CN106188338B - 一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法 - Google Patents

一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法，尤其是降低原料药中残留的杂蛋白的纯化工艺，具体方法为：微生物发酵‑纯化水稀释‑氯仿沉淀‑澄清过滤‑透析‑CPC沉淀‑CPC沉淀解离‑澄清过滤‑有机溶剂醇沉。本发明在获得透明质酸钠发酵液后，将链球菌发酵代谢产物中的杂蛋白等杂质，通过用氯仿其变性沉淀，再采用离心和过滤的方法将其去除，既能有效的去除杂蛋白，又能减少后续过滤时间，同时减轻下游纯化工艺(透析，CPC沉淀解离等)压力，降低了生产成本，缩短生产时间，并使成品杂质明显减少，提升了最终产品质量。

Description

一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法
技术领域
本发明涉及药物制备技术领域，特别涉及一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的纯化方法。
背景技术
目前常规的医用透明质酸钠纯化方法主要包括以下步骤：除菌过滤，透析，季铵盐沉淀，沉淀解离，有机溶剂醇沉等步骤。由于发酵液中成分复杂，包括链球菌代谢产物，未消化完的培养基成分等，给后续纯化分离带来很大的难度。
杂蛋白作为代谢产物的一种，在后续纯化过程中很难有效去除，透析步骤主要为去除小分子无机盐等杂质，所以对超滤膜的孔径选择有限制，杂蛋白作为高分子物质，并不能被有效分离。
CPC沉淀是很有效的去除杂质的方法，虽然大部分杂蛋白不能被特异性络合随母液一起被排出，但仍有相当部分的杂蛋白会被形成CPC-HA沉淀包裹不能有效的去除而带入下游工艺。
杂蛋白含量过高，被视为可能是造成制剂产品不良反应的一大原因，所以在实际生产过程中往往会通过2-3次的乙醇醇沉的方法来去除杂质，提高产品质量。这样不仅在安全方面造成一定隐患，生产周期较长，也大大提高了生产成本。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对现有医用透明质酸钠制备过程中所存在的上述技术问题而提供一种操作简便、生产成本低，可用于降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法。
本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：
一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法，具有如下步骤:
(1)稀释步骤
将微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液，用纯化水稀释混匀得到稀释后的发酵液；
(2)氯仿沉淀步骤
将步骤(1)中稀释后的发酵液，加入质量百分比浓度为3％-20％的氯仿，漩涡震荡混匀，震摇得到沉淀后的发酵液；
(3)离心分离步骤
将步骤(2)得到的沉淀后的发酵液，离心弃沉淀，收集上清液；
(4)氯仿去除步骤
将步骤(3)的上清液静置，待氯仿/发酵液分层明显后，弃去底部的氯仿，收集上清液；
(5)过滤步骤
预铺硅藻土滤层，将步骤(4)的上清液澄清过滤后，再将滤液用滤膜过滤，收集滤液备用；
(6)用超滤膜将步骤(5)制备的滤液体积浓缩至1/3后，再用纯化水等体积透析得到透析液；
(7)透析液加入透明质酸钠质量2-3倍的CPC，络合沉淀，收集CPC沉淀，再用氯化钠溶液解离得到解离液；
(8)将步骤(7)制备的解离液澄清过滤，用乙醇醇沉，收集沉淀，脱水干燥并抽真空干燥后得透明质酸钠原料。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(1)中，所述透明质酸钠发酵液为微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液或采用鸡冠提取法获得的透明质酸钠发酵液。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(1)中，将微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液，用3倍体积的纯化水稀释混匀。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(2)中，所述震摇是在37℃条件震摇2h。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(3)中，离心条件为采用4000转/min的速度，离心20min。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(4)中，所述静置的时间为20min。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(5)中，所述滤膜为0.45um滤膜。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(6)中，所述超滤膜为100KD分子量的聚醚砜材质超滤膜。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(6)中，滤液体积浓缩至1/3后，用5倍体积的纯化水等体积透析。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(7)中，所述络合沉淀的时间为30min。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(7)中，所述氯化钠溶液的摩尔浓度0.4mol/L，解离时间为4h以上。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(8)中，解离液澄清过滤后用3倍体积95％乙醇醇沉。
在本发明的一个优选实施中，所述步骤(8)中，脱水干燥的次数为3次，抽真空干燥的时间为12h以上。
本发明通过用氯仿使杂蛋白变性沉淀，再采用离心和过滤的方法将其去除，既能有效的去除杂蛋白，又能减少后续过滤时间，同时减轻下游纯化工艺(透析，CPC沉淀解离等)压力，降低了生产成本，缩短生产时间，并使成品杂质明显减少，提升了最终产品质量。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明进一步说明，可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明。但不以任何方式限制本发明，凡依照本发明的内容所做的任何本领域的等同替换均属于本发明的保护范围之内。
说明
1：以下实施例所选发酵液均为同一实验批次所得
2：澄清过滤所选硅藻土滤层厚度均为0.5cm
3：实施例不局限于微生物发酵法透明质酸钠的纯化，也将以鸡冠提取法为例说明本发明的有效性和通用性。
实施例1
对比工艺：取发酵液0.5L，加纯化水稀释至1.5L体积后，预铺硅藻土滤层，将发酵液除菌过滤后再用0.45um滤膜过滤，将滤液用100KD超滤膜先浓缩至0.5L，再用5L的纯化水将浓缩液等体积透析，检测截留液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入8g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用1L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用3L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
本发明：取发酵液0.5L，加纯化水稀释至1.5L体积后，加入15ml氯仿，并漩涡震荡混匀3min，置于37℃摇床内震摇2h。将发酵液平均分装至50ml离心管内，4000转/min离心20min，弃去离心管底部沉淀收集上清，将上清静置20min，氯仿出现明显分层后用5ml移液枪将氯仿从底部吸出弃去。预铺硅藻土滤层，将发酵液过滤后再用0.45um滤膜过滤，将滤液用100KD超滤膜先浓缩至0.5L，再用5L的纯化水将浓缩液等体积透析，检测截留液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入8g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用1L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用3L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
实施例2
对比工艺：取发酵液0.5L，加纯化水稀释至1.5L体积后，预铺硅藻土滤层，将发酵液除菌过滤后再用0.45um滤膜过滤，将滤液用100KD超滤膜先浓缩至0.5L，再用5L的纯化水将浓缩液等体积透析，检测截留液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入8g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用1L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用3L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
本发明：取发酵液0.5L，加纯化水稀释至1.5L体积后，加入45ml氯仿，并漩涡震荡混匀3min，置于37℃摇床内震摇2h。将发酵液平均分装至50ml离心管内，4000转/min离心20min，弃去离心管底部沉淀收集上清，将上清静置20min，氯仿出现明显分层后用5ml移液枪将氯仿从底部吸出弃去。预铺硅藻土滤层，将发酵液过滤后再用0.45um滤膜过滤，将滤液用100KD超滤膜先浓缩至0.5L，再用5L的纯化水将浓缩液等体积透析，检测截留液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入8g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用1L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用3L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
实施例3
对比工艺：取发酵液0.5L，加纯化水稀释至1.5L体积后，预铺硅藻土滤层，将发酵液除菌过滤后再用0.45um滤膜过滤，将滤液用100KD超滤膜先浓缩至0.5L，再用5L的纯化水将浓缩液等体积透析，检测截留液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入8g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用1L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用3L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
本发明：取发酵液0.5L，加纯化水稀释至1.5L体积后，加入150ml氯仿，并漩涡震荡混匀3min，置于37℃摇床内震摇2h。将发酵液平均分装至50ml离心管内，4000转/min离心20min，弃去离心管底部沉淀收集上清，将上清静置20min，氯仿出现明显分层后用5ml移液枪将氯仿从底部吸出弃去。预铺硅藻土滤层，将发酵液过滤后再用0.45um滤膜过滤，将滤液用100KD超滤膜先浓缩至0.5L，再用5L的纯化水将浓缩液等体积透析，检测截留液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入8g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用1L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用3L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
实施例4
对比工艺：取鸡冠酶解液0.5L，预铺硅藻土滤层，将其澄清过滤，检测滤液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入2.2g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用0.5L0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用1.5L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
本发明：取鸡冠酶解液0.5L，加入5ml氯仿，漩涡震荡混匀3min，置于37℃摇床内震摇2h。将酶解液平均分装至50ml离心管内，4000转/min离心20min，弃去离心管底部沉淀收集上清，将上清静置20min，氯仿出现明显分层后用5ml移液枪将氯仿从底部吸出弃去。预铺硅藻土滤层，将酶解液过滤后用0.45um滤膜过滤，检测滤液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入2.2g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用0.5L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用1.5L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
实施例5
对比工艺：取鸡冠酶解液0.5L，预铺硅藻土滤层，将其澄清过滤，检测滤液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入2.2g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用0.5L0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用1.5L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
本发明：取鸡冠酶解液0.5L，加入50ml氯仿，漩涡震荡混匀3min，置于37℃摇床内震摇2h。将酶解液平均分装至50ml离心管内，4000转/min离心20min，弃去离心管底部沉淀收集上清，将上清静置20min，氯仿出现明显分层后用5ml移液枪将氯仿从底部吸出弃去。预铺硅藻土滤层，将酶解液过滤后用0.45um滤膜过滤，检测滤液电导率范围(1.2-1.4MS/CM)，合格后加入2.2g的CPC搅拌，络合沉淀30min，收集络合沉淀，用0.5L的0.4Mol/L的氯化钠溶液将沉淀解离6h，将解离液澄清过滤后，用1.5L的95％乙醇将解离液醇沉，收集沉淀，脱水干燥三次，并于40℃条件下抽真空干燥12h，得成品。
将以上实施例所得成品送检，检验结果以及过程工艺参数汇总如下表：
表1
由上表可得出结论，氯仿沉淀工艺对成品透明质酸的含量和分子量影响不大，对去除最终成品中杂蛋白的效果尤为明显，随着氯仿浓度的增高，杂蛋白去除率液相应增加，当氯仿浓度为10％时杂蛋白去除效率明显优于其他例，对提高最终产品质量有很大帮助。

Claims (1)

1.一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法，其特征在于，具有如下步骤:
(1)稀释步骤
将微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液，用纯化水稀释混匀得到稀释后的发酵液；
(2)氯仿沉淀步骤
将步骤(1)中稀释后的发酵液，加入质量百分比浓度为3％-10％的氯仿，漩涡震荡混匀，震摇得到沉淀后的发酵液；
(3)离心分离步骤
将步骤(2)得到的沉淀后的发酵液，离心弃沉淀，收集上清液；
(4)氯仿去除步骤
将步骤(3)的上清液静置，待氯仿/发酵液分层明显后，弃去底部的氯仿，收集上清液；
(5)过滤步骤
预铺硅藻土滤层，将步骤(4)的上清液澄清过滤后，再将滤液用滤膜过滤，收集滤液备用；
(6)用超滤膜将步骤(5)制备的滤液体积浓缩至1/3后，再用纯化水等体积透析得到透析液；
(7)透析液加入透明质酸钠质量2-3倍的CPC，络合沉淀，收集CPC沉淀，再用氯化钠溶液解离得到解离液；
(8)将步骤(7)制备的解离液澄清过滤，用乙醇醇沉，收集沉淀，脱水干燥并抽真空干燥后得透明质酸钠原料；所述步骤(1)中，将微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液用3倍体积的纯化水稀释混匀；所述步骤(2)中，所述震摇是在37℃条件震摇2h，所述步骤(3)中，离心条件为采用4000转/min的速度，离心20min，所述步骤(4)中，所述静置的时间为20min，所述步骤(5)中，所述滤膜为0.45um滤膜，所述步骤(6)中，所述超滤膜为100KD分子量的聚醚砜材质超滤膜，所述步骤(6)中，滤液体积浓缩至1/3后，用5倍体积的纯化水等体积透析，所述步骤(7)中，所述络合沉淀的时间为30min，所述步骤(7)中，所述氯化钠溶液的摩尔浓度0.4mol/L，解离时间为4h以上，所述步骤(8)中，解离液澄清过滤后用3倍体积95％乙醇醇沉，所述步骤(8)中，脱水干燥的次数为3次，抽真空干燥的时间为12h以上。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101357955A (zh) * 2007-08-01 2009-02-04 甘肃省科学院生物研究所 从发酵液中提取透明质酸的方法
CN105504091A (zh) * 2013-07-30 2016-04-20 青岛九龙生物医药有限公司 从猪皮中提取透明质酸的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101357955A (zh) * 2007-08-01 2009-02-04 甘肃省科学院生物研究所 从发酵液中提取透明质酸的方法
CN105504091A (zh) * 2013-07-30 2016-04-20 青岛九龙生物医药有限公司 从猪皮中提取透明质酸的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
发酵液中透明质酸提取的新方法;郭育涛 等;《无锡轻工大学学报》;20000930;第19卷(第5期);第1.1、2.1、2.2节 *
蝉拟青霉产透明质酸的粗提方法及工艺条件研究;黄锴 等;《凯里学院学报》;20090630;第27卷(第3期);第1.2.3、3节 *
超滤技术应用于透明质酸发酵液初提工艺的研究;张延良 等;《医学信息》;20160630(第6期);第2.2、3.3、4节 *

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