CN106106145B - 一种野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种野茉莉种胚苗茎段离体快速繁殖方法,涉及植物组织培养方法,包括以下步骤:选取野茉莉种子,用清水洗净,消毒,剥取种胚接种至初代培养基获得无菌苗;用带腋芽的茎段增殖培养,调节光照和温度,诱导丛生芽;将芽转入诱导生根培养基,调节光照和温度,培养得到野茉莉组培生根苗;炼苗培养,露地栽培。经过组培快繁试验,增殖系数可达3.4。本发明缩短了野茉莉的繁殖周期。

Description

一种野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养方法,尤其是涉及野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖方法。
背景技术
野茉莉是安息香科野茉莉属植物,落叶小乔木或灌木,花期4~7月,木材为散孔材,黄白色至淡褐色,纹理致密,材质稍坚硬,可作器具、雕刻等细工用材;种子油可作肥皂或机器润滑油,油粕可作肥料;花美丽、芳香,可作庭园观赏植物,具有较高的经济和观赏价值。野茉莉多处于野生状态,具有较大的开发利用潜力。野茉莉种9~11月成熟,其种子外皮坚硬,透水性差,内种皮中有一层致密保护膜包裹着种胚,对种子发芽有抑制作用,对野茉莉进行过发芽繁殖研究,未取得良好效果。建立野茉莉组织培养和快速繁殖技术,对野茉莉种质资源的保护以及开发利用有一定的参考价值。野茉莉的组织培养目前尚未见报道。
发明内容
一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于包括以下步骤:
A.选取野茉莉种子消毒处理后,无菌条件下分离种胚并接种于MS培养基,获得无菌种胚苗;
B.切取步骤A种胚苗茎段,接种于增殖培养基中诱导丛生芽;
C.将步骤B形成的芽接种于生根培养基中,诱导生根,以获得生根苗;
D.将步骤C小苗先后经温室炼苗、温室移栽,得到健壮的野茉莉苗。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤A中所述种子消毒具体方法为:选用饱满野茉莉种子,剥除木质种皮,流水冲洗12h,蒸馏水冲洗1遍,于超净工作台上用75% 酒精浸泡1min,期间进行搅拌,然后转入0.1% NaCIO溶液中灭菌15 min,无菌水冲洗5~6次。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤A所选外植体材料为野茉莉成熟种胚。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤A中所述初代培养基为MS培养基。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤B中所述无菌苗的茎段每2~3个节剪成一段,插入增殖培养基诱导丛生芽,增殖培养基为:MS+细胞分裂素6- 苄氨基腺嘌呤0.3mgL-1和MS+6-苄氨基腺嘌呤0.3mgL-1+吲哚丁酸0.3mgL-1。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤C诱导生根的具体步骤是:将无菌苗转入MS+吲哚丁酸(IBA)100 mgL-1处理7d,再转入1/2MS培养基中进行培养。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤D中所述炼苗移栽方法为:将生根苗从组培室转移到室温散射光条件下,先拧松瓶盖炼苗7d,然后揭开瓶盖,于室内放置4~5d,取出生根苗(根长约2.0 ~3.0cm),洗净根部培养基,温室移栽,基质为珍珠岩与草炭按照1:1比例混合而成,基质湿度为70% 左右,覆膜保湿,待长出新叶后,逐步撤去覆膜。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于培养基均添加3%蔗糖和0.8%琼脂,pH 为5.8~6.0。
所述的野茉莉组培方法,其特征在于步骤A-D中材料培育的环境条件为:温度24±2℃,光照时间12h/d,光照强度2500~2800lux。
附图说明
图1-4:本发明所述野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖情况。
其中:图1:种胚初代培养;图2:芽增殖;图3:芽增殖后壮苗;图4:生根情况。
具体实施方式
本发明提供了一种野茉莉种胚茎段离体快繁方法,其包括以下步骤:
1、选用饱满野茉莉种子,剥除木质种皮,流水冲洗12h,蒸馏水冲洗1遍,于超净工作台上用75%酒精浸泡1min,期间进行搅拌,然后转入0.1%的NaCIO溶液中灭菌15min,无菌水冲洗5~6次后,切取种胚置于MS培养基中获得无菌苗。
2、将长成的种胚苗茎段每2~3个节剪成一段,插入增殖培养基诱导丛生芽,25d后最大增殖系数达5.55。
3、将无菌苗(>2.5cm有效无根苗)转入MS+吲哚丁酸(IBA)100 mgL-1处理7d,再转入MS培养,25d后生根率( 生根苗数/ 接入的茎段苗数×100% ) 为77.8%,平均根数为3条, 根长约2.0~3.0cm。
4、将生根苗(根长约2.0~3.0cm)从组培室转移到室温散射光条件下,先拧松瓶盖炼苗7d,然后揭开瓶盖,于室内放置3~4d,取出生根苗,洗净根部培养基,温室移栽,基质为珍珠岩与草炭按照1:1 比例混合而成,基质湿度为70% 左右,覆膜保湿,待长出新叶后,逐步撤去覆膜。
并且上述MS培养基具体配方为:硝酸铵1650.0mg/L,硝酸钾1900.0mg/L,二水合氯化钙440.0mg/L,七水硫酸镁370.0mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,七水硫酸铁27.8mg/L,碘化钾0.83mg/L,四水硫酸锰22.3mg/L,二水钼酸钠0.25mg/L,硼酸6.2mg/L,五水硫酸铜0.025mg/L,六水氯化钴0.025mg/L,肌醇100.0mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,盐酸吡哆醇0.5mg/L,甘氨酸2.0mg/L。
1/2 MS培养基组分为:硝酸铵825.0mg/L,硝酸钾950.0mg/L,二水合氯化钙220.0mg/L,七水硫酸镁185.0mg/L,磷酸二氢钾85.0mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,七水硫酸铁27.8mg/L,碘化钾0.83mg/L,四水硫酸锰22.3mg/L,二水钼酸钠0.25mg/L,硼酸6.2mg/L,五水硫酸铜0.025mg/L,六水氯化钴0.025mg/L,肌醇100.0mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,盐酸吡哆醇0.5mg/L,甘氨酸2.0mg/L)。
上述初代培养基、增殖培养基、生根培养基,pH均为5.8~6.0;上述材料培育过程中的环境条件均为:温度24±2℃,光照时间12h/d,光照强度2500~2800lux。
当然,以上说明仅仅为本发明的较佳实施案例,本发明并不限于列举上述实施案例,应当说明的是,任何熟悉本领域的技术人员在本说明书的教导下,所做出的所有等同替代、明显变形等形式,均在本说明书的实质范围之内,理应受到本发明的保护。

Claims (7)

1.一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于包括以下步骤:
A .选取野茉莉种子消毒处理后,切取种胚接种于初代培养基,获得无菌苗;
B .将步骤A获得的无菌苗剪取茎段接种到增殖培养基中,诱导丛生芽;
C .将步骤B形成的芽接种于生根培养基中,诱导生根,获得生根苗;
D .将步骤C小苗先后经温室炼苗、温室移栽,得到健壮的野茉莉苗;
步骤A中初代培养基为MS培养基,所述MS培养基组分为:硝酸铵1650.0mg/L,硝酸钾1900.0mg/L,二水合氯化钙440.0mg/L,七水硫酸镁370.0mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,七水硫酸铁27.8mg/L,碘化钾0.83mg/L,四水硫酸锰22.3mg/L,二水钼酸钠0.25mg/L,硼酸6.2mg/L,五水硫酸铜0.025mg/L,六水氯化钴0.025mg/L,肌醇100.0mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,盐酸吡哆醇0.5 mg/L,甘氨酸2.0 mg/L;
步骤B中增殖培养基为:MS+细胞分裂素6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0.3mg•L-1或MS+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0.3mg•L-1+吲哚丁酸(IBA) 0.3mg•L-1,其中的MS为步骤A中所述MS培养基组分;
步骤C诱导生根的具体步骤是:将无菌苗转入MS+吲哚丁酸100 mg•L-1处理7d,再转入1/2 MS培养基中进行培养,其中MS同样为步骤A中所述MS培养基组分;
所述1/2 MS培养基组分为:硝酸铵825.0mg/L,硝酸钾950.0mg/L,二水合氯化钙220.0mg/L,七水硫酸镁185.0mg/L,磷酸二氢钾85.0mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,七水硫酸铁27.8mg/L,碘化钾0.83mg/L,四水硫酸锰22.3mg/L,二水钼酸钠0.25mg/L,硼酸6.2mg/L,五水硫酸铜0.025mg/L,六水氯化钴0.025mg/L,肌醇100.0mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,盐酸吡哆醇0.5 mg/L,甘氨酸2.0mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于步骤A种子消毒具体方法为:选取饱满野茉莉种子,剥除木质种皮,流水冲洗12h,蒸馏水冲洗1遍,于超净工作台上用75%酒精浸泡1min,期间搅拌,然后转入0.1% NaCIO溶液中灭菌15 min,无菌水冲洗5 ~6次。
3.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于步骤A所选外植体材料为野茉莉成熟种胚。
4.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于步骤B中诱导增殖的具体步骤是:将无菌苗茎段每2~3个节剪成一段,插入增殖培养基诱导丛生芽。
5.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于步骤D中炼苗移栽方法为:将生根苗从培养室转移到室温散射光条件下先拧松瓶盖炼苗7d,然后揭开瓶盖,于室内放置4~5d,取出生根苗,根长2.0~3.0cm,洗净根部培养基,温室移栽,基质为珍珠岩与草炭按照1:1比例混合而成,基质湿度为70%,覆膜保湿,待长出新叶后,逐步撤去覆膜。
6.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于培养基均添加3%蔗糖和0.8%琼脂,pH为5.8~6.0。
7.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法,其特征在于步骤A-D中材料培育的环境条件为:温度24±2℃,光照时间12h/d,光照强度2500~2800lux。
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