CN106109844A - 龙血竭酚类提取物在制备改善血液流变学药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种龙血竭酚类提取物在制备改善血液流变学药物中的用途。本发明应用龙血竭酚类提取物改善血液流变学效果显著，副作用小，安全性高，为临床治疗高脂血症提供了一种新的选择。

Description

龙血竭酚类提取物在制备改善血液流变学药物中的用途

技术领域

本发明属于药物技术领域，涉及一种龙血竭酚类提取物的医药用途，具体涉及龙血竭酚类提取物在制备改善血液流变学药物中的用途。

背景技术

龙血竭为百合科龙血树属植物剑叶龙血树(Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen)的含树脂木材经提取加工制成。其性甘、咸、平，归心、肝经。具有活血散瘀、定痛止血、敛疮生肌的功效，用于跌打损伤、瘀血作痛、妇女气血凝滞、外伤出血、脓疮久不收口{国家药品标准[WS₃-082(Z-016)-99(Z)]}。现代药理研究表明，龙血竭具有活血、抗炎镇痛、抗肿瘤、抗氧化、止血、抗菌等药理作用PloS one,2014,9(7)。

发明内容

本发明目的在于提供一种龙血竭酚类提取物的新用途，特别是涉及龙血竭酚类提取物在制备改善血液流变学药物中的用途。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

龙血竭酚类提取物是一种已知的具有药物活性的物质，本发明使用的龙血竭酚类提取物制备方法可与“一种龙血竭总黄酮制备工艺及其新用途(专利号ZL 02129688.X)”的实施例制备方法一致。本发明也可以使用市售龙血竭酚类提取物，其中，龙血竭酚类提取物中含总酚以7,4’-二羟基黄酮(C₁₅H₁₀O₄)计，应为60％～85％；含7,4’-二羟基黄酮(C₁₅H₁₀O₄)应不低于0.60％；含龙血素B(C₁₈H₂₀O₅)应不低于0.50％。

本发明对龙血竭酚类提取物进行了药效研究，结果表明龙血竭酚类提取物能够降低血浆脂质含量，降低血浆总胆固醇水平，降低血浆甘油三酯水平，降低血浆低密度脂蛋白水平；降低全血粘度；改善红细胞变形性及红细胞渗透脆性；龙血竭酚类提取物显著降低血浆及红细胞膜MDA水平；龙血竭酚类提取物显著减少主动脉内膜下脂质沉积。

因此，龙血竭酚类提取物或其可药用盐作为活性成分用于制备改善血液流变学的药物或 保健食品。

所述的改善血液流变学是指同时降低血浆脂质含量，降低血浆总胆固醇水平，降低血浆甘油三酯水平，降低血浆低密度脂蛋白水平。

所述的改善血液流变学还可以指降低全血粘度。

所述的改善血液流变学还可以指改善红细胞变形性及红细胞渗透脆性。

龙血竭酚类提取物或其可药用盐作为活性成分用于制备预防和/或治疗高脂血症药物。

龙血竭酚类提取物或其可药用盐还可以与其他中药或化学药组成复方用于制备改善血液流变学的药物或保健食品。

所述的药物或保健食品中龙血竭酚类提取物人日用剂量为1.6～2.0g，最优日用量为1.8g。

所述的药物或保健食品采用的剂型为药学上认可的任何一种剂型。优选为口服制剂，如片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液、悬浮剂等。

与现有技术比较本发明的有益效果：本发明应用龙血竭酚类提取物改善血液流变学效果显著，副作用小，安全性高，为临床治疗高脂血症提供了一种新的选择。

附图说明

图1为龙血竭酚类提取物对凝血四项的影响。

图中，A为龙血竭酚类提取物对APTT的影响。B为龙血竭酚类提取物对TT的影响。C为龙血竭酚类提取物对Fib的影响。D为龙血竭酚类提取物对PT的影响。结果以表示，与高脂模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图2为龙血竭酚类提取物对红细胞变形性及红细胞渗透脆性的影响。

A为龙血竭酚类提取物对红细胞变形曲线积分面积的影响。B为龙血竭酚类提取物对红细胞最大变性指数的影响。C为龙血竭酚类提取物对红细胞在不同渗透压是溶血率的影响。D为在渗透压为130,145,175mOsm/kg时，龙血竭酚类提取物对红细胞渗透脆性的影响。结果以表示，与高脂模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图3为龙血竭酚类提取物对血浆及红细胞膜MDA水平的影响。

图中，A为龙血竭酚类提取物对血浆MDA水平(以nmol/L表示)的影响。B为龙血竭酚类提取物对血浆MDA水平(以血浆总胆固醇含量矫正，以mol/g表示)的影响。C为龙血竭酚类提取物对红细胞膜上MDA水平的影响。结果以表示，与高脂模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图4为龙血竭酚类提取物对主动脉内膜下脂质沉积的影响

采用油红O染色的方法评价主动脉内膜下脂质沉积(a,b,c分别为高脂模型组，龙血竭酚类提取物组，依折麦布阳性药组的油红O染色结果)，并通过病理图像分析系统(imageJ)对主动脉内膜下脂质沉积定量(d)。结果以表示，与高脂模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

具体实施方式

以下通过具体药效实验进一步说明本发明：

实验例1：龙血竭酚类提取物对ApoE基因敲除的高脂血症小鼠的作用

实验材料：

1、药物：(1)受试样品名称：龙血竭酚类提取物；按照专利号ZL02129688.X中的实施例制备方法制备得到。(2)阳性对照药：依折麦布由先灵葆雅公司生产(批号：2EZPA17005)。

2、动物：SPF级C57/BL6-ApoE基因敲除小鼠模型，6-8周龄，体重19-23g，雄性；由北京大学医学部动物中心提供。

3、试剂与仪器：

血浆脂质TC，TG，LDL试剂盒购自美国西格玛公司。

毛细管粘度计购自中国北京中勤世帝科学仪器有限公司。

血凝度计及血凝试剂盒购自日本希森美康株式会社。

红细胞变形仪购自中国北京普利生仪器有限公司。

游离胆固醇试剂盒购自中国北京普利来基因技术有限公司。

病理图像分析系统：imageJ

主动脉染色的试剂：油红O，苏木素染液，伊红染液

主动脉染色的仪器：切片机

实验方法：

1.高脂血症小鼠模型的建立

45只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为5组，分别为高脂模型组、依折麦布阳性对照组、龙血竭酚类提取物高、中、低剂量组，每组9只。均给予0.2％高胆固醇饲料7周，4个给药组在喂食高胆固醇饲料1周后分别灌胃给予依折麦布30mg/kg，龙血竭酚类提取物100、200、300mg/kg，每日1次，连续给药6周，其中高脂饮食组每天灌胃0.1ml/10g的饮用水。

2.血浆脂质含量的测定

小鼠过夜禁食不禁水，眶静脉取血，离心，取血浆。分别采用TC、TG、LDL试剂盒测 血浆脂质含量。

3.血液流变学指标的测定

3.1全血粘度与红细胞压积的测定

小鼠过夜禁食不禁水，眶静脉取血。毛细管粘度计测全血粘度。毛细管中全血1000rpm,10min离心后，测红细胞及全血的长度求红细胞压积。

3.2凝血四项的测定

小鼠过夜禁食不禁水，眶静脉取血。采用血凝度计测凝血四项：纤维蛋白原浓度(Fib)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、前凝血酶时间(PT)、凝血酶时间(TT)。

3.3红细胞变形性与渗透脆性

小鼠过夜禁食不禁水，眶静脉取血，离心，取红细胞。

采用红细胞变形仪测定红细胞变性指数及红细胞变形曲线积分面积。

相同数量的红细胞在不同渗透压PBS溶液中室温孵育20min，离心，酶标仪测上清在540nm时的吸光度。

4.龙血竭酚类提取物对血浆及红细胞膜MDA水平的影响

4.1龙血竭酚类提取物对血浆MDA水平的影响

小鼠过夜禁食不禁水，眶静脉取血，离心，取血浆。采用MDA试剂盒测定血浆的MDA水平。

4.2龙血竭酚类提取物对红细胞膜MDA水平的影响

小鼠过夜禁食不禁水，眶静脉取血，离心，取红细胞，常规方法收集红细胞膜。采用MDA试剂盒测定红细胞膜的MDA水平。

5.龙血竭酚类提取物对动脉内膜下脂质沉积的影响

5.1主动脉样品的取材与制备

实验动物以3.5ml/min的流速由左心房逆行灌注0.01M磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS,pH7.4)5分钟。自心脏至腹主动脉末端离断整个主动脉，OCT(Optimal Cutting Temperature)包埋后液氮中急速冰冻，-80℃保存。

5.2组织学分析

主动脉近心端1cm处切下，制备冰冻切片，每隔6μm连续横切，每个切片上8-10个组织面。切片进行油红O染色，HE染色，用于分析动脉内膜下的脂质沉积。

实验结果：

1.龙血竭酚类提取物对血浆TC、TG、LDL含量的影响

ApoE基因敲除小鼠经高脂饮食喂养，依折麦布阳性对照药组、龙血竭酚类提取物高、中、低剂量组在给药6周后，血浆脂质含量显著降低，血浆总胆固醇水平降低46.10％(P<0.01)，血浆甘油三酯水平降低30.06％(P<0.01)，与高脂模型组比较，有明显的统计学差异。同时，血浆低密度脂蛋白水平，与高脂模型组比较，有显著降低。结果见表1。

表1 龙血竭提取物对TC,TG,LDL的影响

结果以表示，与高脂模型组比较，**P<0.001。

2.龙血竭酚类提取物对血液流变学指标的影响

2.1龙血竭酚类提取物对全血粘度、红细胞压积及红细胞聚集指数的影响

与高脂模型组比较，龙血竭酚类提取物高、中、低剂量组的红细胞压积及红细胞聚集指数均差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较，龙血竭酚类提取物高、中、低剂量组，在切变率为200s-1、50s-1、1s-1时，全血粘度显著降低(P<0.05，P<0.01)。结果见表2。

表2 龙血竭酚类提取物对全血粘度、红细胞压积及红细胞聚集指数的影响

结果以表示，与高脂模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2龙血竭酚类提取物对凝血四项的影响

与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组，APTT、TT、Fib均显著增高，而龙血竭酚类提取物组无显著差异(P>0.05)。此外，与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组，龙血竭酚类提取物中、高剂量组，均可显著延长PT(P<0.05)，而龙血竭酚类提取物低剂量组无显著变化(P>0.05)。结果见图1。

2.3龙血竭酚类提取物对红细胞变形性及红细胞渗透脆性的影响

与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组，龙血竭酚类提取物中、高剂量组，变形曲线积分面积显著增加(P<0.05)。与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组，龙血竭酚类提取物高剂量组，最大变性指数显著增加(P<0.05)。

溶血率计算：(Hr)＝(Tr(295)-Tr/Tr(295)-Tr(0))×100％。

与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组，龙血竭酚类提取物低、中、高剂量组，红细胞渗透脆性有显著差异(P<0.001)。图4C显示，龙血竭酚类提取物组渗透脆性曲线左移。与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组及龙血竭酚类提取物组，在渗透压为130,145,175mOsm/kg时，溶血率有显著差异(P<0.001)。此外，在渗透压为145mOsm/kg时，与依折麦布阳性药组比较，龙血竭酚类提取物中、高剂量组的溶血率有显著改善，说明龙血竭酚类提取物较依折麦布阳性药，在改善渗透脆性方面有更好的效果。

3.龙血竭酚类提取物对血浆及红细胞膜MDA水平的影响

图3A.B为龙血竭酚类提取物对血浆MDA水平的影响。图3A为龙血竭酚类提取物对血浆MDA水平(以nmol/L表示)的影响，与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组及龙血竭酚 类提取物组的MDA水平均显著降低(P<0.001；P<0.05；P<0.01)。图3B为龙血竭酚类提取物对血浆MDA水平(以血浆总胆固醇含量矫正，以mol/g表示)的影响，与高脂模型组比较，龙血竭酚类提取物组的MDA水平均显著降低(P<0.05)；与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组的MDA水平无显著变化。图3C为龙血竭酚类提取物对红细胞MDA水平的影响。与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组及龙血竭酚类提取物组的MDA水平均显著降低(P<0.001)。说明龙血竭酚类提取物有抗氧化作用。

4.龙血竭酚类提取物对主动脉内膜下脂质沉积的影响

图4为采用油红O染色的方法研究龙血竭酚类提取物对主动脉内膜下脂质沉积的影响。高脂模型组油红O染色显示大量脂质沉积(1.853×10⁶±494706μm²)；与高脂模型组比较，龙血竭酚类提取物低、中、高剂量组脂质沉积均显著减少，分别为25.05％,25.86％,23.47％(P<0.05)；与高脂模型组比较，依折麦布阳性药组无显著变化。

实施例1片剂

取龙血竭酚类提取物，加入淀粉等片剂常规辅料，研磨混合过筛，干法制粒，整粒，压制成片剂。

实施例2胶囊剂

取龙血竭酚类提取物，加入淀粉、乳糖等胶囊剂常规辅料，混匀，过筛，灌装制备成胶囊剂。

实施例3颗粒剂

取龙血竭酚类提取物，加入淀粉、糖粉、硬脂酸镁等颗粒剂常规辅料，混匀，过筛，干法制粒、，整粒制备成颗粒剂。

实施例4注射剂

取龙血竭酚类提取物，加入甘露醇、注射用水等制备注射剂的常规辅料，按照常规注射剂的生产方法制备得到注射液。

Claims (8)

1.龙血竭酚类提取物或其可药用盐作为活性成分在制备改善血液流变学的药物或保健食品中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的改善血液流变学是指降低血浆脂质含量，降低血浆总胆固醇水平，降低血浆甘油三酯水平，降低血浆低密度脂蛋白水平。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的改善血液流变学是指降低全血粘度。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的改善血液流变学是指改善红细胞变形性及红细胞渗透脆性。

5.龙血竭酚类提取物或其可药用盐作为活性成分在制备预防和/或治疗高脂血症药物中的用途。

6.龙血竭酚类提取物或其可药用盐与其他中药或化学药组成复方在制备改善血液流变学的药物或保健食品中的用途。

7.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的药物制成药学上认可的任何一种剂型。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述的药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液、悬浮剂、注射液。