CN106138191A - 红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的应用。所述的红花龙胆草是以水、乙醇或二氧化碳为溶媒提取的红花龙胆草提取物。所述的将红花龙胆草应用于制备预防或治疗肺癌的药物，是以红花龙胆草为原料，制备成适用于临床上使用的药物。该药物在预防或治疗肺癌方面具有显著的作用。

Description

红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的应用

技术领域

本发明涉及红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的临床新用途，属于制药技术领域。

背景技术

肺癌是目前发病率和死亡率上升最快的恶性肿瘤。肺癌发生于支气管黏膜上皮，近50年来肺癌的发病率显著增高，在欧美工业发达国家和我国的一些工业大城市中，肺癌发病率在男性恶性肿瘤中已居首位，在女性发病率也迅速增高，占女性常见恶性肿瘤的第2位或第3位。肺癌成为危害生命健康的一种主要疾病。

肺癌病人一经发现多是中后期，已经失去了手术治疗的机会，应用放疗、化疗对于患者毒副作用又很大。肿瘤患者接受放疗、化疗杀伤肿瘤细胞的同时，由于多数抗肿瘤药物缺乏选择作用，对正常机体也有相当大的损伤，如骨髓造血功能抑制、消化道反应、肝脏及肾脏等组织的损害、免疫功能低下等。中药配合放疗、化疗不但可以减轻其副作用,对肿瘤的疗效也有明显的提高。但是，目前治疗肺癌中药很少，特别是作用机制清楚、疗效确切的中药更少。

红花龙胆，别名红龙胆、龙胆草、小青鱼胆、星秀花，Gentiana rhodantha Franch. ex Hemsl. 龙胆科、龙胆属多年生草本，具短缩根茎。根细条形，黄色。茎直立。基生叶呈莲座状，椭圆形、倒卵形或卵形；茎生叶宽卵形或卵状三角形。花单生茎顶，无花梗；花萼膜质，有时微带紫色；花冠淡红色，上部有紫色纵纹，筒状，上部稍开展；雄蕊着生于冠筒下部，花丝丝状，花药椭圆形；子房椭圆形。蒴果内藏或仅先端外露，淡褐色，长椭圆形，两端渐狭，果皮薄，种子淡褐色，近圆形，具翅。花果期10月至翌年2月，全草入药。

发明内容

本发明的目的在于，提供红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的应用。用红花龙胆草或其提取物为原料制成的药物制剂对预防或治疗肺癌具有显著的作用。另外，红花龙胆草提取物的制备方法还具有出膏率高、成本低廉、适合工业化生产、制备效率高、收率高的优点。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的应用。

上述的应用中，所述的预防或治疗肺癌，是预防或治疗肺癌引起的气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛。

上述的应用中，所述的肺癌为非小细胞肺癌。

前述的应用中，肺癌的分布情况右肺多于左肺,下叶多于上叶。起源于主支气管、肺叶支气管的肺癌称为中央型肺癌。起源于肺段支气管远侧的肺癌,位于肺的周围部位者称为周围型肺癌"绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮,表现为肿瘤组织血管密度和血管内皮生长因子的不断表达T细胞亚群、NK细胞、白细胞数量急剧下降，最终导致肺癌患者的免疫状态下降或缺失。肺癌患者临床上表现为咳嗽、咯痰、咯血等症状。

前述的应用中，所述的红花龙胆草，是以水、乙醇或二氧化碳为溶媒提取的红花龙胆草提取物。

前述的应用中，所述的红花龙胆草提取物的制备方法为，将红花龙胆草切制成0.02～1cm段，称取60～110g，用8～11倍量水将药材浸润35～125min，煎煮2～3次，每次2～3小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为60～70℃、真空度为0.08～0.1Mpa的条件下减压干燥，即得。

前述的应用中，所述的将红花龙胆草应用于制备预防或治疗肺癌的药物，是以红花龙胆草为原料，制备成适用于临床上使用的药物。

前述的应用中，所述的药物的剂型包括散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、口服液、糖浆剂、分散片、喷雾剂或气雾剂、静脉注射剂、肌肉注射剂、吸入剂、贴剂或凝胶剂。

前述的应用中，所述的将红花龙胆草应用于制备预防或治疗肺癌的药物，是将红花龙胆草与治疗肺癌的药物组合制成的复方药物。

本发明应用红花龙胆草制备的药物预防或治疗肺癌的疗效，特别是红花龙胆草的提取物制备的药物预防或治疗肺癌的疗效非常优越。为了确保本发明的效果，申请人进行了一系列的实验来验证红花龙胆草在预防或治疗肺癌及其并发症方面的作用效果，并且申请人还对红花龙胆草的提成物的制备方法作了改进，改进后的制备工序和工序参数协同作用，具有出膏率高、成本低廉、适合工业化生产、制备效率高、收率高的优点。

以下是本发明的实验例：

实验例1：

提取溶媒的选择及提取方法的粗选

取红花龙胆草的粗粉100克，按下表1中的方案进行试验，试验结果如表2所示：

表1 不同提取方案

表2 不同提取溶剂对出膏率的影响

由表2可知：红花龙胆草以水和二氧化碳为溶媒进行提取，提取物的出膏率最高，从节约成本考虑，选择水作为最佳提取溶媒，提取方式选择煎煮提取。

实验例2:

红花龙胆草水提工艺考察

一、药材的炮制长度对出膏率的影响

称取红花龙胆草100g，用10倍量水将药材浸润40分钟，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩，进行出膏率测定，结果见表3：

表3 药材炮制长度对出膏率的影响

由上表3可知：药材粗粉的出膏率最高，但是由于药材粗粉提取后药液难于滤过，实验时虽然可用机械的方法榨干药渣，但并不适用于大工业生产；而且切制成1.0cm段的药材的出膏率与药材粗粉的出膏率相近，故以切制成1.0cm段进行提取为佳。

二、浸泡时间对出膏率的影响

药材吸水率测定：将红花龙胆草炮制成1.0cm段，称取100g，加水至浸泡药材完全，过夜，测定其吸水率，结果见表4：

表4 浸泡过夜药材吸水率测定

称取100g炮制成1.0cm段的红花龙胆草，用10倍量水将药材浸润不同时间，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩，测定出膏率，结果见表5：

表5 药材不同浸泡时间

由上表5可知：不同的浸泡时间，对药材的出膏率影响不大，从节约时间和成本考虑，以浸润30分钟为佳。

三、不同加水量、煎煮时间和提取次数对出膏率的影响

在药材炮制长度和浸泡时间确定之后，根据预实验，选定对影响出膏率的主要因素：煎煮时间、提取次数和加水量，采用正交实验的方法，以三因素的三个不同水平来进行考察各环节对出膏率的影响，从而选取最佳工艺。其中因素水平如表6所示：

表6 综合评价实验水平

采用L9(34) 正交表进行试验，称取100g炮制成1.0cm段的红花龙胆草，按表6中的因素和水平条件进行，药材浸泡时间均为30分钟，提取后，提取液滤过，滤液浓缩，进行出膏率测定，结果如表7所示：

表7 正交表实验结果

由表7可知：各因素影响的顺序为A > B > C ，最佳提取工艺为A2B2C2，即：炮制成1.0cm段的红花龙胆草提取2次，第一次加8倍量水浸泡30分钟，煎煮2小时，第二次加8倍量水煎煮2小时。

实验例3:

红花龙胆草提取物的提取方案验证

根据优选出的试验条件，称取10000g炮制成1.0cm段的红花龙胆草，提取2次，第一次加8倍量水浸泡30分钟，煎煮2小时，第二次加8倍量水煎煮2小时，提取后，提取液滤过，滤液浓缩，减压干燥（温度为65～75℃，真空度为0.08～0.1Mpa）进行出膏率测定，结果如表8所示：

表8 提取方案验证

由上表8可见，优选出的试验条件用来提取红花龙胆草是合理、可行的。

上述实验例中所述出膏率测定的具体方法为：取浓缩至相对密度1.20～1.30（测定温度60℃）的清膏，转移至1000ml的容量瓶中并定容，摇匀，精密量取20ml分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴挥干，残渣于105℃干燥3小时，取出，置干燥器中放置30分钟，称重，计算；超临界二氧化碳萃取的提取物水浴挥干，置于105℃下干燥至恒重，称重，计算。

以下通过试验例来进一步阐述红花龙胆草药物的疗效,这些试验例包括了红花龙胆草的药效学试验和临床疗效观察试验。

实验例4：红花龙胆草药效学试验

1.实验材料

1.1.1 动物

实体瘤肺癌种鼠，体重17～22g，购于重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司，动物许可证号SCXK(渝)，2014-0006。

提取物及试剂

取红花龙胆草提取物，成人临床剂量为0.045g/kg,小鼠等效剂量与人换算为7倍人用临床剂量。参莲胶囊:批号:20140403,中国吉林通化金马药业股份有限公司生产；环磷酞胺:批号:20131214,200mg/瓶,上海华联制药有限公司生产；氨茶碱片:批号:20140212,湖南制药厂生产;止咳宝片:批号:20140713,中国广东台城制药厂生产; 三七片:批号:20130208,中国广西柳州长安制药厂生产;复方阿斯林片(复方乙酞水杨酸片):批号:20120818,湖北中天爱百颗药业有限分司生产;胃复安片(甲氧氯普胺片):批号:020703,山两省临汾健民制药厂生产;西洋参片:批号:010312,力菲克药业有限公司生产。

试验方法与结果

2.1 体内抑瘤作用

2.1.1对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

取带生长良好的实体瘤肺癌种鼠，无菌条件下剥离瘤块,生理盐水1:4制成匀浆，取C57BL/6J小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，按无菌操作于右腋皮下接种小鼠肿瘤无菌稀释液0.2ml/只，24小时后称重，随机分为6组:荷瘤对照组、本发明药物高、中、低剂量组、参莲胶囊组和环磷酞胺组。荷瘤对照组药20只动物，其他各组均为10只动物。环磷酞胺组每日ip20mg/kg，其余各组灌胃给药，荷瘤对照组给予等体积蒸馏水。另取正常动物(未接利肿瘤,接种等量生理盐水作药假接种组)10只，每日灌服等体积蒸馏水作为正常对照组。分组当日给药，每日1次，连续7天，停药次日处死小鼠，称重后剥离皮下瘤块,称瘤重,计算抑瘤率"结果见表1。

表1本发明药物对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

与荷瘤对照组比较,***p<0.01。

由表1可见，本药提取物物(高剂量)对小鼠Lewis肺癌最大抑癌率大剂量达47.1%，小剂量达37.9%。荷瘤对照组动物均未见假性肿块形成，体重及死亡率均符合要求，表明肿瘤生长良好;荷瘤动物有少量在中途死亡，体重变化各组间比较无显著性差异。环磷酞胺和参莲胶囊也表现较稳定的抑瘤作用，其中参莲胶囊抑瘤率略高于本发明药物小剂量，但无显著性差异。结果表明，本发明药物对小鼠Lewis肺癌表现出较强、较稳定的抑制作用,并呈一定的剂量依赖性。

肿瘤免疫作用

2.2.1 对荷肺癌小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

取C57BL/6J雄性小鼠50只，体重18～23,按无菌操作于右腋皮下接种小鼠Lewis肺癌生理盐水(1:4)无菌稀释液0.2ml/只，24小时后称重，随机分为5组：荷瘤对照组、本药物23.92、11.96、5.98g/kg组和参莲胶囊1.179/kg组，每组10只，另取正常动物10只接种等量生理盐水作为正常对照组。分组当日给药，每日1次，连续8天，对照组给予等体积蒸馏水。末次给药后1小时,各鼠ip5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.5ml，5小时后处死，腹腔注射生理盐水2ml,转动鼠体1分钟，然后抽取腹腔洗液，分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒中，于37℃温育30分钟，取出玻片，于生理盐水中漂洗，凉干后1:1丙酮-甲醇液固定5分钟，用4%(v/v)Giemsa一Wright’S染液染色3分钟，蒸馏水漂洗，凉干，油镜下观察,按公式计算吞噬百分率和吞噬指数，结果见表2。

表2本发明药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(x±SD)

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	吞噬百分率（%）	吞噬指数
					正常对照组	10	20ml	39.92±5.5*	0.73±0.16*
荷瘤对照组	10	20ml	33.92±6.0	0.68±0.21
					本药提取物（高剂量）	10	23.92g	41.91±8.3**	0.91±0.22**
本药提取物（中剂量）	10	11.96g	40.80±9.4*	0.85±0.18*
					本药提取物（低剂量）	10	5.88g	37.51±8.1*	0.75±0.15*
参莲胶囊组	9	1.18g	40.22±8.5*	0.81±0.20*

与荷瘤对照组比较,*p>0.05,**p<0.05。

结果表明,荷瘤对照组吞噬百分率和吞噬指数较正常对照组有所降低，本发明药物23.929/kg能明显提高荷Lewis肺癌小鼠吞噬百分率和吞噬指数,能显著提高其吞噬细胞功能，增强小鼠机体免疫功能。

对荷肺癌小鼠溶血素形成的影响

取C57BL/6J雄性小鼠50只，体重18～24g，按无菌操作于右腋皮下接种小鼠Lewis肺癌生理盐水(1:4)无菌稀释液0.2ml/只，24小时后称重，随机分为5组:荷瘤对照组、本药物23.92、11.96、5.98/kg组和参莲胶囊1.179/kg组，每组10只，另取正常动物10只接种等量生理盐水作为正常对照组。分组当日给药，每日1次，连续8天，对照组给予等体积蒸馏水。给药当天每鼠ip5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.2ml，第8天末次给药后1小时，摘眼球取血，离心取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清lml，与5%鸡红细胞混悬液0.5ml、10%补体0.5ml混合，于37℃恒温箱中保温30分钟后，0℃冰箱中中止反应。离心取上清液，用7230型分光光度计于540nm处比色，以不加血清的空白对照管调零，测定各管光密度OD值,以OD读数作为判定血清溶血素的指标，结果见表3。

表3本发明药物对荷瘤小鼠溶血素形成的影响(x±SD)

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	OD值
				正常对照组	10	20ml	0.425±0.10**
荷瘤对照组	10	20ml	0.321±0.07
				本药提取物（高剂量）	10	23.92g	0.395±0.8**
本药提取物（中剂量）	10	11.96g	0.406±0.06**
				本药提取物（低剂量）	10	5.88g	0.349±0.05*
参莲胶囊组	10	1.18g	0.387±0.06**

与荷瘤对照组t比较,*p>0.05,**p<0.05。

结果表明,荷瘤对照组OD值明显低于正常对照组，本发明药物23.92、11.96/kg能明显提高荷Lewis肺癌小鼠OD值，促进溶血素形成，提高机体体液免疫功能。

减毒作用

2.3.1 对环磷酞胺中毒小鼠的影响

取ICR小鼠60只，体重18～23g，雌雄各半，随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、本发明药物23.92、11.96、5.98/kg组和参莲胶囊1.179/kg组，每组10只，分组当天灌胃给药，每天1次，连续10天，对照组给予等体积蒸馏水。给药第8天、第9天时除正常对照组外，其它各组动物ip环磷酞胺100mg/kg，第10天末次给药后1小时，各鼠摘眼球取血，用H12型血细胞分析仪测白细胞数。然后剥离一根股骨，用3%醋酸液10ml冲出骨髓内细胞，用血细胞计数盘计数四个大方格的有核细胞数，所得数×2.5×104，即为一根股骨中的骨髓有核细胞数，结果见表4。

表4本发明药物对环磷酞胺中毒小鼠的影响(x±SD)

与模型对照组比较,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。

结果表明，模型对照组外周血白细胞数和骨髓有核细胞数明显降低，本发明药物23.929/kg能明显提高环磷酞胺中毒小鼠的白细胞数和骨髓有核细胞数，具有一定的减毒作用。

对60Co放疗小鼠的影响

取ICR小鼠60只，体重18～23g，雌雄各半，随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、本发明药物23.92、11.96、5.98/kg组和参莲胶囊1.179/kg组，每组10只，分组当天灌胃给药，每天1次，连续10天，对照组给予等体积蒸馏水。给药第5天时除正常对照组外，其它各组动物用60Co照射1次，将待照射的小鼠置塑料鼠笼中，鼠笼呈辐射状排列，置60Co辐射井中，60Co辐射源自中央以26Rad/min剂量率照射，总照射剂量为7.5Gy。第10天末次给药后1小时，各鼠摘眼球取血，用H12型血细胞分析仪测白细胞数。然后剥离一根股骨，用3%醋酸液10ml冲出骨髓内细胞，用血细胞计数盘计数四个大方格的有核细胞数,所得数×2.5×104，即为一根股骨中的骨髓有核细胞数，结果见表5。

表5本药物对60Co放疗小鼠的影响(x±SD)

与模型对照组比较,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。

结果表明，模型对照组外周血白细胞数和骨髓有核细胞数明显降低，本发明药物23.92、11.96/kg能明显提高60Co放疗小鼠的白细胞数和骨髓有核细胞数,具有明显的减毒作用。

止血作用

取体重18～23g昆明种小鼠50只，随机分为5组，分别为正常对照组、本发明药物23.92、11.96、5.989/kg组和三七片1.29/kg组，每组10只，雌雄各半，每天灌胃给药1次，连续5天，对照组给予等体积蒸馏水。末次给药后30分钟，分别以利剪将小鼠尾尖0.5cm处横断，自血液自行流出后计时，每隔15秒用滤纸吸去血滴1次，直至血液自然停止，计算出血时间，进行组间t检验，结果见表6。

表6本发明药物对小鼠出血时间的影响(x±SD)

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	出血时间（min）
				正常对照组	10	20ml	6.82±2.34
本药提取物（高剂量）	10	23.92g	4.59±1.92**
				本药提取物（中剂量）	10	11.96g	6.08±2.73*
本药提取物（低剂量）	10	5.88g	5.21±2.51*
				三七片组	10	1.20g	3.85±1.74***

与正常对照组t比较,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。

镇痛作用

取体重18～22g，昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组:正常对照组、本发明药物23.92、11.96、5.989/kg组和阿斯匹林0.109/kg组，每组10只，每天灌胃给药1次，连续5天，对照组给予等体积蒸馏水，于末次给药后30分钟各鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.2ml/只，记录注射致痛剂后各鼠扭体反应(腹部内凹、伸屈后腿、臀部指高)潜伏期及15分钟内扭体反应次数，计算扭体反应抑制率，结果见表7。

表7本发明药物对小鼠醋酸扭体反应的影响(x±SD)

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	扭体潜伏期（min）	扭体数（次）	抑制率（%）
						正常对照组	10	20ml	3.55±0.96	19.9±7.7	/
本药提取物（高剂量）	10	23.92g	4.96±1.15***	10.2±6.2***	48.7
						本药提取物（中剂量）	9	11.96g	4.68±1.06**	11.5±6.4**	42.2
本药提取物（低剂量）	8	5.88g	4.58±0.99**	13.5±5.5**	32.2
						阿司匹林组	9	0.10g	5.11±1.04***	9.3±5.1***	53.3

与正常对照组t比较,**p<0.05,***p<0.01。

结果表明,本发明药物能明显延长醋酸所致小鼠扭体反应潜伏期，降低扭体反应次数(与对照组比较，p<0.05或p<0.01)，具有明显的镇痛作用。

止咳作用

取体重18～22g昆明种小鼠50只，雌性各半，随机分为5组:正常对照组、本发明药物23.92、11.96、5.989/kg组和止咳宝片0.399/kg组，每组10只，每天灌胃给药1次，连续5天，对照组给予等体积蒸馏水。末次给药后1小时，将小鼠置于玻璃钟罩内，用1ml25%氨水于沸水浴上蒸发，让氨水蒸汽刺激小鼠45秒，而后迅速将小鼠移至另一玻璃钟罩内，用小儿听诊器在钟罩内察听小鼠咳嗽情况，小鼠咳嗽表现以其腹肌收缩，同时张开嘴为准，有时有咳嗽声，记录3分钟内的咳嗽次数。结果见表8。

表8本发明药物对小鼠氨水引咳的止咳作用

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	三分钟咳嗽次数（次，x±SD）
				正常对照组	10	20ml	24.1±8.7
本药提取物（高剂量）	10	23.92g	15.4±5.8**
				本药提取物（中剂量）	10	11.96g	16.7±5.1**
本药提取物（低剂量）	10	5.88g	20.7±6.5*
				止咳宝片组	10	0.39g	12.0±4.3***

与正常对照组t比较,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。

结果表明，本发明药物能降低氨水引咳小鼠3分钟内的咳嗽次数，23.92、11.96g/kg组与对照组比较有显著性差异,具有明显的止咳作用。

止吐作用

取体重250～350g家鸽50只，雌雄兼用，随机分为5组:模型对照组、本药物20.00、10.00、5.00g/kg组和胃复安片0.39g/kg组,每组10只，每天灌胃给药1次，连续5天，对照组给予等体积蒸馏水。末次给药后45分钟，各组动物按0.39/kg的剂量灌胃给予硫酸铜致吐，观察记录动物呕吐发生的潜伏期及1小时内呕吐次数，结果见表9。

表9本发明药物对家鸽呕吐反应的影响(x±SD)

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	呕吐潜伏期（min）	呕吐数（次）
					模型对照组	10	20ml	9.73±2.65	16.5±5.8
本药提取物（高剂量）	10	20.00g	11.68±3.90**	10.8±3.2**
					本药提取物（中剂量）	10	10.00g	12.88±3.26**	11.4±3.5**
本药提取物（低剂量）	10	5.00g	10.82±2.18*	12.9±4.0*
					胃复安片组	10	3×10-3g	14.29±4.07***	10.3±2.7***

与模型对照组t比较,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。

结果表明，本发明药物能对抗硫酸铜引起的家鸽呕吐反应，延缓其呕吐发生时间，减少其呕吐次数，具有明显的止吐作用。

益气作用

取ICR小鼠60只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为6组:正常对照组、模型对照组、本发明药物23.92、11.96、5.98g/kg组以及西洋参片0.129/kg组，每组10只。除正常对照组给予正常食量外，模型对照组和各给药组每日按100g/kg喂饲7天，此后恢复正常食量并灌胃给药，每天1次，连续7天，空白对照组和模型对照组灌胃等体积蒸馏水。末次给药后1小时，将小鼠尾部系一重物(为体重的10%)，置于水深25cm、水温20±0.5℃的水池中，自小鼠投入水中至头部沉入水中10秒不能浮出时所经历的时间，即为小鼠游泳时间，进行组间t检验，结果见表10。

表10本发明药物对气虚小鼠游泳时间的影响(x±SD)

组别	动物数（只）	剂量（/kg）	游泳时间（min）
				空白对照组	10	20ml	11.69±3.61***
模型对照组	10	20ml	7.22±2.23
				本药提取物（高剂量）	10	23.92g	11.51±3.98***
本药提取物（中剂量）	10	11.96g	10.46±3.23**
				本药提取物（低剂量）	10	5.88g	10.28±3.43**
西洋参片组	10	0.18g	11.86±3.03***

与模型对照组t比较,**p<0.05,***p<0.01。

结果表明，模型对照组小鼠游泳时间明显低于空白对照组，本发明药物能明显提高气虚小鼠的游泳时间，具有明显的抗疲劳作用。

实验例2：临床试验

通过临床试验证明，本发明治疗109例患者均经病理学及痰细胞学证实为非小细胞肺癌，其中鳞癌60例，腺癌46例。其他类型3例，疗效显著，症状及体征缓解率为71.7%；病灶缩小率为68.2%，存活一年占73.7%。提高病人生活质量改善为87.2%，对延长生存期也较为明显。本药具有清肺益气、止咳化痰、止血散结的功用。既能增强机体免疫功能，抑制肿瘤的生长，又能改善患者生存质量，延长患者生存时间，是高效、安全、适用的抗癌良药。

通过治疗观察肺癌109例,治疗前诊断经X线、CT、内窥镜、手术、病理或细胞学检验证实为非小细胞肺癌。109例患者服用本发明药物，口服，每次1包，每日3次，随时观察临床变化，5～6周观察肿物大小及化验指标；并以40例化疗者做对照，对照组以联合化疗方法治疗，每3周为1周期，2周期为1疗程做复查。常用化疗药为卡铂或顺铂、足叶乙叉甙、表阿霉索或阿霉素：鳞癌加用环磷酞胺或培普利欧霉素，腺癌加用氟脉嚓咤或吠喃氟脉嚓咤注射液化疗方案均以3种药组成并配合西药对症处理。

、临床症状改善情况分析:从疗前与疗后主要症状对比来看，本药物(高剂量)对临床症状的改善具有较好的效果，在咳嗽、咯痰、咯血等症状上与其它两组相比均有显著性差异(P<0.05)。两组具体情况参见表11。(表中所提到的本发明药物均指本药物(高剂量))

表11本发明药物对临床症状的缓解情况

组别	例数	咳嗽	咯痰	咯血	胸痛
						本药物组	109	74/90*	75/86*	57/62*	32/94
化疗组	40	8/33	9/29	12/24	4/11

注:表中数据为缓解倒数/症状倒数I *P<0.01。

另外，服用本发明药物后其他症状亦得以缓解，包括五心(10/22)、虚汗(15/25)、烦渴(8/19)、舌苔黄燥(21/29)，无明显其他毒副反应。而化疗组发生厌食、呢逆、脱发、面色萎黄等脾胃不和及气血亏虚症状超过半数。

、肿物大小变化：治疗前后x线胸片对比病灶大小变化，参照1978年所定《抗肿瘤药物疗效通用标准》，可供评价者82例，表12显示观察组稳定率明显高于对照组，且恶化者少(P<0.001)。

表12胸部x片病灶变化情况

组别	例数	部分缓解例（%）	稳定例（%0	恶化例（%）
					本药物组	82	1（1.2）	55（67.0）	26（31.8）*
化疗组	20	2（10）	7（35.0）	11（55）

3、化验指标变化情况：血常规、肝肾功能、血沉、免疫球蛋白及T细胞亚群各项指标，本发明药物治疗前后无显著变化。表13示，应用本发明药物后，碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、唾液酸(THA)、癌胚抗原(CEA)下降明显，且与化疗组比较显著差异。

表13化验指标变化情况

与对照组t比较*P<0.05Δ<0.01。

、生存质量情况分析：根据Karnofsky百分分级标准，全身状况以变化10分及10分以上为上升或下降指标表14显示，观察组生存质量稳定及上升者明显高于对照组(P<0.05)。对照组在化疗期间生存质量明显下降。

表14生存质量变化情况

组别	例数	上升例（%）	稳定例（%）	下降例（%）
					本药物组	109	22（20.2）	73（67.0）	14（12.8）*
对照组	40	3（7.5）	16（40.0）	31（52.5）*

5、生存期情况分析:2009年1月～2012年1月，对收治的130例无法进行手术的NSCLC患者应用化学治疗、放射治疗及“本发明药物”等保守疗法，疗效较满意。共有128例患者符合病例选择标准，通过电话及信函随访，截止日期为2012年12月31日，118例患者有明确的存活时间，其基本情况。治疗方法及中位生存期见表16。10例患者失访，失访率为7.8%。

表16生存期单因素分析情况

相关因素	例数	中位生存期（月）	P值
				性别			>0.05
男	90	12.43
				女	28	11.97
年龄			<0.05
				30～49	16	11.97
50～59	31	11.50
				60～69	56	13.10
70～78	15	7.53
				分期			>0.05
IIIB	18	14.73
				IV	100	11.97
病理类型			<0.05
				鳞癌	50	14.73
腺癌	65	9.73
				其他	3	3.60
化疗			<0.01
				用	85	14.73
不用	33	7.13
				本药物			<0.01
用	68	16.57
				不用	50	5.70
放疗			>0.05
				用	85	12.67
不用	33	9.07

表17 生存期多因素分析情况

	回归系数β	标准误S.E.	自由度df	P值	危险比Exp(β)
						本药物组	-1.2899	0.2219	1	<0.01	0.2751
化疗组	-0.7075	0.2146	1	<0.01	0.4837

本组118例肺癌患者生存期的Cox多因素分析表明,化疗和”本药物”是延长生存期的独立预后因子。服用本发明药物的患者平均中位生存期为16.57个月，而未服用本发明药物的患者平均中位生存期为5.70个月，差异显著。

从本研究结果表明:本发明治疗肺癌咯血有效率高达91%，止咳及化痰作用也均在80%以上，均优于化疗组及西药对症的处理，这和方中集中了多味肺经要药有关。尤其对中晚期肺癌病人，既不能手术治疗，又不是以放疗和化疗者,用本药治疗后不仅症状改善，胸痛减轻，病情缓解，病灶缩小，还可以获得较长期的生存期，受到患者好评。

临床观察证实，本发明治疗肺癌不但疗效显著，而且长期用药无任何毒副作用，是高效、安全、适用的抗癌良药。

具体实施方式

实施例1：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，用8倍量水将药材浸润35min，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为70℃、真空度为0.1Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例2：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成0.5cm段，称取90g，用8倍量水将药材浸润60min，煎煮2次，每次2.5小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为68℃、真空度为0.09Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例3：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成0.9cm段，称取110g，用10倍量水将药材浸润120min，煎煮3次，每次3小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为70℃、真空度为0.1Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例4：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成0.02cm段，称取80g，用11.5倍量水将药材浸润35min，煎煮4小时，滤过，浓缩，于温度为65℃、真空度为0.08Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例5：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，加10倍药材量的5%乙醇回流提取2次，每次2 小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为72℃、真空度为0.09Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例6：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，加10倍药材量的40%乙醇回流提取2次，每次2 小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为72℃、真空度为0.09Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例7：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，加10倍药材量的80%乙醇回流提取2次，每次2 小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为72℃、真空度为0.09Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例8：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，加10倍药材量的95%乙醇回流提取2次，每次2 小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为72℃、真空度为0.09Mpa的条件下减压干燥，即得。

实施例9：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，CO2超临界提取，其中，以质量比为5%的乙醇作夹带剂，萃取压力为30Mpa，萃取温度为50℃，静态浸泡时间为3h，动态萃取3h，减压干燥，即得。

实施例10：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，CO2超临界提取，其中，以质量比为40%的乙醇作夹带剂，萃取压力为30Mpa，萃取温度为50℃，静态浸泡时间为3h，动态萃取3h，减压干燥，即得。

实施例11：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，CO2超临界提取，其中，以质量比为75%的乙醇作夹带剂，萃取压力为30Mpa，萃取温度为50℃，静态浸泡时间为3h，动态萃取3h，减压干燥，即得。

实施例12：红花龙胆草提取物的制备：将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，CO2超临界提取，其中，以质量比为95%的乙醇作夹带剂，萃取压力为30Mpa，萃取温度为50℃，静态浸泡时间为3h，动态萃取3h，减压干燥，即得。

实施例13：取实施例1～4任一所得的红花龙胆草提取物，加入适量的常规辅料，混匀，烘干，灭菌，装入硬胶囊，包装，制成胶囊剂。该制剂日服1～3次，每次10～20 mg，益气养阴，清热解毒、化痰止咳。适用于气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述症状的放化疗无效及复发者。

实施例14：取实施例5～8任一所得的红花龙胆草提取物，加适量的增溶剂，研磨，加入少量水稀释，混匀，加入矫味剂和防腐剂，混匀，加水至规定量，过滤，混匀，分装，灭菌，制成口服液。该制剂日服1～3次，每次10～20 mg，益气养阴，清热解毒、化痰止咳。适用于气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述症状的放化疗无效及复发者。

实施例15：取实施例9～12任一所得的红花龙胆草提取物，加适量的常规辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压片，制成片剂。该制剂日服1～3次，每次10～20 mg，益气养阴，清热解毒、化痰止咳。适用于气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述症状的放化疗无效及复发者。

实施例16：取实施例1～4任一所得的红花龙胆草提取物，加入适量常用辅料，成丸，干燥，制成丸剂。该制剂日服1～3次，每次10～20 mg，益气养阴，清热解毒、化痰止咳。适用于气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述症状的放化疗无效及复发者。

实施例17：取实施例1～12任一所得的红花龙胆草提取物，另取常规的治疗肺癌的药物，加适量的常规辅料，混匀，制成颗粒剂。该制剂日服1～3次，每次10～20 mg，益气养阴，清热解毒、化痰止咳。适用于气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述症状的放化疗无效及复发者。

实施例18：取实施例5～8任一所得的红花龙胆草提取物，另取常规的治疗肺癌的药物，加适量的常规辅料，混匀，制成软胶囊。益气养阴，清热解毒、化痰止咳。适用于气阴两虚，阴虚内热型中、晚期肺癌，症见气短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述症状的放化疗无效及复发者。

Claims (8)

1.红花龙胆草在制备预防或治疗肺癌的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的肺癌为非小细胞肺癌。

3.根据权利要求1或2所述的应用中，其特征在于：所述的红花龙胆草，是以水、乙醇或二氧化碳为溶媒提取的红花龙胆草提取物。

4.根据权利要求3所述的应用中，其特征在于：所述的红花龙胆草提取物的制备方法为，将红花龙胆草切制成0.02～1cm段，称取60～110g，用8～11倍量水将药材浸润35～125min，煎煮2～3次，每次2～3小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为60～70℃、真空度为0.08～0.1Mpa的条件下减压干燥，即得。

5.根据权利要求4所述的应用中，其特征在于：所述的红花龙胆草提取物的制备方法为，将红花龙胆草切制成1cm段，称取100g，用8倍量水将药材浸润35min，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩，于温度为70℃、真空度为0.1MPa的条件下减压干燥，即得。

6.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于：所述的将红花龙胆草应用于制备预防或治疗肺癌的药物，是以红花龙胆草为原料，制备成适用于临床上使用的药物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的药物的剂型包括散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、口服液、糖浆剂、分散片、喷雾剂或气雾剂、静脉注射剂、肌肉注射剂、吸入剂、贴剂或凝胶剂。

8.根据权利要求1至7任一项所述的应用，其特征在于：所述的将红花龙胆草应用于制备预防或治疗肺癌的药物，是将红花龙胆草与治疗肺癌的药物组合制成的复方药物。