CN106106145B - 一种野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种野茉莉种胚苗茎段离体快速繁殖方法，涉及植物组织培养方法，包括以下步骤：选取野茉莉种子，用清水洗净，消毒，剥取种胚接种至初代培养基获得无菌苗；用带腋芽的茎段增殖培养，调节光照和温度，诱导丛生芽；将芽转入诱导生根培养基，调节光照和温度，培养得到野茉莉组培生根苗；炼苗培养，露地栽培。经过组培快繁试验，增殖系数可达3.4。本发明缩短了野茉莉的繁殖周期。

Description

一种野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养方法，尤其是涉及野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖方法。
背景技术
野茉莉是安息香科野茉莉属植物，落叶小乔木或灌木，花期4～7月，木材为散孔材，黄白色至淡褐色，纹理致密，材质稍坚硬，可作器具、雕刻等细工用材；种子油可作肥皂或机器润滑油，油粕可作肥料；花美丽、芳香，可作庭园观赏植物，具有较高的经济和观赏价值。野茉莉多处于野生状态，具有较大的开发利用潜力。野茉莉种9～11月成熟，其种子外皮坚硬，透水性差，内种皮中有一层致密保护膜包裹着种胚，对种子发芽有抑制作用，对野茉莉进行过发芽繁殖研究，未取得良好效果。建立野茉莉组织培养和快速繁殖技术，对野茉莉种质资源的保护以及开发利用有一定的参考价值。野茉莉的组织培养目前尚未见报道。
发明内容
一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
A.选取野茉莉种子消毒处理后，无菌条件下分离种胚并接种于MS培养基，获得无菌种胚苗；
B.切取步骤A种胚苗茎段，接种于增殖培养基中诱导丛生芽；
C.将步骤B形成的芽接种于生根培养基中，诱导生根，以获得生根苗；
D.将步骤C小苗先后经温室炼苗、温室移栽，得到健壮的野茉莉苗。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤A中所述种子消毒具体方法为：选用饱满野茉莉种子，剥除木质种皮，流水冲洗12h，蒸馏水冲洗1遍，于超净工作台上用75% 酒精浸泡1min，期间进行搅拌，然后转入0.1% NaCIO溶液中灭菌15 min，无菌水冲洗5～6次。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤A所选外植体材料为野茉莉成熟种胚。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤A中所述初代培养基为MS培养基。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤B中所述无菌苗的茎段每2～3个节剪成一段，插入增殖培养基诱导丛生芽，增殖培养基为：MS+细胞分裂素6- 苄氨基腺嘌呤0.3mgL-1和MS+6-苄氨基腺嘌呤0.3mgL-1+吲哚丁酸0.3mgL-1。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤C诱导生根的具体步骤是：将无菌苗转入MS+吲哚丁酸(IBA)100 mgL-1处理7d，再转入1/2MS培养基中进行培养。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤D中所述炼苗移栽方法为：将生根苗从组培室转移到室温散射光条件下，先拧松瓶盖炼苗7d，然后揭开瓶盖，于室内放置4～5d，取出生根苗（根长约2.0 ～3.0cm），洗净根部培养基，温室移栽，基质为珍珠岩与草炭按照1:1比例混合而成，基质湿度为70% 左右，覆膜保湿，待长出新叶后，逐步撤去覆膜。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于培养基均添加3%蔗糖和0.8%琼脂，pH 为5.8～6.0。
所述的野茉莉组培方法，其特征在于步骤A-D中材料培育的环境条件为：温度24±2℃，光照时间12h/d，光照强度2500～2800lux。
附图说明
图1-4：本发明所述野茉莉种胚苗茎段的离体快速繁殖情况。
其中：图1：种胚初代培养；图2：芽增殖；图3：芽增殖后壮苗；图4：生根情况。
具体实施方式
本发明提供了一种野茉莉种胚茎段离体快繁方法，其包括以下步骤：
1、选用饱满野茉莉种子，剥除木质种皮，流水冲洗12h，蒸馏水冲洗1遍，于超净工作台上用75%酒精浸泡1min，期间进行搅拌，然后转入0.1%的NaCIO溶液中灭菌15min，无菌水冲洗5～6次后，切取种胚置于MS培养基中获得无菌苗。
2、将长成的种胚苗茎段每2～3个节剪成一段，插入增殖培养基诱导丛生芽，25d后最大增殖系数达5.55。
3、将无菌苗（>2.5cm有效无根苗）转入MS+吲哚丁酸(IBA)100 mgL-1处理7d，再转入MS培养，25d后生根率( 生根苗数/ 接入的茎段苗数×100％ ) 为77.8％，平均根数为3条， 根长约2.0～3.0cm。
4、将生根苗（根长约2.0～3.0cm）从组培室转移到室温散射光条件下，先拧松瓶盖炼苗7d，然后揭开瓶盖，于室内放置3～4d，取出生根苗，洗净根部培养基，温室移栽，基质为珍珠岩与草炭按照1:1 比例混合而成，基质湿度为70% 左右，覆膜保湿，待长出新叶后，逐步撤去覆膜。
并且上述MS培养基具体配方为：硝酸铵1650.0mg/L，硝酸钾1900.0mg/L，二水合氯化钙440.0mg/L，七水硫酸镁370.0mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水硫酸铁27.8mg/L，碘化钾0.83mg/L，四水硫酸锰22.3mg/L，二水钼酸钠0.25mg/L，硼酸6.2mg/L，五水硫酸铜0.025mg/L，六水氯化钴0.025mg/L，肌醇100.0mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，甘氨酸2.0mg/L。
1/2 MS培养基组分为：硝酸铵825.0mg/L，硝酸钾950.0mg/L，二水合氯化钙220.0mg/L，七水硫酸镁185.0mg/L，磷酸二氢钾85.0mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水硫酸铁27.8mg/L，碘化钾0.83mg/L，四水硫酸锰22.3mg/L，二水钼酸钠0.25mg/L，硼酸6.2mg/L，五水硫酸铜0.025mg/L，六水氯化钴0.025mg/L，肌醇100.0mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，甘氨酸2.0mg/L）。
上述初代培养基、增殖培养基、生根培养基，pH均为5.8～6.0；上述材料培育过程中的环境条件均为：温度24±2℃，光照时间12h/d，光照强度2500～2800lux。
当然，以上说明仅仅为本发明的较佳实施案例，本发明并不限于列举上述实施案例，应当说明的是，任何熟悉本领域的技术人员在本说明书的教导下，所做出的所有等同替代、明显变形等形式，均在本说明书的实质范围之内，理应受到本发明的保护。

Claims (7)

1.一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
A .选取野茉莉种子消毒处理后，切取种胚接种于初代培养基，获得无菌苗；
B .将步骤A获得的无菌苗剪取茎段接种到增殖培养基中，诱导丛生芽；
C .将步骤B形成的芽接种于生根培养基中，诱导生根，获得生根苗；
D .将步骤C小苗先后经温室炼苗、温室移栽，得到健壮的野茉莉苗；
步骤A中初代培养基为MS培养基，所述MS培养基组分为：硝酸铵1650.0mg/L，硝酸钾1900.0mg/L，二水合氯化钙440.0mg/L，七水硫酸镁370.0mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水硫酸铁27.8mg/L，碘化钾0.83mg/L，四水硫酸锰22.3mg/L，二水钼酸钠0.25mg/L，硼酸6.2mg/L，五水硫酸铜0.025mg/L，六水氯化钴0.025mg/L，肌醇100.0mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L；
步骤B中增殖培养基为：MS+细胞分裂素6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0.3mg•L-1或MS+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0.3mg•L-1+吲哚丁酸(IBA) 0.3mg•L-1，其中的MS为步骤A中所述MS培养基组分；
步骤C诱导生根的具体步骤是：将无菌苗转入MS+吲哚丁酸100 mg•L-1处理7d，再转入1/2 MS培养基中进行培养，其中MS同样为步骤A中所述MS培养基组分；
所述1/2 MS培养基组分为：硝酸铵825.0mg/L，硝酸钾950.0mg/L，二水合氯化钙220.0mg/L，七水硫酸镁185.0mg/L，磷酸二氢钾85.0mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水硫酸铁27.8mg/L，碘化钾0.83mg/L，四水硫酸锰22.3mg/L，二水钼酸钠0.25mg/L，硼酸6.2mg/L，五水硫酸铜0.025mg/L，六水氯化钴0.025mg/L，肌醇100.0mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5 mg/L，甘氨酸2.0mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于步骤A种子消毒具体方法为：选取饱满野茉莉种子，剥除木质种皮，流水冲洗12h，蒸馏水冲洗1遍，于超净工作台上用75%酒精浸泡1min，期间搅拌，然后转入0.1% NaCIO溶液中灭菌15 min，无菌水冲洗5 ~6次。
3.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于步骤A所选外植体材料为野茉莉成熟种胚。
4.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于步骤B中诱导增殖的具体步骤是：将无菌苗茎段每2~3个节剪成一段，插入增殖培养基诱导丛生芽。
5.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于步骤D中炼苗移栽方法为：将生根苗从培养室转移到室温散射光条件下先拧松瓶盖炼苗7d，然后揭开瓶盖，于室内放置4~5d，取出生根苗，根长2.0～3.0cm，洗净根部培养基，温室移栽，基质为珍珠岩与草炭按照1:1比例混合而成，基质湿度为70%，覆膜保湿，待长出新叶后，逐步撤去覆膜。
6.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于培养基均添加3%蔗糖和0.8%琼脂，pH为5.8～6.0。
7.根据权利要求1所述的一种野茉莉种胚苗茎段离体快繁方法，其特征在于步骤A-D中材料培育的环境条件为：温度24±2℃，光照时间12h/d，光照强度2500～2800lux。
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