CN105461819B - 一种姬松茸多糖及其提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种姬松茸多糖及其提取方法，方法包括：步骤(1)将姬松茸菌丝体置于质量浓度为1％～4％的草酸铵溶液中，在50～80℃下提取1～3h，然后加入活性炭，处理得到姬松茸菌丝体提取液；步骤(2)采用DEAE‑纤维素‑A52弱阴离子交换柱对步骤(1)所得的姬松茸菌丝体提取液进行凝胶过滤层析，收集洗脱液；步骤(3)用0.5～0.8μm的无机陶瓷微滤膜对所述洗脱液进行浓缩，压力为0.50～0.90MPa，流速为10～20L/h，得到姬松茸多糖溶液；步骤(4)采用乙醇沉淀法处理所述姬松茸多糖溶液，得到姬松茸多糖。姬松茸多糖的提取率不低于9.0％，所制得姬松茸多糖纯度不低于96％。

Description

一种姬松茸多糖及其提取方法

技术领域

本发明涉及一种生物医药技术领域，尤其涉及一种姬松茸多糖的提取方法。

背景技术

姬松茸又名巴西蘑菇，原产于巴西等南美国家。1992年引入我国。姬松茸具有抗辐射性能、提高人体免疫机能、能让免疫系统长期保持在最佳状态。所以姬松茸对一些因免疫系统失调而引发的疾病(如风湿性关节炎、哮喘、红斑狼疮等)都能发挥功效。

姬松茸多糖具有螺旋状的三维立体结构，是一种β型的葡萄糖。此类多糖进入人体后不会被消化系统消化、分解。而是直接作用于细胞膜上的受体，使其发生药理作用。其药效显著并多样，而且许多效果是其他真菌多糖所不具备的。

近年来姬松茸多糖已被医学界证实为具有显著的药理效果，美国宾州大学教授辛登博士与蓝伯研究所的蓝伯博士，发表关于抗癌作用等药效的研究报告后，姬松茸多糖便实时疯摩全球，知名度顿时提高，各国企业及医疗机构纷纷研制相应的胶囊、粉剂。

目前关于姬松茸多糖的提取方法比较多，公开号CN1647695A提出了一种先用乙醇除小分子杂质，然后用水提取姬松茸多糖，然后将水溶液浓缩。该方法虽然除去了部分杂质，但是对于蛋白质的干扰不能不排除，而且提取纯度很低；公开号为CN1663965A，采用超临界萃取，然后水提取，但这种方法对设备要求高，提取率也不高，设备要求高也不合适工业化大生产。公开号为CN101768614A的专利提供一种由酶除蛋白，然后水提取，接下来树脂纯化的一种获取姬松茸多糖的方法，但是该方法的问题就是提取率低，而且提取后的纯度也低，达不到目前医药市场对姬松茸多糖的品质要求。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供了一种提取率高、提取纯度高的姬松茸多糖的提取方法。

本发明还提供了一种纯度高的姬松茸多糖。

本发明提供的技术方案为：

一种姬松茸多糖的提取方法，包括以下步骤：

步骤(1)将姬松茸菌丝体置于质量浓度为1％～4％的草酸铵溶液中，在50～80℃下提取1～3h，然后加入活性炭，处理得到姬松茸菌丝体提取液；

步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱对步骤(1)所得的姬松茸菌丝体提取液进行凝胶过滤层析，收集洗脱液；

步骤(3)用0.5～0.8μm的无机陶瓷微滤膜对所述洗脱液进行浓缩，压力为0.50～0.90MPa，流速为10～20L/h，得到姬松茸多糖溶液；

步骤(4)采用乙醇沉淀法处理所述姬松茸多糖溶液，得到姬松茸多糖。

优选的是，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(1)中，在加入活性炭之前，保持温度，加入活性炭后，保温搅拌30～60min，活性炭相对于草酸铵溶液的质量比为5％～8％。

优选的是，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(1)中，在保温搅拌之后，板框压滤得到姬松茸菌丝体提取液。

优选的是，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(2)中，采用0.1mol/L NaCl溶液进行洗脱，流速为10.0～30.0L/h。

优选的是，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(4)中，将所述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，向浓缩液中加入乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到70～80％，静置5～8h。

优选的是，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(4)中，静置之后，在2000rpm下离心，取沉淀物，在40℃下真空干燥，得到姬松茸多糖。

一种由所述方法制备得到的姬松茸多糖。

本发明所述的姬松茸多糖的提取方法有以下有益效果：

采用草酸铵溶液提取姬松茸多糖，对子实体和菌丝体的多糖提取都能提高产率，提取时间短，而且条件温和。本工艺采用活性炭在水中脱色，吸附，使水中的有机物和不溶物被活性炭吸附，同时也舍弃了Sevag法除蛋白这个方法，放弃使用氯仿、正丁醇等大量有机溶解，是一种绿色环境友好型工艺。采用陶瓷微滤膜分离纯化姬松茸多糖，定向准确地分离出了姬松茸多糖。采用本发明的方法，姬松茸多糖的提取率不低于9.0％，所制得姬松茸多糖纯度不低于96％。

附图说明

图1为本发明的一个实施例中姬松茸多糖的提取方法的流程图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

如图1所示，本发明提供一种姬松茸多糖的提取方法，包括以下步骤：

步骤(1)将姬松茸菌丝体置于质量浓度为1％～4％的草酸铵溶液中，在50～80℃下提取1～3h，然后加入活性炭，处理得到姬松茸菌丝体提取液；

步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱对步骤(1)所得的姬松茸菌丝体提取液进行凝胶过滤层析，收集洗脱液；

步骤(3)用0.5～0.8μm的无机陶瓷微滤膜对所述洗脱液进行浓缩，压力为0.50～0.90MPa，流速为10～20L/h，得到姬松茸多糖溶液；

步骤(4)采用乙醇沉淀法处理所述姬松茸多糖溶液，得到姬松茸多糖。

本发明的特点是采用草酸铵提取、超滤分离、乙醇沉淀精制等工艺从菌丝体中提取姬松茸多糖，提取方法操作简单，是一种可实现连续大生产要求的稳定工艺。

本发明中，采用草酸铵溶液提取姬松茸多糖，对子实体和菌丝体的多糖提取都能提高产率，提取时间短，而且条件温和。

本发明采用活性炭在水中脱色，吸附，使水中的有机物和不溶物被活性炭吸附，同时也舍弃了用Sevag法除蛋白这个步骤，放弃了氯仿、正丁醇等大量有机溶解，是一种绿色环境友好型工艺。

本发明采用无机陶瓷微滤膜分离纯化姬松茸多糖，定向准确地分离出了姬松茸多糖，而将其他杂质分离出去，从而保证对姬松茸多糖提取的纯度。目前广泛使用的有机微滤膜，都存在化学稳定性差、易老化、使用寿命短以及耐高温、酸、碱及有机溶剂性能差等缺点。与有机膜相比，无机陶瓷膜具有耐高温、耐酸碱、机械强度高、使用寿命长、运行稳定性好、污染后易清洗等优点。

利用本发明的方法，对姬松茸多糖的提取率不低于9.0％，姬松茸多糖纯度不低于96％。

进一步地，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(1)中，在加入活性炭之前，保持温度，加入活性炭后，保温搅拌30～60min，，活性炭相对于草酸铵溶液的质量比为5％～8％。活性炭可以充分吸附除去蛋白质等杂质，保证最终产品的纯度，并且同时减少杂质对后续凝胶过滤层析的干扰。

进一步地，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(1)中，在保温搅拌之后，板框压滤得到姬松茸菌丝体提取液。

进一步地，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(2)中，采用0.1mol/L NaCl溶液进行洗脱，流速为10.0～30.0L/h。合适的流速可以保证将提取液中的有效成分充分地提取出来。

进一步地，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(4)中，将所述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，向浓缩液中加入乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到70～80％，静置5～8h。

进一步地，所述的姬松茸多糖的提取方法中，所述步骤(4)中，静置之后，在2000rpm下离心，取沉淀物，在40℃下真空干燥，得到姬松茸多糖。

本发明还提供了一种由所述方法制备得到的姬松茸多糖。所制得姬松茸多糖纯度不低于96％。

以下提供实施例，用于对本发明作出更详细的说明。

实施例一

步骤(1)在姬松茸菌丝体中加入2％的草酸铵溶液中，60℃下提取1h，然后保持温度，提取罐中加入5.0％活性碳，保温搅拌30min，板框压滤得到清液姬松茸菌丝体提取液。步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱对上述提取液进行凝胶过滤层析。装柱后，先用0.1mol/LNaCl冲洗，之后上样。用0.1mol/L NaCl进行洗脱，流速15.0L/h，收集洗脱液，得到纯化的姬松茸多糖母液。步骤(3)先冲洗微滤设备，确定管道及容器干净后，原料槽装入料液(即姬松茸多糖母液)，通过用0.5μm无机陶瓷微滤膜为组件的微滤设备，以10L/h，压力为0.50MPa的流速进行浓缩。步骤(4)将上述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到75％，沉淀多糖静置5.0h，2000rpm离心，弃上清液，40℃真空干燥，得姬松茸多糖精品。提取率为9.12％，苯酚-硫酸法测得姬松茸多糖含量为96.12％。

实施例二

步骤(1)在姬松茸菌丝体中加入3％的草酸铵溶液中，70℃下提取2.0h，然后保持温度，提取罐中加入6.0％活性碳，保温搅拌50min，板框压滤得到清液姬松茸菌丝体提取液。步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱将上述提取液进行凝胶过滤层析。装柱后，用0.1mol/LNaCl冲洗，之后上样。用0.1mol/LNaCl进行洗脱，流速15.0L/h，收集洗脱液，得到纯化的姬松茸多糖母液。步骤(3)先冲洗微滤设备，确定管道及容器干净后，原料槽装入料液(即姬松茸多糖母液)，通过用0.8μm无机陶瓷微滤膜为组件的微滤设备，以15L/h，压力为0.60MPa的流速进行浓缩。步骤(4)将上述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到78％，沉淀多糖静置6.0h，2000rpm离心，弃上清液，40℃真空干燥，得姬松茸多糖精品。提取率为10.75％，苯酚-硫酸法测得姬松茸多糖含量为97.51％。

实施例三

步骤(1)在姬松茸菌丝体中加入1％的草酸铵溶液中，50℃下提取1h，然后保持温度，提取罐中加入7％活性碳，保温搅拌30min，板框压滤得到清液姬松茸菌丝体提取液。步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱将上述提取液进行凝胶过滤层析。装柱后，用0.1mol/LNaCl冲洗，之后上样。用0.1mol/LNaCl进行洗脱，流速10.0L/h，收集洗脱液，得到纯化的姬松茸多糖母液。步骤(3)先冲洗微滤设备，确定管道及容器干净后，原料槽装入料液(即姬松茸多糖母液)，通过用0.8μm无机陶瓷微滤膜为组件的微滤设备，以10L/h，压力为0.50MPa的流速进行浓缩。步骤(4)将上述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到70％，沉淀多糖静置8.0h，2000rpm离心，弃上清液，40℃真空干燥，得姬松茸多糖精品。提取率为10.32％，苯酚-硫酸法测得姬松茸多糖含量为97.24％。

实施例四

步骤(1)在姬松茸菌丝体中加入4％的草酸铵溶液中，80℃下提取3.0h，然后保持温度，提取罐中加入8.0％活性碳，保温搅拌60min，板框压滤得到清液姬松茸菌丝体提取液。步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱将上述提取液进行凝胶过滤层析。装柱后，用0.1mol/LNaCl冲洗，之后上样。用0.1mol/LNaCl进行洗脱，流速30.0L/h，收集洗脱液，得到纯化的姬松茸多糖母液。步骤(3)先冲洗微滤设备，确定管道及容器干净后，原料槽装入料液(即姬松茸多糖母液)，通过用0.5μm无机陶瓷微滤膜为组件的微滤设备，以10L/h，压力为0.90MPa的流速进行浓缩。步骤(4)将上述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到80％，沉淀多糖静置5h，2500rpm离心，弃上清液，40℃真空干燥，得姬松茸多糖精品。提取率为10.05％，苯酚-硫酸法测得姬松茸多糖含量为97.03％。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (1)

1.一种姬松茸多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)将姬松茸菌丝体置于质量浓度为3％的草酸铵溶液中，在70℃下提取2h，然后加入活性炭，处理得到姬松茸菌丝体提取液；所述步骤(1)中，在加入活性炭之前，保持温度，加入活性炭后，保温搅拌50min，活性炭相对于草酸铵溶液的质量比为6％；所述步骤(1)中，在保温搅拌之后，板框压滤得到姬松茸菌丝体提取液；

步骤(2)采用DEAE-纤维素-A52弱阴离子交换柱对步骤(1)所得的姬松茸菌丝体提取液进行凝胶过滤层析，收集洗脱液；所述步骤(2)中，采用0.1mol/L NaCl溶液进行洗脱，流速为15.0L/h；

步骤(3)用0.8μm的无机陶瓷微滤膜对所述洗脱液进行浓缩，压力为0.60MPa，流速为15L/h，得到姬松茸多糖溶液；

步骤(4)采用乙醇沉淀法处理所述姬松茸多糖溶液，得到姬松茸多糖；所述步骤(4)中，将所述姬松茸多糖溶液浓缩至原体积的1/5，向浓缩液中加入乙醇使乙醇在浓缩液中的终浓度达到78％，静置6h；所述步骤(4)中，静置之后，在2000rpm下离心，取沉淀物，真空干燥，得到姬松茸多糖。