CN104541659A

CN104541659A - 一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法

Info

Publication number: CN104541659A
Application number: CN201410814243.9A
Authority: CN
Inventors: 韦荣昌
Original assignee: Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Current assignee: Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority date: 2014-12-24
Filing date: 2014-12-24
Publication date: 2015-04-29
Anticipated expiration: 2034-12-24
Also published as: CN104541659B

Abstract

本发明公开了一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法，包括以下步骤：步骤A，将经过预处理的心叶紫金牛种子完全浸泡于激动素溶液中，其中所述激动素溶液浓度为10～100mg/L，浸泡时间为1～24小时；步骤B，将经过浸种的心叶紫金牛种子进行恒温培养，采用本发明方法可使心叶紫金牛种子的萌发率高达92％，而且该操作简便、成本低、实用性强、无污染以及易推广，能有效促进心叶紫金牛种子的萌发，并且具有萌发时间短、出芽整齐的优势，同时本发明对保护我国心叶紫金牛种质资源和促进其大规模人工种植具有很重要的生态和经济意义。

Description

一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法

技术领域

本发明属于植物种子萌发技术领域，特别是一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法。

背景技术

心叶紫金牛(Ardisia maclurei Merr.)，又名走马风、红云草、红铺地毯，为紫金牛科紫金牛属植物，是瑶药“七十二风”中的走马风。心叶紫金牛为广西壮、瑶族常用药材，以全株入药，性凉，味苦，具有清热解毒、镇咳祛痰、活血止血、调经通络、消肿定痛的功效，用于治疗吐血、便血、咯血、血崩、疮疖、肺结核、慢性支气管炎、咳嗽气喘、月经不调、痛经、产后恶露不尽、产后体弱、风湿痹痛、跌打损伤等症。近年研究表明，心叶紫金牛还具有抗艾滋病毒、抑制胰岛素降解和抗心率失常等作用。心叶紫金牛分布于我国广西、广东、海南、贵州、台湾等省区，主要产于广西的藤县、蒙山、昭平、金秀、武宣、罗城、都安、平果等地。

心叶紫金牛为珍稀濒危药用植物，处于纯野生状态，多生于海拔230-860m的密林下、水旁和石缝间荫湿处，地域分布零散且蕴藏量稀少。随着人民生活水平的提高和保健意识的增强，心叶紫金牛的市场需求量逐年攀升，野生资源遭到过度采挖，濒临枯竭。心叶紫金牛主要依靠种子进行繁殖，但种子量极为稀少，且在自然状态下萌发慢、萌发率低，给科学研究和引种栽培带来极大困难。现有技术没有对于促进心叶紫金牛种子萌发的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法，以解决心叶紫金牛种子在自然状态下萌发慢、萌发率低、出芽不整齐的问题，为大规模人工栽培提供大量的优良种苗，以满足生产上的需要。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法，包括以下步骤：

步骤A，将经过预处理的心叶紫金牛种子完全浸泡于激动素溶液中，其中所述激动素溶液浓度为10～100mg/L，浸泡时间为1～24小时；

步骤B，将经过浸种的心叶紫金牛种子进行恒温培养。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，所述预处理包括：

(1)采集种子：每年1月采集成熟的心叶紫金牛果实，取出种子，洗净，从中挑选饱满、无破损、不携带病虫卵的种子备用；

(2)种子消毒：将所述步骤(1)挑选的种子置于质量分数为0.3％的高锰酸钾溶液浸泡25min，再置于质量分数为1％的硫酸铜溶液浸泡20min，蒸馏水冲洗5次；

(3)变温浸泡：将所述步骤(2)消毒处理过的种子置于30～35℃的水中浸泡4～5小时，再置于20～25℃的水中浸泡8～10小时。

(4)激光辐照：将所述步骤(3)变温浸泡处理过的种子放入He-Ne激光生物辐照仪中辐照5min。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，所述激动素浓度为50mg/L，浸种时间为12小时。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，所述恒温培养包括：将经过步骤A浸种的心叶紫金牛种子置于两层充分湿润的萌发纸上，然后将所述萌发纸放于透明玻璃培养皿中，并盖上盖子，最后将所述透明玻璃培养皿放于恒温培养箱中，所述恒温培养箱温度为18～28℃，所述恒温培养箱湿度为75～85％，时间为10～25天。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，在所述步骤A用激动素溶液浸泡之后，在所述步骤B恒温培养之前，还包括步骤M：将所述步骤A激动素溶液浸泡过的种子，与层积基质混合，放入干净容器中，用薄膜覆盖，并在薄膜上扎几个小孔以便种子呼吸，再移至3～5℃的冰箱中层积处理35天，其中，所述种子与所述层积基质的重量比为1∶3。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，所述层积基质为含水量为60～70％的河沙。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，所述恒温培养箱温度为22℃。

优选的是，所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，所述He-Ne激光生物辐照仪的波长为632.8nm，功率为1.0mW，光束直径为1.0mm，功率密度为128mW/cm²，辐射剂量为20.0J/cm²。

本发明至少包括以下有益效果：(1)本发明采用激动素浸种处理，降低心叶紫金牛种子中核酸和蛋白质分解活性，促进细胞分裂，延缓衰老，将糖和氨基酸吸入细胞分裂部位，增加可溶性蛋白质和可溶性糖含量，最终促进种子打破休眠，提高种子萌发率；(2)变温浸种处理可以提高种子的吸胀率和萌发速率；(3)利用He-Ne激光生物辐照仪进行辐照，对种子进行一种良性刺激，可以显著提高种子自身内部酶的活性，促进新陈代谢加快，进而表现为萌发率提高；(4)采用层积处理，有效解除种子休眠；(5)采用恒温培养，使得出芽一致。

本发明属首次对促进心叶紫金牛萌发技术的研究成果，显著促进心叶紫金牛种子的萌发，可使心叶紫金牛种子的萌发率高达92％，并且具有萌发时间短、出芽整齐的优势，同时本发明方法操作简便、成本低、实用性强、无污染以及易推广，对保护我国心叶紫金牛种质资源和促进其大规模人工种植具有很重要的生态和经济意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法，包括以下步骤：

步骤一，采集种子：每年1月采集成熟的心叶紫金牛果实，取出种子，洗净，从中挑选饱满、无破损、不携带病虫卵的种子备用；

步骤二，种子消毒：将所述步骤一挑选的种子置于质量分数为0.3％的高锰酸钾溶液浸泡25min，再置于质量分数为1％的硫酸铜溶液浸泡20min，蒸馏水冲洗5次；

步骤三，变温浸泡：将所述步骤二消毒处理过的种子置于30～35℃的水中浸泡4～5小时，再置于20～25℃的水中浸泡8～10小时。

步骤四，激光辐照：将所述步骤三变温浸泡处理过的种子放入He-Ne激光生物辐照仪中辐照5min。

步骤五，激动素浸种：将所述步骤四激光辐照处理的心叶紫金牛种子完全浸泡于激动素溶液中，其中所述激动素溶液浓度为10～100mg/L，浸泡时间为1～24小时，所述He-Ne激光生物辐照仪的波长为632.8nm，功率为1.0mW，光束直径为1.0mm，功率密度为128mW/cm²，辐射剂量为20.0J/cm²；

其中，所述浓度为10-100mg/L的激动素溶液的配制方法为：首先从-20℃的冰箱中取出激动素粉末，分别准确称取10mg、20mg、50mg、100mg倒入4个对应的试管中，然后各加入浓度为95％的乙醇溶解20-30min，待激动素充分溶解后，缓慢倒入盛有600-800mL蒸馏水的4个对应烧杯中，一边倒一边搅拌，避免激动素产生重结晶，最后用蒸馏水定容到4个对应的1000mL容量瓶中，颠倒摇匀，即配得浓度为10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L的激动素溶液。

步骤六，层积处理：将所述步骤五激动素溶液浸泡过的种子，与层积基质混合，放入干净容器中，用薄膜覆盖，并在薄膜上扎几个小孔以便种子呼吸，再移至3～5℃的冰箱中层积处理35天，其中，所述种子与所述层积基质的重量比为1∶3，所述层积基质为含水量为60～70％的河沙。

步骤七，恒温培养：将所述步骤六层积处理过的心叶紫金牛种子进行恒温培养，所述恒温培养包括：将经过步骤六浸种的心叶紫金牛种子置于两层充分湿润的萌发纸上，然后将所述萌发纸放于透明玻璃培养皿中，并盖上盖子，最后将所述透明玻璃培养皿放于恒温培养箱中，所述恒温培养箱温度为18～28℃，所述恒温培养箱湿度为75～85％，时间为10～25天。

(1)不同浓度激动素溶液浸种对心叶紫金牛种子萌发的影响

为了搞清楚不同浓度激动素溶液浸种对心叶紫金牛种子萌发的影响，将进行试验，本试验步骤如下：(1)将所述步骤一采集到的种子进行消毒处理，其中所述消毒处理采用的是所述步骤二的方法；(2)然后将所述步骤二消毒处理过的种子进行变温浸泡，所述变温浸泡采用是所述步骤三的方法；(3)将所述步骤三处理过的种子进行激光辐照，所述激光辐照的处理方法采用的是所述步骤四的方法；(4)将所述步骤四激光辐照处理的种子完全浸泡于激动素溶液中，所述激动素浸泡处理采用的是所述步骤五的方法，浸种时间为12小时，其中，设置4个不同的激动素浓度(10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L)的溶液，以及一个空白对照(CK)，也就是激动素浓度为0mg/L的蒸馏水溶液；(5)将所述步骤五激动素溶液浸种后的种子进行层积处理，其中所述层积处理方法采用所述步骤六的方法；(6)将所述步骤六层积处理后的种子进行恒温培养，其中所述恒温培养采用所述步骤七的方法，而且恒温箱温度为22℃，时间为25天；并观察不同浓度激动素浸种对心叶紫金牛种子萌发的影响如表2所示。

表1 不同浓度激动素溶液浸种对心叶紫金牛种子萌发的影响

结果表明，激动素浸种对心叶紫金牛种子的萌发具有极显著影响，统计分析显示各处理与空白对照(CK)间的萌发率差异极显著。结合出芽整齐度和芽的健壮程度来看，以浓度为25mg/L和50mg/L的激动素溶液浸种为优，恒温培养25d时，两者萌发率均高达86％以上；其中以浓度为50mg/L的激动素溶液的处理效果最佳，恒温培养25d时，萌发率高达92％。

(2)不同浸种时间对心叶紫金牛种子萌发的影响

为了搞清楚不同浸种时间对心叶紫金牛种子萌发的影响，将进行试验，本试验步骤如下：(1)将所述步骤一采集到的种子进行消毒处理，其中所述消毒处理采用的是所述步骤二的方法；(2)然后将所述步骤二消毒处理过的种子进行变温浸泡，所述变温浸泡采用是所述步骤三的方法；(3)将所述步骤三处理过的种子进行激光辐照，所述激光辐照的处理方法采用的是所述步骤四的方法；(4)将所述步骤四激光辐照处理的种子完全浸泡于激动素溶液中，所述激动素浸泡处理采用的是所述步骤五的方法，其中所述激动素溶液浓度为50mg/L，并设置4个不同的浸种时间(1h、6h、12h和24h)；(5)将所述步骤五激动素溶液浸种后的种子进行层积处理，其中所述层积处理方法采用所述步骤六的方法；(6)将所述步骤六层积处理后的种子进行恒温培养，其中所述恒温培养采用所述步骤七的方法，而且恒温箱温度为22℃，时间为25天；观察不同浸种时间对心叶紫金牛种子萌发的影响如表2所示。

表2 不同浸种时间对心叶紫金牛种子萌发的影响

结果表明，激动素浸种时间对心叶紫金牛种子萌发的影响较大，统计分析显示不同处理间的萌发率差异极显著，结合出芽整齐度和种苗的健壮程度来看，浸种12h效果最佳，恒温培养25d时，萌发率高达92％。

(3)不同培养温度对心叶紫金牛种子萌发的影响

为了搞清楚不同培养温度对心叶紫金牛种子萌发的影响，将进行试验，本试验步骤如下：(1)将所述步骤一采集到的种子进行消毒处理，其中所述消毒处理采用的是所述步骤二的方法；(2)然后将所述步骤二消毒处理过的种子进行变温浸泡，所述变温浸泡采用是所述步骤三的方法；(3)将所述步骤三处理过的种子进行激光辐照，所述激光辐照的处理方法采用的是所述步骤四的方法；(4)将所述步骤四激光辐照处理的种子完全浸泡于激动素溶液中所述激动素浸泡处理采用的是所述步骤五的方法，其中所述激动素溶液浓度为50mg/L，浸种时间为12小时；(5)将所述步骤五激动素溶液浸种后的种子进行层积处理，其中所述层积处理方法采用所述步骤六的方法；(6)将所述步骤六层积处理后的种子进行恒温培养，其中所述恒温培养采用所述步骤七的方法，而且设置4个不同的恒温箱温度(18℃、22℃、25℃、28℃)，时间为25天；并观察不同培养温度对心叶紫金牛种子萌发的影响如表3所示。

表3 不同培养温度对心叶紫金牛种子萌发的影响

结果表明，不同培养温度对心叶紫金牛种子的萌发具有极显著影响，统计分析显示不同处理间的萌发率差异极显著。当培养温度低至18℃，培养10d时，心叶紫金牛种子还没有萌发；当培养25d时，心叶紫金牛种子的萌发率才达到75％。当培养温度高达28℃时，心叶紫金牛种子在培养过程中发生变软、发腐和发霉现象，说明不宜在28℃及以上温度培养。综合出芽整齐度和芽的健壮程度来看，22℃和25℃为心叶紫金牛种子萌发的适宜温度，培养25d时，两者萌发率均高达84％以上；其中以22℃的处理效果最佳，培养25d时，萌发率高达92％。

综上所述，促进心叶紫金牛种子萌发的方法中，最佳方案为将心叶紫金牛种子置于浓度为50mg/L的激动素溶液中浸泡12h，然后在22℃的恒温培养箱中培养，心叶紫金牛种子的萌发率高达92％，该方法得到的心叶紫金牛种子萌发快，萌发率高，出芽整齐，种苗健壮，而且该方法简便、成本低、实用性强、无污染以及易推广，能有效促进心叶紫金牛种子的萌发，并且具有萌发时间短、出芽整齐的优势，同时本发明对保护我国心叶紫金牛种质资源和促进其大规模人工种植具有很重要的生态和经济意义。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims

1.一种促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤B，将经过浸种的心叶紫金牛种子进行恒温培养。

2.如权利要求1所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，所述预处理包括：

3.如权利要求2所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，所述激动素浓度为50mg/L，浸种时间为12小时。

4.如权利要求3所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，所述恒温培养包括：将经过步骤A浸种的心叶紫金牛种子置于两层充分湿润的萌发纸上，然后将所述萌发纸放于透明玻璃培养皿中，并盖上盖子，最后将所述透明玻璃培养皿放于恒温培养箱中，所述恒温培养箱温度为18～28℃，所述恒温培养箱湿度为75～85％，时间为10～25天。

5.如权利要求4所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，在所述步骤A用激动素溶液浸泡之后，在所述步骤B恒温培养之前，还包括步骤M：将所述步骤A激动素溶液浸泡过的种子，与层积基质混合，放入干净容器中，用薄膜覆盖，并在薄膜上扎几个小孔以便种子呼吸，再移至3～5℃的冰箱中层积处理35天，其中，所述种子与所述层积基质的重量比为1∶3。

6.如权利要求5所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，所述层积基质为含水量为60～70％的河沙。

7.如权利要求6所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，所述恒温培养箱温度为22℃。

8.如权利要求7所述的促进心叶紫金牛种子萌发的方法，其特征在于，所述He-Ne激光生物辐照仪的波长为632.8nm，功率为1.0mW，光束直径为1.0mm，功率密度为128mW/cm²，辐射剂量为20.0J/cm²。