CN106053415A - 一种荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法 - Google Patents

一种荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，包括如下步骤：步骤1、多壁碳纳米管/氧化石墨烯纳米带MWCNTs/GONRs分散液的制备；步骤2、氮硫同杂石墨烯量子点(NSGQDs)溶液的制备；步骤3、氮硫同杂石墨烯量子点‑捕获探针(NSGQDs‑ssDNA)分散液的制备；步骤4、荧光共振能量转移传感器的构建；步骤5、标准曲线的构建；步骤6、基于MWCNTs/GONRs‑NSGQDs‑ssDNA构建的FRET传感器对转基因大豆的检测。该方法具有FRET传感器所具有的操作简便灵活、分析速度快的特点，适用于快速检测分析。

Description

一种荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子 的检测方法
技术领域
本发明属于材料制备及荧光共振能量转移领域，特指一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法。
背景技术
转基因作物(Genetically Modified Organisms，简称GMOs)是指利用生物技术，把从动物、植物或微生物等生物体中经鉴定、分离的目的基因插入植物基因组中，改变其遗传组成，产生新的农艺性状的植物。目前转基因检测方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫试纸条法和蛋白质芯片，聚合酶链式反应(PCR)法等。但是基于蛋白的检测方法背景信号高、蛋白质活性难以长久保持、开发特异性抗体的成本高、加工过的转基因产品其蛋白质发生变性而无法进行检测。基于RAN的检测收到RNA容易降解和对实验条件要求较高的限制，从而较难普及。而尽管PCR方法是高灵敏度的DNA水平检测方法，但是常伴有各种假性结果出现：一方面，DNA提取时产生的各种反应抑制因子，可能使PCR呈假阴性；另一方面，PCR过程中容易引入非特异性扩增，从而使PCR呈假阳性。此外，PCR样品需要量大，操作繁琐，检测时间长，还容易造成定量不准确等一系列问题。因此，发展一种非PCR扩增的快速检测方法成为GMO检测所追求的目标。
石墨烯纳米带(Graphene Nanoribbons,GNRs)是最近被发现的又一种新型碳质纳米材料，其结构介于一维碳纳米管和二维石墨烯纳米片之间，被认为是拉长的石墨带，具有准一维蜂窝构型单层带状结构，以及优异的性能，如导电性较好、材料容易制备、表面含有大量的含氧官能团而容易功能化等，研究者们已初步将其应用于电子学、光学、磁学、生物医学、催化、传感器等诸多领域。石墨烯材料自身具有荧光性能，能够通过荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，FRET)来有效猝灭其他分子的荧光，传统的荧光能量转移速率由供体与受体距离(d)的负6次方决定，而石墨烯材料与荧光分子的荧光能量转移速率取决于d的负4次方，荧光淬灭效率更高。但是，石墨烯纳米片之间由于存在强烈的相互作用，易于重新堆砌成石墨，这给石墨烯的应用研究造成严重的障碍。通过选择合适的功能材料与其杂化，形成石墨烯杂化材料，不仅可以有效地阻止石墨烯纳米片的重新聚集，而且所制备的石墨烯杂化材料还可能会被赋予更加优异的物理化学性能[153]。最近的研究发现，通过将碳纳米管与石墨烯进行复合，所得到的MWCNTs/GONRs，不仅可以保持碳纳米 管良好的机械性能，而且可以有效增加石墨烯纳米片的层间距使其不易团聚，具有良好的分散性。
量子点是一种新型荧光纳米材料，相对于传统有机荧光染料分子，量子点的发射光谱窄而且不拖尾，因而，以量子点为给体的荧光共振能量转移，可减少给体与受体发射光谱的重叠；量子点的激发光谱范围较宽，当它作为能量给体时，可以更自由地选择激发波长，从而最大限度地避免对受体的直接激发；量子点的发射光谱可调，也就是说它可以为吸收光谱在可见区的任一生色团作能量给体。所以，量子点应用于荧光共振能量转移的研究，已受到广大科研工作者的广泛关注。由于具有良好的化学惰性、生物相容性和较低的生物毒性，在生物成像、疾病检测、药物输送和光电器件应用领域中引起了极大关注。而氮、硫元素的参杂是一种对量子点性能调节非常有效的方法。氮硫同杂石墨烯量子点(NSGQDs)中通过化学键合N,S原子，可改变其性能，如提高荧光量子产率，提供更多的活性位点，其荧光性能明显增强等。NSGQDs具有稳定的荧光信号，其最佳激发光谱在350nm，而荧光发射光谱位于425nm处。
NSGQDs和MWCNTs/GONRs分别作为FRET传感器的能量供体和受体。捕获探针DNA(ssDNA)末端修饰氨基，与NSGQDs的羧基通过酰胺反应，形成NSGQDs-ssDNA；通过DNA和NSGQDs与MWCNTs/GONRs的π-π叠加作用，使NSGQDs-ssDNA吸附于MWCNTs/GONRs表面，淬灭NSGQDs的荧光；当加入待检测目标DNA(tDNA)后，tDNA和ssDNA杂交互补配对，形成NSGQDs-dsDNA,从而把NSGQDs-ssDNA从MWCNTs/GONRs表面解离，从而使NSGQDs的荧光恢复。
发明内容
本发明旨在发明一种低毒、高灵敏度、高选择性、简单易操作等优点为一体的FRET方法，提供一种制备工艺简单，灵敏度高，测量范围宽，成本低的检测含有CaMV35S启动子转基因作物及产品的方法，解决现有检测成本高、检测方案复杂、检测时间过长、灵敏度较低的难题。
一种简单的荧光共振能量转移传感器检测GMO含量的方法：发出荧光信号的NSGQDs通过酰胺反应和捕获探针ssDNA结合，形成NSGQDs-ssDNA；通过DNA和NSGQDs与MWCNTs/GONRs的π-π叠加作用，使NSGQDs-ssDNA吸附于MWCNTs/GONRs表面，淬灭NSGQDs的荧光；当加入待检测目标DNA(tDNA)后，tDNA和ssDNA杂交互补配对，形成NSGQDs-dsDNA,从而把NSGQDs-ssDNA从MWCNTs/GONRs表面解离，从而使NSGQDs的荧光恢复。通过所恢复的荧光强度的测定，检测转基因大豆中是否含有CaMV35S启动子以区分转基因和非转基因大豆。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，包括如下步骤：
步骤1、多壁碳纳米管/氧化石墨烯纳米带MWCNTs/GONRs分散液的制备；
步骤2、氮硫同杂石墨烯量子点(NSGQDs)溶液的制备；
步骤3、氮硫同杂石墨烯量子点-捕获探针(NSGQDs-ssDNA)分散液的制备：
取步骤2制备的氮硫同杂石墨烯量子点溶液超声分散，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶液，振荡均匀，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液，振荡均匀，加入捕获探针储备液；在室温下反应，得到氮硫同杂石墨烯量子点-捕获探针，记作NSGQDs-ssDNA，之后用乙醇洗涤，离心，最后将NSGQDs-ssDNA分散于Tris-HCl缓冲液中，得到NSGQDs-ssDNA分散液，备用；
步骤4、荧光共振能量转移传感器的构建：
将步骤1的MWCNTs/GONRs分散液加入到步骤3的NSGQDs-ssDNA分散液中，超声分散，静置后，测定MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA体系的荧光强度；
步骤5、标准曲线的构建：将步骤1的MWCNTs/GONRs分散液加入到步骤3的NSGQDs-ssDNA分散液中，超声分散，静置后，测定MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA体系的荧光强度，随后加入不同浓度的目标DNA，超声，静置后，测量其荧光恢复程度，构建标准曲线；
步骤6、基于MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA构建的FRET传感器对转基因大豆的检测：采用植物DNA提取试剂盒提取转基因大豆的DNA；之后将转基因大豆的DNA加入到MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA FRET传感体系中，测定其荧光恢复强度与标准曲线进行对比，得出是否含有CaMV35S启动子的结论。
步骤3中，所使用的氮硫同杂石墨烯量子点溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶液、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液与捕获探针储备液的体积比为42:2:2:1，所使用的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶液的浓度为400mM，所使用的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液的浓度为200mM，所使用的捕获探针储备液的浓度为100μM；所述的在室温下反应的时间为40min；所使用的Tris-HCl缓冲溶液浓度为10mM，pH＝7.4，所使用的Tris-HCl缓冲溶液与所使用的氮硫同杂石墨烯量子点溶液的体积比为47:42。
步骤4中，所使用的MWCNTs/GONRs的浓度为1.5mg/mL；所使用的Tris-HCl缓冲溶液与所使用的氮硫同杂石墨烯量子点溶液的体积比为47:42，MWCNTs/GONRs和 NSGQDs-ssDNA体积比为1:750；所述超声时间为5min，静置时间为5min。
步骤5中，所使用的MWCNTs/GONRs分散液、NSGQDs-ssDNA分散液和目标DNA体积比为4:3000:15，所述的不同浓度的不同浓度的目标DNA的浓度为0～500nM；所述超声时间均为5min，静置时间均为5min。
步骤6中，所使用的MWCNTs/GONRs分散液、NSGQDs-ssDNA分散液和转基因大豆所提取的DNA体积比为1:750:5。
所使用的目标DNA CaMV35S启动子的序列为：GGC AGA GGC ATC TTC AAC GAT GGCC，
捕获探针ssDNA的序列为：G GCC ATC GTT GAA GAT GCC TCT GCC-NH2。
所述的标准曲线是指传感器与不同浓度的CaMV35S目标DNA作用，通过杂交互补配对原则，目标DNA和捕获探针结合，从而使NSGQDs-ssDNA从MWCNTs/GONRs表面脱离，从而发生荧光恢复。根据各个浓度所恢复的荧光绘制的标准曲线。
有益效果：
本发明基于DNA杂交互补配对的原则，使FRET传感器的荧光得以恢复，所建立的检测CaMV35S目标DNA的方法，为转基因作物中CaMV35S启动子的检测提供了一种新的方法途径。该方法较目前CaMV35S启动子检测方法，具有如下优点：
(1)该传感器的制备是基于DNA互补配对杂交特异性作用所构建的，因而相对于免疫反应而言有与目标分子结合力强、特异性高、长时间暴露不容易变性、对周围环境要求低等特点。
(2)传感器构建的设计思路清晰，采用NSGQDs为能量供体，MWCNTs/GONRs为能量受体构建了荧光共振能量转移传感器。
(3)该方法所有试剂具有无毒，低价，合成方法简单等优点，相对于其他方法成本降低很多。
(4)该方法具有FRET传感器所具有的操作简便灵活、分析速度快的特点，适用于快速检测分析。
附图说明
图1为检测不同浓度CaMV35S目标DNA的标准曲线图，其中曲线a～k为按照自下而上的顺序，CaMV35S目标DNA的浓度自下而上依次为0,0.1,0.5,1,5,10,50,100,200,400,500nM。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：
(1)MWCNTs/GONRs的制备
MWCNTs/GONRs采用氧化剪切多壁碳纳米管制得，具体过程如下：称取120mg多壁碳纳米管加入圆底烧瓶中，向烧瓶中加入40mL H2SO4/H3PO4(体积比为9:1)并搅拌，然后向上述混合溶液中加入600mg KMnO4，并在65℃油浴下继续搅拌2h。将反应后溶液冷却至室温，将其倒入400mL含0.375％H2O2的冰水中，溶液经PTFE膜(孔径0.2μm)过滤得到固体产物MWCNTs/GONRs，并继续水洗数次，最后分散于去离子水中，得到浓度为1.5mg/mL MWCNTs/GONRs分散液。
(2)NSGQDs的制备
采用常压下热裂解法一步制备氮硫同杂石墨烯量子点(NSGQDs)，0.5g柠檬酸铵，0.5g硫脲和30mL水混合后，转入三颈烧瓶中，将三颈烧瓶置于200℃油浴锅中加热，三颈烧瓶上接有球形冷凝管，冷凝管出气口绑有气球，以确保整个过程在相对密闭、恒压的环境中进行。随着加热反应的进行，气球开始微微膨胀，说明有氨气、H2O等气体生成，通过冷凝回流，所生成的氨气又以NH4 +的形式重新回到溶液中，溶液的颜色也由无色渐渐变成淡黄色。随着加热时间的推移，气球逐渐胀大，在持续加热10min后，气球的直径稳定在5～7cm左右。反应20min左右，膨胀的气球开始收缩，体积减小，溶液颜色也由淡黄色不断加深至黄色。在反应达到1h时，气球直径收缩至4～5cm，而此时溶液呈现淡黄褐色，说明NSGQDs成功合成。最后，用NaOH(10mg mL-1)逐滴加到NSGQDs中，调节溶液pH值至7.4，于4℃下冷藏保存，得到NGQDs溶液，备用。
(3)NSGQDs-ssDNA分散液的制备
取420μL NSGQDs溶液超声分散15分钟后，加入20μL 400mM的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，振荡2分钟后，加入20μL 200mM的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，继续振荡20分钟。加入10μL 100μM ssDNA在室温下反应40分钟，得到NSGQDs-ssDNA之后用乙醇洗涤离心，最后分散于470μL的10mM Tris-HCl(pH 7.4)缓冲液中，得到NSGQDs-ssDNA分散液。
(4)MWCNTs/GONRs和NSGQDs-ssDNA FRET传感器的构建
将4μL 1.5mg/mL的MWCNTs/GONRs加入到3.0mL NSGQDs-ssDNA中，超声5min，静置5min后，测定MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA体系的荧光强度。
实施例2：该FRET传感器对tDNA标准曲线的构建
将4μL 1.5mg/mL的MWCNTs/GONRs分散液加入到3.0mL NSGQDs-ssDNA中，超声5min，静置5min后，测定MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA体系的荧光强度，随后加入15μL 不同浓度的tDNA，超声5min后，静置40min测量其荧光恢复程度，构建标准曲线。
图1为检测不同浓度CaMV35S目标DNA的标准曲线图，其中曲线a～k为按照自下而上的顺序，其目标DNA的浓度依次为0,0.1,0.5,1,5,10,50,100,200,400,500nM。曲线a表示当没有目标DNA出现时，NSGQDs被吸附到MWCNTs/GONRs表面，导致荧光淬灭，从而显示出较低的荧光强度。当加入目标DNA后，与NSGQDs发生杂交互补配对，使吸附在MWCNTs/GONRs表面的NSGQDs被逐渐脱离，从而产生荧光恢复。当目标DNA浓度逐渐增大时，NSGQDs从MWCNTs/GONRs表面脱离的数量逐渐增加，导致荧光强度逐渐增强。
实施例3：
基于MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA构建的FRET传感器对转基因大豆的检测：
采用植物DNA提取试剂盒提取转基因大豆的DNA。将4μL 1.5mg/mL的MWCNTs/GONRs分散液加入到3.0mL NSGQDs-ssDNA中，超声5min，静置5min后，将20μL转基因大豆的DNA加入到MWCNTs/GONRs和NSGQDs-ssDNA FRET传感体系中，测定其荧光恢复强度与标准曲线进行对比，得出是否含有CaMV35S启动子的结论，并且可以根据荧光强度计算得出转基因大豆中含有的CaMV35S启动子的浓度。
SEQUENCE LISTING
<110> 江苏大学
<120> 一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S
启动子的检测方法
<130> 一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S
启动子的检测方法
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggcagaggca tcttcaacga tggcc 25
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ggccatcgtt gaagatgcct ctgcc 25

Claims (6)

1.一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、多壁碳纳米管/氧化石墨烯纳米带MWCNTs/GONRs分散液的制备；
步骤2、氮硫同杂石墨烯量子点溶液的制备；
步骤3、氮硫同杂石墨烯量子点-捕获探针分散液的制备：
取步骤2制备的氮硫同杂石墨烯量子点溶液超声分散，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，振荡均匀，加入N-羟基琥珀酰亚胺溶液，振荡均匀，加入捕获探针储备液；在室温下反应，得到氮硫同杂石墨烯量子点-捕获探针，记作NSGQDs-ssDNA，之后用乙醇洗涤，离心，最后将NSGQDs-ssDNA分散于Tris-HCl缓冲液中，得到NSGQDs-ssDNA分散液，备用；
步骤4、荧光共振能量转移传感器的构建：
将步骤1的MWCNTs/GONRs分散液加入到步骤3的NSGQDs-ssDNA分散液中，超声分散，静置后，测定MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA体系的荧光强度；
步骤5、标准曲线的构建：将步骤1的MWCNTs/GONRs分散液加入到步骤3的NSGQDs-ssDNA分散液中，超声分散，静置后，测定MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA体系的荧光强度，随后加入不同浓度的目标DNA，超声，静置后，测量其荧光恢复程度，构建标准曲线；
步骤6、基于MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA构建的FRET传感器对转基因大豆的检测：采用植物DNA提取试剂盒提取转基因大豆的DNA；之后将转基因大豆的DNA加入到MWCNTs/GONRs-NSGQDs-ssDNA FRET传感体系中，测定其荧光恢复强度与标准曲线进行对比，得出是否含有CaMV35S启动子的结论。
2.根据权利要求1所述的一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，其特征在于，步骤3中，所使用的氮硫同杂石墨烯量子点溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液与捕获探针储备液的体积比为42:2:2:1，所使用的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液的浓度为400mM，所使用的N-羟基琥珀酰亚胺溶液的浓度为200mM，所使用的捕获探针储备液的浓度为100μM；所述的在室温下反应的时间为40min；所使用的Tris-HCl缓冲溶液浓度为10mM，pH＝7.4，所使用的Tris-HCl缓冲溶液与所使用的氮硫同杂石墨烯量子点溶液的体积比为47:42。
3.根据权利要求1所述的一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，其特征在于，步骤4中，所使用的MWCNTs/GONRs的浓度为1.5mg/mL；所使用的Tris-HCl缓冲溶液与所使用的氮硫同杂石墨烯量子点溶液的体积比为47:42，MWCNTs/GONRs和NSGQDs-ssDNA体积比为1:750；所述超声时间为5min，静置时间为5min。
4.根据权利要求1所述的一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，其特征在于，步骤5中，所使用的MWCNTs/GONRs分散液、NSGQDs-ssDNA分散液和目标DNA体积比为4:3000:15，所述的不同浓度的目标DNA的浓度为0～500nM；所述超声时间均为5min，静置时间均为5min。
5.根据权利要求1所述的一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，其特征在于，步骤6中，所使用的MWCNTs/GONRs分散液、NSGQDs-ssDNA分散液和转基因大豆所提取的DNA体积比为1:750:5。
6.根据权利要求1所述的一种基于石墨烯和量子点的荧光共振能量转移传感器的构建及其对CaMV35S启动子的检测方法，其特征在于，所使用的目标DNA的序列为：GGC AGA GGCATC TTC AAC GAT GGC C，捕获探针的序列为：G GCC ATC GTT GAA GAT GCC TCT GCC-NH2。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107955006A (zh) * 2017-11-29 2018-04-24 温州医科大学 一种氨基喹啉改性的氮参杂石墨烯量子点及其制备方法与制备组氨酸荧光检测试剂上的应用
CN109802043A (zh) * 2019-01-15 2019-05-24 新疆交通建设集团股份有限公司 氮硫共掺杂石墨烯量子点钙钛矿吸光层及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103487418A (zh) * 2013-09-18 2014-01-01 广州阳普医疗科技股份有限公司 一种以碳纳米材料为受体的上转换荧光共振能量转移检测方法
CN104150473A (zh) * 2014-08-04 2014-11-19 江苏大学 一种氮掺杂石墨烯量子点的化学制备方法
CN105372307A (zh) * 2015-11-27 2016-03-02 江苏大学 一种检测转基因CaMV35S启动子的电极的制备方法及用途
CN105567230A (zh) * 2016-02-22 2016-05-11 桂林理工大学 一种氮硫共掺石墨烯量子点及其制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103487418A (zh) * 2013-09-18 2014-01-01 广州阳普医疗科技股份有限公司 一种以碳纳米材料为受体的上转换荧光共振能量转移检测方法
CN104150473A (zh) * 2014-08-04 2014-11-19 江苏大学 一种氮掺杂石墨烯量子点的化学制备方法
CN105372307A (zh) * 2015-11-27 2016-03-02 江苏大学 一种检测转基因CaMV35S启动子的电极的制备方法及用途
CN105567230A (zh) * 2016-02-22 2016-05-11 桂林理工大学 一种氮硫共掺石墨烯量子点及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAMING HUANG: "Highly sensitive electrochemical detection of sequence-specific DNA of 35S promoter of cauliflower mosaic virus gene using CdSe quantum dots and gold nanoparticles", 《MICROCHIM ACTA》 *
TAO YANG: "Direct and Freely Switchable Detection of Target Genes Engineered by Reduced Graphene Oxide-Poly(m‑Aminobenzenesulfonic Acid) Nanocomposite via Synchronous Pulse Electrosynthesis", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
郑小青等: "石墨烯纳米带", 《化学进展》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107955006A (zh) * 2017-11-29 2018-04-24 温州医科大学 一种氨基喹啉改性的氮参杂石墨烯量子点及其制备方法与制备组氨酸荧光检测试剂上的应用
CN107955006B (zh) * 2017-11-29 2020-03-10 温州医科大学 一种氨基喹啉改性的氮参杂石墨烯量子点及其制备方法与制备组氨酸荧光检测试剂上的应用
CN109802043A (zh) * 2019-01-15 2019-05-24 新疆交通建设集团股份有限公司 氮硫共掺杂石墨烯量子点钙钛矿吸光层及其制备方法

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