CN106010976B - 一种提高液体菌种菌丝球密度的方法 - Google Patents

一种提高液体菌种菌丝球密度的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提高液体菌种菌丝球密度的方法，其包括以下步骤：制备母种‑摇瓶震荡培养‑保水剂处理‑菌液浓缩处理，在保水剂处理阶段，将保水剂装入聚乙烯袋中，袋口扎紧，袋表面扎圆洞，再将装好保水剂的聚乙烯袋装入容器中灭菌，在菌液浓缩处理阶段，在超净工作台内将灭完菌的聚乙烯袋加入培养好的摇瓶，静止半小时后，用镊子将聚乙烯袋取出即可。本发明的有益之处在于：操作简便、容易控制；与过滤菌液提高菌丝球密度相比，操作过程中不仅染杂菌的概率大大降低，而且工作效率可以大大提高，解决了液体菌种中菌液过多，接入固体栽培种后固体料含水量变大，菌种不易萌发的问题，同时也解决了菌液中养分过多容易滋生杂菌的问题。

Description

一种提高液体菌种菌丝球密度的方法
技术领域
本发明涉及一种提高菌丝球密度的方法，具体涉及一种提高液体菌种菌丝球密度的方法，属于生物技术领域。
背景技术
食用菌是一类富有营养与药用价值的大型真菌，它主要利用农业、林业以及工业生产中所产生的下脚料如稻草、玉米芯、棉子壳、木屑等可再生废弃物作为原料进行生产，转废为宝，生产的各种菇类可供人类食用和药用。我国是食用菌生产大国，食用菌的生产栽培是将原料通过灭菌消毒再种入菌种经过培养菌丝长出子实体。而菌种又分固体菌种和液体菌种，固体菌种具有生产周期长、菌龄不一致、接种劳动强度大以及不利于机械化接种等缺点。但与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、接种方便、发酵繁殖快、发菌速度快等优点，适合工厂化大面积生产使用，是食用菌行业发展的新时代。
在用目前，国内尚未颁布统一的国家标准来规范液体菌种的质量和品质，但是在实际应用过程中人们总结应用效果制订了一些地方性标准，如辽宁省地方标准《DB21/T1693-2008食用菌液体菌种生产技术规程》等，在这些标准中明确规定，合格的食用菌液体菌种应该“可见特有的菌丝形态，球状和丛状菌丝体大量分布，菌丝粗壮，菌丝内原生质分布均匀”“菌液稍粘稠，有大量片状或球状菌丝体悬浮、分布均匀”，也就是说优良的液体菌种菌丝球密度高、直径小，分布均匀。
在实际生产中，有时候制得的液体菌种密度过小，菌液过多，使用起来很不方便。用密度小的液体菌种向固体培养基中接菌后，会使固体培养基中存在大量的菌液。液体菌种菌液过多，在培养料中容易滋生杂菌，甚至有时培养料出现酸臭的味道。菌液过多的另一个坏处就是会使培养料的含水量变大，使培养料的透气性变差，不利于菌丝生长。
所以当液体菌种的密度过小时，就要增大其密度。通常的方法是对菌液进行过滤，但在过滤过程中，由于操作流程过多，菌种有大量时间暴露在空气中，很容易染杂菌。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种提高液体菌种菌丝球密度的方法，该方法不仅操作简便、容易控制，而且能够解决液体菌种容易滋生杂菌的问题。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
Step1、制备母种：将菌种块接种到试管PDA富加培养基中，置于25℃培养箱中避光培养8-15天；
Step2、摇瓶震荡培养：将Step1中培养的母种切成3mm的方形小块，在无菌工作台中用接种刀挑起菌丝体，接种到摇瓶中，每瓶接入量为5-8块，将摇瓶放置放在频率为120-180r/min、温度25℃的震荡摇床上培养，培养7-12天，得到直径为1cm的菌丝球；
Step3、保水剂处理：将保水剂装入聚乙烯袋中，袋口扎紧，袋表面扎圆洞，再将装好保水剂的聚乙烯袋装入容器中灭菌；
Step4、菌液浓缩处理：在超净工作台内将Step3中灭完菌的聚乙烯袋加入Step2中培养好的摇瓶，静止半小时后，用镊子将聚乙烯袋取出即可。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，在Step1中，前述PDA富加培养基的组成为：马铃薯、葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂和水。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，以重量份计，前述PDA富加培养基中各组分的配比为：马铃薯200份、葡萄糖20份、硫酸镁0.5份、磷酸二氢钾3份、琼脂20份、水1000份。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，前述PDA富加培养基在121℃下进行密闭灭菌30min。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，前述PDA富加培养基的pH值设置在5.0-6.5。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，在Step2中，摇瓶选用的是500ml的摇瓶，液体培养基的装入量为250ml。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，在Step3中，前述保水剂选用的是吸水倍数是200-300倍、颗粒为80-100目的农用保水剂。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，前述聚乙烯袋内体积是其内所装入保水剂体积的10-15倍。
前述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，前述聚乙烯袋表面的圆洞直径为1mm。
本发明的有益之处在于：
(1)操作简便、容易控制；
(2)与过滤菌液提高菌丝球密度相比，操作过程中不仅染杂菌的概率大大降低，而且工作效率可以大大提高；
(3)解决了液体菌种中菌液过多，接入固体栽培种后固体料含水量变大，菌种不易萌发的问题；
(4)同时也解决了菌液中养分过多容易滋生杂菌的问题。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
Step1、制备母种
PDA富加培养基的组成为：马铃薯、葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂和水。
以重量份计，称取马铃薯200克、葡萄糖20克、硫酸镁0.5克、磷酸二氢钾3克、琼脂20克、水1000毫升。
马铃薯200克切片，放入1000毫升水当中沸煮25分钟，然后通过四层纱布过滤，提取1000毫升的马铃薯汁，向马铃薯汁中加入葡萄糖20克、硫酸镁0.5克、磷酸二氢钾3克，搅拌溶解之后加入琼脂20克，小火沸煮，琼脂融化后配制成试管培养基，用柠檬酸调pH值为6.5(最低可调至5.0)，装入试管，将试管放入高压锅灭菌，保持温度121℃，30分钟后取出，试管倾斜45度，冷却，在冷却过程中为防止试管内壁形成冷凝水，可以在冷却过程中用棉花将试管包住，使其降温缓慢。
将菌种块接种到试管PDA富加培养基中，置于25℃培养箱中避光培养8天(可适当延长至15天)。一般温度高时，所需要的培养时间短，温度低时，所需要的培养时间长，当菌丝全部长满斜面即可。
Step2、摇瓶震荡培养
将Step1中培养的母种切成3mm的方形小块，在无菌工作台中用接种刀挑起菌丝体，接种到摇瓶中，每瓶接入量为5-8块，将摇瓶放置放在频率为150(±30)r/min、温度25℃的震荡摇床上培养，培养8天(可适当延长至12天)，得到直径为1cm的菌丝球。此时菌球占液体菌种的80％，菌球悬浮在液体菌种中。
摇瓶中培养基量装的不能过多，500ml的摇瓶中装入250ml的液体培养基即可。
Step3、保水剂处理
保水剂选用的是吸水倍数是200-300倍、颗粒为80-100目的农用保水剂。
农用保水剂成分是高吸水性树脂，它是一种吸水能力特别强的功能高分子材料。无毒无害，反复释水、吸水，因此农业上人们把它比喻为"微型水库"。同时，它还能吸收肥料、农药，并缓慢释放，增加肥效、药效。高吸水性树脂广泛用于农业、林业、园艺、建筑材料。
将保水剂装入聚乙烯袋中，袋口扎紧，袋表面扎直径为1mm的圆洞，再将装好保水剂的聚乙烯袋装入容器中灭菌。
聚乙烯袋内体积是其内所装入保水剂体积的10-15倍，不能将保水剂在袋中装的太满，因为保水剂到后期吸收菌液后会膨胀，要将膨胀之后的体积算入。
聚乙烯袋表面的圆洞直径为1mm，小于保水剂的直径，圆洞不能过大，否则保水剂会从袋中渗漏。
由于是湿热灭菌，灭菌后的保水剂会稍微膨胀，所选择的容器最好是组培瓶。
Step4、菌液浓缩处理
在超净工作台内将Step3中灭完菌的聚乙烯袋加入Step2中培养好的摇瓶，静止半小时后，用镊子将聚乙烯袋取出即可。聚乙烯袋取出时，动作越快感染杂菌的概率越低。
将装有保水剂的聚乙烯袋放入液体菌种中静止半个小时，聚乙烯袋表面有圆洞，菌液可以流入到聚乙烯袋内。其目的是：保水剂在液体菌种中吸收菌液，将菌液固定在保水剂中，半个小时后，保水剂已经达到饱和状态，将保水剂取出，从而液体菌种的密度变大。与过滤液体菌种菌液增大密度的方法比，此使用保水剂的方法操作更简单，而且不容易被杂菌侵染。
由此可见，本发明的方法不仅操作简便、容易控制，而且操作过程中染杂菌的概率大大降低，工作效率大大提高，解决了液体菌种中菌液过多，接入固体栽培种后固体料含水量变大，菌种不易萌发的问题，同时也解决了菌液中养分过多容易滋生杂菌的问题，具有很好的推广应用价值。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
Step1、制备母种：将菌种块接种到试管PDA富加培养基中，置于25℃培养箱中避光培养8-15天；
所述PDA富加培养基的组成为：马铃薯、葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂和水；
Step2、摇瓶震荡培养：将Step1中培养的母种切成3mm的方形小块，在无菌工作台中用接种刀挑起菌丝体，接种到摇瓶中，每瓶接入量为5-8块，将摇瓶放置放在频率为120-180r/min、温度25℃的震荡摇床上培养，培养7-12天，得到直径为1cm的菌丝球；
Step3、保水剂处理：将保水剂装入聚乙烯袋中，袋口扎紧，袋表面扎圆洞，再将装好保水剂的聚乙烯袋装入容器中灭菌；
所述保水剂选用的是吸水倍数是200-300倍、颗粒为80-100目的农用保水剂；
Step4、菌液浓缩处理：在超净工作台内将Step3中灭完菌的聚乙烯袋加入Step2中培养好的摇瓶，静止半小时后，用镊子将聚乙烯袋取出即可。
2.根据权利要求1所述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，以重量份计，所述PDA富加培养基中各组分的配比为：马铃薯200份、葡萄糖20份、硫酸镁0.5份、磷酸二氢钾3份、琼脂20份、水1000份。
3.根据权利要求1所述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，所述PDA富加培养基在121℃下进行密闭灭菌30min。
4.根据权利要求1或2所述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，所述PDA富加培养基的pH值设置在5.0-6.5。
5.根据权利要求1所述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，在Step2中，摇瓶选用的是500ml的摇瓶，液体培养基的装入量为250ml。
6.根据权利要求1所述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，所述聚乙烯袋内体积是其内所装入保水剂体积的10-15倍。
7.根据权利要求1所述的提高液体菌种菌丝球密度的方法，其特征在于，所述聚乙烯袋表面的圆洞直径为1mm。
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