CN101899122B - 一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法，具体包括如下步骤：(1)将新鲜或干燥的灵芝子实体粉碎；(2)建立乙醇/硫酸铵双水相体系；(3)萃取分离：将灵芝粉末加入至乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀或超声混匀后，静置分相或离心分相，得到上相和下相；(4)将上相减压浓缩、冷冻干燥，得灵芝酸；(5)将下相经过透析，得到透过液和截留液；截留液通过80％的乙醇醇沉，离心得到沉淀物和上清液；沉淀物经冷冻干燥得灵芝多糖。本发明工艺简单、设备要求低，成本低，无污染，适合于规模化生产；实现了同步提取灵芝酸和灵芝多糖。

Description

一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法
技术领域
本发明属于萜类和多糖的提取方法，具体涉及一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法。
背景技术
灵芝是食药两用真菌。民间传说：吃了灵芝草，就可以长生不老，这充分说明灵芝确有较高的药用价值。被视为珍贵的中药材，作为药物已经有2000多年的历史。现代研究表明，灵芝酸是灵芝发挥药理作用的活性成分之一，能抑制细胞组织胺的释放，增强消化器官的机能，降血脂，降血压，护肝，调节肝功能，具有止痛、镇静、抗肿瘤、抗突变等功效。灵芝多糖则是灵芝中的另一种活性成分，具有抗肿瘤、提高机体免疫力、消除自由基、抗血栓、降血糖等作用。
灵芝酸的传统提取方法主要有氯仿、甲醇等有机溶剂提取，以及超声辅助提取法、超临界CO2萃取法等。而灵芝多糖的提取主要采用煎煮法、水蒸馏法、溶剂浸提法、超声辅助提取法等。这些提取方法或者存在提取效率较低、溶剂残留、毒性较大，或存在设备要求高、能耗高、成本高。双水相是指两种水溶性的物质不相容而造成它们的混合溶液分离形成两相，通过溶质在两相之间分配系数的差异而进行萃取纯化或直接用其作为提取剂的体系。短链醇/盐体系作为一种新型的双水相体系，因原料丰富、价格低廉、溶剂粘度小、传质速度快、试剂易回收等优点，引起了广泛关注，已被用于黄酮等天然产物的分离。采用双水相体系同步提取灵芝酸和灵芝多糖的方法尚未见报道。
发明内容
灵芝酸和灵芝多糖的规模化提取至关重要，为填补目前提取方法的不足，本发明的目的在于提供一种高效经济的高质量灵芝酸和灵芝多糖的提取方法。
实现上述目的的具体技术方案如下：
一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法包括以下操作步骤：
步骤1原料预处理：
取灵芝子实体，于65℃干燥至恒重，粉碎，过20目筛，得灵芝粉末；
步骤2双水相体系的建立：
称取15.6-43g硫酸铵，加入32-115ml水中，溶解结束加入无水乙醇6.5-64ml，充分混匀建立乙醇/硫酸铵双水相体系；
步骤3萃取分离：
将2-8g灵芝粉末加入至40-240ml的乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀或超声混匀后，静置分相或离心分相，得到上相和下相；
步骤4灵芝酸的获得：
收集上相，将上相减压浓缩，取浓缩浸膏，浓缩浸膏经冷冻干燥，得灵芝酸；
步骤5灵芝多糖的获得：
收集下相，将下相用截留分子量为3000Dal-5000Dal透析袋透析，取截留液；截留液通过80％的乙醇醇沉，于5000-8000转/分钟离心5-10分钟，取沉淀物；沉淀物经冷冻干燥得灵芝多糖。
所述步骤3中振荡摇匀时间为2-5分钟。
所述步骤3中超声混匀的超声功率为200W，时间为2分钟。
所述步骤3中静置分相为静置5-8分钟。
所述步骤3中离心分相条件为5000转/分钟、2分钟。
与现有技术相比，本发明方法具有如下优点：(1)本发明的提取方法实现了灵芝酸和灵芝多糖的同步分离提取，产物中大分子杂质少(比较结果见表1)，便于产品的纯化；而且缩短了提取时间，提高了工作效率；(2)本发明的提取方法所用的硫酸铵和乙醇都可以回收、重复使用，节约了试剂，降低了成本，避免了环境污染；(3)本发明的提取方法工艺简单，设备要求低，成本低，无污染，适合于规模化生产。
表18g灵芝粉末分别经双水相萃取和乙醇传统提取获得的灵芝酸结果比较
Figure BSA00000219699000021
本发明中灵芝酸和灵芝多糖含量的测定采用如下方法进行：
灵芝酸含量的测定：采用分光光度法，以齐墩果酸为对照品，5％香草醛一冰醋酸和高氯酸为显色剂，70℃水浴25min，在最大吸收波长520nm处测定吸光度，绘制浓度和吸光度的标准曲线，得回归方程：Y＝0.023X+0.000，r2＝0.995，线性范围0～0.25mg/ml。精密称取双水相萃取物样品50mg，同法显色测定，根据标准曲线计算灵芝酸含量。
灵芝多糖含量的测定：采用苯酚-硫酸法，在试管中加入一定的样品和水，使其总体积为2ml，再加入1ml苯酚，5ml浓硫酸，37℃水浴30min，摇匀后，在490nm处测定其吸光度。根据标准曲线计算灵芝多糖含量。
附图说明
图1为本发明灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取的工艺流程。
具体实施方式
下面结合附图1及具体的实施方式对本发明作进一步地说明。
实施例1：
一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法包括以下操作步骤：
步骤1原料预处理：取灵芝子实体，于65℃干燥至恒重后粉碎，过20目筛，得灵芝粉末；
步骤2双水相体系的建立：称取43g硫酸铵，加入115ml水中，溶解结束加入无水乙醇64ml，充分混匀建立乙醇/硫酸铵双水相体系；
步骤3萃取分离：将8g灵芝粉末加入240ml乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀10分钟后静置5分钟，得到上相和下相；
步骤4灵芝酸的获得：收集上相，将上相减压浓缩，取浓缩浸膏，浓缩浸膏经冷冻干燥，得灵芝酸0.1596g；
步骤5灵芝多糖的获得：收集下相，将下相用截留分子量为5000Dal透析袋透析，取截留液；截留液通过80％的乙醇醇沉，于5000转/分钟离心10分钟，取沉淀；沉淀经冷冻干燥得灵芝多糖0.1048g。
实施例2：
一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法包括以下操作步骤：
步骤1原料预处理：取灵芝子实体，于65℃干燥至恒重后粉碎，过20目筛，得灵芝粉末；
步骤2双水相体系的建立：称取15.6g硫酸铵，加入32ml水中，溶解后加入无水乙醇6.5ml，充分混匀建立乙醇/硫酸铵双水相体系；
步骤3萃取分离：将2g灵芝粉末加入40ml乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀10分钟后于5000r/min离心2分钟，得到上相和下相；
步骤4灵芝酸的获得：收集上相，将上相减压浓缩，取浓缩浸膏，浓缩浸膏经冷冻干燥，得灵芝酸0.0347g；
步骤5灵芝多糖的获得：收集下相，将下相用截留分子量为3000Dal透析袋透析，取截留液；截留液通过80％的乙醇醇沉，于8000转/分钟离心5分钟，取沉淀；沉淀经冷冻干燥得灵芝多糖0.0276g。
实施例3：
一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法包括以下操作步骤：
步骤1原料预处理：取灵芝子实体，于65℃干燥至恒重后粉碎，过20目筛，得灵芝粉末；
步骤2双水相体系的建立：称取15.6g硫酸铵，加入32ml水中，溶解后加入无水乙醇6.5ml，充分混匀建立乙醇/硫酸铵双水相体系；
步骤3萃取分离：将2g灵芝粉末加入60ml的乙醇/硫酸铵双水相体系中，于超声清洗器中，功率200W下超声混匀2分钟，然后静置8分钟，得到上相和下相；
步骤4灵芝酸的获得：收集上相，将上相减压浓缩，取浓缩浸膏，浓缩浸膏经冷冻干燥，得灵芝酸0.0372g；
步骤5灵芝多糖的获得：收集下相，将下相用截留分子量为3000Dal透析袋透析，取截留液；截留液通过80％的乙醇醇沉，于8000转/分钟离心5分钟，取沉淀；沉淀经冷冻干燥得灵芝多糖0.0312g。

Claims (5)

1.一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法，其特征在于包括以下操作步骤：
步骤1原料预处理：
取灵芝子实体，于65℃干燥至恒重，粉碎，过20目筛，得灵芝粉末；
步骤2双水相体系的建立：
称取15.6-43g硫酸铵，加入32-115ml水中，溶解结束加入无水乙醇6.5-64ml，充分混匀建立乙醇/硫酸铵双水相体系；
步骤3萃取分离：
将2-8g灵芝粉末加入至40-240ml的乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀或超声混匀后，静置分相或离心分相，得到上相和下相；
步骤4灵芝酸的获得：
收集上相，将上相减压浓缩，取浓缩浸膏，浓缩浸膏经冷冻干燥，得灵芝酸；
步骤5灵芝多糖的获得：
收集下相，将下相用截留分子量为3000Dal-5000Dal透析袋透析，取截留液；截留液通过80％的乙醇醇沉，于5000-8000转/分钟离心5-10分钟，取沉淀物；沉淀物经冷冻干燥得灵芝多糖。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法，其特征在于：所述步骤3中振荡摇匀时间为2-5分钟。
3.根据权利要求1所述的一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法，其特征在于：所述步骤3中超声混匀的超声功率为200W，时间为2分钟。
4.根据权利要求1所述的一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法，其特征在于：所述步骤3中静置分相为静置5-8分钟。
5.根据权利要求1所述的一种灵芝酸和灵芝多糖的双水相体系提取方法，其特征在于：所述步骤3中离心分相条件为在转速为5000转/分钟的条件下离心2分钟。。
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