CN105998031A

CN105998031A - 榼藤子酸的应用及其制备方法

Info

Publication number: CN105998031A
Application number: CN201610365584.1A
Authority: CN
Inventors: 熊慧; 梅之南; 赵平; 张胜男
Original assignee: South Central University for Nationalities
Current assignee: South Central Minzu University
Priority date: 2016-05-30
Filing date: 2016-05-30
Publication date: 2016-10-12

Abstract

本发明公开了一种榼藤子酸的应用及其制备方法。榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用：榼藤子酸作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成防治糖尿病药物或药物组合物。与现有的降糖药相比，EA具有有效剂量小、作用可靠、毒副作用小等优点，其疗效不仅在于降低血糖，同时在防治糖尿病并发症中也具有重要作用。因此EA在抗糖尿病方面具有可观的开发和应用价值。

Description

榼藤子酸的应用及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及天然药物来源的榼藤子酸的应用及其制备方法。

背景技术

糖尿病（DM)是一种由胰岛素绝对或相对分泌不足而导致的以高血糖为主要特征的慢性代谢性疾病。在全球范围内DM发病率成逐年升高的趋势，已成为继癌症、心脑血管之后威胁人类健康的第三大疾病。据世界卫生组织报告，2014年全球糖尿病患者人数已达3.87亿，预计到2035年将增至5.92亿，增幅达53%。在DM患者中二型糖尿病(T2DM)患者占90%以上，因此针对二型糖尿病的治疗是防治糖尿病的关键。目前治疗糖尿病的药物主要有双胍类、噻唑烷二酮类、磺脲类、α-糖苷酶抑制剂类等，但都有各种不等的毒副作用。天然的活性成分具有毒副作用小、多位点效应等优点而成为开发抗糖尿病药物的主要来源。

榼藤子为豆科榼藤子属植物榼藤子 Entada pHaseoloides (Linn. ) Merr.的干燥种仁，又名象豆、合子、眼镜豆。味涩、甘、平，归胃、肝、大肠经。榼藤子在傣族、壮族等多个少数民族地区常用，主要用于治疗痔疮、胃痛、便秘、水肿等病症。榼藤子酸，英文名为Entagenic acid，简称EA，其为榼藤子皂苷的一苷元形式，是以齐墩果烷为母核的五环三萜皂苷类化合物，结构式如下所示：

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：目前治疗糖尿病的药物存在各种不等的毒副作用。

为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供榼藤子酸在制备抗糖尿病药物中的应用，为民族药物开发及寻找新型抗糖尿病药物提供依据。

本发明提供了榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用。

优选地，榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用为：榼藤子酸作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成防治糖尿病药物或药物组合物。

优选地，所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。

优选地，所述的防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物。

优选地，所述的防治糖尿病药物为增强机体糖耐量，降低胰岛素抵抗指数的药物。

优选地，所述的防治糖尿病药物为改善脂代谢紊乱的药物。

本发明提供一种防治糖尿病的药物，所述药物的药效成分含有榼藤子酸。

优选地，所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。

优选地，所述的防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物；或者为增强机体糖耐量，降低胰岛素抵抗指数的药物；或者为改善脂代谢紊乱的药物。

本发明还提供制备榼藤子酸的方法，包括如下步骤：

1）榼藤子总皂苷的制备：取榼藤子种仁粉碎，用体积浓度70%的乙醇水溶液浸泡提取，合并提取液，回收乙醇得到浸膏，浸膏用热水溶解，上HP-20大孔树脂柱，用体积浓度30%的乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度50%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得榼藤子总皂苷；

2）榼藤子酸的制备：取榼藤子总皂苷，加HCl水溶液，90℃水解反应，水解液用NaOH调pH至5~6，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得到的固体用甲醇溶解，过MCI柱色谱，用体积浓度50%的乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度60%乙醇的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液蒸干即得榼藤子酸。

优选地，步骤（1）中浸膏用50~70℃的水溶解。

优选地，步骤（2）中HCl水溶液的浓度为2 mol/L，水解反应的温度为85~95℃。

与现有的技术相比，本发明具有以下有益的效果：

本发明公开了榼藤子酸（EA）在制备防治糖尿病药物中的应用：EA具有抗糖尿病的作用，本发明用不同浓度的EA分别处理大鼠骨骼肌(L6)细胞,发现EA可显著增加L6细胞葡萄糖消耗量，且其效药物浓度均比二甲双胍及结构相似的同类化合物低，结果表明EA具有潜在的降血糖活性。本发明用EA作用于糖尿病模型小鼠，结果发现，EA能显著减少糖尿病模型小鼠进水量；改善其餐后2h血糖水平及葡萄糖、胰岛素耐量；可降低二型糖尿病模型小鼠空腹胰岛素水平，改善胰岛素抵抗状态；可降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平而改善脂质代谢紊乱状态。因此EA具有显著的抗二型糖尿病作用。

与现有的降糖药相比，EA具有有效剂量小、作用可靠、毒副作用小等优点，其疗效不仅在于降低血糖，同时在防治糖尿病并发症中也具有重要作用。因此EA在抗糖尿病方面具有可观的开发和应用价值。

附图说明

图1该化合物的核磁共振氢谱。

图2 该化合物的HPLC 图谱。

图3 EA对糖尿病模型小鼠IPGTT的影响。

图4 EA对糖尿病模型小鼠IPITT的影响。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1：榼藤子总皂苷及榼藤子酸的制备

1榼藤子总皂苷的制备：取榼藤子种仁（5.3 kg）粉碎，用6倍量体积百分比浓度70%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次24小时，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏（1288g），浸膏用60℃热水溶解上HP-20大孔树脂柱，上样量以药材量计与树脂重量比为（1:13）,用10个柱体积的体积百分比浓度为30%的乙醇水溶液冲洗除杂，用5个柱体积的体积百分比浓度为50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液的洗脱液，浓缩，干燥，即得榼藤子总皂苷。

2榼藤子酸（EA）的制备：取榼藤子总皂苷，加20倍量2 mol/L的HCl，90℃水解反应3h,水解液用NaOH调pH至5.4 ，用等量乙酸乙酯萃取三次，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯,得到的固体用2倍量（g/ml=1:2）甲醇溶解，过MCI柱色谱，用10个柱体积的体积百分比浓度为50%乙醇水溶液冲洗除杂，用5个柱体积的体积百分比浓度为60%乙醇水溶液洗脱，收集60%乙醇水溶液洗脱液，蒸干即得EA（HPLC法测定纯度为96%）。

3 对实施例1中提取得到的榼藤子酸进行结构鉴定

该化合物为白色无定型粉末。结合核磁共振氢谱（图1）及HPLC图谱（图2）与标准品对照鉴定该化合物为榼藤子酸，结构式如下所示：

实施例2：EA及结构相似的同类化合物对大鼠骨骼肌细胞（L6）葡萄糖消耗的对比。

1材料与方法

1.1材料：齐墩果酸、熊果酸（含量≥98%，中国药品生物制品检定所）、积雪草酸（含量≥98%，上海源叶生物科技有限公司），刺囊酸（含量≥98%，天津一方科技有限公司）；L6细胞株购自中科院上海细胞库；胰蛋白酶、胎牛血清（Hyclon，美国），α-MEM培养基（Gibco, 美国），葡萄糖氧化酶法测定试剂盒（英科新创科技有限公司），CO₂ 培养箱（ThermoScientific公司，美国)；XDS-1型倒置显微镜（重庆光学仪器厂）；酶标仪（Tecan infinite M2000型，瑞士）；超净工作台（苏州净化设备厂）。

1.2细胞培养

L6细胞生长于含 10 % 胎牛血清的α-MEM培养基中，37℃恒温，5% CO_2,饱和湿度的培养箱中生长，0.25%胰酶消化传代。取对数生长期的细胞用于实验。

1.3 L6细胞葡萄糖量消耗测定

取对数生长期的L6细胞以1×10⁴的密度接种于96孔板，每孔100μL。待细胞单层贴壁后换上含2%胎牛血清的α-MEM培养基，每2天换液一次，至第6天使细胞分化为成熟骨骼肌细胞。用0%胎牛血清的培养基饥饿细胞2 h后，对照组换上含0%胎牛血清的培养基，各给药组换上含不同药物浓度的含0%胎牛血清的培养基继续孵育24h，按葡萄糖氧化酶法测定每孔葡萄糖含量：按试剂盒说明，从培养板中吸取2ul细胞培养液与200ul工作液混合，37℃反应30 min，505nm波长处测定各孔吸光度值。每孔葡萄糖含量=（标准孔吸光度值/测定孔吸光度值）×标准液葡萄糖浓度。每孔葡萄糖消耗量 = 空白培养基中葡萄糖含量－每孔葡萄糖含量。

葡萄糖含量测定后按MTT法测定细胞活性：弃掉培养基，每孔加100μl新培养基及10μl（0.5mg/mL） MTT孵育4h后，弃掉培养基，每孔加150μl DMSO溶解紫色晶体，492nm波长下测定各孔OD值。葡萄糖消耗量用每孔细胞实际消耗量与每孔OD值的比值表示用于消除细胞增殖或是药物毒性等综合因素造成的实验误差。最后计算各组细胞葡萄糖消耗量与对照组的比值得到各组葡萄糖消耗率。每组设6个复孔，实验重复3次。

2统计学处理：采用SPSS10.0对各组实验数据进行检验：各组数据以均数±标准差（x±s）表示,组间比较用单因素方差分析及t检验，以P<0.05为有统计学意义。

3试验结果：

结果如表1所示，齐墩果酸、熊果酸、榼藤子酸均在一定程度上促进了大鼠骨骼肌L6细胞葡萄糖消耗，显示有良好的体外降糖活性。与对照组相比，齐墩果酸80μM时可显著增加L6葡萄糖消耗量(117.41%, P<0.05), 160μM时虽可极显著地增加葡萄糖消耗量（179.33%，P<0.001），但是其也具有显著的细胞毒性（P<0.001）；熊果酸在80μM时可显著增加葡萄糖消耗量（131.20%，P<0.01）；榼藤子酸40μM时即可显著增加葡萄糖消耗量（122.54%，P<0.01），80μM时虽有一定的细胞毒性（P< 0.05），但仍可及显著地增加葡萄糖消耗量（163.99%，P<0.001），其增加葡萄糖消耗的活性成剂量依赖性增强。刺囊酸和积雪草酸在安全剂量范围内均不能显著增加细胞葡萄糖消耗量。

表1 同类化合物促进L6细胞葡萄糖消耗活性的对比

注：与对照组相比^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001

4 结论：实验结果表明，榼藤子酸具有促进L6细胞葡萄糖消耗的作用，显示了一定的体外降糖活性。与结构类似的同类化合物相比，榼藤子酸的有效药物浓度低于齐墩果酸和熊果酸。

实施例5：EA对自发性二型糖尿病模型db/db小鼠的影响

1.实验材料

1.1 给药样品：自制EA样品（HPLC法测定纯度≥96%），对照药品：盐酸二甲双胍（阿拉丁，批号:M107827）。所有样品均用0.25%CMC-Na配制。

1.2实验动物：7周龄雄性BKS-db/db小鼠40只，同窝杂合子db/m小鼠8只，均购自南京模式动物研究所（合格证编号：SCXK(苏)2010-0001 ）。db/db纯合子小鼠餐后两小时血糖均≥15mmol/L,符合糖尿病症状。均给予普通饲料喂养，12h光照/黑暗，室温22±1℃，湿度50%-60%。

1.3主要试剂及设备

诺和锐；甘油三酯试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20150127），总胆固醇测试盒（南京建成生物工程研究所，批号：20150521），高密度脂蛋白胆固醇测试盒（南京建成生物工程研究所，批号:20150522）,低密度脂蛋白胆固醇测试盒（南京建成生物工程研究所，批号：20150605），小鼠胰岛素ELISA试剂盒（Mercodia,批号：10-1247-01）,血糖仪（ONETOUCH Ultra），酶标仪（Tecan infinite M2000型，瑞士），高速冷冻离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）。

2.实验方法

2.1分组及给药:db/db小鼠随机分成5组，每组8只，分别为模型组、EA高剂量组（20mg/kg）、EA中剂量组（10mg/kg）、EA低剂量组（5mg/kg）及阳性药物组（150mg/kg）,db/m小鼠做为正常对照组。各组均灌胃给药，模型组及正常对照组灌胃给予等剂量溶剂（0.25% CMC-Na）。每天一次，共计6周。

2.2 标本采集及处理：实验结束前一天，小鼠禁食不禁水12h,摘眼圈取血，血凝后于4℃，3500r·min^-1离心10min后分装于-80℃保存待用。断颈处死小鼠，迅速取出肝脏、肾脏、附睾脂肪及胰腺浸泡于4%多聚甲醛或放液氮中速冻待用。

2.3检测指标

2.3.1体重、进水量测定:观察实验期间各组小鼠精神状态及健康状况，记录实验前后体重、饮水量变化，饮水量以连续三天进水量的平均值表示。

2.3.2 餐后2h血糖检测：各组小鼠分别于给药前，及给药后每周禁食不禁水2h，采用血糖仪尾端静脉取血测定血糖值。

2.3.2 IPGTT测定：给药六周后测定IPGTT，具体方法为：各组小鼠禁食不禁水12h，测定其空腹血糖作为0 min血糖值，立即腹腔注射1g/kg葡萄糖，分别测定注射后30min、60min、120min血糖值。

根据一下公式计算其糖耐量曲线下面积：

AUC=0.5×(FBG_0min+BG_30min)/2+0.5×(BG_30min+BG_60min)/2+1×(BG_60min+BG_120min)/2

2.3.3 IPITT测定:给药六周后测定IPITT：各组小鼠禁食不禁水4h,测定其血糖作为0min血糖值，立即腹腔注射0.75U/kg胰岛素，分别测定注射后30min、60min、120min血糖值。

根据公式计算其胰岛素耐量曲线下面积：

AUC=0.5×(BG_0min+BG_30min)/2+0.5×(BG_30min+BG_60min)/2+1×(BG_60min+BG_120min)/2

2.3.4 血清指标测定：

将分离的血清用于检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、空腹血糖（FBG），均严格按照试剂盒说明操作。空腹胰岛素（FINS）用ELISA法按照试剂盒操作说明测定。

按稳态模型HOMA-IR分析法，计算胰岛素抵抗指数（IRI），以此来评价胰岛素抵抗程度。

IRI=(FINS×FBG)/22.5

3.统计学处理

采用SPSS10.0对各组实验数据进行检验：各组数据以均数±标准差（x±s）表示,组间比较用单因素方差分析及t检验，以P<0.05为有统计学意义。

4.实验结果

4.1EA对小鼠体重的影响

给药前，db/db小鼠各组之间体重无显著性差异。给药后，db/db小鼠各组之间体重亦无显著性差异。与给药前相比db/db各组小鼠体重增长率大于对照组小鼠，且各给药组体重增长率均小于模型组，但各组之间无显著性差异。结果见表1。

表1 EA对糖尿病模型小鼠体重的影响(x±s, n=8)

4.2 EA对小鼠进水量的影响

db/db糖尿病小鼠进水量显著多于正常对照组，给药前，db/db各组小鼠进水量无显著性差异。给药6周后，与模型组相比，各给药组db/db小鼠进水量均显著减少。EA药物处理组小鼠进水量呈剂量依赖性减少。结果见表2。

表2 EA对糖尿病模型小鼠进水量的影响(x±s, n=8)

组别	剂量	初始值 (g)	终值（g）
				对照	—	5.79±0.37	5.25±1.41
模型	—	14.75±0.07^###	20.06±1.68^###
				阳	150 mg/kg	14.23±1.03	12.03±0.43^***
低	5 mg/kg	16.25±0.43	16.83±2.24^**
				中	10 mg/kg	13.39±0.37	15.82±0.75^***
高	20 mg/kg	14.17±0.47	14.56±0.47^***

注：与对照组比较^#P<0.05，^##P<0.01，与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.01

4.3 EA对糖尿病模型小鼠餐后2h血糖的影响

各个时期db/db各组小鼠餐后2h血糖水平显著高于对照组。给药前db/db各组之间血糖水平无显著性差异，给药两周后高剂量组能显著降低餐后2h血糖，效果与阳性药物组相当，给药4周后各组均能显著降低餐后2h血糖。结果见表3。

表3 EA对糖尿病模型小鼠餐后2h血糖的影响(x±s, n=8)

组别	剂量	0 week	2 week	4 week	6 week
						对照	—	7.32±0.74	5.68±0.82	5.93±0.70	5.93±0.76
模型	—	24.42±3.13^##	25.04±3.96^##	26.3±1.71^##	25.99±1.33^##
						阳	150 mg/kg	23.75±2.94	18.09±3.36^**	15.9±2.9^**	16.27±2.96^**
低	5 mg/kg	24.32±3.32	23.65±3.01	22.55±2.76^**	22.11±2.24^*
						中	10 mg/kg	23.36±2.87	21.16±3.08	21.71±2.87^*	21.11±3.85^*
高	20 mg/kg	24.46±1.97	19.34±2.89^**	19.74±2.32^**	18.93±1.8^*

4.4 EA对db/db小鼠IPGTT的影响

经过对各组小鼠IPGTT的测定，结果表明，各组小鼠腹腔注射1g/kg葡萄糖后0.5h血糖值达到高峰。正常对照小鼠在1h后血糖开始下降，2h时已降至注射前水平。模型组小鼠血糖达到峰值后一直处于高糖状态，且与对照组有极显著性差异。各给药组在2h时血糖明显下降，与模型组相比阳性组及高剂量组具显著性差异。结果见表4与图3。

表4 EA对糖尿病模型小鼠IPGTT的影响(x±s, n=8)

4.5 EA对db/db小鼠IPITT的影响

结果如表5与图4所示，对照组小鼠腹腔注射0.75U/kg胰岛素后0.5h对照组血糖显著下降，1h时下降到最低值。EA给药组在1h时血糖值开始下降，2h时虽仍在下降，但各时间的血糖值均低于模型小鼠。AUC显示，阳性组和EA高剂量组可显著增加模型小鼠对胰岛素的耐量（P<0.05）。

表5 EA 对糖尿病模型小鼠IPITT的影响（x±s, n=8）

4.6 EA对db/db小鼠血脂的影响

与对照组相比，模型组血清TC、TG、LDL-C均显著升高（P<0.01），与模型组相比，各给药组均可显著降低TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，并呈一定的剂量依赖性。结果见表6。

表6 EA对糖尿病模型小鼠血脂的影响（x±s, n=6）

组别	剂量	TC(mmol/L)	TG(mmol/L)	HDL-C(mmol/L)	LDL-C(mmol/L)
						对照	—	2.17±0.27	0.75±0.15	2.89±0.35	0.12±0.05
模型	—	5.20±0.80^###	1.66±0.20^###	3.53±0.17	0.68±0.11^###
						阳性	150 mg/kg	3.67±0.34^**	1.17±0.18^***	3.95±0.60^*	0.36±0.12^***
低	5 mg/kg	4.19±0.49^*	1.29±0.26^**	3.92±0.43^*	0.50±0.20^*
						中	10 mg/kg	3.95±0.46^*	1.28±0.13^***	4.04±0.23^**	0.39±0.13^***
高	20 mg/kg	3.83±0.35^**	1.26±0.24^**	4.89±0.58^***	0.40±0.08^***

4.7 EA对糖尿病模型小鼠空腹血糖（FBG）、胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的影响

如表7所示，与对照组相比，模型组FBG、FINS、HOMA-IR均显著增加，提示db/db模型小鼠存在明显的高血糖、高胰岛素血症，并且表现出显著的胰岛素抵抗。与模型组相比，各给药组可不同程度的减轻胰岛素抵抗状态，表明EA可有效降低空腹血糖、空腹胰岛素水平，可有效改善胰岛素抵抗。

表7 EA对糖尿病模型小鼠FINS、胰岛素抵抗的影响（x±s, n=6）

	剂量	FINS(U/L)	FBG(mmol/L)	HOMA-IR
					对照	—	0.32±0.05	4.37±1.39	0.05
模型	—	3.24±0.20^###	23.23±4.91^###	3.34^###
					阳	150 mg/kg	2.89±0.73	13.28±2.45^***	1.7
低	5 mg/kg	2.76±0.53	20.26±4.65^*	2.48
					中	10 mg/kg	2.68±0.48	18.84±4.09^*	2.24
高	20 mg/kg	2.51±0.47	12.51±3.65^***	1.39

从上可看出，本发明公开了榼藤子酸（EA）在制备防治糖尿病药物中的应用：EA具有抗糖尿病的作用，本发明用不同浓度的EA分别处理大鼠骨骼肌(L6)细胞, 发现EA可显著增加L6细胞葡萄糖消耗量，且其效药物浓度均比二甲双胍及结构相似的同类化合物低，结果表明EA具有潜在的降血糖活性。本发明用EA作用于二型糖尿病模型小鼠，结果发现，EA能显著减少糖尿病模型小鼠进水量；改善其餐后2h血糖水平及葡萄糖、胰岛素耐量；可降低二型糖尿病模型小鼠空腹胰岛素水平，改善胰岛素抵抗状态；可降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平而改善脂质代谢紊乱状态。因此EA具有显著的抗二型糖尿病作用。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims

1.榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，榼藤子酸作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成防治糖尿病药物或药物组合物。

3.根据权利要求1或2所述的榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。

4.根据权利要求1所述的榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物；或者，所述防治糖尿病药物为增强机体糖耐量，降低胰岛素抵抗指数的药物；或者，所述防治糖尿病药物为改善脂代谢紊乱的药物。

5.一种防治糖尿病的药物，其特征在于，所述药物的药效成分含有榼藤子酸。

6.根据权利要求5所述的防治糖尿病的药物，其特征在于，所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。

7.根据权利要求5所述的防治糖尿病的药物，其特征在于，所述防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物；或者为增强机体糖耐量，降低胰岛素抵抗指数的药物；或者为改善脂代谢紊乱的药物。

8.一种制备榼藤子酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）榼藤子总皂苷的制备：取榼藤子种仁粉碎，用体积浓度70%的乙醇水溶液浸泡提取，合并提取液，回收乙醇得到浸膏，浸膏用水溶解，上HP-20大孔树脂柱，用体积浓度30%的乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度50%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得榼藤子总皂苷；

2）榼藤子酸的制备：取榼藤子总皂苷，加HCl水溶液，水解反应，水解液用NaOH调pH至5~6，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得到的固体用甲醇溶解，过MCI柱色谱，用体积浓度50%的乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度60%乙醇的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液蒸干即得榼藤子酸。

9.根据权利要求8所述的制备榼藤子酸的方法，其特征在于，步骤（1）中浸膏用50~70℃的水溶解。

10.根据权利要求8所述的制备榼藤子酸的方法，其特征在于，步骤（2）中HCl水溶液的浓度为2 mol/L，水解反应的温度为85~95℃。