CN105996009A - 一种抗氧化抗衰老sod纳米硒肽组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,每100克组合物中各组分含量为:SOD150‑650万活力单位、血红蛋白肽35‑70g、低聚糖15‑50g、纳米硒4‑8mg、葡萄糖酸锌5000‑7200mg、葡萄糖酸锰1000‑2200mg、葡萄糖酸铜600‑1200mg。其制备方法是:先以猪血红细胞为原料制备SOD和血红蛋白肽,以低聚糖为介质模板制备纳米硒,再以血红蛋白肽与纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰以及葡萄糖酸铜进行螯合反应,制备血红蛋白肽螯合粉,然后将SOD、低聚糖与血红蛋白肽螯合粉混合即得SOD纳米硒肽组合物,根据需要可制成粉剂、片剂或胶囊剂等常规内服制剂。本发明科学遣药组方,从调、养、补三个方面来增强和提高机体SOD活性与含量,能显著清除体内自由基,降低丙二醛(MDA)含量,从而实现抗氧化、抗衰老、增强免疫力的功效。

Description

一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种保健食品,尤其涉及一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物及其制备方法。
背景技术
人体因增龄、疾病、创伤、环境污染、不良生活方式以及化学药物等因素会产生过多的活性自由基,过多的自由基会引起膜损伤和交联键的形成,使机体内蛋白质变性,核酸代谢紊乱,生物酶破坏,激素被氧化,并导致膜功能损失,溶酶体内衰老色素大量堆积,产生大量脂质过氧化物(LPO)和丙二醛(MDA),使机体各脏器损伤和功能丧失,从而导致机体衰老与多种疾病。大量的科学研究表明,自由基引起的一系列氧化和过氧化反应是人类衰老和患病的根源,人体的衰老及90%以上的疾病与自由基有关。
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,简称SOD)是一类含金属的酶,按金属辅基成分的不同可分为三种类型,即含有铜锌辅基的Cu,Zn-SOD,含有锰辅基的Mn-SOD,以及含有铁辅基的Fe-SOD,高等动物细胞内只有两种SOD,即Cu,Zn-SOD和Mn-SOD。SOD是国际上公认的超氧阴离子氧自由基( O2 -. )的专一清除剂,其作用机理是SOD特异性地将机体产生的超氧阴离子氧自由基( O2 -. )歧化为过氧化氢(H2O2)和分子氧(O2),由此生成的过氧化氢(H2O2)再经过氧化氢酶(CAT)或谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的作用进一步分解为无毒的水(H2O)。因此,SOD 是构成机体防御氧自由基损伤的第一道防线。SOD催化O2 -.歧化反应式如下:
国内外大量的实验和临床研究都一一证实,无论青年还是老年正常人,其血液中SOD和淋巴细胞中SOD的活性和含量均随年龄的增长而呈现明显的渐进性降低趋势,尤其是45岁以后以及老年期人体红细胞内的SOD活性的下降更为显著。进一步的研究发现,导致SOD活性或含量随增龄而降低的主要因素有:第一,随着年龄递增,机体调节酶生成的内分泌系统功能也随之减退,使抗氧化酶系统合成减少, SOD的合成减少;第二,随着年龄的增长,人体内活性氧自由基生成增加,活性氧包括超氧阴离子自由基(O2 -.)、羟自由基(.OH)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(1O2)以及脂质过氧化氢等,它们都是性质极为活泼、破坏性很大的生物毒性物质,这些物质的堆积给SOD造成毒害作用,使SOD性质改变,结构破坏,酶活性下降甚至灭活,导致机体内无活性SOD增多;第三,在机体衰老过程中其它抗氧化剂和抗氧化酶类,如过氧化氢酶(CAT)、谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和维生素C含量与抗氧化能力下降。这一方面增加了SOD的消耗,另一方面也加快了SOD的失活,因而造成SOD活性的降低;第四,随着年龄的增长,与SOD密切相关的微量元素如Cu、Zn、Mn等在体内的含量降低(过多丧失或摄入不足),也是造成SOD活性和含量进一步降低的重要原因。因为在机体Cu、Zn-SOD和Mn-SOD的分子结构中,Cu、Zn、Mn三种微量元素对维持SOD活性和正常结构及分子构象具有重要作用,如果这些元素减少或丢失过多,将会影响SOD的合成,或使SOD 活性下降甚至失活。
因此,从衰老的自由基学说出发,通过补充外源性抗氧化酶类(如SOD、CAT、GSH-Px等)和抗氧化剂(如维生素C、维生素E、辅酶Q、谷胱甘肽等)以及与抗氧化酶活性中心密切相关的矿物元素(如Cu、Zn、Mn、Se等),以增强和提高机体SOD活性与含量,无疑是实现清除自由基对机体的氧化作用,延缓机体衰老进程的重要途径。
目前市场上出现了一些含有SOD的药物和保健食品,其中有不少已申报了发明专利,如专利号ZL200610044379.1公开了一种SOD保健组合物,该专利是利用SOD与VC、VE、花粉以及何首乌与黄精提取物混合复配,得到具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳、增强免疫、降脂等功能的保健组合物;专利号ZL200810112887.8公开了一种SOD复合胶囊及其制备方法,该专利采用从蝌蚪中提取的SOD酶制剂,与白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物混合后,分装胶囊,产品具有抗氧化功能,但工艺流程繁琐;专利号ZL201010604957.9公开了一种抗衰老、降压、降脂SOD药物组合物及其制备方法,该专利主要取人参粉、田七粉、红花粉、银杏粉与松树皮提取物混合烘干灭菌后,加入SOD混匀,制成胶囊制剂;专利号ZL201110197534.4公开了SOD胶原蛋白肽美颜抗衰老剂,该专利选用天然植物SOD与胶原蛋白多肽、透明质酸、珍珠粉以及人参皂苷提取物的合理组配,具有活化细胞机能,提高免疫力和美容抗衰老的功效;专利号ZL201110254795.5公开了一种SOD复合胶囊及其制备方法,该专利选取SOD、人参提取物、珍珠粉、党参提取物、红花提取物、绞股蓝提取物、螺旋藻、松树皮提取物与枸杞多糖组合,制成肠溶性胶囊,产品具有延缓衰老,增强机体免疫力的效果;专利号ZL201210179382.X公开了一种治疗化疗、放疗综合症口服生物药及其制备方法,该专利主要以重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)、甘露糖、海藻糖、金属硫蛋白、维生素C和维生素E为原料,通过分步溶解、过滤、冷冻干燥等步骤加工而成的粉状口服生物新药,产品在治疗癌症病人放、化疗综合症,保护白细胞、淋巴细胞不受损失以及抗氧化方面具有较好的功效。这些专利申请所涉及的产品配方各不相同,但制作工艺大同小异,其中绝大多数是以SOD添加中草药提取物的方式补充和调节人体的SOD活性,也有一些是通过以SOD组合其他抗氧化剂(如维生素C和维生素E)协同作用的方式来清除体内氧自由基,没有涉及到整合外源性SOD、酶活性中心元素、活性小肽与功能性低聚糖的功效,并通过科学组方,协同增效来全面提高和增强机体的SOD活性。因此,现有技术方案在产品组方和疗效方面存在不足之处。
发明内容
本发明的目的就是为了克服现有技术的不足,提供一种全面整合外源性SOD、酶活性中心元素、活性小肽与功能性低聚糖的功效,使SOD在矿物元素、小分子肽和抗氧化低聚糖的共同保护与促进下吸收更好、功效更强的抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,所述的组合物含有SOD 、血红蛋白肽、低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,可以抗氧化,抗衰老,增强人体免疫力。
本发明的目的是通过下述技术方案实现的:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,每100g组合物中各个组分含量为:
SOD150-650万活力单位,
血红蛋白肽35-70g,
低聚糖15-50g,
纳米硒4-8mg,
葡萄糖酸锌5000-7200mg,
葡萄糖酸锰1000-2200 mg,
葡萄糖酸铜600-1200 mg。
所述的SOD是猪血红细胞提取物。
所述的血红蛋白肽是猪血红蛋白酶解物,含有60%以上的活性小分子肽,所述活性小分子肽的相对分子量为180-1000Da。
所述的纳米硒包括低聚糖纳米微球模板和富集在其上的纳米硒。
所述的低聚糖为低聚果糖、异麦芽低聚糖、低聚半乳糖或低聚木糖中的任一种。
本发明的另一个目的是提供一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,每100g组合物中各个组分含量为:SOD150-650万活力单位,血红蛋白肽35-70g,低聚糖15-50g,纳米硒4-8mg,葡萄糖酸锌5000-7200mg,葡萄糖酸锰1000-2200 mg,葡萄糖酸铜600-1200 mg, 包括如下工艺步骤:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血,加入柠檬酸钠做抗凝处理,离心收集血红细胞,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液;
B. 通过热变性反应收集上清液、血渣:
即在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2-5.5,然后升温至60℃,保温30-50min,快速降温至45℃以下,以转速>10000r/min进行离心分离,分别收集上清液Ⅰ和血渣Ⅰ;用氢氧化钠调节上清液Ⅰ pH值至6.2~6.5,快速升温至70℃,保温10-20min后,快速降温至45℃以下,以转速>10000r/min进行离心分离,分别收集上清液Ⅱ和血渣Ⅱ;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:
即将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液;
D. 通过冷冻干燥获取SOD冻干粉:
即将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉,检测SOD酶活力,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:
将步骤B所收集到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ合并,加入两血渣重量3-5倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.0~6.5,按每公斤血渣加入蛋白酶3.0-6.0克,加热至50-55℃,搅拌下保温酶解4-8h,将酶解液升温至85℃灭酶20分钟,即得到血红蛋白酶解液;
F. 离心分离获得上清液Ⅲ:将血红蛋白酶解液进行高速离心,离心转速>10000r/min,收集上清液Ⅲ,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:
即将上清液Ⅲ经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液;将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,收集浓缩液,得到血红蛋白肽溶液;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:
即将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
称取亚硒酸钠溶于去离子水中,搅拌下依次加入低聚糖和维生素C,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液;
(3)螯合配制:
取步骤(1)所制备的血红蛋白肽粉,加去离子水溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为10-20%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后依次加入葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸铜,在60℃下继续搅拌反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;其中血红蛋白肽粉、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸铜的添加量均为配比的重量;
(4)喷雾干燥:
即将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:
即按配比称取低聚糖和步骤(1)D中所制备的SOD冻干粉,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得SOD纳米硒肽组合物。
在制作方法的步骤(1)A中所述柠檬酸钠为食品级柠檬酸钠,添加量为新鲜猪血重量的0.5%。
在制作方法的步骤(1)E中所述的蛋白酶为来源于米曲霉的弱酸性蛋白酶,酶活力为390000-430000HU/g。
在制作方法的步骤(2)所述的亚硒酸钠的使用量为配比中硒的量换算成相应的亚硒酸钠(硒含量为45.65%)的重量,低聚糖、亚硒酸钠和维生素C的混合质量比为100:1:10。
在制作方法的步骤(5)所述低聚糖的添加量为配比中低聚糖总量减去步骤(2)所添加的低聚糖量之后的余量。
本发明组合物可采用药物制剂的常规方法制备成任何常规内服制剂。例如,将本发明组合物研磨成粉制成粉剂;加入制备不同剂型所需的各种常规辅料制备成片剂、胶囊剂等。
根据以上技术方案提出的这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,具有以下优点:
(1)本发明基于衰老的自由基学说,科学遣药组方,从调、养、补三个方面来增强和提高机体SOD活性与含量,最终达到清除机体自由基,实现抗氧化、抗衰老、增强免疫力的效果。一方面,通过补充吸收外源性抗氧化酶SOD,来提高机体内SOD总体水平(即“补”);另一方面,又添加了与SOD及GSH-Px活性中心密切相关的矿物元素(金属离子),通过激活机体本身内在(存量)抗氧化酶SOD活性,使其活性得到提升与增强,或使其不再下降失活(即“调”);再者,通过添加了功能性低聚糖和活性肽,从改善人体内微生态环境,调节胃肠功能,促进营养吸收率,特别是硒、锌、锰、铜等矿物离子的吸收以及增强机体免疫力方面,间接提升机体的SOD和GSH-Px的抗氧化活性(即“养”)。
(2)本发明产品中各功效成份巧妙组合,有机结合,相互补充,协同增效。例如,将活性小分子肽与矿物(金属)离子Se、Zn、Mn、Cu结合在一起,形成稳定的可溶性的蛋白肽复合物,从而提高了这些矿物(金属)离子的吸收利用率;再如,利用低聚糖对纳米硒的均匀分散和稳定作用,以低聚糖为微球模板富集、稳定纳米硒,同时低聚糖还是一个缓冲载体,可以逐步将硒释放出来,起到持久补硒和抗氧化的作用,另外,低聚糖在产品中也发挥润肠通便排毒以及增甜矫味的功效;又如, 利用Cu、Zn和Mn三种金属离子是SOD酶活性中心元素,对SOD有一定的保护和稳定作用的特性,将Cu、Zn和Mn与SOD混配在一起,在一定程度上起到保护SOD 酶蛋白免遭胃酸破坏,稳定和提高SOD酶活性的作用。
(3)本发明以猪血红细胞为原料,采用联产制取工艺,同步制备SOD和血红蛋白肽原料,工艺简单,生产周期短,成本低,易于实施。
(4)本发明在制备SOD原料的过程中,采用等电点沉淀和热变性方法分离去除杂蛋白,用超滤技术浓缩和纯化SOD,不添加任何化学试剂和有机溶剂,避免了外源有毒物质的引入,提高了产品的安全性。
(5)本发明产品中矿物元素或金属离子的使用均按GB14880和GB2760的规定或中国营养学会制定的DRIs值(每日参考摄入量)执行,保证了绝对的安全性。
具体实施方式
下面结合具体实施例,对本发明作进一步详细的说明,但是本发明的实施方式并不局限于此实施例表示的范围。
本发明涉及的这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,每100g组合物中各个组分含量为:
SOD150-650万活力单位,
血红蛋白肽35-70g,
低聚糖15-50g,
纳米硒4-8mg,
葡萄糖酸锌5000-7200mg,
葡萄糖酸锰1000-2200 mg,
葡萄糖酸铜600-1200 mg。
所述的SOD是猪血红细胞提取物。
所述的血红蛋白肽是猪血红蛋白酶解物,含有60%以上的活性小分子肽,所述活性小分子肽的相对分子量为180-1000Da。
所述的纳米硒包括低聚糖纳米微球模板和富集在其上的纳米硒。
所述的低聚糖为低聚果糖、异麦芽低聚糖、低聚半乳糖或低聚木糖中的任一种。
本发明的另一个目的是提供一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,每100g组合物中各个组分含量为:SOD150-650万活力单位,血红蛋白肽35-70g,低聚糖15-50g,纳米硒4-8mg,葡萄糖酸锌5000-7200mg,葡萄糖酸锰1000-2200 mg,葡萄糖酸铜600-1200 mg,包括如下工艺步骤:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血,加入柠檬酸钠做抗凝处理,离心收集血红细胞,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液;
B. 通过热变性反应收集上清液、血渣:
即在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2-5.5,然后升温至60℃,保温30-50min,快速降温至45℃以下,以转速>10000r/min进行离心分离,分别收集上清液Ⅰ和血渣Ⅰ;用氢氧化钠调节上清液Ⅰ pH值至6.2~6.5,快速升温至70℃,保温10-20min后,快速降温至45℃以下,以转速>10000r/min进行离心分离,分别收集上清液Ⅱ和血渣Ⅱ;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:
即将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液;
D. 通过冷冻干燥获取SOD冻干粉:
即将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉,检测SOD酶活力,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:
将步骤B所收集到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ合并,加入两血渣重量3-5倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.0~6.5,按每公斤血渣加入蛋白酶3.0-6.0克,加热至50-55℃,搅拌下保温酶解4-8h,将酶解液升温至85℃灭酶20分钟,即得到血红蛋白酶解液;
F. 离心分离获得上清液Ⅲ:将血红蛋白酶解液进行高速离心,离心转速>10000r/min,收集上清液Ⅲ,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:
即将上清液Ⅲ经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液;将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,收集浓缩液,得到血红蛋白肽溶液;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:
即将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
称取亚硒酸钠溶于去离子水中,搅拌下依次加入低聚糖和维生素C,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液;
(3)螯合配制:
取步骤(1)所制备的血红蛋白肽粉,加去离子水溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为10-20%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后依次加入葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸铜,在60℃下继续搅拌反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;其中血红蛋白肽粉、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸铜的添加量均为配比的重量;
(4)喷雾干燥:
即将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:
即按配比称取低聚糖和步骤(1)D中所制备的SOD冻干粉,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得SOD纳米硒肽组合物。
在制作方法的步骤(1)A中所述柠檬酸钠为食品级柠檬酸钠,添加量为新鲜猪血重量的0.5%。
在制作方法的步骤(1)E中所述的蛋白酶为来源于米曲霉的弱酸性蛋白酶,酶活力为390000-430000HU/g。
在制作方法的步骤(2)所述的亚硒酸钠的使用量为配比中硒的量换算成相应的亚硒酸钠(硒含量为45.65%)的重量,低聚糖、亚硒酸钠和维生素C的混合质量比为100:1:10。
在制作方法的步骤(5)所述低聚糖的添加量为配比中低聚糖总量减去步骤(2)所添加的低聚糖量之后的余量。
本发明组合物可采用药物制剂的常规方法制备成任何常规内服制剂。例如,将本发明组合物研磨成粉制成粉剂;加入制备不同剂型所需的各种常规辅料制备成片剂、胶囊剂等。
下面结合本发明主要功效成分的性能,对本发明做进一步说明:
(1)SOD
SOD是国际上公认的超氧阴离子氧自由基( O2 -. )的专一清除剂,是生物体内的一种抗氧化酶,它对平衡机体氧化与抗氧化系统,免除自由基损伤起着至关重要的作用。SOD对人体的功效可归之为“一清四抗”:“一清”即有效清除机体内的超氧阴离子氧自由基,保护人体细胞免遭氧自由基的毒害;“四抗”即抗衰老、抗疾病、抗辐射和抗疲劳。SOD因清除机体内产生的过量的超氧阴离子自由基( O2 -. ),保护DNA、蛋白质和细胞膜免遭超氧阴离子( O2 -. )的破坏作用,进而延缓因自由基损害生命大分子而引起的衰老现象,如延缓皮肤衰老和老年斑的形成;SOD可增强人体自身的免疫力,提高人体对自由基引发的一系列疾病的抵抗力,如炎症、肿瘤、白内障、肺气肿、肾脏病、心脑血管疾病等,治疗由于免疫功能下降引发的疾病;SOD可清除放、化疗所诱发的大量自由基,从而减少放射对人体正常组织的损伤,减轻癌症等肿瘤患者放化疗时的痛苦及副作用;SOD可消除疲劳,增强人体对剧烈运动的适应力。
(2)硒
硒是生物体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHG-Px)的活性中心组成元素,在体内通过谷胱甘肽过氧化物酶特异性地催化还原型谷胱甘肽与过氧化物的氧化还原反应,将有毒的氧自由基——过氧化氢(H2O2)还原成无毒的水,以保护生物膜免受损害。此外,硒还能与脂蛋白发生作用,含硒的蛋白质具有很强的抗氧化活性,并且硒还参与辅酶Q的合成,辅酶Q是氧化-还原反应的载氢体,在单电子运转过程中通过醌型-半醌型转换,捕获自由基中的未配对电子,从而起到清除自由基的作用。因此,硒与过氧化氢酶(CAT)和谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)共同构成机体防御氧自由基损伤的第二道防线。
近年来研究发现,与无机硒及有机硒相比,纳米硒具有高安全性、高生物活性的特点,其体外清除自由基是有机硒的2.5倍,无机硒的5倍,是一类很好的抗氧化剂和自由基清除剂。关于硒的日摄入量,我国科技工作者杨光圻教授和陈孝曙教授经过多年的研究分析,得出结论:人体对硒的生理需要量为40μg/日,界限中毒剂量为800μg/日,建议膳食硒补充量为50-250μg/日,最高安全摄入量为400μg/日,此数据为FDA/WHO/IAEA三个国际组织所采用。1998年中国营养学会已将人体必需的微量元素硒列为15种每日膳食营养素之一,并推荐成年人每日膳食硒补充量为50微克。
(3)活性小肽
活性小肽是指相对分子量介于180~1000Da之间的一类寡肽(一般包括二肽和三肽)。小肽的功能主要体现在以下几个方面:(1)促进氨基酸吸收,提高蛋白质合成速度。小肽不仅能被小肠粘膜吸收利用,其合成蛋白质的速度也远远高于氨基酸。(2)提高矿物质的吸收利用率。在动物体(包括人体)内,大多数的矿物元素吸收都要以蛋白质特别是小肽为载体,小肽能与多种矿物元素如钙、镁、铁、锌、铜、硒等结合形成可溶性的小肽络合物或螯合物,小肽可充当许多矿物元素体内运输的载体,从而提高矿物元素的吸收利用。(3)提高机体免疫力。小肽能够通过诱导小肠绒毛刷状缘膜酶活性上升和刺激消化酶分泌,抑制大肠杆菌的繁殖,来提高机体的免疫力。
(4)低聚糖
低聚糖又名寡糖,是由2-10个糖基通过糖苷键连接而成的小聚合体。低聚糖能改善人体内微生态环境,有利于双歧杆菌和其它有益菌的增殖,抑制肠内沙门氏菌和腐败菌的生长,调节胃肠功能,长期食用可减缓衰老、通便、抑菌、防癌、抗癌、减轻肝脏负担、提高营养吸收率,特别是促进钙、铁、锌等矿物离子的吸收;低聚糖类似水溶性植物纤维,能改善血脂代谢,降低血液中胆固醇和甘油三酯的含量。近年来,一些研究表明,某些低聚糖如低聚果糖、异麦芽低聚糖、低聚半乳糖等不仅具有增强免疫和调节肠道菌群的功能,还具有增强机体抗氧化的作用。低聚糖通过直接消除超氧负离子,或通过体内代谢途径,激活机体内在的SOD和GSH-Px,使其抗氧化活性提高,达到抗氧化作用。
(5)抗氧化酶活性中心金属元素
铜:铜是人体必需的微量矿物元素。铜是机体内蛋白质和酶的重要组成部分,许多重要的酶需要微量铜的参与和活化。例如,铜是Cu,Zn-SOD酶分子的活性中心元素,研究证实,当用络合剂将Cu,Zn-SOD中的Cu透析掉后,SOD就失去原来的生物活性,而当重新加入Cu后,SOD的活性又恢复到原来的水平。另外,研究还发现,在一定浓度范围内,增加环境中游离的铜离子浓度可显著提高SOD活性。因此,Cu与SOD酶活性直接相关,起着传递电子的作用。
成年人每天需要铜0.05~2毫克,孕、产妇和青、少年的需要量还要多些。中国营养学会没有制定每日膳食中铜的需要量,但制定了每日铜的“安全和适宜的摄入量”:半岁前婴儿每天需0.5~0.7毫克,半岁至1岁每天0.7~1.0毫克,1岁以上每天1.0~1.5毫克,4岁以上每天1.5~2.0毫克,7岁以上每天2.0~2.5毫克,11岁以上至青年、成年,均为每天2.0~3.0毫克。这个摄入量与美国科学研究委员会制定的“估计每日饮食中安全充足的铜摄取量”相当。
锌:锌是人体必需的微量元素之一,在人体生长发育、生殖遗传、免疫、内分泌等重要生理过程中起着极其重要的作用。锌是Cu,Zn-SOD酶分子的活性中心元素,研究表明,锌的作用一是调节咪唑基与Cu 的相互作用,二是稳定活性中心的结构,锌包埋于SOD酶的疏水基团中参与维持和稳定酶的结构,若除去酶分子中Zn 而保留原有环境中Cu ,SOD仍有相当高的活性。
锰:锰是人体必需的微量元素之一,在维持人体健康方面发挥重要作用:
(1)促进骨骼的生长发育。 锰参与活化硫酸软骨素合成的酶系统,促进骨质的合成;
(2)维持正常的糖代谢和脂肪代谢;
(3)锰在维持正常脑功能中必不可缺,与智力发展、思维、情感、行为均有关系,锰对阿尔茨海默症(老年痴呆)具有疗效;
(4)锰有抗衰老、抗氧化的作用。锰是Mn-SOD活性中心的组成元素,SOD必须在锰离子的催化下才能发挥作用。
此外,锰还能刺激免疫细胞增殖,增强人体的免疫力。成年人通常锰摄入量为每天2~5mg,吸收率为5%~10%,如果少于这个量,就有可能出现锰缺乏症状。
铁:铁是血红蛋白的组成成份,参与氧的运输和存储。铁元素在人体内参与造血,并形成血红蛋白、肌红蛋白,参与氧的携带和运输的整个过程。铁结合多种酶分解氧化物,解毒抑制细菌,释放能量。铁是Fe-SOD的活性中心元素,对SOD活性的影响至关重要。值得一提的是,血红素铁(也称有机卟啉铁)在肠道可以不受食物其他因素的影响进入肠黏膜,较其他植物性铁或动物性非血红素型铁吸收率高,是无机铁的三倍。本发明中添加的血红蛋白肽富含血红素铁,是优良的补铁剂。
以下给出本发明的实施例,并结合实施例进一步阐述本发明。
以制备1000g SOD纳米硒肽组合物粉剂为例:
实施例1:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚果糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD2000万活力单位,血红蛋白肽500g低聚果糖400g,纳米硒70mg,葡萄糖酸锌50g,葡萄糖酸锰12g、葡萄糖酸铜7g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血100L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心分离,收集血红细胞46L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液92L;
B. 通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.5,然后升温至60℃,保温40min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ61L和血渣Ⅰ22公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.3,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经用管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ45L和血渣Ⅱ4.2公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液4.5L;
D. 通过冷冻干燥获取SOD干冻粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉4.8g,检测酶活力为4260U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:将步骤(1)B所收集到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ合并,共计26.2公斤,加入血渣重量3倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.3,按每公斤血渣加入弱酸性蛋白水解酶4.0克,加热至55℃,搅拌下保温酶解8h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液93L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液III87.6L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液56L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:即将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉10.6公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠153mg(即硒含量70mg),溶于1500mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚果糖15.3g和维生素C1.53g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉500g,加去离子水3L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为14.3%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌50g、葡萄糖酸锰12g和葡萄糖酸铜7g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:即将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚果糖385g(配方中低聚果糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉 2000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000g SOD纳米硒肽组合物。
将上述所得的SOD纳米硒肽组合物经研磨过100目筛,再经辐照灭菌,按照需要量包装,可制成粉剂。
服用方法与用量:温水冲服,成年人每日服用3次,每次0.5g。
实施例2:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、异麦芽低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD4000万活力单位,血红蛋白肽680g,异麦芽低聚糖200g,纳米硒60mg,葡萄糖酸锌60g,葡萄糖酸锰15g、葡萄糖酸铜9g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血200L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心收集血红细胞89L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液178L;
B.通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2,然后升温至60℃,保温50min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ115L和血渣Ⅰ48公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.3,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ85L和血渣Ⅱ6.8公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液8.2L;
D.通过冷冻干燥获取SOD冻干粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉10.3g,检测酶单位活力为3890U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:收集步骤(1)B所得到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ,合并共计54.8公斤,加入血渣重量4倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入蛋白水解酶5.0克,加热至55℃,搅拌下保温酶解6h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液239L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液228L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液125L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉19.6公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠131mg(即硒含量60mg),溶于1500mL去离子水中,搅拌下依次加入异麦芽低聚糖13.1g和维生素C1.31g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉680g,加去离子水5L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为12.0%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌60g、葡萄糖酸锰15g和葡萄糖酸铜9g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取异麦芽低聚糖186.9g(配方中异麦芽低聚糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉 4000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000gSOD纳米硒肽组合物。
将上述所得的SOD纳米硒肽组合物经研磨过100目筛,再经辐照灭菌,按照需要量包装,可制成粉剂。
服用方法与用量:温水冲服,成年人每日服用3次,每次0.5g。
实施例3:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、异麦芽低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD6000万活力单位,血红蛋白肽380g,低聚木糖480g,纳米硒50mg,葡萄糖酸锌71g,葡萄糖酸锰20g、葡萄糖酸铜11g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血300L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心收集血红细胞130L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液260L;
B.通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2,然后升温至60℃,保温50min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ175L和血渣Ⅰ62公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.3,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ127L和血渣Ⅱ11.4公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液12.5L;
D.通过冷冻干燥获得SOD冻干粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉14.6g,检测酶活力为4130U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:收集步骤(1)B所得到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ,合并共计73.4公斤,加入血渣重量5倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入弱酸性蛋白水解酶6克,加热至55℃,搅拌下保温酶解4h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液382L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液III355L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液185L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉32.7公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠109mg(即硒含量50mg),溶于1000mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚木糖11g和维生素C1.1g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉380g,加去离子水3L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为11.2%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌71g、葡萄糖酸锰20g和葡萄糖酸铜11g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚木糖469g(配方中低聚木糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉SOD 6000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000g SOD纳米硒肽组合物。
将上述所得的SOD纳米硒肽组合物经研磨过100目筛,再经辐照灭菌,按照需要量包装,可制成粉剂。
服用方法与用量:温水冲服,成年人每日服用3次,每次0.5g。
以制备1000g SOD纳米硒肽组合物含片为例:
实施例4:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚果糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD2000万活力单位,血红蛋白肽550g低聚果糖350g,纳米硒80mg,葡萄糖酸锌70g,葡萄糖酸锰21g、葡萄糖酸铜11g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血100L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心分离,收集血红细胞42L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液84L;
B. 通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.5,然后升温至60℃,保温40min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ66L和血渣Ⅰ20公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.2,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经用管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ47L和血渣Ⅱ5.8公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液4.8L;
D. 通过冷冻干燥获取SOD干冻粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉5.5g,检测酶活力为4306U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:将步骤(1)B所收集到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ合并,共计25.8公斤,加入血渣重量3倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.5,按每公斤血渣加入弱酸性蛋白水解酶4.0克,加热至55℃,搅拌下保温酶解8h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液87L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液III80L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液47L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:即将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉9.1公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠175mg(即硒含量80mg),溶于2000mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚果糖17.5g和维生素C1.75g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉550g,加去离子水4L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为12.1%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌70g、葡萄糖酸锰21g和葡萄糖酸铜11g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:即将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚果糖332.5g(配方中低聚果糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉 2000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000g SOD纳米硒肽组合物。
采用常规的压片工艺,将上述所得的SOD纳米硒肽组合物进行压片成型,制成片剂,平均每片500mg。
服用方法与用量:含服,成年人每日服用3次,每次1片。
实施例5:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、异麦芽低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD4000万活力单位,血红蛋白肽600g,低聚半乳糖300g,纳米硒60mg,葡萄糖酸锌65g,葡萄糖酸锰18g、葡萄糖酸铜10g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血200L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心收集血红细胞92L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液184L;
B.通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2,然后升温至60℃,保温50min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ111L和血渣Ⅰ47公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.2,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ87L和血渣Ⅱ7.5公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液9L;
D.通过冷冻干燥获取SOD冻干粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉12.4g,检测酶单位活力为3620U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:收集步骤(1)B所得到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ,合并共计54.5公斤,加入血渣重量4倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入蛋白水解酶5.0克,加热至55℃,搅拌下保温酶解6h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液257L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液246L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液120L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉21.2公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠131mg(即硒含量60mg),溶于1500mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚半乳糖13.1g和维生素C1.31g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉600g,加去离子水4L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为13.0%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌65g、葡萄糖酸锰18g和葡萄糖酸铜10g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚半乳糖286.9g(配方中低聚半乳糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉 4000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000gSOD纳米硒肽组合物;
采用常规的压片工艺,将上述所得的SOD纳米硒肽组合物进行压片成型,制成片剂,平均每片500mg。
服用方法与用量:含服,成年人每日服用3次,每次1片。
实施例6:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、异麦芽低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD6000万活力单位,血红蛋白肽400g,低聚木糖500g,纳米硒50mg,葡萄糖酸锌50g,葡萄糖酸锰10g、葡萄糖酸铜8g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血300L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心收集血红细胞125L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液250L;
B.通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2,然后升温至60℃,保温50min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ179L和血渣Ⅰ60公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.2,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ121L和血渣Ⅱ13公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液12L;
D.通过冷冻干燥获得SOD冻干粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉20.2g,检测酶活力为3806U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:收集步骤(1)B所得到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ,合并共计73公斤,加入血渣重量5倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入弱酸性蛋白水解酶5.5克,加热至53℃,搅拌下保温酶解5h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液364L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液III340L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液200L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉34.5公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠109mg(即硒含量50mg),溶于1000mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚木糖11g和维生素C1.1g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉400g,加去离子水3L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为11.8%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌50g、葡萄糖酸锰10g和葡萄糖酸铜8g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚木糖489g(配方中低聚木糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉SOD 6000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000g SOD纳米硒肽组合物。
采用常规的压片工艺,将上述所得的SOD纳米硒肽组合物进行压片成型,制成片剂,平均每片500mg。
服用方法与用量:含服,成年人每日服用3次,每次1片。
以制备1000g SOD纳米硒肽组合物胶囊为例:
实施例7:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚果糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD2000万活力单位,血红蛋白肽700g异麦芽低聚糖200g,纳米硒40mg,葡萄糖酸锌60g,葡萄糖酸锰18g、葡萄糖酸铜10g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血100L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心分离,收集血红细胞43L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液96L;
B. 通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.3,然后升温至60℃,保温40min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ65L和血渣Ⅰ21.8公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.2,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经用管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ48L和血渣Ⅱ4公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液4L;
D. 通过冷冻干燥获取SOD干冻粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉6.2g,检测酶活力为3660U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:将步骤(1)B所收集到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ合并,共计25.8公斤,加入血渣重量3倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入弱酸性蛋白水解酶5.0克,加热至55℃,搅拌下保温酶解6h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液82L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液III78L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液51L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:即将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉9.2公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠88mg(即硒含量40mg),溶于1000mL去离子水中,搅拌下依次加入异麦芽低聚糖8.8g和维生素C0.88g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉700g,加去离子水4L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为14.9%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌60g、葡萄糖酸锰18g和葡萄糖酸铜10g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:即将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取异麦芽低聚糖191g(配方中异麦芽低聚糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉 2000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000g SOD纳米硒肽组合物。
采用常规的胶囊填充工艺,将上述所得的SOD纳米硒肽组合物进行胶囊填充,制成胶囊制剂,平均每粒500mg。
服用方法与用量:口服,成年人每日服用3次,每次1粒。
实施例8:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、异麦芽低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD4000万活力单位,血红蛋白肽480g,低聚木糖400g,纳米硒50mg,葡萄糖酸锌70g,葡萄糖酸锰20g、葡萄糖酸铜11g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血200L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心收集血红细胞94L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液188L;
B.通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2,然后升温至60℃,保温50min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ120L和血渣Ⅰ47公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.2,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ92L和血渣Ⅱ6.5公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液9L;
D.通过冷冻干燥获取SOD冻干粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉11.9g,检测酶单位活力为4050U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:收集步骤(1)B所得到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ,合并共计53.5公斤,加入血渣重量4倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入蛋白水解酶4.0克,加热至55℃,搅拌下保温酶解8h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液239L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液233L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液120L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉18.9公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠109mg(即硒含量50mg),溶于1000mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚木糖11g和维生素C1.1g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉480g,加去离子水3L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为13.8%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌70g、葡萄糖酸锰20g和葡萄糖酸铜11g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚木糖389g(配方中低聚木糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉 4000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000gSOD纳米硒肽组合物。
采用常规的胶囊填充工艺,将上述所得的SOD纳米硒肽组合物进行胶囊填充,制成胶囊制剂,平均每粒500mg。
服用方法与用量:口服,成年人每日服用3次,每次1粒。
实施例9:
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、异麦芽低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,组合物中各个组分含量为:SOD6000万活力单位,血红蛋白肽400g,低聚果糖500g,纳米硒60mg,葡萄糖酸锌62g,葡萄糖酸锰15g、葡萄糖酸铜9g。
这种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的具体制备工艺步骤如下:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血300L,加入新鲜猪血重量0.5%的柠檬酸钠做抗凝,经管式离心机16300r/mim离心收集血红细胞138L,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液276L;
B.通过热变性反应收集上清液、血渣:在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2,然后升温至60℃,保温50min,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅰ180L和血渣Ⅰ60公斤;调节上清液Ⅰ pH值至6.5,快速升温至70℃,保温20min后,快速降温至45℃以下,经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液Ⅱ132L和血渣Ⅱ11公斤;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液13L;
D.通过冷冻干燥获得SOD冻干粉:将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉16.1g,检测酶活力为4080U/mg,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:收集步骤(1)B所得到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ,合并共计71公斤,加入血渣重量4倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.2,按每公斤血渣加入弱酸性蛋白水解酶5克,加热至55℃,搅拌下保温酶解6h,将酶解液升温至85℃灭酶20min,即得到血红蛋白酶解液405L;
F. 离心分离获得上清液III:血红蛋白酶解液经管式离心机16300r/mim离心分离,得到上清液III370L,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:将上清液经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液,将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,停止浓缩,得到血红蛋白肽溶液172L;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉29.6公斤,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
按照配比称取亚硒酸钠131mg(即硒含量60mg),溶于1500mL去离子水中,搅拌下依次加入低聚果糖13.1g和维生素C1.3g,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液,备用;
(3)螯合配制:
按照配比称取步骤(1)H所制备的血红蛋白肽粉400g,加去离子水3L溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为11.8%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后按照配比量依次加入葡萄糖酸锌62g、葡萄糖酸锰15g和葡萄糖酸铜9g,不断搅拌下60℃下保温反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;
(4)喷雾干燥:将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:按照配比称取低聚果糖486.9g(配方中低聚果糖总量减去步骤(2)已使用量的余量)和步骤(1)D所制备的SOD冻干粉SOD 6000万活力单位,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得1000g SOD纳米硒肽组合物。
采用常规的胶囊填充工艺,将上述所得的SOD纳米硒肽组合物进行胶囊填充,制成胶囊制剂,平均每粒500mg。
服用方法与用量:口服,成年人每日服用3次,每次1粒。
对上述实施例1、2、3得到的成品进行寡肽含量、肽分子量大小以及功效检测:
寡肽含量及肽分子量大小检测:寡肽含量检测采用日立L-8800型氨基酸自动分析仪,肽的分子大小采用高效凝胶过滤色谱(HPLC)法测定,以已知分子量蛋白质做参照,结果如表1:
从表1中可以看出,产品中分子量小于2000Da的寡肽占蛋白肽总量的比例在90%以上,其中相对分子量在180-1000Da的小分子肽组分占蛋白肽总量的比例在65%以上。
产品抗氧化抗衰老的功效检测:
小鼠口服本发明SOD纳米硒肽组合物对体内抗氧化指标影响的试验:
以实施例1、2、3所得的SOD纳米硒肽组合物为试验样品A、B、C。
选用雌性昆明小鼠55只,体重18-22克,随机分为正常对照组、衰老模型组、A试剂组、B试剂组和C试剂组,每组11只。小鼠每天皮下注射D-半乳糖1次,剂量120mg/kg.bw,连续8周,造成小鼠衰老模型。注射D-半乳糖2周后开始给予受试药物,试剂组每日灌胃200mg/kg.bw试验样品,正常对照组每日灌胃给予等重量蒸馏水,衰老模型组每日注射D-半乳糖120mg/kg.bw,直至实验结束后,采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒并按照试剂盒说明书介绍的方法进行相关生化指标的检测。
结果如表2、表3、表4:
从表2中可以看出,各试剂组小鼠血清总SOD酶活力水平明显高于正常对照组和模型对照组,即本发明SOD纳米硒肽组合物能显著提高造模小鼠血清总SOD酶活力(P<0.05或P<0.01.)。
从表3中可以看出,试剂组小鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力明显高于正常对照组和模型对照组,即本发明SOD纳米硒肽组合物能显著提高造模小鼠血清GSH-Px活力(P<0.05)。
从表4中可以看出,试剂组小鼠血清丙二醛(MDA)含量与模型对照组比较有明显差异,即本发明SOD纳米硒肽组合物能显著降低小鼠血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05)。
人体口服本发明SOD纳米硒肽组合物对降低体内丙二醛(MDA)含量的试验:
丙二醛(MDA)是氧自由基(O2 -.)攻击细胞质膜,生成脂质过氧化物并进一步分解的最终代谢产物,丙二醛(MDA)具有很强的生物毒性,是人体衰老的主要指标,MDA的含量与氧自由基(O2 -.)浓度呈正相关的关系。
试验方案:以年龄在40岁以上的88人为临床试验对象,试验组1、试验组2、试验组3和对照组各22人。其中试验组1服用实施例1得到的SOD纳米硒肽组合物,试验组2服用实施例2得到的SOD纳米硒肽组合物,试验组3服用实施例3得到的SOD纳米硒肽组合物,对照组不服用任何产品。
服用方法和剂量:餐后1小时温水送服,服用0.5g。
检测方法:采用日本LPO Kit氧化值速测液进行快速检测,取人体口服SOD纳米硒肽组合物前的尿液1ml滴入装有测试剂的安瓶中,5min后观察尿液反应液的颜色,同样方法取人体服用SOD纳米硒肽组合物2h后的尿液1ml滴入装有测试剂的安瓶中,5min后观察尿液反应液的颜色,比较口服组合物前、后尿液反应液颜色的差异。尿液反应液的颜色越深越红,说明丙二醛含量越多,机体内的自由基含量亦越高。
评判标准:根据显效、有效和无效三个标准来评判。显效为口服SOD纳米硒肽组合物后尿液反应液的颜色比服用前的颜色明显变淡,二者有肉眼可区分的显著差异,例如服用前为红色或深红色,服用后为白色或浅白色;有效为服用后的颜色比服用前的颜色稍许变浅变淡,二者有肉眼可辨别的差异;无效为服用前、后尿液反应液的颜色基本上无差异或者无肉眼可辨别的差异或者服用后的颜色比服用前的颜色变得更深。
试验结果:所有临床试验对象在服用SOD纳米硒肽组合物之前的尿液反应液颜色均呈现出红色至深红色,表明体内丙二醛(MDA)含量高,自由基含量多。服用SOD纳米硒肽组合物2小时之后,绝大多数试验对象的尿液反应液颜色变成浅白色,表明体内自由基已大量地被清除,体内丙二醛(MDA)含量减少,比如临床试验对象陈先生在服用之前尿液反应液的颜色为深红色,服用2小时后尿液反应液为浅白色,试验对象王先生在服用之前尿液反应液的颜色为粉红色,服用2小时后尿液反应液呈白色,试验对象郭先生在服用之前尿液反应液的颜色为红色,服用2小时后尿液反应液为淡红色。 本次临床试验总有效率达到90%以上,结果见表5:
通过人体临床试验可知,本发明SOD纳米硒肽组合物具有良好的体内清除自由基、抗氧化、抗衰老的功效。

Claims (12)

1.一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述组合物中含有SOD 、血红蛋白肽、低聚糖、纳米硒、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰、葡萄糖酸铜,每100g组合物中各个组分含量为:
SOD150-650万活力单位,
血红蛋白肽35-70g,
低聚糖15-50g,
纳米硒4-8mg,
葡萄糖酸锌5000-7200mg,
葡萄糖酸锰1000-2200mg,
葡萄糖酸铜600-1200mg。
2.根据权利要求1所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述的SOD是猪血红细胞提取物。
3.根据权利要求1所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述的血红蛋白肽是猪血红蛋白酶解物,含有60%以上的活性小分子肽,所述活性小分子肽的相对分子量为180-1000Da。
4.根据权利要求1所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述的低聚糖为低聚果糖、异麦芽低聚糖、低聚半乳糖或低聚木糖中的任一种。
5.根据权利要求1所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述的纳米硒包括低聚糖纳米微球模板和富集在其上的纳米硒。
6.根据权利要求5所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物,其特征在于:所述的低聚糖为低聚果糖、异麦芽低聚糖、低聚半乳糖或低聚木糖中的任一种。
7.一种权利要求1-6任一项所述的抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:主要包括有以下工艺步骤:
(1)SOD和血红蛋白粉的制备:
A. 血红蛋白溶液的制备:采集经过检验合格的新鲜猪血,加入柠檬酸钠做抗凝处理,离心收集血红细胞,然后加入血红细胞体积1倍的去离子水,不断搅拌溶血1h,得血红蛋白溶液;
B. 通过热变性反应收集上清液、血渣:
即在搅拌下用柠檬酸调节血红蛋白溶液PH 值至5.2-5.5,然后升温至60℃,保温30-50min,快速降温至45℃以下,以转速>10000r/min进行离心分离,分别收集上清液Ⅰ和血渣Ⅰ;用氢氧化钠调节上清液Ⅰ pH值至6.2~6.5,快速升温至70℃,保温10-20min后,快速降温至45℃以下,以转速>10000r/min进行离心分离,分别收集上清液Ⅱ和血渣Ⅱ;
C.通过超滤浓缩获取SOD酶液:
即将上清液Ⅱ用截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤浓缩,脱除盐分,浓缩至原体积的1/10,得到蓝绿色的SOD酶液;
D. 通过冷冻干燥获取SOD冻干粉:
即将SOD酶液进行冷冻干燥,得SOD冻干粉,检测SOD酶活力,备用;
E. 通过酶解制得血红蛋白酶解液:
将步骤B所收集到的血渣Ⅰ和血渣Ⅱ合并,加入两血渣重量3-5倍的去离子水溶解并搅拌均匀,调节pH值至6.0~6.5,按每公斤血渣加入蛋白水解酶3.0-6.0克,加热至50-55℃,搅拌下保温酶解4-8h,将酶解液升温至85℃灭酶20分钟,即得到血红蛋白酶解液;
F. 离心分离获得上清液Ⅲ:
将血红蛋白酶解液进行高速离心,离心转速>10000r/min,收集上清液Ⅲ,去除沉淀;
G. 通过纳滤浓缩获得血红蛋白肽溶液:
即将上清液Ⅲ经截留分子量为5000Da的超滤膜装置进行超滤,收集透过液;将收集的超滤透过液,用截留分子量为200Da的纳滤膜进行纳滤浓缩,当浓缩液固形物含量达到15-20%时,收集浓缩液,得到血红蛋白肽溶液;
H. 喷雾干燥获得血红蛋白肽粉:
即将血红蛋白肽溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽粉,备用;
(2)纳米硒溶液的制备:
称取亚硒酸钠溶于去离子水中,搅拌下依次加入低聚糖和维生素C,50℃搅拌反应1h,即制得纳米硒溶液;
(3)螯合配制:
取步骤(1)所制备的血红蛋白肽粉,加去离子水溶解搅拌均匀,配制成质量浓度为10-20%的血红蛋白肽溶液,加入步骤(2)所制备的纳米硒溶液,在50℃下搅拌反应1小时,然后依次加入葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸铜,在60℃下继续搅拌反应1小时,得到血红蛋白肽螯合溶液;其中血红蛋白肽、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸锰和葡萄糖酸铜的添加量均为配比的重量;
(4)喷雾干燥:
即将血红蛋白肽螯合溶液喷雾干燥,得血红蛋白肽螯合粉,备用;
(5)混配得到SOD纳米硒肽组合物:
即按配比称取低聚糖和步骤(1)D中所制备的SOD冻干粉,加入到步骤(4)所制备的血红蛋白肽螯合粉中,混合均匀,即得SOD纳米硒肽组合物。
8.根据权利要求7所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)A中所述柠檬酸钠为食品级柠檬酸钠,添加量为新鲜猪血重量的0.5%。
9.根据权利要求7所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)E中所述的蛋白酶为来源于米曲霉的弱酸性蛋白酶,酶活力为390000-430000HU/g。
10.根据权利要求7所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述亚硒酸钠的使用量为配比中硒的量换算成相应的亚硒酸钠(硒含量为45.65%)的重量,低聚糖、亚硒酸钠和维生素C的混合质量比为100:1:10。
11.根据权利要求7所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的制备方法,其特征在于:步骤(5)所述低聚糖的添加量为配比中低聚糖总量减去步骤(2)所添加的低聚糖量之后的余量。
12.根据权利要求1所述的一种抗氧化抗衰老SOD纳米硒肽组合物的应用,其特征在于:该组合物可制成药剂学上的常规内服制剂:如粉剂、片剂或胶囊剂。
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