CN106072670A - 一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，包括以下质量份数的原料：30‑60份牛乳铁蛋白粉、30‑60份盐藻粉，0.01‑0.5份维生素E。本发明还公开一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉的制备方法。本发明具有提高免疫力、抗疲劳，降低胆固醇的优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉及其制备方法。
背景技术
以克为单位，盐藻算得上是地球上营养密度最高的食品之一；在自然的状态下，每个盐藻细胞可以为人体提供全面而平衡的维生素、矿物质和植物营养素(胡萝卜素)；它是最小的消化单位之一，相对于螺旋藻、小球藻等微藻而言，吸收率极高。
盐藻多糖是盐藻所含有一系列具有生物功能活性的多糖的总称，其具有抗病毒、抗肿瘤和抗炎症的功，主要是硫酸葡聚糖、含糖醛酸的硫酸化蛋白聚糖。
杜氏盐藻还含有相当数量的叶绿素，具有清除体内药物残留的毒素和重金属、造血功能，而叶绿素的主题结构叶绿酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗突变的特性。
牛乳铁蛋白是一种多功能的活性糖蛋白，一直备受人们的关注。具有多种其他生物功能，例如抗菌、抗病毒和抗氧化作用，参与机体免疫调节，增强机体抗病能力等。与这些功能相对应，人们针对牛乳铁蛋白的研究与开发也聚焦在这些功能上。
牛乳铁蛋白的活性受到多种因素的影响，在纯化过程中若不进行良好的控制，其活性将损失严重。影响牛乳铁蛋白活性的因素主要有温度、pH、铁饱和度、盐离子等。Ruegg等研究发现牛乳铁蛋白在pH值为6.6时，温度为65～69℃时开始失活。有研究发现将铁蛋白在pH值为4.0，温度90℃加热5min，牛乳铁蛋白的铁结合能力、抗原活性、抑菌性能几乎无变化，可对其进行大批量灭菌；70℃预热3min，然后UHT杀菌(130℃/2s)，铁结合能力只损失了3％；还发现在酸性条件下牛乳铁蛋白较耐热，在中性和碱性条件下则发生浑浊和凝胶化。
维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素，又称生育酚，是最主要的抗氧化剂之一，天然强抗氧化剂维生素E利用其抗氧化特性帮助内在抗氧化防护体系抵御自由基的侵害及清除脂质过氧化自由基。目前关于用牛乳铁蛋白粉、盐藻粉、维生素E为原料制备生物制品的报导和文献资料尚少。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种具有提高免疫力、抗疲劳，降低胆固醇的盐藻复合牛乳铁蛋白粉及其制备方法。
本发明通过以下技术手段实现上述技术效果：一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，包括以下质量份数的原料：30-60份牛乳铁蛋白粉、30-60份盐藻粉，0.01-0.5份维生素E。
优选地，所述蛋白粉中含有40wt.％盐藻粉和、59.8wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E0.2wt.％。
优选地，所述蛋白粉中含有45wt.％盐藻粉、54.9wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E0.1wt.％。
优选地，所述蛋白粉中含有50wt.％盐藻粉、49.5wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E0.5wt.％。
一种制备上述盐藻复合牛乳铁蛋白粉的方法，将所述牛乳铁蛋白、盐藻粉、维生素E进行混合；将所述混合进行干燥，得产物；所述牛乳铁蛋白为经纯化处理的纯化牛乳铁蛋白；
所述纯化牛乳铁蛋白通过以下步骤制备：取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:20～50的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用50～150目滤网进行过滤，加热至60～100℃，保温30～60分钟进行去腥处理，冷却至30～60℃，调节pH在6.0～11.0，再添加牛乳干品重量3～10％的蛋白酶，在40～60℃下酶解2～8小时，升温至80～90℃，保温15～30分钟灭酶杀菌，冷却至10～40℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡3-4倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有15-30vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱3-7倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱2-5倍柱体积，洗脱流速2-5mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液10-20mmol/L、pH值为7.0-8.0的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.2-1mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
优选地，所述缓冲溶液A为40-50mmol/L、pH值为6.5-7.5的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有0.5-1mol/L NaCl的缓冲溶液A。加入盐藻粉，维生素E，充分混合，最终各种原料质量份数比例为每100份包含30-60份牛乳铁蛋白粉、30-60份盐藻粉，0.01-0.5份维生素E。
优选地，将得到的混合物在进风温度为120～180℃，出风温度为60～140℃条件下进行喷雾干燥。
本发明的的优点在于：将牛乳铁蛋白粉、盐藻粉和维生素E通过本发明的配比混合，结合喷雾干燥技术，混合机混合技术制得的盐藻复合牛乳蛋白粉。该复合蛋白粉含有人体所需的8种必需氨基酸，及盐藻粉中所含的盐藻多糖、β-胡萝卜素。具有提高免疫力、抗疲劳，降低胆固醇等功效。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:20的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用50目滤网进行过滤，加热至60℃，保温30分钟进行去腥处理，冷却至30℃，调节pH在6.0，再添加牛乳干品重量3％的蛋白酶，在40℃下酶解2小时，升温至80℃，保温15分钟灭酶杀菌，冷却至10℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡3倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有15vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱4倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱2倍柱体积，洗脱流速2mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液10mmol/L、pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.2mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
优选地，所述缓冲溶液A为40mmol/L、pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有0.5mol/L NaCl的缓冲溶液A。
加入盐藻粉，维生素E，充分混合，最终各种原料质量份数比例为蛋白粉中含有40wt.％盐藻粉、59.8wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.2wt.％
优选地，将得到的混合物在进风温度为120℃，出风温度为60℃条件下进行喷雾干燥。
实施例2
取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:30的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用100目滤网进行过滤，加热至60℃，保温30分钟进行去腥处理，冷却至30℃，调节pH在6.0，再添加牛乳干品重量3％的蛋白酶，在40℃下酶解2小时，升温至80℃，保温15分钟灭酶杀菌，冷却至10℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡2.5倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有15vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱4倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱3.5倍柱体积，洗脱流速3mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液15mmol/L、pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.3mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
优选地，所述缓冲溶液A为40mmol/L、pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有1mol/L NaCl的缓冲溶液A。
加入盐藻粉，维生素E，充分混合，最终各种原料质量份数比例为蛋白粉中含有45wt.％盐藻粉、54.9wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.1wt.％。
优选地，将得到的混合物在进风温度为150℃，出风温度为80℃条件下进行喷雾干燥。
实施例3
取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:40的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用80目滤网进行过滤，加热至80℃，保温30分钟进行去腥处理，冷却至30℃，调节pH在7.0，再添加牛乳干品重量6％的蛋白酶，在50℃下酶解6小时，升温至85℃，保温30分钟灭酶杀菌，冷却至15℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡3倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有20vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱4倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱3倍柱体积，洗脱流速4mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液10mmol/L、pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.2mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
优选地，所述缓冲溶液A为45mmol/L、pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有1mol/L NaCl的缓冲溶液A。
加入盐藻粉，维生素E，充分混合，最终各种原料质量份数比例为蛋白粉中含有50wt.％盐藻粉、49.5wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.5wt.％
优选地，将得到的混合物在进风温度为130℃，出风温度为90℃条件下进行喷雾干燥。
实施例4
取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:40的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用120目滤网进行过滤，加热至80℃，保温50分钟进行去腥处理，冷却至30℃，调节pH在8.0，再添加牛乳干品重量8％的蛋白酶，在50℃下酶解2小时，升温至85℃，保温25分钟灭酶杀菌，冷却至30℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡4倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有15vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱4倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱3倍柱体积，洗脱流速4mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液15mmol/L、pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.5mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
优选地，所述缓冲溶液A为50mmol/L、pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有1mol/L NaCl的缓冲溶液A。
加入盐藻粉，维生素E，充分混合，最终各种原料质量份数比例为蛋白粉中含有49.9wt.％盐藻粉、49.9wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.17wt.％。
优选地，将得到的混合物在进风温度为165℃，出风温度为120℃条件下进行喷雾干燥。
实施例5
取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:50的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用150目滤网进行过滤，加热至100℃，保温60分钟进行去腥处理，冷却至60℃，调节pH在11.0，再添加牛乳干品重量10％的蛋白酶，在60℃下酶解2小时，升温至90℃，保温30分钟灭酶杀菌，冷却至40℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡4倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有30vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱4倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱5倍柱体积，洗脱流速5mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液20mmol/L、pH值为8的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为1mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
优选地，所述缓冲溶液A为50mmol/L、pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有1mol/L NaCl的缓冲溶液A。
加入盐藻粉，维生素E，充分混合，最终各种原料质量份数比例为蛋白粉中含有49.8wt.％盐藻粉、49.8wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.4wt.％。
优选地，将得到的混合物在进风温度为180℃，出风温度为140℃条件下进行喷雾干燥。
附：不同实施例中产品营养成分测定(每100g)
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能以此限定本发明实施的范围，即依本发明申请专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明专利涵盖的范围内。
Claims (7)
1.一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，其特征在于，包括以下质量份数的原料：30-60份牛乳铁蛋白粉、30-60份盐藻粉、0.01-0.5份维生素E。
2.根据权利要求1所述的一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，其特征在于，所述蛋白粉中含有40wt.％盐藻粉和、59.8wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.2wt.％。
3.根据权利要求1所述的一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，其特征在于，所述蛋白粉中含有45wt.％盐藻粉、54.9wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.1wt.％。
4.根据权利要求1所述的一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，其特征在于，所述蛋白粉中含有50wt.％盐藻粉、49.5wt.％牛乳铁蛋白粉、维生素E 0.5wt.％。
5.一种制备如权利要求1-4任一项所述的盐藻复合牛乳铁蛋白粉的方法，其特征在于，将所述牛乳铁蛋白、盐藻粉、维生素E进行混合；将所述混合进行干燥，得产物；所述牛乳铁蛋白为经纯化处理的纯化牛乳铁蛋白；
所述纯化牛乳铁蛋白通过以下步骤制备：取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:20～50的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用50～150目滤网进行过滤，加热至60～100℃，保温30～60分钟进行去腥处理，冷却至30～60℃，调节pH在6.0～11.0，再添加牛乳干品重量3～10％的蛋白酶，在40～60℃下酶解2～8小时，升温至80～90℃，保温15～30分钟灭酶杀菌，冷却至10～40℃，即得牛乳多肽酶解液；
将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡3-4倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有15-30vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱3-7倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱2-5倍柱体积，洗脱流速2-5mL/min；
上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液10-20mmol/L、pH值为7.0-8.0的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.2-1mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。
6.根据权利要求5所述的一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液A为40-50mmol/L、pH值为6.5-7.5的磷酸盐缓冲溶液；所述缓冲溶液B为含有0.5-1mol/L NaCl的缓冲溶液A。
7.根据权利要求5所述的一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉的制备方法，其特征在于，将得到的混合物在进风温度为120～180℃，出风温度为60～140℃条件下进行喷雾干燥。
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2016
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