CN106232795A - 洗涤剂组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及具有DNA酶活性的多肽用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途,包括此类多肽的组合物和清洁方法,其中该物品是硬表面。
Description
对序列表的引用
本申请包括计算机可读形式的序列表,将其通过引用结合在此。
发明领域
本发明涉及具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽用于从物品上防止、减少或去除生物膜的用途,包括此类多肽的组合物和清洁方法。
发明背景
在许多自然,工业和医疗环境中,微生物一般附着于表面生存,由包括生物聚合物和高分子的细胞外物质包囊。粘液包囊的微生物的产生的层称为生物膜。生物膜是细菌在自然环境中生长的主要模式,并且在生物膜中生长的细菌表现出独特的生理性质。
将硬表面暴露于来自使用它们的环境的DNA和细菌中。将餐具暴露于来自餐具中所供应的或煮熟的食物的DNA和细菌。这些细菌中的一些能够粘附于物品并且在物品上形成生物膜。DNA和细菌的存在暗示,物品变得粘稠,并且因此污垢粘附在粘性区域。这种污垢已经显示出难以通过可商购的洗涤剂组合物来去除。此外,当非常脏的物品与不太脏的物品一起洗涤时,洗涤液中存在的污物倾向于附着于生物膜上。其结果是,该物品在清洁后比洗涤前更“脏”。此外,这些细菌是恶臭的来源,其在使用物品后形成。难闻的臭味难以去除,并且甚至在洗涤后还可能在该物品中作为恶臭来保持。这种难闻的气味的原因是细菌附着到表面上,例如,地板或餐具的裂纹中。由于粘附到表面上,即使洗涤后细菌仍可存在,并且继续成为难闻的气味的来源。
同时,洗碗机或洗衣机的内部会经受生物膜的生长。在这些机器中微生物的生长和增殖一般从暴露于长期温暖、潮湿的环境发生,这些环境可以包含皂渣和衣物或食物残渣。这种环境导致不令人希望的气味和生物膜的发展。生物膜生长进一步导致橡胶的降解,这潜在导致橡胶部分或整个洗涤机的寿命缩短。
国际专利申请WO 2011/098579涉及细菌脱氧核糖核酸酶化合物以及用于破坏和预防生物膜的方法。
发明概述
本发明涉及具有DNA酶活性的多肽用于防止、减少或去除物品的生物膜。本发明进一步涉及洗涤剂组合物,该组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和金属护理剂。另外要求保护的是洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和强螯合助洗剂和/或选自下组的助洗剂,该组由以下各项组成:柠檬酸钠、柠檬酸、醇胺、碳酸钠、碳酸氢钠和氨基-三-(亚甲基-磷酸)(AMP)。此外,要求保护的是用于从物品防止、减少或去除生物膜的清洁方法,该方法包括以下步骤:
a)将物品与包括具有DNA酶活性的多肽的组合物接触或与包括具有DNA酶活性的多肽的液态溶液接触;
b)完成至少一个清洁循环;并且
c)任选地冲洗该物品,
其中该物品是硬表面和/或餐具。
定义
等位基因变体:术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异由突变天然产生,并且可以导致群体内多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
术语自动餐具洗涤剂组合物是指组合物,该组合物旨在在洗碗机中清洁餐具如碟、杯、玻璃杯、碗、罐、餐具、勺、刀、叉、上菜用具、陶瓷、塑料、砧板、瓷器和玻璃器皿。该术语涵盖选择用于家庭或工业洗涤应用的任何材料/化合物以及产品形式(该产品形式是液体、粉末或颗粒)。除脂肪酶之外,自动洗餐具组合物包含洗涤剂组合物如聚合物、漂白系统、漂白活化剂、漂白催化剂、硅酸盐和金属护理剂。
细菌的:在本发明的上下文中,术语“细菌的”相对于多肽(如酶,例如,DNA酶)是指由细菌基因组编码的并且从而直接从细菌基因组衍生的多肽,其中这种细菌未被遗传修饰来编码所述多肽,例如,通过重组DNA技术将编码序列引入基因组。因此,在本发明的上下文中,术语“细菌DNA酶”或“从细菌来源获得的具有DNA酶活性的多肽”或“多肽是细菌来源的”是指由细菌物种基因组编码的并且从而直接从细菌物种基因组衍生的DNA酶,其中该细菌物种还没有经受遗传修饰,引入编码所述DNA酶的重组DNA。因此,编码具有DNA酶活性的细菌多肽核苷酸序列是细菌物种的遗传背景中天然序列。由这种序列编码的具有DNA酶活性的细菌多肽还可以是指野生型DNA酶(或亲本DNA酶)。在另一方面,本发明提供了具有DNA酶活性的多肽,其中所述多肽与细菌DNA酶基本上同源。在本发明的上下文中,术语“基本上同源”表示具有DNA酶活性的多肽,该多肽与所选择的细菌DNA酶的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%,甚至更优选地至少96%、97%、98%,以及最优选地至少99%的一致性。
生物膜:生物膜是任何群组的微生物,其中细胞彼此粘附在一起或粘附在表面,如纺织品、餐具或硬表面或任何类型表面。这些粘附细胞经常包埋在胞外高聚物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是一般由细胞外的DNA、蛋白、和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细胞(相比之下,浮游细胞是可以在液体培养基中漂浮或浮游的单个细胞)是在生理上不同的。
生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的浮游细菌显著不同的特性,因为被膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这一环境的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性,因为,密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。
在衣物上,会发现产生生物膜的细菌是在以下物种中:不动杆菌属物种、气微菌属物种、短波单胞菌属物种、微杆菌属物种、滕黄微球菌、假单胞菌属物种、表皮葡萄球菌、和寡养单胞菌属物种。在硬表面上,会发现产生生物膜的细菌是在以下物种中:不动杆菌属物种、气微菌属物种、短波单胞菌属物种、微杆菌属物种、滕黄微球菌、假单胞菌属物种、表皮葡萄球菌、和寡养单胞菌属物种。在一个实施例中,该产生物膜菌株是短波单胞菌属物种。在一个实施例中,该产生物膜菌株是嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)或荧光假单胞菌。
cDNA:术语“cDNA”意指可以通过从得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体,其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工,包括剪接。
编码序列:术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定,该开放阅读框架从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
色差(L值):Lab色彩空间是针对明度具有尺寸L的色彩对立的空间。L值,L*代表在L*=0下的最暗的黑色,并且在L*=100下的最亮白色。在本发明的上下文中,L值还称为色差。在本专利申请的实例2中使用了色差法。
术语“清洁循环”在此定义为清洁操作,其中通过循环该洗涤液并且将该洗涤液喷到餐具上,将硬表面或餐具与洗涤液接触一段时间,以便清洁该餐具,并且最后去除多余的洗涤液。在相同或不同温度下,清洁循环可以重复一次、两次、三次、四次、五次或甚至六次。此后,通常将硬表面餐具冲洗并且干燥。清洁循环之一可以是浸泡步骤,其中将该硬表面或餐具保持浸泡在洗涤液中一段时间。
控制序列:术语“控制序列”意指对于表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。各个控制序列可以相对于编码多肽的多核苷酸是天然的(即,来自相同基因)或外源的(即,来自不同基因),或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导子、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。至少,控制序列包括启动子,以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的,这些控制序列可以提供有多个接头。
关于术语“深度清洁”意指生物膜或生物膜的组分,例如多糖、蛋白、DNA、污垢或生物膜中存在的其他组分的破坏或除去。
洗涤剂组分:在此将术语“洗涤剂组分”定义为意指可以用于洗涤剂组合物中的化学品的类型。洗涤剂组分的实例是碱、表面活性剂、金属护理剂、助水溶剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污物释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、抗氧化剂以及增溶剂。
洗涤剂组合物:术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(例如硬表面或餐具)除去不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁餐具,用于家用清洁剂和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的具体类型的清洁组合物和产品的形式(例如、液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物,并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如,液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂;织物清新剂;织物柔软剂;以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了包含本发明的酶之外,该洗涤剂配制品还可以包含一种或多种另外的酶(例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶,或其任何混合物),和/或洗涤剂组分,例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
餐具:术语“餐具”旨在意指任何形式的厨房用具、成套餐具或餐桌用餐具,例如但不限于锅、盘、杯、刀、叉、匙、瓷料等。该餐具是由任何适合的材料(如金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料)。
餐具洗涤组合物:术语“餐具洗涤组合物”是指包括洗涤剂组分的组合物,该组合物用于清洁盘、餐具、玻璃器皿、砧板、罐、锅、餐具的组合物和用于清洁厨房中硬表面区域的所有形式。本发明不局限于任何具体类型的餐具洗涤组合物或任何具体洗涤剂。可以将该餐具洗涤组合物用于家用餐具洗涤、工业和机构餐具洗涤,该餐具洗涤组合物包括针对ADW的组合物。
DNA酶(脱氧核糖核酸酶):术语“DNA酶”意指具有DNA酶活性的多肽,该多肽催化DNA主链中的磷酸二酯键的水解断裂,从而降解DNA。出于本发明的目的,根据测定I中所描述的程序确定DNA酶活性。在一方面,本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的DNA酶活性。出于本发明的目的,根据测定I中所描述的程序确定DNA酶活性。在本发明的一个实施例中,参照SEQ ID NO:2的成熟多肽的DNA酶活性,具有以下各项的多肽的DNA酶活性是至少105%,例如,至少110%、至少120%、至少130%、至少140%、至少160%、至少170%、至少180%、或至少200%:包括或由SEQ ID NO:3中所阐述的序列组成的多肽、包括或由SEQ IDNO:5中所阐述的序列组成的多肽、包括或由SEQ ID NO:6的成熟多肽组成的多肽、包括或由SEQ ID NO:7的成熟多肽组成的多肽或包括或由SEQ ID NO:8的成熟多肽组成的多肽。
表达:术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤,包括但不限于,转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体:术语“表达载体”意指线性或环状DNA分子,该分子包含编码多肽的多核苷酸并且该多核苷酸可操作地与提供用于其表达的控制序列相连接。
片段:术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺失的一个或多个(例如,若干个)氨基酸的多肽;其中片段具有DNA酶活性。在一方面,该片段包含至少206个氨基酸残基(例如,SEQ ID NO:2的氨基酸1至206)、至少205个氨基酸残基(例如,SEQID NO:2的氨基酸2至206)、或至少204个氨基酸残基(例如,SEQ ID NO:2的氨基酸3至206)。在一方面,片段包含至少139个氨基酸残基(例如,SEQ ID NO:5的氨基酸50至188)、至少188个氨基酸残基(例如,SEQ ID NO:5的氨基酸1至188)。
真菌的:在本发明的上下文中,术语“真菌的”相对于多肽(如酶,例如,DNA酶)是指由真菌基因组编码的并且从而直接从真菌基因组衍生的多肽,其中这种真菌未被遗传修饰来编码所述多肽,例如,通过重组DNA技术将编码序列引入基因组。因此,在本发明的上下文中,术语“真菌DNA酶”或“从真菌来源获得的具有DNA酶活性的多肽”或“多肽是真菌来源的”是指由真菌物种基因组编码的并且从而直接从真菌物种基因组衍生的DNA酶,其中该真菌物种还没有经受遗传修饰,引入编码所述DNA酶的重组DNA。因此,编码具有DNA酶活性的真菌多肽核苷酸序列是真菌物种的遗传背景中天然序列。由这种序列编码的具有DNA酶活性的真菌多肽还可以是指野生型DNA酶(或亲本DNA酶)。在另一方面,本发明提供了具有DNA酶活性的多肽,其中所述多肽与真菌DNA酶基本上同源。在本发明的上下文中,术语“基本上同源”表示具有DNA酶活性的多肽,该多肽与所选择的真菌DNA酶的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%,甚至更优选地至少96%、97%、98%,以及最优选地至少99%的一致性。
硬表面:在此将术语“硬表面”定义为硬表面,该硬表面包括地板、桌子、墙壁、屋顶等,连同硬物体的表面,例如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。该术语“硬表面”还包括洗涤机内部的表面,如洗衣机或洗碗机的内部,这包括进皂盒、壁、窗、篮子、衣架、喷嘴、水泵、水池、过滤器、管道线、管、接头、密封件、垫片、配件、叶轮、鼓、排水管、存水弯、硬币陷阱入口和出口。术语硬表面并不涵盖纺织品或织物。
硬表面清洁:在此将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面,如从硬表面减少或去除生物膜,其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等,连同硬物体的表面,例如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。硬表面清洁还包括清洁洗涤机内部,如洗衣机或洗碗机的内部,这包括清洁进皂盒、壁、窗、篮子,衣架,喷嘴,水泵,水池,过滤器,管道线,管,接头,密封件,垫片,配件,叶轮,鼓,排水管,存水弯,硬币陷阱入口和出口。餐具洗涤包括但不限于,清洁盘、杯、玻璃杯、碗、罐、餐具、匙、刀、叉、上菜用具、陶瓷、塑料、砧板、瓷器和玻璃器皿。
宿主细胞:术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。
分离的:术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质,(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白、肽或辅因子的任何物质,该物质至少部分地从与其本质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除;(3)相对于天然发现的物质通过人工修饰的任何物质;或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分,增加物质的量而修饰的任何物质(例如,宿主细胞中的重组产生;编码该物质的基因的多个拷贝;以及比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)而修饰的任何物质。分离的物质可以存在于发酵液样品中,例如,可以将宿主细胞进行遗传修饰来表达本发明多肽。来自宿主细胞的发酵液将包括分离的多肽。
洗衣:术语“洗衣”涉及家用洗衣和工业洗衣两者并且意指用包含本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。洗衣过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
关于术语“恶臭”意指在清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干净,而没有附着在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有使人不愉快的气味的化合物,这些化合物可以是微生物产生的。另一实例是令人不愉悦的气味可以是附着至已经与人类或动物接触的物品的汗水或体味。恶臭的另一实例可以是来自香料的气味,其粘附于物品,例如气味强烈的咖喱或其他异国香料。测量物品附着恶臭的能力的一个方式是通过使用测定II。
成熟多肽:术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N末端加工、C末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一方面,成熟多肽是SEQ IDNO:2的氨基酸1至206,并且SEQ ID NO:2的氨基酸-37至-16是信号肽,并且SEQ ID NO:2的氨基酸-15至-1是前肽。在一个方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:5的氨基酸1至188,并且SEQID NO:2的氨基酸-17至-1是信号肽。在一方面,成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至110,成熟多肽是SEQ ID NO:7的氨基酸1至109,或者成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至206。在本领域中已知的是,宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽(即,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。本领域还已知,不同的宿主细胞不同地加工多肽,并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。在一方面,成熟多肽包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:8的高达206个氨基酸残基(例如,SEQ ID NO:2的氨基酸1至206)、或高达204个氨基酸残基(例如,SEQ ID NO:2的氨基酸3至206)。
成熟多肽编码序列:术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有DNA酶活性的成熟多肽的多核苷酸。在一方面,成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的连接的核苷酸1至242、309至494、556至714和766至907。在一方面,成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:4的核苷酸52至864,其中在SEQ ID NO:4的位置76-164、289-362和520-615中的氨基酸中的序列中预测三个内含子。分泌信号存在于SEQ ID NO:4的位置1-51中的氨基酸。
核酸构建体:术语“核酸构建体”意指单链抑或双链的核酸分子,该核酸分子是从天然存在的基因中分离的,或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段,或是合成的,该核酸分子包括一个或多个控制序列。
可操作地连接:术语“可操作地连接”意指如下的构造,其中,控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置处,从而使得该控制序列指导该编码序列的表达。
橡胶:术语“橡胶”旨在覆盖任何标准橡胶,该橡胶必须是经过硫化以提供在尺寸上稳定的橡胶制品。术语“尺寸上稳定的”旨在涵盖硫化橡胶制品,其在结构上能够无需分裂成更小部分来进行处理。因此,制品必须表现出一定程度的结构完整性,并且作为橡胶,某一程度的弯曲模量。以下列出了特定类型的橡胶,并且之前已经针对各种应用用于橡胶工业中,并且一般是整个现有技术中熟知并且进行教导的。
发明的橡胶配制品和固化制品的一种或多种橡胶组分优选地选自下组,该组由以下各项组成:丁腈橡胶[如丙烯腈-丁二烯橡胶(NBR)]、乙烯丙烯二烃单体(EPDM)橡胶、氢化的NBR、羧化的NBR、及其混合物。当选择聚合物和固化系统时,重要的是考虑橡胶制品所希望的物理特性。例如,与更低分子量聚合物相比,高分子量EPDM聚合物倾向于表现出更高的生坯强度和抗张强度以及更低的压缩回弹。在过氧化物固化的弹性体中,通常更希望使用这些高分子量聚合物作为过氧化复合物,与硫固化的复合物相比,这些复合物在高温下表现出更差的‘热态撕裂’强度。
序列一致性:用参数“序列一致性”来描述两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性。出于本发明的目的,使用如在EMBOSS包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite),赖斯(Rice)等人,2000,遗传学趋势(Trends Genet.)16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(尼德尔曼(Needleman)和翁施(Wunsch),1970,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10,空位延伸罚分0.5,以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性,并且计算如下:
(一致的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
为了本发明的目标,使用Needleman(尼德曼)-Wunsch(翁施)算法(Needleman(尼德曼)和Wunsch(翁施),1970,同上)确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性,如在EMBOSS包中的Needle(尼德尔)程序中实施(EMBOSS:The European Molecular BiologyOpen Software Suite(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套装),Rice(赖斯)等人,2000,同上),优选是版本5.0.0或更新版本。使用的参数为空位开放罚分10,缺口延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性,并且计算如下:
(同样的脱氧核糖核苷酸×100)/(比对长度-比对中缺口的总数)
严格条件:
术语“非常低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在45℃下使用2X SSC、0.2%SDS将载体材料洗涤三次,每次15分钟。
术语“低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在50℃使用2X SSC、0.2%SDS将载体材料洗涤三次,每次15分钟。
术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在55℃下使用2X SSC、0.2%SDS将载体材料洗涤三次,每次15分钟。
术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2%SDS,在60℃下洗涤三次,每次15分钟。
术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在65℃下使用2X SSC、0.2%SDS将载体材料洗涤三次,每次15分钟。
术语“非常高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说,遵循标准DNA印迹程序,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在70℃下使用2X SSC、0.2%SDS将载体材料洗涤三次,每次15分钟。
子序列:术语“子序列”意指使一个或多个(例如,若干个)核苷酸从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的多核苷酸;其中该子序列编码具有DNA酶活性的片段。在一方面,子序列包含至少796个核苷酸(例如,SEQ ID NO:1的核苷酸112至907),至少793个核苷酸(例如,SEQ ID NO:1的核苷酸115至907),或至少790个核苷酸(例如,SEQ ID NO:1的核苷酸118至907)。在一方面,子序列包含至少587个核苷酸(例如,SEQ ID NO:4的核苷酸278至864),至少650个核苷酸(例如,SEQ ID NO:4的核苷酸215至864),或至少816个核苷酸(例如,SEQ ID NO:4的核苷酸52至864)。
变体:术语“变体”意指在一个或多个(例如,若干个)位置处包括改变(即,取代、插入和/或缺失)的与亲本酶具有相同活性的多肽。取代意指占据位置的氨基酸替换不同的氨基酸;缺失意指去除占据位置的氨基酸;并且插入意指在邻接并且紧随占据位置的氨基酸之后添加氨基酸。在本发明的上下文中,所鉴别的DNA酶的变体具有亲本的酶活性,即,催化DNA主链中的磷酸二酯键水解断裂的能力(脱氧核糖核酸酶活性)。在一个实施例中,变体的脱氧核糖核酸酶活性参照亲本DNA酶是增加的,例如,SEQ ID NO:2的成熟多肽。
洗涤液:术语“洗涤液”旨在意指用于硬表面清洁或用于餐具洗涤的水和洗涤剂的溶液或混合物(任选地包括酶)。
本发明详细说明
本发明的诸位发明人出人意料地发现,具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽可以用于从物品如硬表面上防止、减少或去除生物膜。
暴露于来自环境中的DNA和细菌的硬表面会在表面上形成生物膜。这种生物膜难以去除,并且倾向于粘在表面上。一个实例是经常被生物膜覆盖的洗涤机和洗碗机中的内部表面。在这些机器中微生物的生长和增殖一般从暴露于长期温暖、潮湿的环境发生,这些环境可以包含皂渣和衣物或食物残渣。这种环境导致不令人希望的气味和生物膜的发展。生物膜生长进一步导致橡胶的降解,这潜在导致橡胶部分或整个洗涤机的寿命缩短。
然而,本发明的诸位发明人已经发现,具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽可以用于从洗涤机或洗碗机上防止、减少或去除生物膜。
在硬表面上生物膜形成的另一个实例是温暖、潮湿环境中存在的硬表面,如厨房区域、浴室或游泳池区域中的硬表面。该硬表面可以有金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料。
具有DNA酶活性的多肽可以用于防止、减少或去除物品的粘性。包括DNA的生物膜会是粘性的,并且因此污垢附着于该生物膜上。在一个实施例中,具有DNA酶活性的多肽可以用于防止、减少或去除污垢附着于该物品。
具有DNA酶活性的多肽可以用于物品上,这些物品具有明显的生物膜生长,或者如果部分这些物品具有明显的生物膜生长。具有DNA酶活性的多肽可以用于预处理该物品的这些部分,其中在该物品上的生物膜污点是明显的。
在物品上生物膜的存在会引起难闻的气味,如恶臭。由生物膜所产生的难闻的气味的一个来源是E-2-壬烯醛。因此,不希望在洗涤机或洗碗机中存在生物膜。除来自洗涤机或洗碗机的坏气味之外,该难闻的气味会粘附在机器中所洗涤的物品上。例如,当从机器除湿时或甚至当该物品是干燥时,衣物物品或餐具可能闻起来气味不好。具有DNA酶活性的多肽的使用可以防止、减少或去除E-2-壬烯醛的量。
在本发明的一个实施例中,该具有DNA酶活性的多肽可以防止、减少或去除来自短波单胞菌属物种的至少一种菌株、荧光假单胞菌的至少一种菌株或嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)的至少一种菌株的生物膜和气味。
在本发明的一个实施例中,防止、减少或去除在湿物品上存在的E-2-壬烯醛的量。在一个实施例中,防止、减少或去除在干燥物品上存在的E-2-壬烯醛的量。
可以将具有DNA酶活性的多肽喷到该物品上。例如,可以将具有DNA酶活性的多肽喷到纺织品的洗涤机或洗碗机的内部,或可以喷到厨房或浴室区域中的硬表面上。
在本发明的一个实施例中,将该物品与包括具有DNA酶活性的多肽的液态溶液接触。该液态溶液可以进一步包括洗涤剂组分,如表面活性剂。该液态溶液可以是用于洗衣或硬表面清洁的洗涤液。
可以将洗衣机或洗碗机的所有内部部分与具有DNA酶活性的多肽接触。可以将包括由以下各项制成的部分的机器的所有零件与该多肽接触:金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料,并且该多肽将从该物品上防止、减少或去除生物膜和恶臭。该金属物品可以由以下各项制成:铁、铜、镁、铬、镍、铝、钛、铅、金、银或其合金。在一个实施例中,该物品由不绣钢制成。洗碗机或洗涤机还可以包含由橡胶(如天然橡胶或合成橡胶)制成的零件。厨房或浴室区域中的硬表面还可以由以下材料制成,如:金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料。
在本发明的一个实施例中,将具有DNA酶活性的多肽用于工业的或机构的器皿洗涤中。术语器皿洗涤是在工业和机构中常用术语,并且它意指餐具的洗涤。
工业的和机构的器皿洗涤是在工业的、商业的或机构的情况中所应用的工艺,以在尽可能短的时间段内提供洁净卫生的器皿。为了实现这种结果,器皿洗涤器通常在洗涤过程期间施用高温和很强机械的和化学的作用。在给出广泛的器皿洗涤器的潜在应用的情况下,存在各种各样的可用系统。这些包括单洗涤台下系统(类似于家用洗碗器)、连帽单次使用系统、针对连续操作的更大或严重弄脏的设备和大型输送机或飞行机的系统。器皿洗涤器通常包含一个池的或蓄水池的洗涤水。这种池的目的是通过经过一段时间或洗涤,允许水的重复使用和再循环,来减少水和器皿洗涤化学品消耗。
在大部分洗涤应用中,由于容量约束,限制了可用于洗涤的时间。一般,洗涤循环在50-90秒之间,但是可以高达10分钟。为了克服这些时间约束并且交付洁净卫生的器皿,器皿洗涤器通常向该器皿施用高水平的机械作用。这通常使用通过喷嘴分布的高压水来完成的,并且将其在器皿洗涤器中再循环。在一些情况下,可以将研磨元件引入该系统(例如,聚合物小球)中,以提高水对弄脏器皿的机械作用。尽管在器皿洗涤过程中施用高度机械作用,但仍依赖强化学作用来交付所需水平的洁净度,并且如果需要的话,交付所需水平的卫生。器皿洗涤化学品特征在于一般为高碱性的并且包含其他元素来提高清洁性能,来确保令人满意的结果,并且来保护器皿洗涤机避免潜在腐蚀性的碱性化学品。
在操作器皿洗涤过程中,将器皿洗涤机的内部表面暴露于包含潜在高水平有机污垢的水中,并且随着时间,会在器皿洗涤机的内部表面上形成污垢膜或沉淀。在正常每日清洁操作过程中,这种膜会潜在是不易去除的。在器皿洗涤过程(其中污垢膜存在于机器的内部表面上)中,不经常会看到性能降低、化学计量需求增加、恶臭以及机器内生物膜的形成。
为了保护机器的金属零件或其他硬表面,可以将具有DNA酶活性的多肽与金属护理剂一起使用。本发明进一步涉及洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有DNA酶活性的多肽和金属护理剂。
该金属护理剂可以选自下组,该组由以下各项组成:
a)苯并三唑类,包括苯并三唑或双-苯并三唑及其取代衍生物,这些衍生物包括具有直链的或支链的Ci-C20-烷基基团的取代基和羟基、硫、苯基或卤素(如氟、氯、溴和碘)。
b)选自下组的金属盐和络合物,该组由以下各项组成:锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴,镓和铯盐和/或络合物,这些金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一,如选自下组的金属盐和/或金属络合物,该组由以下各项组成:Mn(II)硫酸盐、Mn(II)柠檬酸盐、Mn(II)硬脂酸盐、Mn(II)乙酰丙酮化物、KTiF6、KZrF6、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐,例如,硫酸锌、水锌矿、乙酸锌或碳酸锌;
c)硅酸盐,包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、硅酸钠、结晶层状硅酸盐及其混合物。
本发明进一步涉及洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和强螯合助洗剂。
强助洗剂被分类为高效率螯合剂,其能够以高于4,特别是高于5、高于6或高于7的对数稳定常数有力地结合阳离子/螯合剂复合体的二价阳离子(例如,Ca2+)。在0.1M的离子强度和25℃的温度下确定稳定常数。
强螯合助洗剂包括例如,如水溶性三聚磷酸盐、乙二胺四乙酸以及有机磷酸盐等材料。碱金属焦磷酸盐也被分类为强螯合助洗剂。强螯合助洗剂是含磷助洗剂或无磷助洗剂。本发明中,可以使用磷的和无磷的助洗剂。优选的是无磷助洗剂,因为它们更有益于环境。
含磷助洗剂通常包括无机磷酸盐或磷酸盐,典型地为碱金属盐(例如,钠或钾)。
无机磷酸盐可以是二磷酸盐、三磷酸盐、三聚磷酸盐或焦磷酸盐。无机磷酸盐的具体实例包括Na5P3O10(STPP或三聚磷酸钠)和Na4P2O7(焦磷酸四钠)。
磷酸盐可以是烷基磷酸盐、芳基磷酸盐或烷芳基磷酸盐,其中该烷基、芳基或烷芳基可以被取代。磷酸盐的实例包括1-羟基亚乙基-1,1-二磷酸(HEDP,依替磷酸)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTPMP)、乙二胺四(亚甲基磷酸)(EDTMPA)、氨基三(亚甲基磷酸)(ATMP)、次氮基三亚甲基磷酸(NTMP)、2-氨乙基磷酸(AEPn)、二甲基甲基磷酸酯(DMMP)、四亚甲基二胺四(亚甲基磷酸)(TDTMP)、六亚甲基二胺四四(亚甲基磷酸)(HDTMP)、磷酸丁烷-三羧酸(PBTC)、N-(磷酰甲基)亚氨基二乙酸(PMIDA)、2-羧乙基磷酸(CEPA)、2-羟基磷酰羧酸(HPAA)。
无磷强螯合助洗剂可以包括例如乙二胺四乙酸(EDTA)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、次氨基三乙酸(NTA)、亚氨二琥珀酸(IDS)、乙二胺二琥珀酸(EDDS)以及L-谷氨酸-N,N-二乙酸四钠盐(GLDA)。
以下列出了助洗剂钙络合物的稳定常数的实例和磷酸盐的含量:
洗涤剂组合物中的强螯合助洗剂的浓度可以是从0.5%(w/w)至80%的强螯合助洗剂,如在1.0%-75%范围内、在1%-70%范围内、在1%-65%范围内、在1%-60%范围内、在1%-55%范围内、在1%-50%范围内、在1%-45%范围内、在1%-40%范围内、在1%-35%范围内、在1%-30%范围内或在1%-25%范围内。当用自动洗碗机洗涤时,将该洗涤剂组合物在主洗涤中释放。
洗涤液中的强螯合助洗剂的浓度可以从0.01至5.0克的强螯合助洗剂/升的洗涤液(g/L),如在0.01-4.0g/L的范围内、在0.01-3.0g/L的范围内、在0.01-2.8g/的范围内、在0.01-2.6g/L的范围内、在0.01-2.4g/L的范围内、在0.01-2.2g/L的范围内、在0.01-2.0g/L的范围内、在0.01-1.8g/L的范围内、在0.01-1.6g/L的范围内、在0.01-1.4g/L的范围内、在0.01-1.2g/L的范围内或在0.01-1.0g/L的范围内。
洗涤剂组合物中的GLDA的浓度可以从0.5%(w/w)至80%的强螯合助洗剂,如在1.0%-75%范围内、在1%-70%范围内、在1%-65%范围内、在1%-60%范围内、在1%-55%范围内、在1%-50%范围内、在1%-45%范围内、在1%-40%范围内、在1%-35%范围内、在1%-30%范围内或在1%-25%范围内。
洗涤剂组合物中的MGDA的浓度可以从0.5%(w/w)至50%的强螯合助洗剂,如在1%-45%范围内、在1%-40%范围内、在1%-35%范围内、在1%-30%范围内或在1%-25%范围内。
洗涤剂组合物中的碳酸盐(如碳酸钠)的浓度可以从0.5%(w/w)至26%的强螯合助洗剂,如在1.0%-20%范围内、在1%-70%范围内、在1%-15%范围内、在1%-10%范围内、在1%-5%范围内或在1%-3%范围内。
洗涤剂组合物中的柠檬酸盐(如柠檬酸钠)的浓度可以从0.5%(w/w)至50%的强螯合助洗剂,如在1%-45%范围内、在1%-40%范围内、在1%-35%范围内、在1%-30%范围内或在1%-25%范围内。
洗涤剂组合物中的STTP的浓度可以从0.5%(w/w)至50%的强螯合助洗剂,如在1%-45%范围内、在1%-40%范围内、在1%-35%范围内、在1%-30%范围内或在1%-25%范围内。
除了强螯合助洗剂之外,该洗涤剂组合物可以任选地包括一种或多种其他助洗剂,例如,弱助洗剂或沉淀助洗剂。沉淀助洗剂是如碳酸盐、碳酸氢盐、倍半碳酸盐、硅酸盐、铝酸盐、草酸盐以及脂肪酸,尤其是如碱金属盐(例如,钠或钾)等材料。
在本发明的一个实施例中,洗涤剂组合物种使用的助洗剂可以选自下组,该组由以下各项组成:柠檬酸钠、柠檬酸、醇胺例如单、二或三乙醇胺(MEA、DEA或TEA)、碳酸钠(沉淀,log KCa=7.8)、碳酸氢钠以及氨基-三-(亚甲基-磷酸)(AMP)。
本洗涤剂组合物确保,洗涤后硬表面看起来干净并且有吸引力,并且在清洁的表面上不存在恶臭。此外,当消费者满意用本ADW洗涤剂组合物的自动洗涤过程的结果并且满意没有使人不愉快的气味从洁净的餐具或餐具内部释放出的事实时,消费者不倾向于过量使用该ADW洗涤剂组合物,以便来改进清洁的结果。这对释放所排出的洗涤液的局部环境有积极的影响。
该洗涤剂组合物可以进一步包括其他洗涤剂组分,如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、黏质土去除/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、杀细菌剤、杀真菌剂和/或颜料及其组合。在一个实施例中,该洗涤剂组合物包括表面活性剂。在一个实施例中,该洗涤剂组合物包括助洗剂。在一个实施例中,该洗涤剂组合物包括黏质土去除/抗再沉淀剂。
为了提高硬表面例如餐具的清洁,该洗涤剂组合物可以进一步包括选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、过氧化物酶和氧化酶。
该洗涤剂组合物可以用于从表面防止、减少或去除生物膜。该表面可以是硬表面,例如,餐具。
在一个实施例中,该组合物是棒、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。该组合物可以是液体洗涤剂、粉状洗涤剂或颗粒洗涤剂。
本发明进一步涉及液体洗涤剂组合物,包括总浓度按重量计是至少3%的表面活性剂和洗涤剂和洗涤剂助洗剂,和含洗涤剂酶的微囊,其中该微囊的膜是通过具有高于1kDa分子量的多支化的多胺的交联而产生。本发明的诸位发明人已经发现,将酶包封在本发明具有半透膜的微囊中,并且在这些囊(在添加至该液体洗涤剂之前)中具有高于该液体洗涤剂中的水活度时,当被添加到该洗涤剂(水正溢出)中时这些囊将经历(部分地)崩溃,因此在这些囊中留下更为浓缩的并且更粘的含酶内部。该膜的崩溃还可导致可透性的降低。这可以通过添加稳定剂/聚合物进一步使用,尤其是不会通过该膜可透的那些。该崩溃和所得黏度增加将降低/妨碍敌对组分(例如,表面活性剂或螯合剂)扩散进入这些囊中,并且因此增加液体洗涤剂中酶的储存稳定性。该液体洗涤剂中的对该酶敏感的组分(例如,充当该酶底物的组分)还被保护免于受该酶的降解。在洗涤过程中,该液体洗涤剂被水稀释,因此增加了水活度。水现在将扩散进这些囊(渗透作用)中。这些囊将溶胀并且该膜将变得对该酶可透过由此它们可以离开这些囊,抑或简单地胀裂并且以此方式释放该酶。该概念在稳定这些酶对抗液体洗涤剂中的敌对组分方面非常有效,反之亦然还保护该液体洗涤剂中酶敏感的组分不受酶的影响。
对酶敏感并且可以被酶降解的洗涤剂组分的实例包括(括号中的相关酶):黄原胶(黄原胶酶)、具有酯键的聚合物(脂肪酶)、氢化蓖麻油(脂肪酶)、香料(脂肪酶)、甲酯磺酸盐表面活性剂(脂肪酶)、纤维素和纤维素衍生物(例如,CMC)(纤维素酶)、和糊精和环糊精(淀粉酶)。
敏感的洗涤剂成分还可以被囊化,并且由此被稳定化在本发明的微囊中。敏感的洗涤剂成分在储存期间易于降解。这类洗涤剂成分包括漂白化合物、漂白活化剂、香料、聚合物、助洗剂、表面活性剂等。
通常,本发明的微囊可以被用于分离洗涤剂中不相容的组分/化合物。
将这些微囊添加到洗涤剂中可以被用于影响该洗涤剂产品的可视外观,例如不透光效应(小型微囊)或明显可见的颗粒(大型微囊)的效应。这些微囊也可以是着色的。
这些微囊可以被用于在处理和加工酶产品期间降低酶尘埃水平。
除非另外指明,贯穿本申请所有的百分比指示为重量百分比(%w/w)。
微囊:典型地,这些微囊通过将水滴形成不可与水混溶的连续体而产生-即典型地通过制备油包水乳剂-并且随后通过界面聚合经由添加交联剂形成该膜。在最终固化之后,可以收获这些囊并进行进一步清洗并通过本领域已知的方法进行配制。随后将该囊配制品加入该洗涤剂中。
有效负载、有待囊化的主膜成分和最终另外的组分是在水相中发现的。在该连续体中发现了稳定化这些水滴趋向凝聚的组分(乳化剂、乳化稳定剂、表面活性剂等),并且还通过该连续体添加该交联剂。
可以通过本领域中任何方法来制备该乳剂,例如,通过机械搅动、滴注工艺、膜乳化、微流体学、声波降解法等。在一些情况下,将这些相简单混合自动产生乳剂,通常称为自乳化。使用方法导致窄的粒度分布是有利的。
随后典型地将该或这些交联剂加入该乳剂中,这是直接抑或更典型地通过制备交联剂在溶剂中的溶液,该溶剂在连续相中是可溶的。该乳剂和交联剂或其溶液可以通过本领域中常规使用的方法来混合,例如,通过简单混合或通过仔细地控制该乳剂以及该交联剂溶液流动通过串联混合器。
在一些情况下,需要固化这些囊来完成膜的形成。固化经常是简单的搅拌这些囊一段时间以允许界面聚合反应结束。在其他情况下,该膜的形成可以通过添加反应淬灭剂来终止。
这些囊可以被后修饰,例如通过使组分反应到该膜上以阻碍或减少这些颗粒在如在WO 99/01534中所述的洗涤剂中的絮凝。
可以通过本领域中已知的方法分离或浓缩这些产生的囊,例如,通过过滤、离心、蒸馏或倾析该囊分散体。
这些所得囊可以被进一步配制,例如,通过添加表面活性剂以赋予产物对于存储、运输和稍后处理以及添加至洗涤剂的所需性质。其他微囊配制剂包括流变改性剂、杀生物剂(例如,Proxel)、用于pH调节的酸/碱(其也将在这些微囊内调节)、以及用于调节水活度的水。
该囊形成工艺可以包括以下步骤:
-制备初始的一个或多个水相和油相,
-形成油包水乳剂,
-通过界面聚合形成膜,
-任选的后修饰,
-任选的分离和/或配制,
-添加至洗涤剂。
该工艺可以是分批工艺抑或是连续或半连续工艺。
根据本发明的微囊是小型的水性球体,其周围有均匀的膜。该微囊内部的材料被称为核心、内相、或填充物,而该膜有时被称为壳、包衣、或壁。本发明的这些微囊具有在0.5μm和2毫米之间的直径。优选地,这些微囊的平均直径是在1μm至1000μm的范围中,更优选地在5μm至500μm的范围中,甚至更优选地在10μm至500μm的范围中,甚至更优选地在50μm至500μm的范围中,并且最优选地在50μm至200μm的范围中。可替代地,这些微囊的直径是在0.5μm至30μm的范围中;或在1μm至25μm的范围中。该微囊的直径是当聚合作用完成之后在油相中测定的。该囊的直径可以根据周围化学环境的水活度改变。
酶的微囊化(如本发明中所用的)可以通过界面聚合来进行,其中聚合反应中的这两种反应物在界面处相遇并且快速反应。这一方法的基础是多胺与酸衍生物的反应,通常是酸性卤化物,充当交联剂。该多胺优选地是基本上水溶性的(当处于游离碱形式时)。在正确的条件下,柔性薄膜在该界面处快速形成。进行该聚合作用的方式是使用该酶和多胺的水性溶液,其与非水溶剂(以及乳化剂)进行乳化,并添加包含该酸衍生物的溶液。该酶溶液中可以存在碱剂以中和在该反应过程中形成的酸。聚合物(聚酰胺)膜在这些乳滴的界面处立即形成。该微囊的聚合物膜典型地具有阳离子性质,并且因此与具有阴离子性质的化合物结合/络合。
这些微囊的直径是通过这些乳滴的大小而确定的,乳滴的大小通过例如搅拌速率来控制。
乳剂:乳剂是一个液相在第二液相内暂时或永久的分散体。该第二液相通常被称为连续相。表面活性剂通常用于帮助乳剂的形成和稳定化。不是所有的表面活性剂都能同样地稳定化乳剂。需要针对最优乳剂效用选择表面活性剂的类型和数量,尤其是对于该乳剂的制备和物理稳定性,以及在稀释或进一步加工过程中的稳定性。物理稳定性是指将乳剂以分散体形式进行维持。例如凝聚、聚合、吸附至容器壁、沉降和乳油化的过程是物理不稳定性的多种形式,并且应被避免。合适的表面活性剂的实例描述于WO 97/24177,第19-21页;以及WO 99/01534中。
可以将乳剂进一步分类为简单的乳剂,其中该分散的液相是简单的均质液体,抑或更复杂的乳剂,其中该分散的液相是液相或固相的非均质组合,例如双重乳剂或复合型乳剂。例如,可以形成油包水双重乳剂或复合型乳剂,其中该水相本身进一步包含乳化的油相;这种类型的乳剂可以被指定为油包水包油(o/w/o)乳剂。可替代地,可以形成油包水乳剂,其中该水相包含分散的固相,通常被称为悬浮液-乳剂。可以描述其他更复杂的乳剂。因为在描述这类系统方面固有的困难,术语乳剂用于描述简单和更复杂的乳剂两者,不必要限制乳剂的形式或存在的相类型和相数。
多胺:膜的刚性/柔性和可透性主要受多胺选择的影响。根据本发明的多胺是多支化的多胺。每个分支(优选地以伯氨基团结束)充当膜网络中的系拴点,从而产生本发明的有利性质。根据本发明的多支化的多胺是具有多于两个分支点和多于两个反应性氨基的多胺(能够与交联剂反应,即,伯氨基团和仲氨基团)。当制备该乳剂时,该多支化的多胺被用作起始材料–它不是从其他起始材料原位形成的。为了得到本发明引人注目的特性,该多胺的多支化结构必须作为起始材料存在。
分支点数目和伯胺数目之间存在密切的关系,由于伯胺将总是位于分支的末端:线性胺只能包含两个伯胺。对于假设地引入这样线性二胺的每个分支点将允许一个或多个伯胺引入到该或这些被引入的分支的末端。在本文中,我们将该伯氨基团理解为该分支的一部分,即该分支的端点。例如,我们认为三(2-氨乙基)胺或1,2,3-丙烷三胺都是具有一个分支点的分子。对于本发明,该多胺具有至少四个伯胺。可以从脂肪族烃链(如在之前所述实例中)或从不饱和的碳键(例如在,例如3,3’-二氨基联苯胺中)、或从叔氨基团(例如在N,N,N’,N’-四-(2-氨乙基)乙二胺)中引入多个分支点。
除了分支点的数目之外,我们已经发现,反应性氨基团的紧密度非常重要。例如,N,N,N’,N’-四-(12-氨十二基)乙二胺的物质是不适合的。肽或蛋白(例如酶)都不适合用于膜形成。因此,该多支化的多胺不是肽或蛋白。
在一个实施例中,这些反应性氨基团构成该多支化的多胺至少15%的分子量,例如超过20%,或超过25%。优选地,多支化的多胺的分子量是至少1kDa;更优选地,多支化的多胺的分子量是至少1.3kDa。
在一个优选的实施例中,该多支化的多胺是聚乙亚胺(PEI)、及其修饰版,其具有超过两个分支点和超过两个反应氨基基团;其中该反应性氨基基团构成至少15%的PEI分子量,如超过20%、或超过25%。优选地,该PEI的分子量是至少为1kDa。
不同的多支化的多胺的组合可以用于制备根据本发明的微囊。
可以通过添加一种或多种具有小于1kDa分子量的小胺来改进本发明的微囊的有利特性(例如,酶储存稳定性、降低的酶渗出、降低的洗涤剂成分的入通量)。该小胺优选地是基本上水溶性的(当处于游离碱形式时)并且可以是例如乙二胺、六亚甲基二胺、己二胺、二亚乙基四胺、乙四胺、苯二胺、哌嗪、四亚甲基五胺或、优选地二亚乙基三胺(DETA)的物质。在制备本发明的微囊时,可以按小胺和多支化的多胺的总含量重量计高达50%、优选地高达40%、高达30%、高达20%、高达10%、高达5%的量添加这些小胺。
交联剂:如在本发明中所使用的交联剂是具有至少两个能够与胺类反应形成共价键的基团/位点的分子。
该交联剂优选地是油可溶性的并且可以呈酸酐或酸性卤化物的形式,优选地为酰基氯。例如,它可以是己二酰氯、癸二酰氯、十二烷基二酰氯、邻苯二甲酰氯、对苯二甲酰氯、间苯二甲酰氯、或均苯三甲酰氯,但优选地,该交联剂是对苯二甲酰氯或均苯三甲酰氯。
本发明进一步涉及用于从物品防止、减少或去除生物膜的清洁方法,该方法包括以下步骤:
a)将物品与根据本发明所述的组合物或包括具有DNA酶活性的多肽的液态溶液接触;
b)完成至少一个清洁循环;并且
c)任选地冲洗该物品,
其中该物品是硬表面。
在一个实施例中,该是硬表面,如洗碗机或洗涤机的内部表面。该洗碗机或洗涤机的内部表面可以包括进皂盒、壁、窗、篮子、衣架、喷嘴、水泵、水池、过滤器、管道线、管、接头、密封件、垫片、配件、叶轮、鼓、排水管、存水弯、硬币陷阱入口和出口。洗碗机的内部表面或洗碗机可以由各种材料制成,如:金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料。
在本发明的一个实施例中,该餐具,如盘、杯、玻璃杯、碗、罐、餐具、匙、刀、叉、上菜用具、陶瓷、塑料、砧板、瓷器和玻璃器皿。在一个实施例中,将该餐具与硬表面清洁同时清洁,例如,在洗涤或清洁该餐具同时清洁洗碗机的内部。或者与洗涤衣物物品同时清洁洗涤机的内部。
方法中所使用的液态溶液包括抗静电剂,表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、黏质土去除/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、杀细菌剤、杀真菌剂和/或颜料或其组合。
在一个实施例中,该液态溶液进一步包括选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、过氧化物酶和氧化酶。
该液态溶液的pH在1到11的范围内,如在5.5到11的范围内,如在7到9的范围内,在7到8的范围内或在7到8.5的范围内。
该液态溶液的温度可以在5℃至95℃的范围内、或在10℃至80℃的范围内、在10℃至70℃的范围内、在10℃至60℃的范围内、在10℃至50℃的范围内、在15℃至40℃的范围内或在20℃至30℃的范围内。在一个实施例中,该液态溶液的温度是30℃。
在一个实施例中,在与液态溶液或组合物接触后,冲洗该物品。可以将该物品用水或用包括调节剂的水进行冲洗。
该具有DNA酶活性的多肽可以是动物、植物、微生物来源的。在一个实施例中,该多肽是人类来源的。在一个实施例中,该多肽获得自植物材料如绿豆。在一个实施例中,该多肽是细菌或真菌来源的。
真菌来源的多肽可以选自下组,该组由以下各项组成:
a.与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽或与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽
b.由多核苷酸编码的多肽,该多核苷酸在低严格条件下与
i.SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列;
ii.其cDNA序列,或
iii.(i)或(ii)的全长互补体;
c.由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽、或与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽;
d.SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:5的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括一个取代、缺失、和/或插入;以及
e.(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段,该片段具有DNA酶活性。
欧洲专利申请号14164424.5在实例1至3中披露了SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的多肽如何生产。欧洲专利申请号14164429.4在实例1至2中披露了SEQ ID NO:5的多肽如何生产。
细菌来源的多肽可以选自下组,该组由以下各项组成:
a.与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽或与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b.SEQ ID NO:6的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括一个取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入;以及
c.(a)或(b)的具有木聚糖酶活性的片段。
该多肽可以与SEQ ID NO:2的成熟多肽、与SEQ ID NO:3的成熟多肽、或与SEQ IDNO:5成熟多肽、或与SEQ ID NO:6的成熟多肽或与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性。
在编号WO 2011098579下公开的国际专利申请在实例3中披露了如何克隆并且表达SEQ ID NO:6的多肽。
该多肽可以包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:2的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:5的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:6的成熟多肽,或由其组成;或者该多肽包括SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:7的成熟多肽,或由其组成。
该成熟多肽可以包括SEQ ID NO:2的氨基酸1至206、SEQ ID NO:3的氨基酸1至206、SEQ ID NO:5的氨基酸1至188、SEQ ID NO:6的氨基酸1至110或SEQ ID NO:7的氨基酸1至109。
该多肽可以是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ IDNO:7的成熟多肽的变体,其中该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体。
该多肽可以是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ IDNO:7的片段,其中该片段具有DNA酶活性。
具有DNA酶活性的多肽可以获得自曲霉属,例如,米曲霉。
在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO:2成熟多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的多肽,这些多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有多达10个(例如1个、3个、5个、4个、2个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO:3成熟多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的多肽,这些多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有多达10个(例如1个、3个、5个、4个、3个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
在另一个实施例中,本发明涉及一种由以下多核苷酸编码的具有DNA酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性,并且其中将该多肽用于从物品上防止、减少或去除静电。
在一个实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或为其具有DNA酶活性的片段。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:2的氨基酸1至206或由其组成。
在一个实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或为其具有DNA酶活性的片段。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:3的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:3的氨基酸1至206或由其组成。
在另一个实施例中,本发明涉及一种具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在低严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的一种多核苷酸所编码(萨姆布鲁克等,1989,分子克隆实验指南,第2版,纽约冷泉港)。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有DNA酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有DNA酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性,并且其中将该多肽用于从物品上防止、减少或去除静电。
在另一个实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含一个取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:2的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
在另一个实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:3的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
具有DNA酶活性的多肽还可以获得自木霉属,例如,哈茨木霉。在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO:5成熟多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的多肽,这些多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有多达10个(例如1个、3个、5个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
在实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或为其具有DNA酶活性的片段。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:5的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:5的氨基酸1至188或由其组成。
在另一个实施例中,本发明涉及一种具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在低严格度条件下与(i)SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的一种多核苷酸所编码(萨姆布鲁克等,1989,分子克隆实验指南,第2版,纽约冷泉港)。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
可以使用SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4或其子序列,连同SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或其片段来设计核酸探针以便根据本领域熟知的方法鉴定和克隆编码来自不同属或物种的菌株的具有DNA酶活性的多肽的DNA。
具体地,可以遵循标准DNA印迹程序,使用此类探针与感兴趣的细胞的基因组DNA或cDNA杂交,以便鉴定和分离其中的对应基因。这样的探针可以大大短于整个序列,但是长度应该为至少15个,例如至少25个、至少35个或至少70个核苷酸。优选地,核酸探针的长度为至少100个核苷酸,例如长度为至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸、或至少900个核苷酸。DNA和RNA探针二者均可使用。典型地将探针进行标记,用于检测相应的基因(例如,用32P、3H、35S、生物素或抗生物素蛋白)。本发明涵盖此类探针。
可以筛选从此类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA文库的与上述探针杂交并编码具有DNA酶活性的多肽的DNA。来自此类其他菌株的基因组DNA或其他DNA可以通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳、或其他分离技术来分离。来自文库的DNA或分离的DNA可转移到并固定在硝酸纤维素或其他适合的载体材料上。为了鉴定与SEQ ID NO:4或其子序列杂交的克隆或DNA,将载体材料用于DNA印迹中。
出于本发明的目的,杂交表示多核苷酸与对应于以下项的标记的核酸探针杂交:(i)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4;(ii)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列;(iii)其cDNA序列;(iv)其全长互补体;或(v)其子序列;杂交是在非常低的至非常高的严格条件下进行。在这些条件下与该核酸探针杂交的分子可以使用例如X射线薄膜或本领域中已知的任何其他检测手段进行检测。
在另一个实施例中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有DNA酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的成熟多肽的变体,这些变体在一个或多个(例如,若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
具有DNA酶活性的多肽还可以获得自芽胞杆菌属,例如,获得自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌。
在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的多肽,这些多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的成熟多肽具有多达10个(例如1个、6个、3个、7个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
在一个实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包括SEQ ID NO:6、SEQID NO:7的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或为其具有DNA酶活性的片段。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:6的氨基酸1至110或SEQ ID NO:7的氨基酸1至109或由其组成。
在另一个实施例中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有DNA酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体,这些变体在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失和/或插入。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
保守取代的实例是在下组的范围内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.诺伊拉特(Neurath)和R.L.希尔(Hill),1979,在蛋白质(The Proteins),学术出版社(Academic Press),纽约中描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。
可替代地,氨基酸改变具有这样的性质:改变多肽的物理化学特性。例如,氨基酸改变可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。
可以根据本领域中已知的程序,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(坎宁汉(Cunningham)和威尔斯(Wells),1989,科学(Science)244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中,在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并且对所得突变体分子的DNA酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见希尔顿(Hilton)等人,1996,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可结合假定接触位点氨基酸的突变,如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析,从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如德沃斯(de Vos)等人,1992,科学(Science)255:306-312;史密斯等人,1992,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)224:899-904;沃德弗(Wlodaver)等人,1992,欧洲生物化学学会联盟简讯(FEBS Lett.)309:59-64。还可以从与相关多肽的比对推断鉴别必需氨基酸。
可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试,随后进行相关筛选程序,如由里德哈尔-奥尔森(Reidhaar-Olson)和萨奥尔(Sauer),1988,科学(Science)241:53-57;博维(Bowie)和萨奥尔,1989,美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如,洛曼(Lowman)等人,1991,生物化学(Biochemistry)30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)以及区域定向诱变(德比什尔(Derbyshire)等人,1986,基因(Gene)46:145;内尔(Ner)等人,1988,DNA 7:127)。
可以结合诱变/改组方法与高通量自动化筛选方法来检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(内斯(Ness)等人,1999,自然生物技术(Nature Biotechnology)17:893-896)。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以回收自宿主细胞,并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。
多肽可以是杂合多肽,其中一个多肽的区域融合在另一多肽的区域的N末端或C末端。
多肽还可以是融合多肽或可切割的融合多肽,其中另一多肽融合在本发明的多肽的N-末端或C-末端。通过将编码另一多肽的多核苷酸融合到本发明的多核苷酸而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术在本领域是已知的,并且包括连接编码多肽的编码序列,这样使得它们在框内并且使得融合多肽的表达处于相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。融合多肽还可以使用内含肽技术来构建,其中融合多肽在翻译后产生(库珀(Cooper)等人,1993,欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)12:2575-2583;道森(Dawson)等人,1994,科学(Science)266:776-779)。
融合多肽可以在两种多肽之间进一步包括切割位点。在融合蛋白分泌之时,该位点被切割,从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点:马丁(Martin)等人,2003,工业微生物与生物技术杂志(J.Ind.Microbiol.Biotechnol.)3:568-576;斯维特娜(Svetina)等人,2000,生物技术杂志(J.Biotechnol.)76:245-251;拉斯穆森-威尔逊(Rasmussen-Wilson)等人,1997,应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)63:3488-3493;沃德(Ward)等人,1995,生物技术(Biotechnology)13:498-503;以及孔特雷拉斯(Contreras)等人,1991,生物技术9:378-381;伊顿(Eaton)等人,1986,生物化学(Biochemistry)25:505-512;柯林斯-拉西(Collins-Racie)等人,1995,生物技术13:982-987;卡特(Carter)等人,1989,蛋白质:结构、功能以及遗传学(Proteins:Structure,Function,and Genetics)6:240-248;以及史蒂文斯(Stevens),2003,药物发现世界(Drug Discovery World)4:35-48。
本发明的酶-脱氧核糖核酸酶(DNA酶)
具有DNA酶活性的多肽或脱氧核糖核酸酶(DNA酶)是催化DNA骨架中的磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA的任何酶。可互换地使用两个术语,具有DNA酶活性的多肽和DNA酶。
根据本发明,优选的是可从真菌获得的DNA酶;具体地优选的是可从曲霉属获得的DNA酶;具体地优选的是可从米曲霉获得的DNA酶。在本发明的一个实施例中,具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽不是来自米曲霉的S1核酸酶。
本发明中使用的DNA酶包括示为SEQ ID NO:2的氨基酸1至206的SEQ ID NO:2的成熟多肽,其获得自米曲霉。具有DNA酶活性的多肽可以获得自曲霉属,例如,米曲霉。在本发明的一个实施例中,具有DNA酶活性的多肽是要求保护的多肽。
本发明的一方面涉及与SEQ ID NO:2成熟多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的分离的多肽,这些分离的多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有多达10个(例如1个、3个、5个、4个、2个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO:3成熟多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的分离的多肽,这些分离的多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有多达10个(例如1个、3个、5个、4个、3个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO:8具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性的分离的多肽,这些分离的多肽具有DNA酶活性。在一方面,这些多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有多达10个(例如1个、3个、5个、4个、8个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。
本发明的多肽优选地包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或为其具有DNA酶活性的片段。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:2的氨基酸1至206或由其组成。
在一个实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或为其具有DNA酶活性的片段。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:3的成熟多肽或由其组成。在另一方面,该多肽包括SEQ ID NO:3的氨基酸1至204或由其组成。本发明的一方面涉及组合物,该组合物包括由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成的多肽和由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成的本发明的多肽,或由其组成。
在另一个实施例中,本发明涉及具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在低严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸所编码(萨姆布鲁克等,1989,分子克隆实验指南,第2版,纽约冷泉港)。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在低-中严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸所编码。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在中严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸所编码。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在中-高严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸所编码。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在高严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸所编码。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及具有DNA酶活性的分离的多肽,该分离的多肽是由在非常高严格度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸所编码。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有DNA酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列一致性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在另一个实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:2的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
在另一个实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:3的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
该DNA酶可以包括SEQ ID NO:2的氨基酸-37至206所示的氨基酸序列或具有DNA酶的其片段,如成熟多肽,或由其组成。或者该DNA酶可以包括SEQ ID NO:2的氨基酸-37至206的片段或SEQ ID NO:2的氨基酸1至206,或由其组成,针对该片段从SEQ ID NO:2的氨基和/或羧基末端删除一个或多个氨基酸。
该DNA酶可以包括SEQ ID NO:3的氨基酸1至206所示的氨基酸序列或具有DNA酶的其片段,如成熟多肽,或由其组成。或者该DNA酶可以包括SEQ ID NO:3的氨基酸1至206的片段或SEQ ID NO:3的氨基酸1至206,或由其组成,针对该片段从SEQ ID NO:3的氨基和/或羧基末端删除一个或多个氨基酸。
该DNA酶可以包括SEQ ID NO:8的氨基酸1至206所示的氨基酸序列或具有DNA酶的其片段,如成熟多肽,或由其组成。或者该DNA酶可以包括SEQ ID NO:8的氨基酸1至206的片段或SEQ ID NO:8的氨基酸1至206,或由其组成,针对该片段从SEQ ID NO:8的氨基和/或羧基末端删除一个或多个氨基酸。
本发明还提供了基本上与以上多肽同源的DNA酶多肽及其种类同系物(旁系同源物或直系同源物)。在此使用术语“基本上同源”表示与SEQ ID NO:2的氨基酸序列或SEQ IDNO:3的氨基酸序列至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、更优选至少95%、甚至更优选至少97%相同,并且最优选至少99%或更多相同的多肽、或其具有DNA酶活性的片段、或其直系同源物或旁系同源物。
在另一个实施例中,SEQ ID NO:2的DNA酶在一个或多个(例如,若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入。在另一个实施例中,SEQ ID NO:3的DNA酶在一个或多个(例如,若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入。在一个实施例中,引入SEQ ID NO:2的成熟多肽中或SEQ ID NO:3的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目不超过10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8或9个。这些氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端的或羧基末端的延伸,例如氨基末端甲硫氨酸残基;高达20-25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸,例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
根据本发明,优选的是可从真菌获得的DNA酶;具体地优选的是可从木霉属获得的DNA酶;具体地优选的是可从哈茨木霉获得的DNA酶。
本发明中使用的DNA酶包括示为SEQ ID NO:5的氨基酸1至188的SEQ ID NO:5的成熟多肽,其获得自哈茨木霉。
该DNA酶可以包括SEQ ID NO:5的氨基酸-17至188所示的氨基酸序列或具有DNA酶的其片段,如成熟多肽,或由其组成。或者该DNA酶可以包括SEQ ID NO:5的氨基酸-17至188的片段或SEQ ID NO:5的氨基酸1至188,或由其组成,针对该片段从SEQ ID NO:5的氨基和/或羧基末端删除一个或多个氨基酸。
本发明还提供了基本上与以上多肽同源的DNA酶多肽及其种类同系物(旁系同源物或直系同源物)。在此使用术语“基本上同源”表示与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、更优选至少95%、甚至更优选至少97%相同,并且最优选至少99%或更多相同的多肽、或其具有DNA酶活性的片段、或其直系同源物或旁系同源物。
根据本发明,优选的是可从细菌获得的DNA酶;具体地优选的是可从芽胞杆菌属获得的DNA酶;具体地优选的是可从枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌获得的DNA酶。
本发明中所使用的DNA酶包括SEQ ID NO:6的成熟多肽,示为SEQ ID NO:6的氨基酸1至110,其源自枯草芽孢杆菌;或SEQ ID NO:7的成熟多肽,示为SEQ ID NO:7的氨基酸1至109,其源自地衣芽孢杆菌。
该DNA酶可以包括SEQ ID NO:6的氨基酸-26至110或SEQ ID NO:7的氨基酸-33至109所示的氨基酸序列或具有DNA酶的其片段,如成熟多肽,或由其组成。SEQ ID NO:6的氨基酸-26至110或SEQ ID NO:6的氨基酸1至110的片段是一种多肽,该多肽具有一个或多个从SEQ ID NO:6的氨基和/或羧基末端缺失的氨基酸。SEQ ID NO:7的氨基酸-33至109或SEQID NO:7的氨基酸1至109的片段是一种多肽,该多肽具有一个或多个从SEQ ID NO:7的氨基和/或羧基末端缺失的氨基酸。
本发明还提供了基本上与以上多肽同源的DNA酶多肽及其种类同系物(旁系同源物或直系同源物)。在此使用术语“基本上同源”表示与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、更优选至少95%、甚至更优选至少97%相同,并且最优选至少99%或更多相同的多肽、或其具有DNA酶活性的片段、或其直系同源物或旁系同源物。
保守取代的实例是在下组的范围内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.诺伊拉特(Neurath)和R.L.希尔(Hill),1979,在蛋白质(The Proteins),学术出版社(Academic Press),纽约中描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。
可替代地,氨基酸改变具有这样的性质:改变多肽的物理化学特性。例如,氨基酸改变可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。
可以根据本领域中已知的程序,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(坎宁汉(Cunningham)和威尔斯(Wells),1989,科学(Science)244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中,在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并且对所得突变体分子的DNA酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见希尔顿(Hilton)等人,1996,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可结合假定接触位点氨基酸的突变,如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析,从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如德沃斯(de Vos)等人,1992,科学(Science)255:306-312;史密斯等人,1992,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)224:899-904;沃德弗(Wlodaver)等人,1992,欧洲生物化学学会联盟简讯(FEBS Lett.)309:59-64。还可以从与相关多肽的比对推断鉴别必需氨基酸。
可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试,随后进行相关筛选程序,如由里德哈尔-奥尔森(Reidhaar-Olson)和萨奥尔(Sauer),1988,科学(Science)241:53-57;博维(Bowie)和萨奥尔,1989,美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如,洛曼(Lowman)等人,1991,生物化学(Biochemistry)30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)以及区域定向诱变(德比什尔(Derbyshire)等人,1986,基因(Gene)46:145;内尔(Ner)等人,1988,DNA 7:127)。
可以结合诱变/改组方法与高通量自动化筛选方法来检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(内斯(Ness)等人,1999,自然生物技术(Nature Biotechnology)17:893-896)。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以回收自宿主细胞,并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂交多肽,其中一个多肽的区域融合在另一个多肽的区域的N-末端或C-末端。
该多肽可以是一种融合多肽或可裂解的融合多肽,其中另一个多肽是在本发明多肽的N末端或C末端处融合。通过将编码另一多肽的多核苷酸融合至本发明的多核苷酸而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术在本领域是已知的,并且包括连接编码多肽的编码序列,这样使得它们在框内并且使得融合多肽的表达处于相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。融合多肽还可以使用内含肽技术来构建,其中融合多肽在翻译后产生(库珀(Cooper)等人,1993,欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)12:2575-2583;道森(Dawson)等人,1994,科学(Science)266:776-779)。
融合多肽可以在两种多肽之间进一步包括切割位点。在融合蛋白分泌之时,该位点被切割,从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点:马丁(Martin)等人,2003,工业微生物与生物技术杂志(J.Ind.Microbiol.Biotechnol.)3:568-576;斯维特娜(Svetina)等人,2000,生物技术杂志(J.Biotechnol.)76:245-251;拉斯穆森-威尔逊(Rasmussen-Wilson)等人,1997,应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)63:3488-3493;沃德(Ward)等人,1995,生物技术(Biotechnology)13:498-503;以及孔特雷拉斯(Contreras)等人,1991,生物技术9:378-381;伊顿(Eaton)等人,1986,生物化学(Biochemistry)25:505-512;柯林斯-拉西(Collins-Racie)等人,1995,生物技术13:982-987;卡特(Carter)等人,1989,蛋白质:结构、功能以及遗传学(Proteins:Structure,Function,and Genetics)6:240-248;以及史蒂文斯(Stevens),2003,药物发现世界(Drug Discovery World)4:35-48。
DNA酶的浓度典型地在0.00004-100ppm范围内的酶蛋白,如在0.00008-100范围内、在0.0002-100范围内、在0.0004-100范围内、在0.0008-100范围内、在0.001-100ppm范围内的酶蛋白、0.01-100ppm酶蛋白,优选地0.05-50ppm酶蛋白,更优选地0.1-50ppm酶蛋白,更优选地0.1-30ppm酶蛋白,更优选地0.5-20ppm酶蛋白,并且最优选地0.5-10ppm酶蛋白。
可以将本发明的DNA酶以一定量添加到洗涤剂组合物中,该量对应于至少0.002mg的DNA酶蛋白,如至少0.004mg的DNA酶蛋白、至少0.006mg的DNA酶蛋白、至少0.008mg的DNA酶蛋白、至少0.01mg的DNA酶蛋白、至少0.1mg蛋白,优选地1mg的蛋白,更优选地至少10mg的蛋白,甚至更优选地至少15mg的蛋白,最优选地至少20mg的蛋白,并且甚至最优选地至少25mg的蛋白。因此,该洗涤剂组合物可以包括至少0.00008%DNA酶蛋白,优选地至少0.002%、0.003%、0.004%、0.005%、0.006%、0.008%、0.01%、0.02%、0.03%、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1.0%的DNA酶蛋白
可以使用常规稳定剂稳定本发明的清洁剂组合物的DNA酶,这些常规稳定剂例如是多元醇,例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物,例如芳香族硼酸酯,或苯基硼酸衍生物,例如4-甲酰苯基硼酸,并且可以如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中所述配置该组合物。
本发明的多肽还可以结合到WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中,通过引用将其结合在此。
洗涤剂组合物
在一个实施例中,本发明针对洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含结合一种或多种额外的清洁组合物组分的本发明的酶。另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分,包括以下列出的示例性、非限制性组分。
金属护理剂
金属护理剂可以防止或减少金属的锈蚀、腐蚀或氧化,这些金属包括铝、不锈钢和非铁金属,如银和铜。适合的实例包括以下各项的一个或多个:
(a)苯并三唑类,包括苯并三唑或双-苯并三唑及其取代衍生物。苯并三唑衍生物是其中芳环上可获得的取代位点被部分或完全取代的那些化合物。适合的取代基包括直链的或支链的Ci-C20-烷基基团和羟基、硫、苯基或卤素(如氟、氯、溴和碘);
(b)选自下组的金属盐和络合物,该组由以下各项组成:锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴,镓和铯盐和/或络合物,这些金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一。在一方面,适合的金属盐和/或金属络合物可以选自下组,该组由以下各项组成:Mn(II)硫酸盐、Mn(II)柠檬酸盐、Mn(II)硬脂酸盐、Mn(II)乙酰丙酮化物、KTiF6、KZrF6、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐,例如,硫酸锌、水锌矿、乙酸锌或碳酸锌;
(c)硅酸盐,包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、硅酸钠、结晶层状硅酸盐及其混合物。
WO 94/26860和WO 94/26859中披露了用作银/铜腐蚀抑制剂的另外适合的有机和无机氧化还原活性物质。
优选地,本发明的组合物按重量计包括从0.1%至5%的金属护理剂的组合物,优选地该金属护理剂是锌盐。
表面活性剂
该餐具洗涤组合物包括至少一种非离子表面活性剂。适合的非离子表面活性剂包括但不限于低泡非离子(LFNI)表面活性剂。因为它们向自动餐具洗涤组合物赋予的改进的水膜作用(尤其来自玻璃器皿),LFNI表面活性剂最典型地用于自动餐具洗涤组合物中。它们还可以涵盖非硅、磷酸盐或非磷酸盐聚合材料,这些材料已知使在自动餐具洗涤中遇到的食物污垢消泡。该LFNI表面活性剂可以具有相对低的浊点和高亲水亲油平衡(HLB)。针对整个全系列水温中的起泡的最优控制,水中1%溶液的浊点典型地低于约32℃,并且可替代地更低,例如,0℃。如果需要的话,可以使用具有以上特性的可生物降解的LFNI表面活性剂。LFNI表面活性剂可以包括但不限于:烷氧基化的表面活性剂,尤其是由伯醇衍生的乙氧基化物,及其与更复杂的表面活性剂(如聚氧丙烯/聚氧乙烯/聚氧丙烯反向嵌段聚合物)的共混物。符合要求的适合的嵌段聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合化合物可以包括基于以下的那些:乙二醇、丙二醇、甘油、三羟甲基丙烷和乙二胺、及其混合物。由引发剂化合物与单反应性氢原子(如C 12-)的顺序乙氧基化和丙氧基化制成的聚合化合物是脂肪醇,一般不在自动餐具洗涤组合物中提供令人满意的泡沫控制。然而,某些由BASF-Wyandotte公司,怀恩多特,密歇根州命名为PLURONIC(R)和TETRONIC(R)的嵌段聚合表面活性剂化合物适用于自动餐具洗涤组合物。
该LFNI表面活性剂任选地可以按重量计包括高达约15%的量的氧化丙烯。可以通过美国专利号4,223,163中所描述的工艺制备其他LFNI表面活性剂。该LFNI表面活性剂还可以源自直链脂肪醇,该直链脂肪醇包含从约16至约20碳原子(C16-C20醇),可替代地Ci8醇,在从约6至约15摩尔,或从约7至约12摩尔,和可替代地从约7至约9摩尔的氧化乙烯/摩尔醇的平均值下缩合。相对于平均值,这样衍生的乙氧基化的非离子表面活性剂可以具有窄的乙氧基化物分布。
在某些实施例中,具有低于30℃浊点的LFNI表面活性剂按重量计可以以从约0.01%至约60%、或从约0.5%至约10%的量存在,并且可替代地,以按重量计从约1%至约5%的组合物的量存在。
在优选的实施例中,该表面活性剂是具有以下相转变温度的非离子表面活性剂或非离子表面活性剂系统,如在蒸馏水中的1%浓度下测量的,在40℃和70℃之间,优选地在45℃和65℃之间。“非离子表面活性剂系统”本文中意指两种或更多种非离子表面活性剂的混合物。本文中优选使用的是非离子表面活性剂系统。比单非离子表面活性剂,它们在产品中似乎具有改进的清洁和整理性质和稳定性。
适合的非离子表面活性剂包括:i)通过如下制备的乙氧基非离子表面活性剂:单羟基化的烷醇或烷基酚与6至20个碳原子反应,其中优选地至少12摩尔,具体优选地至少16摩尔,并且还更优选至少20摩尔氧化乙烯/摩尔醇或烷基酚;ii)具有从6至20个碳原子和至少一个乙氧基和丙氧基基团的醇烷氧基化的表面活性剂。本文中使用优选的是表面活性剂i)和ii)的混合物。
另一个适合的非离子表面活性剂是由以下化学式代表的环氧封端的聚(烷氧基化)醇:
R1O[CH2CH(CH3)O]x[CH2CH2O]y[CH2CH(OH)R2](I)
其中R1是具有从4至18个碳原子的直链的或支链的脂肪烃基团;R2是具有从2至26个碳原子的直链的或支链的脂肪烃基团;x是具有从0.5至1.5,更优选地约1的平均值的整数;并且y是具有至少15,更优选地至少20的值的整数。
优选地,具有化学式I的表面活性剂在末端环氧单元[CH2CH(OH)R2]中具有至少约10个碳原子。具有化学式I的适合的表面活性剂是Olin公司的POLY-TERGENT(R)SLF-18B非离子表面活性剂,例如,如由Olin公司1994年10月13日公开的WO 94/22800中所描述的。
优选地本文中的非离子表面活性剂和/或系统具有少于360秒的德拉夫斯润湿时间,优选地少于200秒,更优选地少于100秒并且尤其是少于60秒,如通过德拉夫斯润湿方法所测量的(使用以下条件的标准方法ISO 8022:在25℃的温度下,3-g钩、5-g棉绞纱、按重量计0.1%水溶液)。氧化胺表面活性剂在本发明中作为抗再沉淀表面活性剂也是有用的,这些抗再沉淀表面活性剂包括具有以下化学式的直链的和支链的化合物:
其中R3选自以下各项:烷基、羟烷基、酰氨基丙基和烷基苯基基团、或其混合物,其包含从8至26个碳原子,优选地8至18个碳原子;R4为包含从2至3个碳原子(优选地2个碳原子)的亚烷基或羟基亚烷基基团,或其混合物;X是从0至5,优选地从0至3;并且每个R5为包含从1至3个碳原子(优选地1至2个碳原子)的烷基或羟基烷基基团,或包含从1至3个(优选地1个)环氧乙烷基基团的一个聚氧化乙烯基团。R5基团可以,例如通过氧原子或氮原子彼此连接以形成环状结构。
这些氧化胺表面活性剂具体包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C18烷氧基乙基二羟基乙基氧化胺。此类材料的实例包括二甲基辛胺氧化物、二乙基癸胺氧化物、双-(2-羟乙胺)十二烷胺氧化物、二甲基癸胺氧化物、二丙基十四烷胺氧化物、甲基乙基十六烷胺氧化物、十二烷基酰胺丙基二甲胺氧化物、十六烷基二甲胺氧化物、十八烷基二甲胺氧化物、牛脂二甲胺氧化物和二甲基-2-羟基十八烷胺氧化物。优选的是C10-C18烷基二甲胺氧化物、和C10-C18酰胺烷基二甲胺氧化物。
表面活性剂并且尤其是非离子型表面活性剂按重量计可以按从0至10%,优选地从0.1%至10%,并且最优选地从0.25%至6%的量存在。
磺化聚合物
按组合物的重量计,将该聚合物(如果使用的话)以从约0.1%至约20%,优选地从1%至约15%,更优选地从2%至10%的任何适合的量来使用。磺化/羧化的聚合物特别适用于本发明小袋中所包含的组合物中。
本文描述的适合的磺化/羧化的聚合物可以具有如下的重量平均分子量:小于或等于约100,000Da、或小于或等于约75,000Da、或小于或等于约50,000Da、或从约3,000Da至约50,000,优选地从约5,000Da至约45,000Da。
如本文所指出的,该磺化/羧化的聚合物可以包括(a)源自具有通式(I)的至少一种羧酸单体的至少一种结构单元:
其中R1至R4独立地是氢、甲基、羧酸基团或CH2COOH,并且其中可以将该羧酸基团进行中和;(b)任选地,源自具有通式(II)的至少一种非离子单体的一种或多种结构单元:
其中R5是氢、C1至C6烷基、或C1至C6羟烷基,并且X是芳香族的(其中当X是芳香族的时,R5是氢或甲基)抑或者X具有通式(III):
其中R6是(独立于R5)氢、C1至C6烷基、或C1至C6羟烷基,并且Y是O或N;和源自具有通式(IV)的至少一种磺酸单体的至少一种结构单元:
其中R7是包括至少一个sp2键的基团,A是O、N、P、S或酰胺或酯键,B是单或多环芳基基团或脂肪烃基团,每个t独立地是0或1,并且M+是阳离子。在一方面,R7是C2至C6烯烃。在另一方面,R7是乙烯、丁烯或丙烯。
优选的羧酸单体包括以下各项中的一种或多种:丙烯酸、马来酸、衣康酸、异丁烯酸、或丙烯酸的乙氧基化物酯,更优选的是丙烯酸和甲基丙烯酸。优选的磺化的单体包括以下各项中的一种或多种:(甲基)烯丙基磺酸钠、磺酸乙烯酯、苯基(甲基)烯丙基酯磺酸钠、或2-丙烯酰胺-甲基丙磺酸。优选的非离子单体包括以下中的一种或多种:(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、甲基(甲基)丙烯酰胺、乙基(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸叔丁酯、苯乙烯、或[α]-甲基苯乙烯。优选地,该聚合物包括以下水平的单体:按重量计从约40%至约90%,优选地从约60%至约90%的一种或多种羧酸单体的聚合物;按重量计从约5%至约50%,优选地从约10%至约40%的一种或多种磺酸单体的聚合物;和按重量计任选地从约1%至约30%,优选地从约2%至约20%的一种或多种非离子单体的聚合物。特别优选的聚合物包括按重量计约70%至约80%的至少一种羧酸单体的聚合物和按重量计从约20%至约30%的至少一种磺酸单体的聚合物。99
该羧酸优选地是(甲基)丙烯酸。该磺酸单体优选地是以下各项之一:2-丙烯酰胺甲基-1-丙磺酸、2-甲基丙烯酰基氨基-2-甲基-1-丙磺酸、3-甲基丙烯酰基氨基-2-羟基丙磺酸、芳基磺酸、甲芳基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯基氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯-l-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯磺酸、丙烯酸3-磺丙酯、甲基丙烯酸3-磺丙酯、丙烯酸磺甲酯、甲基丙烯酸磺甲酯、及其水溶性盐。该不饱和磺酸单体最优选地是2-丙烯酰氨基-2-丙磺酸(AMPS)。
优选的可商购的聚合物包括:由阿尔科化学公司(Alco Chemical)提供的Alcosperse 240、Aquatreat AR 540和Aquatreat MPS;由Rohm&Haas公司提供的Acumer3100、Acumer 2000、Acusol 587G和Acusol 588G;由BF Goodrich公司提供的Goodrich K-798、K-775和K-797;和由ISP技术公司提供的ACP 1042。特别优选的聚合物是由Rohm&Haas公司提供的Acusol 587G和Acusol 588G。
在聚合物中,所有或一些羧酸或磺酸基团可以按中和形式存在,即,一些或所有酸基团中的羧酸和/或磺酸的酸性氢原子可以被金属离子,优选地碱金属离子并且具体地被钠离子替换。
助水溶剂
助水溶剂是如下化合物,该化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地,在非极性环境中的极性物质)。一般地,助水溶物具有亲水和疏水两种特征(如由表面活性剂已知的所谓的两亲性质);然而,助水溶物的分子结构一般不利于自发性自聚集,参见例如通过霍奇登(Hodgdon)和卡勒(Kaler)(2007),胶体&界面科学新见(Current Opinion inColloid&Interface Science)12:121-128的综述。助水溶剂并不显示临界浓度,高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。很多助水溶剂反而示出连续型聚集过程,其中聚集体的大小随着浓度增加而增长。然而,很多助水溶剂改变了包括极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。经典地从制药、个人护理、食品跨行业至技术应用使用助水溶剂。助水溶剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过除去水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象,例如相分离或高粘度。
洗涤剂可以包含按重量计0-10%,例如按重量计0-5%,例如约0.5%至约5%、或约3%至约5%的助水溶剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
洗涤剂组合物可以包含按重量计约0-65%,例如约5%至约50%的洗涤剂助洗剂或共助洗剂或其混合物。增洁剂和/或共增洁剂(co-builder)可以特别是与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合剂。可以使用本领域中已知用于在洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如,来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA,也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA,也称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。
该洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-50%,例如约5%至约30%的洗涤剂共助洗剂。去污剂组合物可以包括单独的共增洁剂、或与如沸石增洁剂等增洁剂组合的共增洁剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐,螯合剂,例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐,以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二磷酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基磷酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基磷酸)(ATMP)、及其组合和盐。其他示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中
漂白系统
该洗涤剂可以包含按重量计0-30%,例如约1%至约20%的漂白系统。可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠、过硼酸钠和过氧化氢-尿素(1:1)、预成型过酸及其混合物。适合的预成型过酸包括但不限于过氧羧酸及盐、二过氧二羧酸、过亚氨酸(perimidicacid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))及其混合物。漂白体系的非限制性例子包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白体系,其可以包含例如无机盐,包括碱金属盐例如过硼酸盐的钠盐(通常为单或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。术语漂白活化剂在此意指一种与过氧化氢反应以经由过水解反应形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。有待在此使用的适合漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且在那个家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点,它是环境友好的。此外,乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在存储时在产品中具有良好的水解稳定性,并且是一种有效的漂白活化剂。最后,ATC是多功能的,因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。可替代地,漂白系统可以包括例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包括过酸,例如6-(邻苯二甲酰亚胺基)过氧己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中,漂白组分可以是选自下组的有机催化剂,该组由以下各项组成:具有下式的有机催化剂:
(iii)及其混合物;
其中每个R1独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基,优选地每个R1独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基,更优选地每个R1独立地选自下组,该组由以下各项组成:2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO2007/087259、EP 1867708(维生素K)以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
优选地,除了漂白催化剂、特别是有机漂白催化剂以外,漂白组分还包括过酸源。过酸源可以选自(a)预形成的过酸;(b)过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐(过氧化氢源),优选与一种漂白活化剂组合;和(c)过水解酶以及酯,用于在纺织品处理步骤中在水的存在下原位形成过酸。
金属护理剂
金属护理剂可以防止或减少金属的锈蚀、腐蚀或氧化,这些金属包括铝、不锈钢和非铁金属,如银和铜。适合的实例包括以下各项的一个或多个:
(a)苯并三唑类,包括苯并三唑或双-苯并三唑及其取代衍生物。苯并三唑衍生物是其中芳环上可获得的取代位点被部分或完全取代的那些化合物。适合的取代基包括线性或支链Ci-C20-烷基基团和羟基、硫、苯基或卤素(如氟、氯、溴和碘)的取代基。
(b)选自下组的金属盐和络合物,该组由以下各项组成:锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴,镓和铯盐和/或络合物,这些金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一。在一方面,适合的金属盐和/或金属络合物可以选自下组,该组由以下各项组成:Mn(II)硫酸盐、Mn(II)柠檬酸盐、Mn(II)硬脂酸盐、Mn(II)乙酰丙酮化物、KTiF6、KZrF6、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐,例如,硫酸锌、水锌矿、乙酸锌或碳酸锌。
(c)硅酸盐,包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、硅酸钠、结晶层状硅酸盐及其混合物。
WO 94/26860和WO 94/26859中披露了用作银/铜腐蚀抑制剂的另外适合的有机和无机氧化还原活性物质。
优选地,本发明的组合物按重量计包括从0.1%至5%的金属护理剂的组合物,优选地该金属护理剂是锌盐。
聚合物
洗涤剂可以包含按重量计0-10%,例如0.5%-5%、2%-5%、0.5%-2%或0.2%-1%的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用,或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物,例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水改性CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸盐、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂,例如染料或色素,当配制在洗涤剂组合物中时,当所述织物与一种洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上,该洗涤液包括所述洗涤剂组合物,并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下,因为它们吸收至少一部分可见光光谱,所以织物调色剂改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物,并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成:直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物,例如描述于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO2005/03276和EP 1876226中(将其通过引用而特此结合)。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt%至约0.2wt%、从约0.00008wt%至约0.05wt%、或甚至从约0.0001wt%至约0.04wt%的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt%至0.2wt%的织物调色剂,当该组合物处于单位剂量袋的形式时,这可以是特别优选的。适合的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包括一种或多种额外的酶,例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶,例如漆酶、和/或过氧化物酶。
一般而言,一种或多种所选酶的特性应与选定的洗涤剂相容(即,最适pH,与其他酶和非酶成分的相容性,等等),并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶
适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程处理的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳属、枝顶孢属的纤维素酶,例如,从在US4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中披露的特异腐质霉、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。
特别适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有一种序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶,该序列与WO2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97%一致性,或一种家族44木葡聚糖酶,该木葡聚糖酶具有一种序列,该序列与WO2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60%一致性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme PremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、CellucleanClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM和Puradax HATM(杰能科国际公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
蛋白酶
适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些,例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的或蛋白质工程处理的突变体。它可以是碱性蛋白酶,例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶,例如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据斯艾森(Siezen)等人,蛋白质工程学(ProteinEngng.)4(1991)719-737和斯艾森等人,蛋白质科学(Protein Science)6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。枯草杆菌酶可以划分为6个亚部,即,枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是获得自芽孢杆菌属的那些,例如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌;和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶迟缓(lentus)、枯草杆菌蛋白酶诺和(Novo)、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024以及WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢菌蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中),以及获得自纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是如描述于WO 07/044993(杰能科国际公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶,例如获得自解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是于以下各项中的变体:WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264,尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体:3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274,使用BPN’编号。更优选地,这些枯草杆菌酶变体可以包含以下突变:S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’编号)。
适合的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些:DuralaseTm、DurazymTm、Ultra、Ultra、Ultra、 Ultra、和(诺维信公司),以下列商品名出售的那些: PurafectPreferenzTm、PurafectPurafectPurafectEffectenzTm、以及(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTm(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶
适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶,例如如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉);来自腐质霉属的角质酶,例如特异腐质霉(WO 96/13580);来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔氏菌属),例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720&WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012);GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455);来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560);来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536);来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412);嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO11/084417);来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599);以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体,例如描述于EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM;LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司),Lumafast(最初来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(最初来自吉斯特-博克德斯公司(Gist-Brocades))。
再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶,例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
淀粉酶
可以与本发明的酶一起使用的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以具有细菌或真菌起源。包括化学修饰的或蛋白质工程处理的突变体。淀粉酶包括例如获得自芽孢杆菌属的α-淀粉酶,例如GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌具体株系的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90%序列一致性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中,例如在一个或多个以下位置中具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的获得自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90%序列一致性的变体。这一杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的获得自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
适合的另外的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90%序列一致性的变体。使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号,SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置,例如181和182、182和183、或位置183和184具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304以及476的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815中的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90%序列一致性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90%序列一致性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:176、177、178、179、190、201、207、211以及264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90%序列一致性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端的截短和/或取代、缺失或插入的那些:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代的那些:Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K和/或位置R180和/或S181或T182和/或G183的缺失。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K,其中这些变体是C-末端截短的并且任选地进一步在位置243处包括取代和/或在位置180和/或位置181处包括缺失。
其他适合的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90%序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R28,R118,N174;R181,G182,D183,G184,G186,W189,N195,M202,Y298,N299,K302,S303,N306,R310,N314;R320,H324,E345,Y396,R400,W439,R444,N445,K446,Q449,R458,N471,N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有R118K、N195F、R320K及R458K的取代的变体,以及另外在选自下组的一个或多个位置中具有取代的变体:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339,最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是例如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078及WO2013/001087中的那些淀粉酶变体。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X及BANTM(来自诺维信公司),以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase及Preferenz S100(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司(GenencorInternational Inc./DuPont))。
过氧化物酶/氧化酶
根据本发明的过氧化物酶是由如由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(IUBMB)陈述的酶分类EC 1.11.1.7包括的过氧化物酶,或获得自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程处理的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属,例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486),及其变体,如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。
根据本发明的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶,例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶加以分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。
在一个实施例中,本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地,该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶,即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的一个优选方法中,将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯根离子来源组合。
已经从许多不同真菌,特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶,比如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已经从细菌,如假单胞菌属(例如,吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如,金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在一个优选实施例中,该卤代过氧化物酶可源自弯孢属物种,特别是疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)或不等弯孢,如如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS102.42或描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70;或可源自如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii,如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium物种。
根据本发明的氧化酶具体包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或获得自其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物,例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以获得自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌适合的实例包括源自以下项的菌株的漆酶:曲霉属(Aspergillus),脉孢菌属(Neurospora),例如粗糙脉孢菌(N.crassa),柄孢壳属(Podospora),葡萄孢属(Botrytis),金钱菌属(Collybia),层孔菌属(Fomes),香菇属(Lentinus),侧耳属(Pleurotus),栓菌属(Trametes),例如,长绒毛栓菌和变色栓菌,丝核菌属(Rhizoctonia),例如,立枯丝核菌(R.solani),鬼伞属(Coprinus),例如,灰盖鬼伞(C.cinereus)、毛头鬼伞(C.comatus)、费赖斯鬼伞(C.friesii)、和褶纹鬼伞(C.plicatilis),小脆柄菇属(Psathyrella),例如,P.condelleana,斑褶菇属(Panaeolus),例如,蝶形斑褶菇(P.papilionaceus),毁丝霉属(Myceliophthora),例如,嗜热毁丝霉(M.thermophila),柱顶孢属(Schytalidium),例如,S.thermophilum,多孔菌属(Polyporus),例如,匹斯特斯多孔菌(P.pinsitus),射脉菌属(Phlebia),例如,射脉菌(P.radita)(WO 92/01046),或拟革盖菌属(Coriolus),例如,毛革盖菌(C.hirsutus)(JP 2238885)。
来自细菌的适合实例包括可源自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是获得自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶;特别是获得自灰盖拟鬼伞的漆酶,如披露于WO 97/08325中;或来自嗜热毁丝霉,如披露于WO95/33836中。
该一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包含一种或多种酶的单独的添加剂,或通过添加包括所有这些酶的组合添加剂而被包括于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂,即单独的或组合的添加剂,可以配制成例如颗粒、液体、浆液等,优选的洗涤剂添加剂剂型为颗粒,特别是无粉尘颗粒;液体,特别是稳定化液体;或者浆液。
非尘颗粒可以例如如在US 4,106,991和4,661,452中所披露而产生,并且可以任选地通过本领域已知的方法进行涂层。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有16到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚(ethoxylated nonylphenol);具有15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪族醇,其中醇包含12至20个碳原子;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的单-和双-和三甘油酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法制备。
其他材料
还可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物整理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢助悬剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂,单独抑或组合使用。可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何成分。此类成分的选择完全在普通技术人员的技术内。
分散剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地说,粉状洗涤剂可以包括分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐,其中聚羧酸包括至少两个羧基,这两个羧基被不超过两个碳原子彼此分开。适合的分散剂例如描述于粉状洗涤剂,表面活性剂科学系列,第71卷中,马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker)。
染料转移抑制剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当存在于主题组合物中时,染料转移抑制剂可以按组合物重量计的以下水平存在:从约0.0001%至约10%、从约0.01%至约5%或甚至从约0.1%至约3%。
荧光增白剂
本发明的洗涤剂组合物将优选地还包含另外的组分,这些组分可以给正在清洁的物品着色,例如荧光增白剂或光学增亮剂。其中增亮剂优选以约0.01%至约0.5%的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些:二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。二氨基芪-磺酸衍生物类型的荧光增白剂的实例包括以下的钠盐:4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-GeigyAG)(巴塞尔,瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选荧光增白剂,是可商购的Parawhite KX,由派拉蒙矿物与化学(Paramount Minerals and Chemicals),孟买,印度供应。适合用于在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。
适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt%、从0.05wt%、从约0.1wt%或甚至从约0.2wt%的较低水平至0.5wt%或甚至0.75wt%的较高水平。
污物释放聚合物
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污物释放聚合物,这些聚合物帮助从织物(如棉布和基于聚酯的织物)移除污物,特别是从基于聚酯的织物移除疏水性污物。污物释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺,参见例如粉状洗涤剂,表面活性剂科学系列第71卷第7章,马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)。另一种类型的污物释放聚合物是包括一个芯结构和连接至该芯结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包括聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构,如WO 2009/087523中详细描述的(将其通过引用而特此结合)。此外,随机接枝共聚物是适合的污物释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314中(将其通过引用而特此结合)。其他污物释放聚合物是取代的多糖结构,尤其是取代的纤维素结构,例如改性纤维素衍生物,例如EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(将二者都通过引用而特此结合)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、兼性离子改性的纤维素及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉淀剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂,例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污物释放聚合物下描述的纤维素基聚合物还可以用作抗再沉积剂。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂,不同于降粘剂。流变改性剂选自下组,该组由以下各项组成:非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂,它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度,例如如在EP 2169040中所示。
其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填充剂、泡沫调节剂、助水溶剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
洗涤剂产品的配制品
本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式,例如条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。
袋可以被配置为单个或多个的室。它可以具有适合容持该组合物的任何形式、形状和材料,例如在与水接触之前,不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料,优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯,最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地,在膜中的聚合物(例如PVA)的水平是至少约60%。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物,该共混组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物,例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考M8630下,如由美国印第安纳州的MonoSolLLC公司销售)加增塑剂,像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在组成上可以与包括固体的室不同:US 2009/0011970 A1。
可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。由此可以避免组分之间的负面的存储相互作用。在洗涤溶液中,每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的,典型地包含按重量计至少20%并且高达95%的水,例如高达约70%的水、高达约65%的水、高达约55%的水、高达约45%的水、高达约35%的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。含水液体或凝胶洗涤剂可以包含从0-30%的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
洗衣皂条
本发明的DNA酶可以被添加至洗衣皂条中并且用于手洗洗衣、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条以及洗涤剂条。条的类型通常区别在于它们包含的表面活性剂的类型,并且术语洗衣皂条包括包含来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间推移显著改变的实体形式,即如果将一个固体物件(例如洗衣皂条)放置在一种容器内,那么该固体物件不会改变以填充放置该固体物件的容器。该条是典型地呈条形式但是可以呈其他固体形状、如圆形或卵形的一种固体。
洗衣皂条可以包含一种或多种另外的酶,蛋白酶抑制剂例如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物),硼酸,硼酸盐,硼砂和/或苯基硼酸衍生物例如4-甲酰苯基硼酸,一种或多种肥皂或合成表面活性剂,多元醇例如甘油,pH控制化合物例如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸,和/或一价阳离子和有机阴离子的盐,其中该一价阳离子可以是例如Na+、K+或NH4 +并且该有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐,这样使得一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。
洗衣皂条还可以包含络合剂像EDTA和HEDP,香料和/或不同类型的填充剂,表面活性剂例如阴离子型合成表面活性剂,助洗剂,聚合的污垢释放剂,洗涤剂螯合剂,稳定剂,填充剂,染料,着色剂,染料转移抑制剂,烷氧基化的聚碳酸酯,抑泡剂,结构剂,粘合剂,浸出剂,漂白活化剂,粘土去污剂,抗再沉积剂,聚合分散剂,增白剂,织物柔软剂,香料和/或本领域已知的其他化合物。
洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工,例如但不限制于:混合器、压条机例如双级真空压条机、挤出机、切割机、标识压模机(logo-stamper)、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在工艺的不同阶段向肥皂中添加本发明的预混料。例如,可以制备包含肥皂、DNA酶、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料并且然后将该混合物压条。可以同时添加作为例如处于液态的蛋白酶抑制剂的DNA酶以及任选的另外的酶。除了混合步骤和压条步骤以外,该工艺还可以进一步包括研磨、挤出、切割、压模、冷却和/或包装的步骤。
共颗粒中酶的配制品
该DNA酶可以被配制为颗粒,例如,配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后,每种酶将存在于多种颗粒中,这些颗粒确保酶在洗涤剂中更均匀分布。这还减少了由于不同的粒度,不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中,其涉及包括以下各项的洗涤剂组合物:(a)多酶共颗粒;(b)少于10wt沸石(无水基线);和(c)少于10wt磷酸盐(无水基线),其中所述酶共颗粒包括从10至98wt%的水分汇组分,并且该组合物另外还包括从20至80wt%的洗涤剂水分汇组分。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面的方法,优选地织物表面,该方法包括以下步骤:(i)将所述表面与在含水洗涤液中如在此要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触,(ii)冲洗和/或干燥该表面。
该多酶共颗粒可以包括DNA酶和(a)选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:首次洗涤脂肪酶,清洁纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化酶、脂氧合酶、漆酶及其混合物;和(b)选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶酸裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、普鲁兰酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、玻璃酸酶、软骨素酶、淀粉酶、及其混合物。
在以下各段中进一步概述本发明:
1.一种具有DNA酶活性的多肽用于防止、减少和/或去除物品的生物膜的用途,其中该物品是硬表面。
2.根据段落1所述的用途,用于防止、减少和/或去除物品的粘性。
3.根据段落1或2中任一项所述的用途,用于预处理物品上的生物膜污点。
4.根据段落1-3中任一项所述的用途,用于防止、减少和/或去除污垢附着于该物品。
5.根据以上段落中任一项所述的用途,其中从该物品防止、减少和/或去除恶臭。
6.根据以上段落中任一项所述的用途,其中该恶臭是通过E-2-壬烯醛引起的。
7.根据以上段落中任一项所述的用途,其中防止、减少或去除在湿物品上存在的E-2-壬烯醛的量。
8.根据以上段落中任一项所述的用途,其中防止、减少和/或去除在干燥的物品上存在的E-2-壬烯醛的量。
9.根据以上段落中任一项所述的用途,其中将该具有DNA酶活性的多肽喷到该物品上。
10.根据以上段落中任一项所述的用途,其中将该物品暴露于包括具有DNA酶活性的多肽的液态溶液。
11.根据段落10所述的用途,其中该液态溶液是洗涤液。
12.根据以上段落中任一项所述的用途,其中该具有DNA酶活性的多肽是动物、植物或微生物来源的。
13.根据段落12所述的用途,其中该多肽是人类来源的。
14.根据段落12所述的用途,其中该多肽获得自绿豆。
15.根据段落12所述的用途,其中该多肽是细菌或真菌来源的。
16.根据段落15所述的用途,其中该多肽是真菌来源的并且该多肽选自下组,该组由以下各项组成:
a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,或与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b)由多核苷酸编码的多肽,该多核苷酸在低严格条件下与
i.SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列;
ii.其cDNA序列;或
iii.(i)或(ii)的全长互补体;
c)由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽、或与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽;
d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,SEQ ID NO:5的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:8的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括一个取代、缺失、和/或插入;以及
e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段,该片段具有DNA酶活性。
17.根据段落15所述的用途,其中该多肽是细菌来源的并且该多肽选自下组,该组由以下各项组成:
a)与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽或与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b)SEQ ID NO:6的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入;以及
c)(a)或(b)的具有木聚糖酶活性的片段。
18.根据段落16-17中任一项所述的用途,其中该多肽可以与SEQ ID NO:2的成熟多肽、与SEQ ID NO:3的成熟多肽、与SEQ ID NO:5成熟多肽、与SEQ ID NO:6的成熟多肽、与SEQ ID NO:7的成熟多肽或与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性。
19.根据段落16-18中任一项所述的用途,其中该多肽包括SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:2的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:6的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:7的成熟多肽,或由其组成;或者该多肽包括SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的成熟多肽,或由其组成。
20.根据段落16-19中任一项所述的用途,其中该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至206、SEQ ID NO:3的氨基酸1至206、SEQ ID NO:5的氨基酸1至188、SEQ ID NO:6的氨基酸1至110、SEQ ID NO:7的氨基酸1至109或SEQ ID NO:8的氨基酸1至206。
21.根据段落16-20中任一项所述的用途,其中该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的成熟多肽的变体,其中该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQID NO:8的成熟多肽的变体。
22.根据段落16-21中任一项所述的用途,其中该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的片段,其中该片段具有DNA酶活性。
23.根据以上段落中任一项所述的用途,其中该物品是由以下各项制成的:金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸、尼龙、木材、ABS、压克力、聚碳酸酯、PVC、聚丙烯、搪瓷、镀锌材料、锌、彩陶、陶瓷、陶器、瓷器或瓷料。
24.根据段落23所述的用途,其中该物品是由以下各项制成的:铁、铜、镁、铬、镍、铝、钛、钼、铅、金、银、黄铜、锡、或其合金。
25.根据段落23-24中任一项所述的用途,其中该物品是由以不绣钢制成的。
26.根据段落23所述的用途,其中该物品是由橡胶如天然橡胶或合成橡胶制成的。
27.根据以上段落中任一项所述的用途,其中该生物膜包括短波单胞菌属物种的至少一种菌株、荧光假单胞菌的至少一种菌株和/或嗜碱性假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)的至少一种菌株。
28.一种洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和金属护理剂。
29.根据段落28所述的组合物,其中该金属护理剂选自下组,该组由以下各项组成:
a)苯并三唑类,包括苯并三唑或双-苯并三唑及其取代衍生物,这些衍生物包括具有线性或支链Ci-C20-烷基基团和羟基、硫、苯基或卤素(如氟、氯、溴和碘)的取代基;
b)选自下组的金属盐和络合物,该组由以下各项组成:锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴,镓和铯盐和/或络合物,这些金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一,如选自下组的金属盐和/或金属络合物,该组由以下各项组成:Mn(II)硫酸盐、Mn(II)柠檬酸盐、Mn(II)硬脂酸盐、Mn(II)乙酰丙酮化物、KTiF6、KZrF6、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐,例如,硫酸锌、水锌矿、乙酸锌或碳酸锌;
c)硅酸盐,包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、硅酸钠、结晶层状硅酸盐及其混合物。
30.一种洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和强螯合助洗剂和/或选自下组的助洗剂,该组由以下各项组成:柠檬酸钠、柠檬酸、醇胺、碳酸钠、碳酸氢钠和氨基-三-(亚甲基-磷酸)(AMP)。
31.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物进一步包括表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、黏质土去除/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、杀细菌剤、杀真菌剂和/或颜料或其混合物。
32.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该洗涤剂组分是表面活性剂。
33.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该洗涤剂组分是助洗剂。
34.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该洗涤剂组分是黏质土去除/抗再沉淀剂。
35.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、过氧化酶和氧化酶。
36.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中该具有DNA酶活性的多肽是动物、植物或微生物来源的。
37.根据段落36所述的组合物,其中该多肽是人类来源的。
38.根据段落36所述的组合物,其中该多肽获得自绿豆。
39.根据段落36所述的组合物,其中该多肽是细菌或真菌来源的。
40.根据段落39所述的组合物,其中该多肽是真菌来源的并且该多肽选自下组,该组由以下各项组成:
a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,或与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b)由多核苷酸编码的多肽,该多核苷酸在低严格条件下与
i.SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列;
ii.其cDNA序列;或
iii.(i)或(ii)的全长互补体;
c)由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽、或与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽;
d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:5的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括一个取代、缺失、和/或插入;以及
e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段,该片段具有DNA酶活性。
41.根据段落39所述的组合物,其中该多肽是细菌来源的并且该多肽选自下组,该组由以下各项组成:
a)与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽或与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b)SEQ ID NO:6的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入;以及
c)(a)或(b)的具有木聚糖酶活性的片段。
42.根据段落39-41中任一项所述的组合物,其中该多肽可以与SEQ ID NO:2的成熟多肽、与SEQ ID NO:3的成熟多肽、与SEQ ID NO:5成熟多肽、与SEQ ID NO:6的成熟多肽、与SEQ ID NO:7的成熟多肽或与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性。
43.根据段落39-42中任一项所述的组合物,其中该多肽包括SEQ ID NO:2或SEQID NO:2的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:6的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:7或SEQ IDNO:7的成熟多肽,或由其组成;或者该多肽包括SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的成熟多肽,或由其组成。
44.根据段落39-43中任一项所述的组合物,其中该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至206、SEQ ID NO:3的氨基酸1至206、SEQ ID NO:5的氨基酸1至188、SEQ ID NO:6的氨基酸1至110、SEQ ID NO:7的氨基酸1至109或SEQ ID NO:8的氨基酸1至206。
45.根据段落39-44中任一项所述的组合物,其中该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的成熟多肽的变体,其中该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的成熟多肽的变体。
46.根据段落39-45中任一项所述的组合物,其中该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的片段,其中该片段具有DNA酶活性。
47.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中从表面防止、减少或去除生物膜。
48.根据段落47所述的组合物,其中该生物膜包括短波单胞菌属物种的至少一种菌株、荧光假单胞菌的至少一种菌株和/或嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)的至少一种菌株。
49.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中该表面是硬表面。
50.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物是棒、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。
51.根据以上组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物是一种液体洗涤剂、一种粉状洗涤剂或颗粒洗涤剂。
52.根据段落51所述的洗涤剂组合物,其中该组合物是一种液体洗涤剂组合物,包括总浓度按重量计是至少3%的表面活性剂和洗涤剂助洗剂,和含洗涤剂酶的微囊,其中该微囊的膜是通过具有高于1kDa分子量的多支化的多胺的交联而产生。
53.根据段落52所述的洗涤剂组合物,其中该多支化的多胺的这些反应性氨基构成该分子量的至少15%。
54.根据段落52-53中任一项所述的洗涤剂组合物,其中通过使用酰基氯作为交联剂生成该微囊。
55.根据段落52-54中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该微囊的直径是至少50微米,或大于50微米。
56.根据段落52-55中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该微囊按重量计包含至少1%的活性酶。
57.根据段落52-56中任一项所述的洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物进一步包括醇,例如多元醇。
58.根据段落52-57中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该表面活性剂是阴离子表面活性剂。
59.根据段落52-58中任一项所述的洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物是液体洗衣或自动餐具洗涤剂组合物。
60.根据段落52-59中任一项所述的洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物按重量计包含少于90%的水。
61.根据段落52-60中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该洗涤剂酶是具有DNA酶活性的多肽、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酶、或氧化还原酶。
62.根据段落52-61中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该蛋白酶是金属蛋白酶或碱性丝氨酸蛋白酶,例如枯草杆菌蛋白酶。
63.根据段落52-62中任一项所述的洗涤剂组合物,其中具有DNA酶活性的多肽是根据段落47-54中任一项所述的多肽。
64.根据段落52-63中任一项所述的洗涤剂组合物,其中通过使用酰基氯作为交联剂的界面聚合生成该微囊。
65.根据段落52-64中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该多支化的多胺是聚乙亚胺。
66.根据段落52-65中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该微囊包括Mg2+、Ca2+、或Zn2+离子源,如Mg2+、Ca2+、或Zn2+的难溶盐。
67.根据段落30-66中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该强螯合助洗剂选自下组,该组由以下各项组成:乙二胺四乙酸(EDTA)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、次氨基三乙酸(NTA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙烯二胺二琥珀酸(EDDS)、和L-谷氨酸N,N-二乙酸四钠盐(GLDA)、乙二胺四(亚甲基磷酸)(EDTMPA)、次氮基三亚甲基磷酸(NTMP)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTPMP)、1-羟基亚乙基-1,1-二磷酸(HEDP,依替磷酸)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)和焦磷酸盐。
68.根据段落30-67所述的洗涤剂组合物,其中该强螯合助洗剂是无磷助洗剂。
69.根据段落68所述的洗涤剂组合物,其中该强螯合剂选自下组,该组由以下各项组成:乙二胺四乙酸(EDTA)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、次氨基三乙酸(NTA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙烯二胺二琥珀酸(EDDS)、和L-谷氨酸N,N-二乙酸四钠盐(GLDA)。
70.一种用于从物品防止、减少或去除生物膜的清洁方法,该方法包括以下步骤:
a)将物品与根据段落28-69中任一项所述的组合物或包括具有DNA酶活性的多肽的液态溶液接触;
b)完成至少一个清洁循环;并且
c)任选地冲洗该物品;
其中该物品是硬表面。
71.根据段落70所述的方法,其中根据段落28-69中任一项所述的组合物包含在液态溶液中。
72.根据段落70所述的方法,其中该物品是硬表面,该硬表面是洗碗机或纺织品洗涤机的内部表面。
73.根据段落72所述的方法,其中该洗碗机或洗涤机的内部表面包括进皂盒、壁、窗、篮子、衣架、喷嘴、水泵、水池、过滤器、管道线、管、接头、密封件、垫片、配件、叶轮、鼓、排水管、存水弯、硬币陷阱入口和出口。
74.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该硬表面由金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料。
75.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该物品是餐具。
76.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该餐具是选自下组的餐具,该组由以下各项组成:盘、杯、玻璃杯、碗、罐、餐具、匙、刀、叉、上菜用具、陶瓷、塑料、砧板、瓷器和玻璃器皿。
77.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该餐具的清洁与内部硬表面的清洁同时进行。
78.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该液态溶液进一步包括表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、黏质土去除/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、杀细菌剤、杀真菌剂和/或颜料或其混合物。
79.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该液态溶液进一步包括选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和氧化酶。
80.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该液态溶液的pH在1至11的范围内。
81.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该液态溶液的pH在5.5至11的范围内,如在7至9的范围内,在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。
82.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该液态溶液的温度在5℃至95℃的范围内、或在10℃至80℃的范围内、在10℃至70℃的范围内、在10℃至60℃的范围内、在10℃至50℃的范围内、在15℃至40℃的范围内、或在20℃至30℃的范围内。
83.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该液态溶液的温度是30℃。
84.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中在暴露于该液态溶液后,冲洗该物品。
85.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中将该物品用水或用包括调节剂的水进行冲洗。
86.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中该具有DNA酶活性的多肽是动物、植物或微生物来源的。
87.根据段落86所述的方法,其中该多肽是人类来源的。
88.根据段落86所述的方法,其中该多肽获得自绿豆。
89.根据段落86所述的方法,其中该多肽是细菌或真菌来源的。
90.根据段落89所述的方法,其中该多肽是真菌来源的并且该多肽选自下组,该组由以下各项组成:
a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽,或与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b)由多核苷酸编码的多肽,该多核苷酸在低严格条件下与
i.SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列;
ii.其cDNA序列,或
iii.(i)或(ii)的全长互补体;
c)由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽、或与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的多肽;
d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:5的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括一个取代、缺失、和/或插入;以及
e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段,该片段具有DNA酶活性。
91.根据段落89所述的方法,其中该多肽是细菌来源的并且该多肽选自下组,该组由以下各项组成:
a)与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽或与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60%序列一致性的多肽;
b)SEQ ID NO:6的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入;以及
c)(a)、或(b)的具有木聚糖酶活性的片段。
92.根据段落89-91中任一项所述的方法,其中该多肽可以与SEQ ID NO:2的成熟多肽、与SEQ ID NO:3的成熟多肽、与SEQ ID NO:5成熟多肽、与SEQ ID NO:6的成熟多肽、与SEQ ID NO:7的成熟多肽或与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性。
93.根据段落89-92中任一项所述的方法,其中该多肽包括SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:2的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:6的成熟多肽,或由其组成;该多肽包括SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:7的成熟多肽,或由其组成;或者该多肽包括SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的成熟多肽,或由其组成。
94.根据段落89-93中任一项所述的方法,其中该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至206、SEQ ID NO:3的氨基酸1至206、SEQ ID NO:5的氨基酸1至188、SEQ ID NO:6的氨基酸1至110、SEQ ID NO:7的氨基酸1至109或者该成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至206。
95.根据段落89-94中任一项所述的方法,其中该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:3的成熟多肽的变体,其中该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入,或在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQID NO:8的成熟多肽的变体。
96.根据段落89-95中任一项所述的方法,其中该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的片段,其中该片段具有DNA酶活性。
97.根据以上方法段落中任一项所述的方法,其中洗涤液和/或液态溶液中的多肽的浓度是在0.00004-100ppm酶蛋白的范围内,如在0.00008-100的范围内,在0.0001-100的范围内,在0.0002-100的范围内,在0.0004-100的范围内,在0.0008-100的范围内,在0.001-100ppm酶蛋白的范围内,在0.01-100ppm酶蛋白的范围内,在0.05-50ppm酶蛋白的范围内,在0.1-50ppm酶蛋白的范围内,在0.1-30ppm酶蛋白的范围内,在0.5-20ppm酶蛋白的范围内或在0.5-10ppm酶蛋白的范围内。
测定和洗涤剂组合物
针对衣物的洗涤剂组合物
可以将以下提及的洗涤剂组合物结合本发明的多肽一起使用,用于防止或减少静电。
碧浪灵敏性白色与彩色组合物、液体洗涤剂组合物
水、酒精乙氧基硫酸盐、醇乙氧基化物、氨基氧化物、柠檬酸、C12-18拔顶棕榈仁脂肪酸、蛋白酶、糖苷酶、淀粉酶、乙醇、1,2丙二醇、甲酸钠、氯化钙、氢氧化钠、有机硅乳液、跨硫酸EHDQ(这些成分以递减次序列出)。
WFK IEC-A标准洗涤剂的组合物(粉状)
成分:直链烷基苯磺酸钠8.8%、乙氧基化的脂肪醇C12-18(7EO)4.7%、钠皂3.2%、消泡剂DC2-4248S 3.9%、硅酸铝钠沸石4A 28.3%、碳酸钠11.6%、丙烯酸和马来酸的共聚物的钠盐(Sokalan CP5)2.4%、硅酸钠3.0%、羧甲基纤维素1.2%、Dequest 2066 2.8%,光学增白剂0.2%、硫酸钠6.5%、蛋白酶0.4%。
标准洗涤剂A组合物(液体)
成分:12%LAS、11%AEO Biosoft N25-7(NI)、7%AEOS(SLES)、6%MPG(丙二醇)、3%乙醇、3%TEA、2.75%可可皂、2.75%大豆皂、2%甘油、2%氢氧化钠、2%柠檬酸钠、1%甲酸钠、0.2%DTMPA和0.2%PCA(所有的百分数都是w/w)
碧浪Actilift组合物(液体)
成分:5%-15%阴离子表面活性剂;<5%非离子型表面活性剂、磷酸盐、肥皂;酶、光学增亮剂、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、香料、α-异甲基紫罗兰酮、香茅醇、香叶醇、芳樟醇。
碧浪Actilift彩色&风格的组合物
水、十二烷基苯磺酸钠、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、丙二醇、棕榈仁油酸钠、月桂醇醚硫酸钠、MEA十二烷基苯磺酸、季铵化的硫酸化乙氧基化的六亚甲基二胺、枯烯磺酸钠、香料、PEG/乙酸乙烯酯的共聚物、甲酸钠、氢化蓖麻油、二亚乙基三胺五亚甲基磷酸钠、PEG/PPG-10/2丙基庚基醚、丁苯基甲基丙醛、聚乙烯吡啶-N-氧化物、山梨糖醇、甘油、乙醇胺、氢氧化钠、α-异甲基紫罗兰酮、蛋白酶、氯化钙、香叶醇、芳樟醇、香茅醇、三丙二醇、糖苷酶、苯并异噻唑啉酮、二甲硅油、糖苷酶、乙酸钠、纤维素酶、着色剂、甘油硬脂酸酯、羟乙基纤维素、二氧化硅。
碧浪Actilift彩色&风格的组合物,新包装
成分:水、月桂醇醚硫酸钠、丙二醇、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、棕榈仁油酸钠、醇、甲酸钠、季铵化的硫酸化乙氧基化的六亚甲基二胺、氢氧化钠、香料、聚乙烯吡啶-N-氧化物、山梨糖醇、氯化钙、蛋白酶、甘油、葡糖苷酶、糖苷酶、乙酸钠、着色剂、纤维素酶。
碧浪Actilift白色与彩色酷洁的组合物,新包装
成分:水、月桂醇醚硫酸钠、丙二醇、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、棕榈仁油酸钠、醇、甲酸钠、季铵化的硫酸化乙氧基化的六亚甲基二胺、氢氧化钠、香料、山梨糖醇、氯化钙、蛋白酶、甘油、葡糖苷酶、糖苷酶、乙酸钠、着色剂、纤维素酶。
碧浪灵敏性白色与彩色组合物
成分:水、月桂醇醚硫酸钠、丙二醇、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、棕榈仁油酸钠、醇、甲酸钠、季铵化的硫酸化乙氧基化的六亚甲基二胺、氢氧化钠、山梨糖醇、氯化钙、蛋白酶、甘油、糖苷酶、乙酸钠、纤维素酶、二氧化硅。
碧浪Actilif组合物,普通
水、十二烷基苯磺酸钠、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、丙二醇、棕榈仁油酸钠、月桂醇醚硫酸钠、MEA十二烷基苯磺酸、季铵化的硫酸化乙氧基化的六亚甲基二胺、枯烯磺酸钠、香料、PEG/乙酸乙烯酯的共聚物、甲酸钠、C12-C14Pareth-7、氢化蓖麻油、二亚乙基三胺五亚甲基磷酸钠、PEG/PPG-10/2丙基庚基醚、丁苯基甲基丙醛、荧光增亮剂9、山梨糖醇、甘油、乙醇胺、氢氧化钠、α-异甲基紫罗兰酮、蛋白酶、氯化钙、香叶醇、芳樟醇、香茅醇、三丙二醇、氯化钠、糖苷酶、苯并异噻唑啉酮、二甲硅油、糖苷酶、乙酸钠、纤维素酶、着色剂、甘油硬脂酸酯、羟乙基纤维素、二氧化硅。
宝莹小&强大组合物(液体)
成分:15%-30%阴离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、5%-15%皂、<5%聚羧酸盐、香料、磷酸盐、光学增亮剂
Fairy非生物制品组合物(液体)
成分:15%-30%阴离子表面活性剂、5%-15%非离子表面活性剂、肥皂、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、香料
标准洗涤剂T组合物(粉末)
成分:11%LAS、2%AS/AEOS、2%肥皂、3%AEO、15.15%碳酸钠、3%硅酸钠、18.75%沸石、0.15%螯合剂、2%柠檬酸钠、1.65%AA/MA共聚物、2.5%CMC和0.5%SRP(所有的百分数都是w/w)。
标准洗涤剂X组合物(粉末)
成分:16.5%LAS、15%沸石、12%二硅酸钠、20%碳酸钠、1%sokalan、35.5%硫酸钠(所有的百分数都是w/w)。
碧浪Actilif组合物(粉末)
成分:15%-30%阴离子表面活性剂、<5%非离子表面活性剂、磷酸盐、聚羧酸盐、沸石;酶、香料、己基肉桂醛。
宝莹Megaperls组合物(粉末)
成分:以下的15%-30%:阴离子表面活性剂、基于氧的漂白剂和沸石,以下的少于5%:非离子表面活性剂、磷酸盐、聚羧酸盐、肥皂、另外成分:香料、己基肉桂醛、水杨酸苄酯、芳樟醇、光学增亮剂、酶和香茅醇。
嘉盛液体,原版:
成分:水、醇乙氧基硫酸盐、二乙二醇、醇乙氧化物、乙醇胺、直链烷基苯磺酸盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、柠檬酸、硼砂、枯烯磺酸钠、丙二醇、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二丙乙基四氨、氢氧化钠、甲酸钠、甲酸钙、二甲硅油、淀粉酶、蛋白酶、LiquitintTM、氢化蓖麻油、香味。
汰渍液体,原版:
成分:线形烷基苯磺酸酯、丙二醇、柠檬酸、氢氧化钠、硼砂、乙醇胺、乙醇、醇硫酸盐、聚乙烯亚胺乙氧基化物、脂肪酸钠、乙氧基硫酸二季铵盐、蛋白酶、二乙二醇、月桂醇聚醚-9、烷基二甲胺氧化物、香味、淀粉酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、DTPA、甲酸钠、甲酸钙、聚乙二醇4000、甘露聚糖酶、LiquitintTM蓝、二甲硅油。
液体汰渍,自由和温和型:水、醇乙氧基硫酸钠、丙二醇、硼砂、乙醇、线形烷基苯磺酸钠、盐、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、反式硫酸化和乙氧基化的六亚甲基二胺、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、甲酸钠、烷基硫酸钠、DTPA、氧化胺、甲酸钙、二氨基二苯乙烯二钠、二磺酸盐、淀粉酶、蛋白酶、二甲硅油、苯并异噻唑啉酮
汰渍冷水液体,清香型:水、醇乙氧基硫酸酯、线形烷基苯磺酸酯、二乙二醇、丙二醇、乙醇胺、柠檬酸、硼砂、醇硫酸盐、氢氧化钠、聚乙烯亚胺、乙氧基化物、脂肪酸钠、乙醇、蛋白酶、月桂醇聚醚-9、乙氧基硫酸二季铵盐、月桂基胺氧化物、异丙苯钠、磺酸盐、香味、DTPA、淀粉酶、二钠、二氨基二苯乙烯、二磺酸盐、甲酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钙、聚乙二醇4000、甘露聚糖酶、果胶酶、LiquitintTM蓝、二甲硅油
汰渍TOTALCARETM液体,冷棉:水、醇乙氧基硫酸酯、丙二醇、脂肪酸钠、月桂基三甲基氯化铵、乙醇、氢氧化钠、枯烯磺酸钠、柠檬酸、乙醇胺、二乙二醇、聚醚硅氧烷、硼砂、香味、聚乙烯亚胺乙氧基化物、蛋白酶、月桂醇聚醚-9、
DTPA、聚丙烯酰胺季铵盐氯化物、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甲酸钠、LiquitintTM橙、二丙基乙四胺、二甲硅油、纤维素酶。
液体汰渍加漂白剂AlternativeTM,生动白和鲜艳、最初以及清洁微风:
水、醇乙氧基硫酸钠、烷基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、脂肪酸钠、乙醇胺、月桂基胺氧化物、硼砂、月桂醇聚醚-9、DTPA、枯烯磺酸钠、甲酸钠、甲酸钙、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、醇硫酸盐、氢氧化钠、乙氧基硫酸二季铵盐、香味、淀粉酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、果胶酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、苯并异噻唑啉酮、LiquitintTM蓝、二甲硅油、二丙基乙四胺。
液体汰渍HE,原味:水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、烷基硫酸钠、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、硼砂、聚乙烯亚胺、乙氧基化物丙氧基化物、乙醇、枯烯磺酸钠、香味、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、LiquitintTM蓝、二甲硅油/聚二甲基硅酮。
汰渍TOTALCARE HE液体,新生雨润(renewing Rain):水、醇乙氧基硫酸酯、线形烷基苯磺酸酯、醇乙氧化物、柠檬酸、乙醇胺、脂肪酸钠、二乙二醇、丙二醇、氢氧化钠、硼砂、聚乙烯亚胺乙氧基化物、聚醚硅氧烷、乙醇、蛋白酶、枯烯磺酸钠、乙氧基硫酸二季铵盐、月桂醇聚醚-9、香味、淀粉酶、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钠、甲酸钙、甘露聚糖酶、LiquitintTM橙、二甲硅油、聚丙烯酰胺季铵盐氯化物、纤维素酶、二丙基乙四胺。
汰渍液体HE自由:水、醇乙氧基硫酸酯、二乙二醇、单乙醇胺柠檬酸、甲酸钠、丙二醇、线形烷基苯磺酸酯、乙醇胺、乙醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、淀粉酶、苯并异噻唑啉、硼砂、甲酸钙、柠檬酸、乙二烯三胺五乙酸钠、二甲硅油、乙氧基硫酸二季铵盐、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、月桂醇聚醚-9、甘露聚糖酶、蛋白酶、枯烯磺酸钠、脂肪酸钠。
汰渍冷水HE液体,清香型:水、醇乙氧基硫酸酯、MEA柠檬酸、醇硫酸盐、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯MEA、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、硼砂、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙醇、枯烯磺酸钠、香味、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、蛋白酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、LiquitintTM蓝、二甲硅油。
汰渍冷水HE自由液体:水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯:钠盐、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯:MEA盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、硼砂、蛋白酶、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙醇、枯烯磺酸钠、淀粉酶、柠檬酸、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甲酸钠、甲酸钙、二甲硅油。
汰渍简单洁净与清新:水、醇乙氧化物硫酸盐、线形烷基苯磺酸钠/MEA盐、丙二醇、二乙二醇、甲酸钠、乙醇、硼砂、脂肪酸钠、香味、月桂基胺氧化物、DTPA、聚乙烯胺乙氧基化物、甲酸钙、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二甲硅油、四胺、LiquitintTM蓝。
汰渍舱,海雾,神秘森林,春天牧场:线形烷基苯磺酸酯、C12-16Pareth-9、丙二醇、醇乙氧基硫酸酯、水、聚乙烯亚胺乙氧基化物、甘油、脂肪酸盐、PEG-136聚乙酸乙烯酯、乙二胺琥珀酸盐、单乙醇胺柠檬酸、亚硫酸氢钠、乙二烯三胺五乙酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钙、甘露聚糖酶、木葡聚糖酶、甲酸钠、氢化蓖麻油、natalase、染料、termamyl、枯草杆菌蛋白酶、苯并异噻唑啉、香料。
汰渍去污笔(Tide to Go):去离子水、二丙二醇丁基醚、烷基硫酸钠、过氧化氢、乙醇、硫酸镁、烷基二甲基氧化胺、柠檬酸、氢氧化钠、三甲氧基苯甲酸、香味。
汰渍污点释放液体:水、烷基乙氧基化物、直链烷基苯磺酸盐、过氧化氢、乙氧基硫酸二季铵盐、乙醇胺、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、四丁基乙叉基双酚、F&DC黄3、香味。
汰渍污点释放粉末:过碳酸钠、硫酸钠、碳酸钠、铝硅酸钠、壬酰氧基苯磺酸盐、聚丙烯酸钠、水、烷基苯磺酸钠、DTPA、聚乙二醇、棕榈酸钠、淀粉酶、蛋白酶、修饰的淀粉、FD&C蓝1、香味。
汰渍污点释放,预处理器喷雾:
水、烷基乙氧基化物、MEA硼酸盐、直链烷基苯磺酸盐、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、氯化钙酶、蛋白酶、乙醇胺、苯并异噻唑啉酮、淀粉酶、柠檬酸钠、氢氧化钠、香味。
汰渍去污点橡皮擦:水、烷基氧化胺、二丙二醇苯基醚、过氧化氢、柠檬酸、乙二胺二琥珀酸钠盐、烷基硫酸钠、香味。
汰渍氧化加强:
碳酸氢钠、碳酸钠、过碳酸钠、醇乙氧化物、氯化钠、马来酸/丙烯酸共聚物、壬酰氧基苯磺酸盐、硫酸钠、着色剂、乙二烯三胺五乙酸钠盐、水合硅铝酸盐(沸石)、聚乙二醇、烷基苯磺酸钠、棕榈酸钠、淀粉、水、香味。
汰渍污点释放加强双重Pac:
聚乙烯醇袋膜,其中有被包装的液体部分和粉末部分:
液体成分:二丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、水、甘油、LiquitintTM橙、粉末成分:过碳酸钠、壬酰氧基苯磺酸盐、碳酸钠、硫酸钠、铝硅酸钠、聚丙烯酸钠、烷基苯磺酸钠、马来酸/丙烯酸共聚物、水、淀粉酶、聚乙二醇、棕榈酸钠、修饰的淀粉、蛋白酶、甘油、DTPA、香味。
汰渍超级污点释放:水、醇乙氧基硫酸钠、直链烷基苯磺酸盐、钠/MEA盐、MEA柠檬酸、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、脂肪酸钠、蛋白酶、硼砂、枯烯磺酸钠、DTPA、香味、淀粉酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甲酸钙、甲酸钠、葡聚糖酶、二甲硅油、LiquitintTM蓝、甘露聚糖酶。
具有少许粉状洗涤剂的超级汰渍,四月清新/清洁微风/四月精华:碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、膨润土、水、过碳酸钠、聚丙烯酸钠、硅酸盐、烷基硫酸盐、壬酰氧基苯酚酯磺酸、DTPA、聚乙二醇4000、硅胶、乙氧基化物、香味、聚氧化乙烯、棕榈酸、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、蛋白酶、LiquitintTM红、FD&C蓝1、纤维素酶。
具有少许Downy清洁微风的超级汰渍:水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐:钠/MEA盐、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺、丙氧基乙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、醇硫酸盐、二甲硅油、香味、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、葡聚糖酶、蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、甲酸钠、LiquitintTM蓝。
具有Downy阳花的超级汰渍:水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐:钠/MEA盐、丙二醇、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、聚乙烯亚胺乙氧基化物、醇硫酸盐、二甲硅油、香味、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、丙铵丙酰胺、葡聚糖酶、甲酸钠、LiquitintTM蓝。
具有Downy四月清新/甜蜜梦境的超级汰渍:水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐:钠/MEA盐、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、二乙二醇、聚亚乙基亚胺丙氧基乙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、醇硫酸盐、二甲硅油、香味、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、葡聚糖酶、蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、丙铵丙酰胺、甲酸钠、LiquitintTM蓝。
超级汰渍自由粉状洗涤剂:碳酸钠、铝硅酸钠、烷基硫酸盐、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、水、聚丙烯酸钠、硅酸盐、乙氧基化物、过碳酸钠、聚乙二醇4000、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、纤维素酶。
超级汰渍粉状洗涤剂,清洁微风/春日薰衣草/森林泉:碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、烷基硫酸盐、过碳酸钠、水、聚丙烯酸钠、硅酸盐、壬酰氧基苯酚酯磺酸、乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、棕榈酸、蛋白酶、硅胶、纤维素酶。
超级汰渍HE(高效率)粉状洗涤剂,清洁微风:碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、水、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、聚丙烯酸钠、硅酸盐、过碳酸钠、乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、棕榈酸、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、蛋白酶、硅胶、纤维素酶。
超级汰渍冷水粉状洗涤剂,清香型:碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、过碳酸钠、烷基硫酸盐、线形烷基苯磺酸酯、水、壬酰氧基苯酚酯磺酸、聚丙烯酸钠、硅酸盐、乙氧基化物、聚乙二醇4000、DTPA、香味、Natalase、棕榈酸、蛋白酶、二钠、二氨基二苯乙烯二磺酸盐、FD&C蓝1、硅胶、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。
具有漂白剂粉状洗涤剂的超级汰渍,清洁微风:碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、过碳酸钠、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、水、硅酸盐、聚丙烯酸钠乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、棕榈酸、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。
具有Febreeze FreshnessTM粉状洗涤剂的超级汰渍,春日新生:
碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、过碳酸钠、烷基硫酸盐、水、聚丙烯酸钠、硅酸盐、壬酰氧基苯酚酯磺酸、乙氧基化物、聚乙二醇4000、DTPA、香味、纤维素酶、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1。
具有Febreeze Freshness的液体汰渍加-运动HE活跃新鲜:
水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、线形烷基苯磺酸酯:MEA盐、醇乙氧化物、脂肪酸钠、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、乙醇、枯烯磺酸钠、硼砂、香味、DTPA、硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、LiquitintTM蓝、二甲硅油/聚二甲基硅酮。
汰渍加Febreeze Freshness春日新生:
水、醇乙氧基硫酸钠、直链烷基苯磺酸盐:钠/MEA盐、MEA柠檬酸、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、香味、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、蛋白酶、醇硫酸盐、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、MEA、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、甲酸钠、二甲硅油、LiquitintTM蓝、四胺。
具有Febreeze Freshness的液体汰渍加,运动HE胜利新鲜:水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、线形烷基苯磺酸酯:MEA盐、醇乙氧化物、脂肪酸钠、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、乙醇、枯烯磺酸钠、硼砂、香味、DTPA、硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、LiquitintTM蓝、二甲硅油/聚二甲基硅酮。
汰渍生动白+鲜艳,原版:
碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、
过碳酸钠、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、水、硅酸盐、聚丙烯酸钠
乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、棕榈酸、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。
命名为汰渍、嘉盛和Fairy的产品是由宝洁公司(Procter&Gamble)提供的可商购产品。命名为宝莹的产品是由联合利华和汉高公司(Unilever and Henkel)提供的可商购产品。
所有酶水平表达为rug活性酶蛋白/100g洗涤剂组合物。表面活性剂成分获得自巴斯夫公司(BASF)、路德维希港、德国(Lutensol(R));壳牌化学公司(Shell Chemicals),伦敦,英国;斯泰潘公司(Stepan),诺思菲尔德,III,美国;亨斯曼公司(Huntsman),盐湖城,犹他州,美国;科莱恩公司(Clariant),苏尔茨巴赫市,德国(Praepagen(R))。三聚磷酸钠可以获得自罗地亚公司(Rhodia)、巴黎、法国。沸石可以获得自工业沸石(英国)有限公司,格雷士,艾塞克斯,英国。柠檬酸和柠檬酸钠可以获得自永本兹劳尔公司(Jungbunzlauer),巴塞尔,瑞士。NOBS是壬酰基羟苯磺酸钠,由伊士曼公司(Eastman),贝茨维尔,阿肯色州,美国。
TAED是四乙酰乙二胺,在科莱恩有限公司(Clariant GmbH),祖尔茨巴赫,德国的Peractive(R)品牌下提供。
碳酸钠和碳酸氢钠可以获得自索尔维公司(Solvay),布鲁塞尔,比利时。
聚丙烯酸酯、聚丙烯酸酯/马来酸酯共聚物可以获得自巴斯夫公司、路德维希港、德国。
Repel-O-Tex(R)可以获得自罗地亚公司(Rhodia)、巴黎、法国。
Texcare(R)可以获得自科莱恩公司,祖尔茨巴赫,德国。过碳酸钠和碳酸钠可以获得自索尔维公司,休斯顿,德克萨斯州,美国。
乙二胺-N,N’-二琥珀酸的Na盐,(S,S)异构体(EDDS)是通过联合奥泰公司(Octel),埃尔斯米尔港,英国提供。
羟基乙醇二磷酸盐(HEDP)是由美国陶氏化学公司(Dow Chemical),米德兰,密歇根州,美国提供。
酶Savinase(R)、Savinase(R)Ultra、Stainzyme(R)Plus、Lipex(R)、Lipolex(R)、Lipoclean(R)、Celluclean(R)、Carezyme(R)、Natalase(R)、Stainzyme(R)、Stainzyme(R)Plus、Termamyl(R)、Termamyl(R)ultra、和Mannaway(R)可以获得自诺维信公司(Novozymes),巴格斯瓦德,丹麦。
酶Purafect(R)、FN3、FN4和Optisize可以获得自杰能科国际公司(GenencorInternational Inc.)帕洛阿尔托,加利福尼亚州,美国。
直接紫9和99可以获得自巴斯夫公司、路德维希港、德国。溶剂紫13可以获得自宁波立兴化工有限公司(Ningbo Lixing Chemical Co.,Ltd.),宁波,浙江,中国。增亮剂可以获得自汽巴精化有限公司,巴塞尔,瑞士。除非另外指明,所有百分比和比率都是按重量计计算。除非另外指明,所有百分比和比率都是基于总组合物计算。应当理解的是贯穿本说明书给出的每一最大数值限度包括每一较低的数值限度,如同此类较低数值限度在此被明确写出。贯穿本说明书给出的每一最小数值限度将包括每一较高的数值限度,如同此类较高数值限度在此被明确写出。本说明书中所给出的每个数值范围将包括落入在这样更宽泛数值范围内的每一狭小的范围,好像这样狭小的数值范围都在这里被书面表达了。
针对餐具洗涤的洗涤剂组合物
CascadeAction和CascadeAction
碳酸钠、过碳酸钠、硅酸钠、改性聚丙烯酸酯、甲基甘氨酸二乙酸(三钠盐)、硫酸钠、蛋白酶、淀粉酶、醇烷氧基化物、聚乙二醇、水锌矿、胺钴盐、水、香料、醇烷氧基化物、十三烷醇-n、二丙二醇、水、甘油、酸性红#33和/或FD&C黄#5和/或酸性蓝182和/或染料反应性绿12。
Action
过碳酸钠、硅酸钠、改性聚丙烯酸酯、甲基甘氨酸二乙酸(三钠盐)、硫酸钠、蛋白酶、淀粉酶、醇烷氧基化物、聚乙二醇、水锌矿、胺钴盐、水、香料、醇烷氧基化物、十三烷醇-n、二丙二醇、水、甘油、酸性红#33和/或FD&C黄#5和/或酸性蓝182和/或染料反应性绿12。
Cascade凝胶
水、硅酸钠、聚丙烯酸钠、次氯酸钠、碳酸钠、硫酸钠、苯甲酸钠、氢氧化钠、交联的聚丙烯酸酯、碳酸锌、硝酸、各种香料。
Cascade凝胶
水、谷氨酸二乙酸四钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硅酸钠、改性聚丙烯酸酯、黄原胶、聚乙烯亚胺(磺化的)、醇烷氧基化物、硫酸锌、氯化钙、蛋白酶、淀粉酶、苯甲酸钠、Proxel GXL、LiquitintTM嫩黄和/或LiquitintTM亮艳橙和/或直接蓝086、香料。
粉末
碳酸钠、硫酸钠、水、硅酸钠、过碳酸钠、改性聚丙烯酸酯、醇烷氧基化物、聚乙二醇、水锌矿、胺钴盐、蛋白酶、淀粉酶、香料。
Cascade洗碗机用
柠檬酸、醇烷氧基化物、二氧化硅、酸性蓝182、香料、醇烷氧基化物、二丙二醇、十三烷醇-n、水、甘油、酸性蓝182。
Fairy液体
水、月桂基醚硫酸钠、改性醇、月桂基胺氧化物、C9-11pareth-8、氯化钠、1,3-环己烷二甲胺、PPG(聚丙二醇)、二甲基氨乙基甲基丙烯酸/羟丙基丙烯酸酯共聚物柠檬酸、香精、香叶醇、柠檬烯、着色剂。
Fairy专业多合一柠檬洗碗机
>30%磷酸盐;5%-15%非离子表面活性剂、基于氧的漂白剂;<5%磷酸盐、聚羧酸盐;酶、香料、香茅醇、柠檬烯、芳樟醇。
Fairy专业多合一原味洗碗机片
>30%磷酸盐;5%-15%非离子表面活性剂、基于氧的漂白剂;<5%聚羧酸盐;酶;香料、香叶醇。
Fairy专业多合一白金洗碗机
>30%磷酸盐;5%-15%非离子表面活性剂、基于氧的漂白剂、聚羧酸盐;<5%磷酸盐;酶、香料、香茅醇、柠檬烯、芳樟醇。
Fairy专业粉末暴片
>30%磷酸盐;5%-15%基于氧的漂白剂;<5%非离子表面活性剂、聚羧酸盐;酶、香料、和(A)硫脲、柠檬烯、芳樟醇抑或(B)香叶醇、柠檬烯。
Fairy专业原味洗碗液和Fairy专业原味柠檬洗碗液和Fairy专业超净洗碗液
15%-30%阴离子表面活性剂;5%-15%非离子表面活性剂;苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、香料。
Fairy专业抗细菌洗碗液
15%-30%阴离子表面活性剂;5%-15%非离子表面活性剂;甲基异噻唑啉酮、苯氧乙醇:消毒剂、香料、柠檬烯、香茅醇。
Cascade专业自动餐具洗涤剂
15%-40%碳酸钠;1%-5%过氧水合碳酸钠;1%-5%硅酸钠。
Bistro 141器皿洗涤剂
1%-5%氢氧化钠;1%-5%氢氧化钾;5%-15%三聚磷酸钾;5%-15%偏硅酸钠(Dinatriummetasilicate),五水合物;1%-5%四钠-EDTA;<5%聚羧酸盐。
Bistro 741器皿洗涤剂
5%-15%氢氧化钠;1%-5%2-磷酰基丁烷-1,2,4-三羧酸;<5%磷酸盐;<5%聚羧酸盐。
Bistro 742器皿洗涤剂
5%-15%氢氧化钾;5%-15%硅酸钾;1%-5%偏硅酸二钠,五水合物;1%-5%碳酸钠;5%-15%磷酸盐;<5%阴离子表面活性剂;<5%磷酸盐;<5%聚羧酸盐。
Bistro 743器皿洗涤剂
30%-60%碳酸钠;5%-15%偏硅酸二钠,五水合物;5%-15%过碳酸钠;5%-15%硅酸钠;1%-5%脂肪醇烷氧基化物;5%-15%磷酸盐;5%-15%基于氧的漂白剂;<5%非离子表面活性剂;<5%聚羧酸盐;<1%酶。
Bistro CL 341器皿洗涤剂
15%-30%次氯酸钠;5%-15%氢氧化钾;5%-15%三聚磷酸钾;5%-15%偏硅酸二钠,五水合物;1%-5%氢氧化钠;<5%聚羧酸盐。
Bistro Glas 345器皿洗涤剂
5%-15%偏硅酸二钠,五水合物;1%-5%氢氧化钾;1%-5%三聚磷酸钾;1%-5%辛酰基limino双丙酸钠;1%-5%脂肪醇烷氧基化物;<1%硫酸锌一水合物。
Suma Nova L6器皿洗涤剂
10%-20%四钠-EDTA;10%-20%氢氧化钠。
Suma Revoflow Max P2器皿洗涤剂
50%-75%氢氧化钠。
Suma Alu Free L10器皿洗涤剂
10%-20%偏硅酸二钾。
Suma Blend L7器皿洗涤剂
10%-20%偏硅酸二钠/二钾。1%-3%次氯酸钠;1%-3%氢氧化钾。
Suma Combi+La6器皿洗涤剂和冲洗助剂
10%-20%四钠-乙二胺四乙酸;10%-20%氢氧化钠。
Topmatic Clean器皿洗涤剂
5%-10%氢氧化钠。
Apex无氯机器洗涤剂
>60%碳酸钠;<10%c13-15-支链和线性的、丁氧基化、乙氧基化的醇。
Apex金属保护器皿洗涤剂
<10%氯化锌;<10%氢氧化钠。
Apex Power Plus器皿洗涤剂
<60%碳酸钠;<10%偏硅酸二钠;<10%曲氯新钠,二水合物;<10%磷酸、(1-羟基亚乙基)双-,钾盐。
Apex Ultra LW器皿洗涤剂
30%-60%碳酸钠;<10%曲氯新钠,二水合物;<10%偏硅酸二钠。
命名为Cascade和Fairy的产品是由宝洁公司(Procter&Gamble)提供的可商购产品。命名为Bistro的产品是由Novadan公司提供的可商购产品。命名为Suma的产品是由泰华施公司(Diversey)提供的可商购产品。命名为Topmatic和Apex的产品是由艺康公司(艺康)提供的可商购产品。
酶测定
测定I
DNA酶活性的测试
在具有甲基绿(BD公司,富兰克林湖,新泽西州,美国)的DNA酶测试琼脂上确定DNA酶活性。简言之,将21g琼脂溶于500ml水中,并且然后在121℃下高压灭菌15分钟。将高压蒸汽处理的琼脂在水浴中温和至48℃,并且将20ml的琼脂倒入培养皿并且允许在室温下通过孵育来固化。在固化的琼脂平板上,添加5μl的酶溶液,并且DNA酶活性被观察为斑点酶溶液周围的无色区域。
测定II
使用电子鼻分析纺织品上的E-2-壬烯醛。
测试纺织品上的恶臭的存在的一种方式是通过使用作为恶臭的标志物的E-2-壬烯醛,因为此化合物引起衣物上的恶臭。
将E-2-壬烯醛的溶液添加至5cm x 5cm纺织品小块布样上并且将该小块布样放入20mL玻璃小瓶中用于GC分析并且盖住该小瓶。在40℃下孵育20分钟后,在来自法国阿尔法M.O.S.(Alpha M.O.S.)的Heracles II电子鼻中分析来自加帽小瓶的5mL顶部空间(具有2个FID的双柱气相色谱仪,柱1:MXT5并且柱2:MXT1701)。
实例
实例1
防止在与洗衣和餐具洗涤有关的表面上的附着和生物膜形成
在本研究中,使用短波单胞菌属物种中的一种菌株。在30℃下,使短波单胞菌属物种在胰胨豆胨琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131;Oxoid有限公司,贝辛斯托克,英国)上预生长2-5天。将来自一个单菌落的满环物转移至10mL的TSB(胰胨大豆肉汤,胰蛋白胨)中并且伴随振荡(240rpm)于30℃下孵育1天。繁殖后,通过离心(西格玛实验室离心机(SigmaLaboratory Centrifuge)6K15)(3000g,在21℃下,7min)沉淀短波单胞菌属并且将其重悬于10mL用水稀释两次的TSB中。使用分光计(POLARstar Omega(BMG莱伯泰科(BMGLabtech),奥滕贝格(Ortenberg),德国))测量600nm处的光密度(OD)。将用水稀释两次的新鲜TSB接种至0.03的OD600nm,并且将3mL添加到12孔的聚苯乙烯平底微板的各孔(3512;康宁公司(Corning Incorporated),康宁(Corning),纽约州(NY),美国),其中放置钢(RD128-316)、PVC(RD128-PVC)、橡胶(RD128-Si)、瓷料(RD128-PL)和玻璃(RD128-GL)的取样片(都获得自Biosurface技术公司,波兹曼,蒙大纳州,美国)。分别将十ppm的来自米曲霉的DNA酶(SEQ ID NO:2)、来自哈茨木霉的DNA酶(SEQ ID NO:5)、和来自地衣芽孢杆菌的DNA酶(SEQID NO:7)添加到包含取样片和短波单胞菌属物种的孔中。包括作为对照的包含取样片和短波单胞菌属物种并且不包含DNA酶的孔。孵育(37℃下72h)后,通过用0.9%(w/v)NaCl冲洗取样片两次来去除非贴壁细胞。通过添加3ml的0.1%(w/v)龙胆紫(C0775;西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich),圣路易斯,密苏里州,美国)来使贴壁细胞可视化,并且在室温下放置15min。将取样片用0.9%(w/v)洗涤两次,并且移至新12孔聚苯乙烯平底微板。通过添加3ml的96%(w/v)乙醇(201145;Kemetyl公司,丹麦)来洗脱结合的龙胆紫,并且在595nm下通过测量吸光度来确定。
表1.防止钢、PVC、橡胶、瓷料和玻璃上的附着和生物膜形成。
实例2
DNA酶介导在塑料表面上生物膜的附着的减少
还将实例1中使用的短波单胞菌属物种用于本研究,将其根据实例1中所描述的程序进行预生长。在增殖后,将短波单胞菌属物种培养物在TSB中稀释100倍。将125μl的100倍稀释的培养物添加到具有Nunclon Delta表面(赛墨科技公司(Thermo Scientific),#167008)的96孔聚苯乙烯板的各孔。将该板在15℃下孵育3天,以允许生物膜生长。将该介质从孔中去除,并且通过添加300μl milliQ水来冲洗这些孔。然后吸出水。向各孔添加150μl的0.1ppm抑或0.3ppm的来自米曲霉的DNA酶(SEQ ID NO:2),该DNA酶稀释于补充以0.7g/l颜料污垢(Pigmentschmutz 09V,wfk,克雷费尔德(Krefeld),德国)的标准A洗涤剂(标准洗涤剂A)中。用具有15°dH硬度的水制备标准A洗涤剂溶液(洗涤液)。作为对照,添加补充以0.7g/l颜料污垢没有DNA酶的150μl标准A洗涤剂。在震荡的情况下,将该板在30℃下孵育1小时(800rpm)。然后从每个孔吸出洗涤液。用DigiEye成像系统(VeriVide)量化在孔底部附着于生物膜的污垢的量,并且所报告的值是Lab色彩空间中的L值。
表2.在具有DNA酶的塑料表面上生物膜粘性的减少
本研究证实,洗涤剂组合物中所配制的在此披露的米曲霉DNA酶能够减少塑料表面上的生物膜的粘性,更少的污垢沉积在表面上。
实例3
DNA酶介导从塑料表面上去除
还将实例1中使用的短波单胞菌属物种用于本研究,将其根据实例1中所描述的程序进行预生长。在增殖后,将短波单胞菌属物种培养物在TSB中稀释1000倍。将125μl的1000倍稀释的培养物添加到具有Nunclon Delta表面(赛墨科技公司(Thermo Scientific),#167008)的96孔聚苯乙烯板的各孔。将该板在15℃下孵育2天,以允许生物膜生长。将该介质从孔中去除,并且通过添加300μl milliQ水来冲洗这些孔。然后吸出水。向每个孔添加150μl的0.03ppm、0.1ppm、0.3ppm抑或1ppm的水中稀释的来自米曲霉的DNA酶(SEQ ID NO:2)。作为对照,添加150μl没有DNA酶的纯milliQ水。在震荡(1000rpm)情况下,将该板在30℃下孵育1小时。吸出该酶溶液,并且添加300μl milliQ水来冲洗这些孔。吸出水,添加150μl 0.1%(w/v)龙胆紫(C0775;西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich),圣路易斯,密苏里州,美国)到各孔中,来染色剩余生物膜,并且将该板在室温下孵育30分钟。去除龙胆紫,并且添加300μl milliQ水来冲洗这些孔。吸出水,添加150μl 96%乙醇(201145;Kemetyl公司,丹麦)到各孔中,以溶解该龙胆紫,并且在震荡(800rpm)情况下,将该板在25℃下孵育30分钟。通过在595nm下测量吸光度来量化龙胆紫的量(POLARstar Omega,BMG莱伯泰科(BMGLabtech),奥滕贝格(Ortenberg),德国)。
表3.从具有DNA酶的塑料表面的生物膜的去除
DNA酶浓度(ppm) | Abs590nm | Abs590nm(无DNase)-Abs590nm(有DNase) |
0 | 1.263 | |
0.03 | 1.062 | 0.201 |
0.1 | 1.003 | 0.260 |
0.3 | 0.953 | 0.310 |
1 | 0.858 | 0.405 |
本研究证实,在此披露的米曲霉DNA酶能够从塑料表面去除生物膜。
实例4
在本研究中,使用短波单胞菌属物种的一种菌株、荧光假单胞菌的一种菌株(假单胞菌属1)和嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)的一种菌株(假单胞菌属2)。
在30℃下,使所有三种细菌菌株在胰胨豆胨琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131;Oxoid有限公司,贝辛斯托克,英国)上预生长2-5天。将来自一个单菌落的满环物转移至10mL的TSB(胰胨大豆肉汤,胰蛋白胨)中并且伴随振荡(240rpm)于30℃下孵育1天。在增殖后,通过离心(西格玛实验室离心机6K15)沉淀所有三种细菌菌株(在21℃下3000g,7min)。将短波单胞菌属物种再悬浮于10mL用水稀释两次的TSB中,而荧光假单胞菌和嗜碱性假单胞菌(P.Alcaliphila)稀释于未稀释的TSB中。使用分光计(POLARstar Omega(BMG莱伯泰科(BMGLabtech),奥滕贝格(Ortenberg),德国))测量600nm处的光密度(OD)。用短波单胞菌属物种接种用水稀释两次的新鲜TSB至0.03的OD600nm,而分别用荧光假单胞菌和嗜碱性假单胞菌(P.Alcaliphila)接种接种新鲜未稀释的TSB至0.03的OD600nm。将100μl添加到96孔聚苯乙烯平底微板(161093;Nunc公司,罗斯基勒,丹麦)的各孔中。将具有短波单胞菌属物种的板在15℃下孵育24h和48h。将具有荧光假单胞菌和嗜碱性假单胞菌(P.Alcaliphila)的板在30℃下孵育48h。
在孵育后,通过用0.9%(w/v)NaCl(默克公司)洗涤两次来去除非贴壁细胞。将贴壁细胞用200μl的三种自动餐具洗涤(ADW)粉状标准洗涤剂和一种液体标准洗涤剂进行处理。
通过溶解3.94g在具有15°dH硬度的1000ml水中来制备ADW标准A(具有过碳酸盐并且具有TAED),该ADW标准A包含MGDA(29%)、柠檬酸钠(17%)、碳酸钠(17%)、过碳酸钠(10%)、硅酸钠(5%)、硫酸钠(10%)、Acusol 588G(5%)、TAED(3%)和Surfac 23-6.5(4%)。
通过溶解3.83g在具有15°dH硬度的1000ml水中来制备ADW标准A1(具有过碳酸盐并且没有TAED),该ADW标准A1包含MGDA(30%)、柠檬酸钠(18%)、碳酸钠(18%)、过碳酸钠(10%)、硅酸钠(5%)、硫酸钠(11%)、Acusol 588G(5%)和Surfac 23-6.5(4%)。
通过溶解3.45g在具有15°dH硬度的1000ml水中来制备ADW标准A2(没有过碳酸盐并且没有TAED),该ADW标准A2包含MGDA(33%)、柠檬酸钠(20%)、碳酸钠(20%)、硅酸钠(6%)、硫酸钠(12%)、Acusol 588G(5%)和Surfac 23-6.5(5%)。
通过溶解3.70g在具有15°dH硬度的1000ml水中来制备ADW液体洗涤剂,该ADW液体洗涤剂包含柠檬酸钠(2.9%)、甲酸钠(0.2%)、GLDA(28.7%)、HEDP(0.3%)、PCA聚合物(1.0%)、水(9.6%)、37w/w%HCl(5.2%)、10M HCl(3.7%)和NaOH(0.2%)。
所有处理在45℃下进行30和60min。去除ADW洗涤剂,并且将孔用0.9%(w/w)NaCl冲洗两次。为了量化贴壁细胞,添加200μl的0.1%(w/v)龙胆紫(C0775;西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich),圣路易斯,密苏里州,美国),并且在室温下放置15分钟。将这些孔用0.9%(w/v)NaCl洗涤两次,并且通过添加200μl 96%(w/v)乙醇(201145;Kemetyl公司,克厄丹麦)而洗脱结合的结晶紫并且通过在595nm下进行测量加以确定。
Claims (15)
1.一种具有DNA酶活性的多肽用于防止、减少和/或去除物品的生物膜的用途,其中该物品是硬表面。
2.根据权利要求1所述的用途,用于防止、减少和/或去除污垢附着于该物品。
3.根据以上权利要求中任一项所述的用途,其中该具有DNA酶活性的多肽是动物、植物或微生物来源的。
4.根据以上权利要求中任一项所述的用途,其中该生物膜包括短波单胞菌属物种的至少一种菌株或假单胞菌属物种的至少一种菌株。
5.一种洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和金属护理剂。
6.一种洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包括具有脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性的多肽和强螯合助洗剂和/或选自下组的助洗剂,该组由以下各项组成:柠檬酸钠、柠檬酸、醇胺、碳酸钠、碳酸氢钠和氨基-三-(亚甲基-磷酸)(AMP)。
7.根据权利要求5或6中任一项所述的组合物,其中该组合物进一步包括表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、黏质土去除/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、杀细菌剤、杀真菌剂和/或颜料或其混合物。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的组合物,其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种酶,该组由以下各项组成:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、过氧化物酶和氧化酶。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的组合物,其中该具有DNA酶活性的多肽是动物、植物和/或微生物来源的。
10.根据权利要6-9中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该强螯合助洗剂选自下组,该组由以下各项组成:EDTA、EDTMP、NTMP、DTPMP、MGDA、NTA、HEDP、STPP、IDS、GLDA、焦磷酸盐和EDDS。
11.一种用于防止、减少和/或去除物品的生物膜的清洁方法,该方法包括以下步骤:
a)将物品与根据权利要求5-10中任一项所述的组合物或包括具有DNA酶活性的多肽的液态溶液接触;
b)完成至少一个清洁循环;并且
c)任选地冲洗该物品;
其中该物品是硬表面。
12.根据权利要求11所述的方法,其中该物品是硬表面,该硬表面是洗碗机或纺织品洗涤机的内部表面。
13.根据权利要求11所述的方法,其中该物品是选自下组的餐具,该组由以下各项组成:盘、杯、玻璃杯、碗、罐、餐具、匙、刀、叉、上菜用具、陶瓷、塑料、砧板、瓷器和玻璃器皿。
14.根据权利要求11-13中任一项所述的方法,其中该餐具的清洁与内部硬表面的清洁同时进行。
15.根据权利要求11-14中任一项所述的方法,其中该具有DNA酶活性的多肽是动物、植物和/或微生物来源的。
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