CN106035076A - 一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法 - Google Patents

一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106035076A
CN106035076A CN201610440273.7A CN201610440273A CN106035076A CN 106035076 A CN106035076 A CN 106035076A CN 201610440273 A CN201610440273 A CN 201610440273A CN 106035076 A CN106035076 A CN 106035076A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture medium
tetraploid
roxburgh rose
colchicine
seedless roxburgh
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610440273.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106035076B (zh
Inventor
辛培尧
辛亚龙
林�源
唐军荣
李斌
何承忠
韩国伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southwest Forestry University
Original Assignee
Southwest Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southwest Forestry University filed Critical Southwest Forestry University
Priority to CN201610440273.7A priority Critical patent/CN106035076B/zh
Publication of CN106035076A publication Critical patent/CN106035076A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106035076B publication Critical patent/CN106035076B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/06—Processes for producing mutations, e.g. treatment with chemicals or with radiation
    • A01H1/08—Methods for producing changes in chromosome number
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Absorbent Articles And Supports Therefor (AREA)

Abstract

本发明公开了一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，包括如下步骤：步骤一：材料准备,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成0.8‑3cm长，每段至少保留一个叶腋；步骤二：预培养：培养基MS+0.5mg/L 6‑BA中预培养，2‑3d；步骤三：避光震荡：将预处理后的材料，浸泡于含200‑500mg/L秋水仙素的无菌水中，于摇床上以120r/min，25‑30℃避光震荡，处理时间分别12‑72h；步骤四：光照培养：材料经浸泡处理后，转入未附加秋水仙素的MS+ 0.15mg/L NAA+ 0.5mg/L 6‑BA培养基中继续培养；步骤五：变异芽的同质化处理：上述培养40d后，选培养得到的变异明显的芽苗，在培养基MS+ 0.15mg/L NAA+ 0.5mg/L 6‑BA中，间隔40d反复培养5次。本发明的诱导方法,获得了四倍体无籽刺梨新种质，可增加无籽刺梨果实营养成分如Vc、VE和SOD等，同时使其果径和可食用部分增多。

Description

一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法
技术领域
本发明涉及浸泡法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法技术领域，特别是涉及一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法。
背景技术
无籽刺梨(RosasterilisS.D.Shi)是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)的多年生攀援小灌木。为中国特有种之一，是刺梨(R.roxbunghii)的近缘种。其野生资源主要分布在贵州安顺市北部和贵阳市南部，近年来多地大量进行引种种植。无籽刺梨具有较高的药用保健、观光、生态保护和经济价值。与普通刺梨相比，无籽刺梨单果无籽或有1-2粒籽，单宁含量较少，糖含量更高，肉厚且果味香甜，无明显涩味，鲜果售卖更有优势。其无籽或瘦籽的特性，可以减少加工成本。但是，无籽刺梨果实营养成分如Vc、VE和SOD含量比刺梨少，果径比刺梨小，可食用部分也较少。这在一定程度上大大影响了这一特色植物的生产利用价值。因此，利用现代生物技术选育果实大，营养成分含量高的无籽刺梨，成为其产业开发，提高无籽刺梨经济价值的当务之急。而在诸多的植物育种手段中，倍性育种所选育的多倍体品种能显著增加果实体积及营养成分含量。所以，对无籽刺梨进行多倍体育种，选育较高倍性的无籽刺梨，无疑是解决上述问题的有效方法之一。无籽刺梨品种改良，仅见韦景枫等对其进行了单株选优方面的研究，而在倍性育种方面未见报道。本发明以无籽刺梨幼嫩茎段为材料，利用“浸泡法”进行无籽刺梨四体的诱导，并对变异材料的倍性进行鉴定。该发明技术，可为无籽刺梨，乃至林木多倍体育种提供理论参考及实践指导。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，对无籽刺梨进行多倍体育种，选育四倍体无籽刺梨，可增加了无籽刺梨果实营养成分如Vc、VE和SOD等，同时增加了其果径和可食用部分。
本发明所采用的技术方案是：一种通过浸泡法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法，包括如下步骤：
步骤一：材料准备,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成0.8-3cm长，每段至少保留一个叶腋；
步骤二：预培养：培养基MS+0.5mg/L 6-BA中预培养，1-3d；
步骤三：避光震荡：茎段转入分别含有200-500mg/L秋水仙素的无菌水中，置于摇床上以120r/min，25-30℃避光震荡，处理时间分别12-72h；
步骤四：光照培养：转入MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA未附加秋水仙素的培养基中继续培养；
步骤五：变异芽的同质化处理：上述培养40d后，选培养得到的变明显的芽苗，在培养基MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA中，间隔40d反复培养5次；
其中避光震荡结束后，需将茎段在超净工作台上，用无菌过滤纸吸尽表面残留液体，再进行步骤四。
进一步地，步骤二预培养1d后，再在400mg/L秋水仙素培养基中浸泡并避光震荡24h。
进一步地，步骤二预培养3d后，再在300mg/L秋水仙素培养基中浸泡12h。
进一步地，倍性鉴定：步骤五完成后，当同质化处理的芽长至2-3cm时，将变异明显的无籽刺梨芽苗转入1/2MS+0.1mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+0.3g/L活性炭的培养基中生根；待根长1cm时，截取根尖材料，利用常规制片法进行染色体计数，确定其倍性。
进一步地，步骤一中材料准备,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成1cm长，每段至少保留一个叶腋。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：将经过秋水仙素处理的单株苗转至未附加秋水仙素的培养基中培养一段时间后，与对照相比，大部分表现出叶片浓绿且明显增厚，茎杆变粗等现象，表现为多倍化材料相对于二倍体材料在生长方面的优势。本发明的诱导方法,对无籽刺梨进行多倍体育种，选育四倍体的无籽 刺梨，可增加了无籽刺梨果实营养成分如Vc、VE和SOD等，同时增加了果径和可食用部分。
附图说明
图1为一种通过浸泡法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法的诱导过程的流程图；
图2为一种通过混培法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法的诱导过程的流程图。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面结合实施例对本发明进一步说明，该实施例仅用于解释本发明，并不对本发明的保护范围构成限定。
实施例 选用某大学生物多样性保育重点实验室所建立的无籽刺梨无菌苗进行多倍体的诱导试验以及倍性鉴定
1材料与方法
1.1试验材料
试验材料选用西南林业大学生物多样性保育重点实验室所建立的无籽刺梨无菌苗。
1.2试验方法
1.2.1浸泡法，如图1所示。
将无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成1cm长左右，每段至少保留一个叶腋，转入培养基MS+0.5mg/L 6-BA中预培养，预培养时间分别为1、2和3d。预培养结束后进行光照培养。光培养期间，先将预培养后的茎段分别浸泡于含不同浓度秋水仙素(200、300、400、500mg/L)的无菌水中，并置于摇床上以120r/min，25-30℃避光震荡，处理时间分别12、24、48和72h。对照组的茎段置于无菌水中避光震荡培养处理12、24、48和72h，方法同上。处理完毕后，将茎段在超净工作台上，用无菌过滤纸吸尽表面残留液体，再转入MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA(未附加秋水仙素)的培养基中继续培养。上述处理共计52组，每组处理接种20瓶，每瓶接种茎段5枚，重复3次。
1.2.2混培法，如图2所示。
将无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成1cm长左右，每段至少保留一个叶腋，在培养基MS+0.5mg/L 6-BA中预培养0、1、2、3d。预培养后的茎段转入分别附加有0、50、100、150、200mg/L秋水仙素的MS+0.5mg/L 6-BA+培养基中，茎段略浸没于培养基，使腋芽与培养基充分接触。7d后，转未附加秋水仙素的MS+0.5mg/L 6-BA培养基中继续培养。对照组设1组，接种于腋芽诱导培养基中。上述处理共计13个，每组处理接种20瓶，每瓶接种茎段5枚，重复3次。1.2.3变异芽的同质化处理
40d后，选上述1.2.1和1.2.2中变明显的芽苗，在培养基MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA中，间隔40d反复培养5次。
1.2.4倍性鉴定
当同质化处理的芽长至2-3cm时，与对照组比较，将变异明显的无籽刺梨芽苗转入1/2MS+0.1mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+0.3g/L活性炭的培养基中生根。并采用林源等提出的方，对变异的无籽刺梨组培苗及二倍体材料根尖染色体数目进行计数，以确定其倍性。
2.结果与分析
2.1浸渍法
预培养时间、秋水仙素浓度和处理时间对无籽刺梨多倍体的产生有明显的影响(表2)。
表1 秋水仙素浓度与处理时间对茎段诱导多倍体的影响
由表1可知，不同处理下，无籽刺梨的诱变率差异显著。总体上，在相同预处理时间下，随着处理浓度的增加，相同处理天数内，诱变率有上升趋势；而在相同预处理时间和相同浓度处理但26号处理，即：预培养1d后，再在400mg/L秋水仙素溶液中浸泡24h，其平均诱变率最高(为30.0％)，其次为预培养3d后，用300mg/L秋水仙素处理12h，其诱变为26.7％(21号处理)。所有对照中，均未出现变异材料。多重比较结果显示，21号处理与26号处理间差异不显著。因此，21号与26号处理均适合于茎段浸泡法诱导无籽刺梨多倍体不定芽的产生。但是，从试剂的用量等方面考虑，应以21号处理为优，也即：预培养3d后，用 300mg/L秋水仙素处理12h，为无籽刺梨浸泡法处理诱导多倍体产生的较佳诱导方案。
2.2混培法，如图1所示。
利用混培法，对茎段进行不同处理后，其诱变效果列于表2。
表2 秋水仙素浓度与处理时间对茎段诱导多倍体的影响
由表2可知，混培法诱导茎段的方法诱变率普遍较低，方差分析表明，不同的处理间，存在显著差异。不进行任何处理的对照组，其诱变率为0.0％，随着处理浓度的增加，诱变率显著下降。当预培养1d可不进行预培养时，接种于附加有100mg/L秋水仙素的培养基中的材料，诱变率较高，分别为5.8％和5.6％(处理1和2)。且这2个处理间差异不显著。这说明，在附加100mg/L秋水仙素的处理中，预处理的有无，对诱变效果影响并不大。考虑实验的简便性认为，不进行预处理，而直接将茎段接入附加100mg/L秋水仙素的培养基中，为利用混培法诱导无籽刺梨多倍体产生的较理想方法。
2.3倍性鉴定
经5次同质化处理后，对无籽刺梨生根组培苗的根尖染色体数目进行观察。结果表明，无籽刺梨二倍体染色体数目是2n＝2x＝14。变异植株中，部分材料其根尖染色体数目均为28条，可判定为四倍体；而部分材料中，既有14条染色体细胞，又有28条染色体细胞，可断定为嵌合体。实验中未发现有三倍体细胞的产生。
本发明的实施例公布的是较佳的实施例，但并不局限于此，本领域的普通技术人员，极易根据上述实施例，领会本发明的精神，并做出不同的引申和变化，但只要不脱离本发明的精神，都在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：材料准备,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成0.8-3cm长，每段至少保留一个叶腋；
步骤二：预培养：培养基MS+0.5mg/L 6-BA中预培养，1-3d；
步骤三：避光震荡：将预处理后的材料，浸泡含200-500mg/L秋水仙素的无菌水中，于摇床上以120r/min，25-30℃避光震荡，处理时间分别12-72h；
步骤四：光照培养：材料经浸泡处理后，转入未附加秋水仙素的MS+ 0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA培养基中继续培养；
步骤五：变异芽的同质化处理：上述培养40d后，选培养得到的变明显的芽苗，在培养基MS+ 0.15mg/L NAA+ 0.5mg/L 6-BA中，间隔40d反复培养5次；
其中避光震荡结束后，需将茎段在超净工作台上，用无菌过滤纸吸尽表面残留液体，再进行步骤四。
2.根据权利要求1所述的一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，其特征在于，步骤二预培养1d后，再在400mg/L秋水仙素培养基中浸泡并避光震荡24h。
3.根据权利要求1所述的一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，其特征在于，步骤二预培养3d后，再在300mg/L秋水仙素培养基中浸泡12h。
4.根据权利要求2所述的一种通过浸泡法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法，其特征在于，倍性鉴定：步骤五完成后，当同质化处理的芽长至2-3cm时，将变异明显的无籽刺梨芽苗转入1/2MS +0.1mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+0.3g/L活性炭的培养基中生根；待根长1cm时，截取根尖材料，利用常规制片法进行染色体计数，确定其倍性。
5.根据权利要求1所述的一种通过浸泡法使无籽刺梨四倍体产生的诱导方法，其特征在于，所述步骤一中材料准备,无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成1cm长，每段至少保留一个叶腋。
CN201610440273.7A 2016-06-20 2016-06-20 一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法 Expired - Fee Related CN106035076B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610440273.7A CN106035076B (zh) 2016-06-20 2016-06-20 一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610440273.7A CN106035076B (zh) 2016-06-20 2016-06-20 一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106035076A true CN106035076A (zh) 2016-10-26
CN106035076B CN106035076B (zh) 2018-06-15

Family

ID=57167763

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610440273.7A Expired - Fee Related CN106035076B (zh) 2016-06-20 2016-06-20 一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106035076B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112753581A (zh) * 2021-02-04 2021-05-07 公孙国林 一种阿福花科十二卷属多肉植物多倍体植株培育配方
NL2033132B1 (en) * 2022-08-08 2024-02-16 Tropical Crops Genetic Resources Inst Chinese Academy Of Tropical Agricultural Sciences Method for formulating polyploid germplasm of bougainvillea and application thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102919132A (zh) * 2012-11-29 2013-02-13 西南林业大学 组织培养结合秋水仙素诱导滇杨四倍体的方法
CN105340735A (zh) * 2015-10-13 2016-02-24 西南林业大学 金铁锁四倍体植株的诱导方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102919132A (zh) * 2012-11-29 2013-02-13 西南林业大学 组织培养结合秋水仙素诱导滇杨四倍体的方法
CN105340735A (zh) * 2015-10-13 2016-02-24 西南林业大学 金铁锁四倍体植株的诱导方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
唐军荣等: "无籽刺梨离体快繁技术研究", 《云南农业大学学报》 *
景枫等: "无籽刺梨组培快繁技术研究", 《黑龙江生态工程职业学院学报》 *
王小平等: "刺梨四倍体诱导及其ISSR分析", 《北方园艺》 *
谭德冠等: "组织培养与秋水仙碱诱导相结合培育植物多倍体的应用(综述)", 《亚热带植物科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112753581A (zh) * 2021-02-04 2021-05-07 公孙国林 一种阿福花科十二卷属多肉植物多倍体植株培育配方
NL2033132B1 (en) * 2022-08-08 2024-02-16 Tropical Crops Genetic Resources Inst Chinese Academy Of Tropical Agricultural Sciences Method for formulating polyploid germplasm of bougainvillea and application thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CN106035076B (zh) 2018-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103583368A (zh) 兔眼蓝莓组培快繁体系的构建方法
CN112106659B (zh) 一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法
Ray et al. In vitro regeneration of brinjal (Solanum melongena L.)
CN113519394B (zh) 一种红果参多倍体诱导及多倍体植株的高效人工育苗方法
CN104099287A (zh) 高产原花青素刺葡萄愈伤组织的获取与继代保持方法
CN103734016B (zh) 一种离体诱导同源四倍体青花菜的育种方法
CN103477985A (zh) 一种提高紫锥菊外植体再生不定芽的再生培养基及培养方法
CN107750946A (zh) 一种适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法
CN106035076A (zh) 一种通过浸泡法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法
CN111374053B (zh) 一种诱导锥栗组培苗叶片生成不定根的方法
Govindaraju et al. In vitro propagation of banana (Musa sp-Rasthali variety) from sword suckers for its commercial production.
CN112602595A (zh) 一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法
CN105248473A (zh) 开放式植物组织培养的抑菌组合物及其制备方法
CN105941162A (zh) 分蘖洋葱高效再生体系的建立方法
CN105850746B (zh) 一种枸杞花培育种分化培养基
CN104429958A (zh) 白榆组培苗瓶内复壮的方法
CN105052743B (zh) 一种有效保存黄菖蒲胚性愈伤组织的方法
CN110178734B (zh) 一种山兰萌发种子的定向培养基及定向培养成苗方法
CN110178733B (zh) 一种山兰原球茎的种苗快繁培养基及种苗快繁方法
Grendysz et al. Influence of micropropagation with addition of kinetin on development of a willow (Salix viminalis L.)
CN106069744B (zh) 一种通过混培法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法
CN106665347A (zh) 一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法
CN111771729A (zh) 一种火龙果组织培养快繁方法
CN112042543A (zh) 一种通过梨未受精胚珠离体培养获得单倍体植株的方法
CN106937600B (zh) 一种邳州白蒜组织培养方法以及培养基组合

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20180615

Termination date: 20190620

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee