威尔克尔逊等级和测试以中位数值作为分界点在生物标记层之间比较肿瘤体积中最佳的反应百分比变化。
在生物标记层之间的ORR、PFS、及OS分析中对显著测试结果(p<0.05)，生产接收者操作特征(ROC)曲线以进一步评估作为患者挑选标记效用的潜力。在预测双患者客观反应(CR+PR对SD+PD)中基线CD68值作为连续性诊断标记上进行ROC分析。对时间相依临床结果PFS及OS，时间相依的ROC，记为ROC(t)，其中t表示目标时间点，应用于使用Kaplan-Meierestimator 20分析基线CD68值以预测存活结果。用于预测临床结果的CD68值的最佳分界点为取自ROC曲线上的点(其具有从敏感及特异性两者的值为1的点之最小距离)。使用梯型规则计算AUC。
观察到较高的CD68表达与较长的PFS及较高的ORR相关，然而，在患者中没有观察到CD68表达及OS之间的关联。不论先前的治疗，有≧中位数的CD68值(分界＝5.21％阳性细胞或0.08细胞/mm2的细胞密度)的患者中无进展存活期(PFS)的中位数对两个分界点均为12.0个月，而有<中位数的生物标记值的患者，分别为3.7及3.8个月(风险比[HR]＝0.42，对数秩p-值≦0.01)(图3)。然而，对以先治疗的患者，观察到与PFS相似但非统计上显著趋势(图4)。无论先前治疗或以先治疗的患者，在CD3的量及PFS之间没有统计上显著关联(图5及6)。
再者，不论先前治疗，具有≧中位数的CD68值(分界＝5.21％阳性细胞或0.08细胞/mm2)之患者中OS的中位数分别为20.0个月及22.6个月，而当无论先前治疗而评估所有患者时，具有<中位数的生物标记值的患者分别为21.8个月或17.8个月(所有案例中HR＞0.6，非统计上显著)(图7)。对以先治疗的患者与OS没有观察到统计上显著关联。无论治疗或在先以治疗的患者中，CD3的量及OS亦无统计上显著关联(图8)。使用ROC分析，对较高的CD68细胞计数观察到良好的OS，虽然0.559的AUC值在CD68的量的预测值中指示低信赖(图9)。
最后，无论先前治疗，藉由阳性细胞百分比(p-值＝0.0059)或细胞密度(p-值＝0.0071)测量的CD68的量在反应者(CR+PR)对非反应者(SD+PD)中高出2倍(图10)。对先前以治疗的患者，藉由阳性细胞百分比(p-值＝0.407)或细胞密度(p-值＝0.0762)测量的CD68的量在反应者对非反应者中高出2倍(图11)。在ORR分析中对可估计生物标记的患者中，较高CD68百分比及阳性细胞密度的患者倾向于具有肿瘤客观反应的较好机率。ROC分析显示CD68百分比及阳性细胞密度分别为0.818及0.795之预测精确度。0.791及0.784的AUC，指示使用CD68生物标记对ORR高的整体预测精确度。对预测ORR的最佳分界点CD68阳性细胞百分比及细胞密度分别为9.42％及0.13细胞/mm2。
对先前以治疗之可估计生物标剂的患者在ORR分析中发现相似结果。较高CD68阳性细胞百分比及密度的患者倾向于具有肿瘤客观反应的较好机率。ROC分析显示CD68阳性细胞百分比及密度分别为0.777及0.852之预测精确度。0.809及0.764的AUC，指示使用CD68生物标记对ORR高的整体诊断精确度。对预测ORR的最佳分界点CD68阳性细胞百分比及细胞密度分别为5.20％及0.16细胞/mm2。

Claims (15)

1.一种鉴定对阿西替尼治疗敏感的肿瘤之方法，其包括：(a)测量来自肿瘤的组织样品中CD68多肽表达水平，所述肿瘤取自考虑以阿西替尼治疗之人类患者；及(b)将步骤(a)中CD68表达水平与临界CD68表达水平比较，所述临界CD68表达水平藉由测量肿瘤之组织样品中CD68多肽表达所测定，所述肿瘤取自先前以阿西替尼治疗且表现对阿西替尼为抗药性之人类患者及先前以阿西替尼治疗且表现对阿西替尼为敏感性之人类患者，其中高于该临界水平的CD68表达水平表示该肿瘤对阿西替尼治疗敏感。
2.权利要求1之方法，其中该测量CD68多肽表达的步骤藉由免疫组织化学进行。
3.权利要求2之方法，其中该藉由免疫组织化学测量CD68多肽表达之步骤是藉由来自全切片扫描之影像分析进行，其中测定该样品中CD68阳性细胞之百分比。
4.权利要求3之方法，其进一步包括测定该样品中CD68阳性细胞的密度之步骤。
5.权利要求1之方法，其中该肿瘤选自乳腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、结肠直肠肿瘤及胰脏肿瘤。
6.一种治疗mRCC之方法，包括给患者施用阿西替尼，根据权利要求1，该患者经测定具有对阿西替尼敏感的mRCC肿瘤。
7.一种治疗癌症的方法，包括：a)确定来自对象的肿瘤中CD68阳性细胞的百分比；和b)如果所述百分比是至少5％，给该对象施用阿西替尼。
8.一种治疗癌症之方法，包括：a)确定来自对象的肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度；和b)如果所述细胞密度是至少0.08细胞/mm2，给该对象施用阿西替尼。
9.一种治疗癌症之方法，包括给具有肿瘤的对象施用阿西替尼，其中所述肿瘤中至少5％的细胞是CD68阳性的。
10.一种治疗癌症之方法，包括给具有肿瘤的对象施用阿西替尼，其中所述肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度是至少0.08细胞/mm2。
11.一种治疗癌症之方法，包括：a)确定来自对象的肿瘤中CD68阳性细胞的百分比；b)确定肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度；和c)如果所述百分比是至少5％且所述细胞密度是至少0.08细胞/mm2，给该对象施用阿西替尼。
12.一种治疗癌症之方法，包括给具有肿瘤的对象施用阿西替尼，其中所述肿瘤中至少5％的细胞是CD68阳性的且其中所述肿瘤中CD68阳性细胞的细胞密度是至少0.08细胞/mm2。
13.权利要求7至12中任一项之方法，其中该肿瘤选自乳腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、结肠直肠肿瘤及胰脏肿瘤。
14.权利要求7、8或11之方法，其中使用免疫组织化学进行测量CD68阳性细胞的百分比或细胞密度的步骤。
15.权利要求14之方法，其中使用免疫组织化学和来自全切片扫描之影像分析进行测量CD68阳性细胞的百分比或细胞密度的步骤。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6945199B2 (ja) 2017-05-19 2021-10-06 国立大学法人山口大学 アキシチニブの薬物動態判定方法及びアキシチニブの薬物動態に基づくアキシチニブによる治療効果予測方法
KR20210043578A (ko) * 2018-07-12 2021-04-21 코버스 파마슈티칼스, 인크. 아데노신 경로 활성화를 갖는 암의 검출 및 치료 방법
CA3106041A1 (en) * 2018-07-12 2020-01-16 Corvus Pharmaceuticals, Inc. Methods for detecting and treating cancers having adenosine pathway activation
US10586164B1 (en) 2018-10-15 2020-03-10 AIble Inc. Interface for visualizing and improving model performance
US10936768B2 (en) * 2018-10-15 2021-03-02 Aible, Inc. Interface for visualizing and improving model performance
US20220390456A1 (en) * 2019-10-17 2022-12-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Small extracellular vesicle-associated vegf as a predictor for therapeutic responses
AU2023267942A1 (en) * 2022-05-11 2024-12-19 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Use of bmmf1 rep protein as diagnostic marker for lung cancer
AU2023269517A1 (en) * 2022-05-11 2024-12-19 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Use of bmmf1 rep protein as diagnostic marker for pancreatic cancer and diabetes mellitus type 2
WO2024026407A1 (en) * 2022-07-28 2024-02-01 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Biomarkers, diagnostic methods, treatments, and therapeutics for autoimmune disorders and diseases

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012052757A1 (en) * 2010-10-20 2012-04-26 Astrazeneca Ab Tumour phenotype patient selection method
WO2013106765A1 (en) * 2012-01-13 2013-07-18 Genentech, Inc. Biological markers for identifying patients for treatment with vegf antagonists

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005040396A2 (en) 2003-10-16 2005-05-06 Genomic Health, Inc. qRT-PCR ASSAY SYSTEM FOR GENE EXPRESSION PROFILING
EP1737980A2 (en) * 2004-04-09 2007-01-03 Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Gene expression markers for predicting response to chemotherapy
US8383357B2 (en) * 2005-03-16 2013-02-26 OSI Pharmaceuticals, LLC Biological markers predictive of anti-cancer response to epidermal growth factor receptor kinase inhibitors
RU2395090C2 (ru) * 2005-10-21 2010-07-20 БАЙЕР ХелсКер ЛЛСи Способы прогнозирования и предсказания рака и мониторинг терапии раковых заболеваний
US20070128636A1 (en) * 2005-12-05 2007-06-07 Baker Joffre B Predictors Of Patient Response To Treatment With EGFR Inhibitors
MX2009001070A (es) * 2006-07-28 2009-04-23 Novartis Ag Uso de proteina con actividad inhibidora de melanoma (mia) como un indicador temprano para la respuesta terapeutica en melanoma.
EP2088863A2 (en) * 2006-11-22 2009-08-19 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Tyrosine kinase inhibitors as anti-kinetolastid and anti-apicomplexan agents
EA021945B1 (ru) * 2009-07-08 2015-10-30 Уорлдуайд Иновейтив Нетуорк Способ прогнозирования эффективности лекарственных соединений для пациента
EP2478114B1 (en) * 2009-09-17 2014-12-17 F.Hoffmann-La Roche Ag Diagnostic methods for lung cancer
US7736861B1 (en) * 2009-10-19 2010-06-15 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Tivozanib response prediction
EP2640384A1 (en) * 2010-11-18 2013-09-25 Synta Pharmaceuticals Corp. Preselection of subjects for therapeutic treatment with oxygen sensitive agents based on hypoxic status
RU2672874C2 (ru) * 2011-10-04 2018-11-20 Инвайвис Фармасьютикалз Инк. Способы и системы для выявления и лечения опухолей, восприимчивых к антипрогестинам

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012052757A1 (en) * 2010-10-20 2012-04-26 Astrazeneca Ab Tumour phenotype patient selection method
WO2013106765A1 (en) * 2012-01-13 2013-07-18 Genentech, Inc. Biological markers for identifying patients for treatment with vegf antagonists

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRITI MITTAL ET AL: "Axitinib in Metastatic Renal Cell Carcinoma", 《BIOL THER》 *
ROBERT J MOTZER ET AL: "Axitinib versus sorafenib as second-line treatment for advanced renal cell carcinoma: overall survival analysis and updated results from a randomised phase 3 trial", 《LANCET ONCOL》 *
SUMANTA K. PAL ET AL: "Tivozanib: Current status and future directions in the treatment of solid tumors", 《EXPERT OPIN INVESTIG DRUGS.》 *

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Publication number Publication date
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