CN106086133A - 一种酶法制备榛子蛋白的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种酶法制备榛子蛋白的方法，包括：榛子粕粉原料的制备；榛子蛋白萃取液的制备；调节榛子蛋白萃取液pH，加入一次复合酶进行超声辅助酶解，得到一次酶解液；调节一次酶解液pH，加入二次复合酶进行超声辅助酶解，得到二次酶解液；调节二次酶解液pH进行酸沉处理，得到一次蛋白；调节一次蛋白pH，并将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液；调节蛋白复溶液的pH，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，得到三次酶解液；调节三次酶解液pH进行酸沉处理，得到二次蛋白；对二次蛋白进行微波灭酶处理，既得成品的榛子蛋白。该酶法制备榛子蛋白的方法，工艺安全、制备便捷，提取的榛子蛋白纯度高达85.0%以上。

Description

一种酶法制备榛子蛋白的方法
技术领域
本发明涉及榛子蛋白技术领域，具体涉及一种酶法制备榛子蛋白的方法。
背景技术
榛子是“四大坚果”之一，是木本油料作物。其主产地在土耳其，在我国，榛子的大面积栽培种植比较少，但东北、华北的广大山区，都有野生品种。榛子含有丰富的脂肪，主要是人体不能自身合成的不饱和脂肪酸，榛子仁中蛋白质含量也特别高，明显的高于其它坚果。铁岭榛子蛋白质含量达到22%，蛋白质中氨基酸含量高，占49.5%，人体必需的八种氨基酸样样都有。通过低温冷榨脱油后的榛子蛋白质含量高达44.6%-50%，开发前景广阔。虽然近年来，我国榛子年产量越来越高，但是总体产量还是偏低，所以开发出一种能高效利用榛子的方法很重要。榛子蛋白是榛子主要营养物质之一，目前，水相萃取法是一种应用于植物蛋白中提取比较广泛的方法，该方法工艺简单、成本低，易于工业化生产，但是提取的蛋白的纯度只能达到60%～75%。因此，研究一种高纯度榛子蛋白的制备方法很有必要。
发明内容
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺安全、制备便捷、提取的榛子蛋白纯度高的酶法制备榛子蛋白的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种酶法制备榛子蛋白的方法，包括如下步骤：步骤一、榛子粕粉原料的制备；步骤二、榛子蛋白萃取液的制备：将榛子粕粉原料和水混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8～8.5，并进行超声波辅助萃取，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至8.5～9，并进行超声波辅助萃取，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液；步骤三、一次酶解：调节榛子蛋白萃取液的pH至8～8.5，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，得到一次酶解液；步骤四、二次酶解：调节一次酶解液的pH至8.5～9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，得到二次酶解液；步骤五、一次酸沉：调节二次酶解液pH至4.6～4.7进行酸沉处理，得到一次蛋白；步骤六、碱液复溶：向一次蛋白中加入氢氧化钠溶液调节pH至10～11，并在温度为40～50℃下将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液； 步骤七、三次酶解：调节蛋白复溶液的pH至9～9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，得到三次酶解液；步骤八、二次酸沉：调节三次酶解液的pH 至4.4～4.6进行酸沉处理，得到二次蛋白；步骤九、微波灭酶：对二次蛋白进行微波灭酶处理，得到灭酶蛋白，将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。
优选的，所述步骤一中榛子粕粉原料的制备过程如下：将榛子去壳粉碎后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的榛子粕，其残油量为1.1～1.9%，并将脱脂的榛子粕粉碎过筛得到颗粒大小为100～150目筛的榛子粕粉原料。
优选的，所述步骤二中榛子蛋白萃取液的制备过程如下：将榛子粕粉原料和水按料液比1g:8～10mL混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8～8.5，并通过超声波辅助萃取30～40分钟，萃取温度为35～40℃，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水按料液比1g:10～15mL混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至8.5～9，并通过超声波辅助萃取15～20分钟，萃取温度为45～50℃，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液。
优选的，所述步骤三中一次酶解的过程如下：调节榛子蛋白萃取液的pH至8～8.5，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，一次复合酶采用风味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量为1：3～6：2～4，且一次复合酶的加入量为榛子蛋白萃取液用量的2000～3000u/g，酶解反应温度为40～45℃，酶解反应时间为80～90分钟，超声强度为1.0～1.1W/cm3，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。
优选的，所述步骤四中二次酶解的过程如下：调节一次酶解液的pH至8.5～9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，二次复合酶采用原果胶酶+碱性果胶酶+果胶甲酯水解酶，所述原果胶酶、碱性果胶酶和果胶甲酯水解酶的用量为1：4～8：3～6，且二次复合酶的加入量为一次酶解液用量的1500～2000u/g，酶解反应温度为45～50℃，酶解反应时间为70～80分钟，超声强度为1.1～1.2W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
优选的，所述步骤七中三次酶解的过程如下：调节蛋白复溶液的pH至9～9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，三次复合酶采用碱性纤维素酶+碱性半纤维素酶，所述碱性纤维素酶和碱性半纤维素酶的用量为1：3～6，且三次复合酶的加入量为蛋白复溶液用量的1000～1500u/g，酶解反应温度为50～55℃，酶解反应时间为60～70分钟，超声强度为1.2～1.3W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
优选的，所述步骤九中微波灭酶的过程如下：对二次蛋白进行微波灭酶处理，微波功率为500～800W，灭酶温度为80～90℃，灭酶时间为2～3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶蛋白；将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。
本发明与现有技术相比，其有益效果是：本发明提供的酶法制备榛子蛋白的方法，通过对榛子粕粉原料先后两次进行超声波辅助萃取，可使得榛子粕粉原料中的榛子蛋白充分溶出，极大缩短了榛子蛋白的提取时间；通过先后依次进行两次酸沉和碱液复溶处理，可将榛子蛋白中其它杂质有效分离，从而提高榛子蛋白的纯度；通过分别依次采用一次复合酶、二次复合酶、三次复合酶进行酶解处理，以提供合适的微环境来溶解榛子蛋白，有效提高了榛子蛋白的提取率和纯度；该酶法制备榛子蛋白的方法，工艺安全、制备便捷，提取的榛子蛋白纯度高达85.0%以上。
附图说明
图1是本发明所述酶法制备榛子蛋白的方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
如图1所示，本发明提供了一种酶法制备榛子蛋白的方法，包括如下步骤：
步骤一、榛子粕粉原料的制备：将榛子去壳粉碎后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的榛子粕，其残油量为1.1～1.9%，并将脱脂的榛子粕粉碎过筛得到颗粒大小为100～150目筛的榛子粕粉原料；
步骤二、榛子蛋白萃取液的制备：将榛子粕粉原料和水按料液比1g:8～10mL混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8～8.5，并通过超声波辅助萃取30～40分钟，萃取温度为35～40℃，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水按料液比1g:10～15mL混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至8.5～9，并通过超声波辅助萃取15～20分钟，萃取温度为45～50℃，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液；通过对榛子粕粉原料先后两次进行超声波辅助萃取，可使得榛子粕粉原料中的榛子蛋白充分溶出，极大缩短了榛子蛋白的提取时间；
步骤三、一次酶解：调节榛子蛋白萃取液的pH至8～8.5，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，一次复合酶采用风味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量为1：3～6：2～4，且一次复合酶的加入量为榛子蛋白萃取液用量的2000～3000u/g，酶解反应温度为40～45℃，酶解反应时间为80～90分钟，超声强度为1.0～1.1W/cm3，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；
步骤四、二次酶解：调节一次酶解液的pH至8.5～9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，二次复合酶采用原果胶酶+碱性果胶酶+果胶甲酯水解酶，所述原果胶酶、碱性果胶酶和果胶甲酯水解酶的用量为1：4～8：3～6，且二次复合酶的加入量为一次酶解液用量的1500～2000u/g，酶解反应温度为45～50℃，酶解反应时间为70～80分钟，超声强度为1.1～1.2W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；
步骤五、一次酸沉：调节二次酶解液pH至4.6～4.7进行酸沉处理，待出现絮状物后静置1～1.5小时，离心分离得到一次蛋白；
步骤六、碱液复溶：向一次蛋白中加入氢氧化钠溶液调节pH至10～11，并在温度为40～50℃下将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液；
步骤七、三次酶解：调节蛋白复溶液的pH至9～9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，三次复合酶采用碱性纤维素酶+碱性半纤维素酶，所述碱性纤维素酶和碱性半纤维素酶的用量为1：3～6，且三次复合酶的加入量为蛋白复溶液用量的1000～1500u/g，酶解反应温度为50～55℃，酶解反应时间为60～70分钟，超声强度为1.2～1.3W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；通过分别依次采用一次复合酶、二次复合酶、三次复合酶进行酶解处理，以提供合适的微环境来溶解榛子蛋白，有效提高了榛子蛋白的提取率和纯度；
步骤八、二次酸沉：调节三次酶解液的pH 至4.4～4.6进行酸沉处理，待出现絮状物后静置1～1.5小时，离心分离得到二次蛋白；通过先后依次进行两次酸沉和碱液复溶处理，可将榛子蛋白中其它杂质有效分离，从而提高榛子蛋白的纯度；
步骤九、微波灭酶：对二次蛋白进行微波灭酶处理，微波功率为500～800W，灭酶温度为80～90℃，灭酶时间为2～3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶蛋白；将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。
实施例1：
将榛子去壳粉碎后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的榛子粕，其残油量为1.1%，并将脱脂的榛子粕粉碎过筛得到颗粒大小为130目筛的榛子粕粉原料；将榛子粕粉原料和水按料液比1g:10mL混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8，并通过超声波辅助萃取35分钟，萃取温度为40℃，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水按料液比1g:15mL混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至8.5，并通过超声波辅助萃取15分钟，萃取温度为50℃，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液；调节榛子蛋白萃取液的pH至8.5，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，一次复合酶采用风味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量为1：3：2，且一次复合酶的加入量为榛子蛋白萃取液用量的2500u/g，酶解反应温度为40℃，酶解反应时间为85分钟，超声强度为1.0W/cm3，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；调节一次酶解液的pH至9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，二次复合酶采用原果胶酶+碱性果胶酶+果胶甲酯水解酶，所述原果胶酶、碱性果胶酶和果胶甲酯水解酶的用量为1：6：3，且二次复合酶的加入量为一次酶解液用量的1500u/g，酶解反应温度为45℃，酶解反应时间为75分钟，超声强度为1.1W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；调节二次酶解液pH至4.6进行酸沉处理，得到一次蛋白；向一次蛋白中加入氢氧化钠溶液调节pH至10，并在温度为50℃下将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液； 调节蛋白复溶液的pH至9，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，三次复合酶采用碱性纤维素酶+碱性半纤维素酶，所述碱性纤维素酶和碱性半纤维素酶的用量为1：6，且三次复合酶的加入量为蛋白复溶液用量的1250u/g，酶解反应温度为50℃，酶解反应时间为70分钟，超声强度为1.2W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；调节三次酶解液的pH 至4.5进行酸沉处理，得到二次蛋白；对二次蛋白进行微波灭酶处理，微波功率为800W，灭酶温度为80℃，灭酶时间为3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶蛋白；将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。其中，榛子蛋白的提取率为74.2%，纯度为87.5%。
实施例2：
将榛子去壳粉碎后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的榛子粕，其残油量为1.5%，并将脱脂的榛子粕粉碎过筛得到颗粒大小为150目筛的榛子粕粉原料；将榛子粕粉原料和水按料液比1g:8mL混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8.5，并通过超声波辅助萃取30分钟，萃取温度为35℃，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水按料液比1g:12mL混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至9，并通过超声波辅助萃取20分钟，萃取温度为45℃，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液；调节榛子蛋白萃取液的pH至8，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，一次复合酶采用风味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量为1：6：4，且一次复合酶的加入量为榛子蛋白萃取液用量的3000u/g，酶解反应温度为45℃，酶解反应时间为80分钟，超声强度为1.1W/cm3，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；调节一次酶解液的pH至8.5，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，二次复合酶采用原果胶酶+碱性果胶酶+果胶甲酯水解酶，所述原果胶酶、碱性果胶酶和果胶甲酯水解酶的用量为1：8：6，且二次复合酶的加入量为一次酶解液用量的1800u/g，酶解反应温度为50℃，酶解反应时间为80分钟，超声强度为1.2W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；调节二次酶解液pH至4.7进行酸沉处理，得到一次蛋白；向一次蛋白中加入氢氧化钠溶液调节pH至11，并在温度为40℃下将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液； 调节蛋白复溶液的pH至9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，三次复合酶采用碱性纤维素酶+碱性半纤维素酶，所述碱性纤维素酶和碱性半纤维素酶的用量为1：4，且三次复合酶的加入量为蛋白复溶液用量的1000u/g，酶解反应温度为55℃，酶解反应时间为65分钟，超声强度为1.3W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；调节三次酶解液的pH 至4.6进行酸沉处理，得到二次蛋白；对二次蛋白进行微波灭酶处理，微波功率为500W，灭酶温度为90℃，灭酶时间为2分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶蛋白；将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。其中，榛子蛋白的提取率为72.3%，纯度为86.8%。
实施例3：
将榛子去壳粉碎后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的榛子粕，其残油量为1.9%，并将脱脂的榛子粕粉碎过筛得到颗粒大小为100目筛的榛子粕粉原料；将榛子粕粉原料和水按料液比1g:9mL混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8，并通过超声波辅助萃取40分钟，萃取温度为40℃，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水按料液比1g:10mL混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至9，并通过超声波辅助萃取20分钟，萃取温度为45℃，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液；调节榛子蛋白萃取液的pH至8，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，一次复合酶采用风味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量为1：4：3，且一次复合酶的加入量为榛子蛋白萃取液用量的2000u/g，酶解反应温度为40℃，酶解反应时间为90分钟，超声强度为1.1W/cm3，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；调节一次酶解液的pH至9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，二次复合酶采用原果胶酶+碱性果胶酶+果胶甲酯水解酶，所述原果胶酶、碱性果胶酶和果胶甲酯水解酶的用量为1：4：4，且二次复合酶的加入量为一次酶解液用量的2000u/g，酶解反应温度为45℃，酶解反应时间为70分钟，超声强度为1.2W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；调节二次酶解液pH至4.6进行酸沉处理，得到一次蛋白；向一次蛋白中加入氢氧化钠溶液调节pH至11，并在温度为45℃下将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液； 调节蛋白复溶液的pH至9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，三次复合酶采用碱性纤维素酶+碱性半纤维素酶，所述碱性纤维素酶和碱性半纤维素酶的用量为1：3，且三次复合酶的加入量为蛋白复溶液用量的1500u/g，酶解反应温度为55℃，酶解反应时间为60分钟，超声强度为1.3W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；调节三次酶解液的pH 至4.4进行酸沉处理，得到二次蛋白；对二次蛋白进行微波灭酶处理，微波功率为600W，灭酶温度为85℃，灭酶时间为3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶蛋白；将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。其中，榛子蛋白的提取率为73.9%，纯度为85.7%。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (7)

1.一种酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、榛子粕粉原料的制备；
步骤二、榛子蛋白萃取液的制备：将榛子粕粉原料和水混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8～8.5，并进行超声波辅助萃取，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至8.5～9，并进行超声波辅助萃取，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液；
步骤三、一次酶解：调节榛子蛋白萃取液的pH至8～8.5，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，得到一次酶解液；
步骤四、二次酶解：调节一次酶解液的pH至8.5～9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，得到二次酶解液；
步骤五、一次酸沉：调节二次酶解液pH至4.6～4.7进行酸沉处理，得到一次蛋白；
步骤六、碱液复溶：向一次蛋白中加入氢氧化钠溶液调节pH至10～11，并在温度为40～50℃下将一次蛋白完全溶解，得到蛋白复溶液；
步骤七、三次酶解：调节蛋白复溶液的pH至9～9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，得到三次酶解液；
步骤八、二次酸沉：调节三次酶解液的pH 至4.4～4.6进行酸沉处理，得到二次蛋白；
步骤九、微波灭酶：对二次蛋白进行微波灭酶处理，得到灭酶蛋白，将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。
2.如权利要求1所述的酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步骤一中榛子粕粉原料的制备过程如下：将榛子去壳粉碎后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的榛子粕，其残油量为1.1～1.9%，并将脱脂的榛子粕粉碎过筛得到颗粒大小为100～150目筛的榛子粕粉原料。
3.如权利要求1所述的酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步骤二中榛子蛋白萃取液的制备过程如下：将榛子粕粉原料和水按料液比1g:8～10mL混匀制得一次浆液，调节一次浆液的pH至8～8.5，并通过超声波辅助萃取30～40分钟，萃取温度为35～40℃，待萃取结束，离心得到上层的一次萃取清液和下层的一次沉淀；再将一次沉淀和水按料液比1g:10～15mL混匀制得二次浆液，调节二次浆液的pH至8.5～9，并通过超声波辅助萃取15～20分钟，萃取温度为45～50℃，待萃取结束，离心得到上层的二次萃取清液和下层的二次沉淀；并将一次萃取清液和二次萃取清液合并混匀，即得榛子蛋白萃取液。
4.如权利要求1所述的酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步骤三中一次酶解的过程如下：调节榛子蛋白萃取液的pH至8～8.5，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，一次复合酶采用风味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量为1：3～6：2～4，且一次复合酶的加入量为榛子蛋白萃取液用量的2000～3000u/g，酶解反应温度为40～45℃，酶解反应时间为80～90分钟，超声强度为1.0～1.1W/cm3，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。
5.如权利要求1所述的酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步骤四中二次酶解的过程如下：调节一次酶解液的pH至8.5～9，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，二次复合酶采用原果胶酶+碱性果胶酶+果胶甲酯水解酶，所述原果胶酶、碱性果胶酶和果胶甲酯水解酶的用量为1：4～8：3～6，且二次复合酶的加入量为一次酶解液用量的1500～2000u/g，酶解反应温度为45～50℃，酶解反应时间为70～80分钟，超声强度为1.1～1.2W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
6.如权利要求1所述的酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步骤七中三次酶解的过程如下：调节蛋白复溶液的pH至9～9.5，并加入三次复合酶进行超声辅助酶解，三次复合酶采用碱性纤维素酶+碱性半纤维素酶，所述碱性纤维素酶和碱性半纤维素酶的用量为1：3～6，且三次复合酶的加入量为蛋白复溶液用量的1000～1500u/g，酶解反应温度为50～55℃，酶解反应时间为60～70分钟，超声强度为1.2～1.3W/cm3，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
7.如权利要求1所述的酶法制备榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步骤九中微波灭酶的过程如下：对二次蛋白进行微波灭酶处理，微波功率为500～800W，灭酶温度为80～90℃，灭酶时间为2～3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶蛋白；将灭酶蛋白水洗至呈中性，并进行冷冻干燥处理，既得成品的榛子蛋白。
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