CN105974043B - 一种低聚木糖快速鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于木糖鉴别技术领域，具体涉及一种低聚木糖快速鉴别方法；依次包括下述步骤：1)取低聚木糖原料加60％乙醇溶解；2)取上清液照薄层色谱法试验，以正丁醇‑异丙醇‑乙酸‑水为展开剂，展开；3)取出薄层板，吹干，喷以显色剂显色，加热至条带清晰；4)木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带。本发明具有高效、简便、准确、可靠的优点，填补了低聚木糖原料特异性快速鉴别方法的空白，可用于低聚木糖原料的质量控制。

Description

一种低聚木糖快速鉴别方法
技术领域
本发明属于木糖鉴别技术领域，具体涉及低聚木糖原料高效薄层色谱快速鉴别方法。
背景技术
低聚糖一般是由3-9个单糖以结合而成的功能性聚合糖，低聚木糖通常由富含木质纤维素的材料通过化学或者酶解方法制备(A.F.A.Carvalho,et al.,Food Res.Int.,2013,51:75-85)。因生产工艺影响，国产低聚木糖主要为由2-7个木糖以β-1，4糖苷键结合而成的功能性聚合糖(GB/T 23747-2009和QB/T2384-2008)。
低聚木糖具有高选择性促进肠道双歧杆菌等有益菌增殖、抑制有害菌生长的功能，其双歧因子功能为其他聚合糖类的10～20倍，是一种高效的益生元(S.M.Finegold,etal.,Food Funct.,2014,5:436-445)。低聚木糖还能通过改善食品风味以及生理化学特性来提高食品品质，且具有耐酸、耐热，稳定性好，低热值等特性，被广泛用作食品、医药、饲料等行业，需求量增长迅速，具有十分广阔的应用前景[M.J.Vázquez,et al.,Trends FoodSci.Tech.,2000,11:387-393]。
目前，低聚木糖检测主要采用酸水解法测定木糖，或高效液相色谱仪结合蒸发光散射检测器对不同聚合度的木糖进行定性定量分析，由于糖类成分的复杂性，不同单糖相同或相近聚合度的低聚糖可具有相同或相近的保留特征，易造成定性结果错误。此外，液相色谱分析耗时较长、有机流动相消耗量大、同时低聚木糖标准品不易获取，造成检测费用高，不适合低聚木糖快速检测与鉴别。因此，开发高效、简便、准确、可靠的低聚木糖鉴别方法对于产品质量控制具有重要意义。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种低聚木糖的高效薄层色谱鉴别方法。
发明是通过如下技术方案实现的：
一种低聚木糖快速鉴别方法，所述测定方法包括如下步骤：
1)取低聚木糖原料于溶剂中溶解，涡旋混匀、离心，取上清液作为供试品溶液；
2)另取木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡聚糖部分酸水解产物、木聚糖部分酸水解产物，分别配成60％乙醇对照品溶液；
3)吸取上述对照品溶液和供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-异丙醇-乙酸-水为展开剂，展开、取出、吹干、喷苯胺-二苯胺-丙酮溶液显色，加热至条带清晰，对照品及供试品薄层色谱中，木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带。
其中，所述步骤1)中的溶剂为水或醇。
较佳地，所述醇为甲醇或乙醇。
较佳地，所述的展开剂为正丁醇、异丙醇、乙酸、水的混合物，它们之间的体积比正丁醇:异丙醇:乙酸:水为5～10:3～8:1:1～5。最优选正丁醇:异丙醇:乙酸:水为5～10:3～8:1:1～5。
较佳地，所述的显色剂为苯胺-二苯胺-丙酮溶液或硫酸乙醇溶液。硫酸乙醇显色剂为10％硫酸乙醇溶液，其显色和苯胺-二苯胺-丙酮溶液不同，但可用对照品进行判断。
本发明的高效薄层色谱快速鉴别低聚木糖方法，其具有高效、简便、准确、可靠的优点，填补了低聚木糖原料特异性快速鉴别方法的空白，可用于低聚木糖原料的质量控制。
附图说明
图1本发明方法检测的不同低聚木糖原料HPTLC色谱图。
其中，低聚木糖原料(XY1-XY14)；S1：木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖(由上至下)；S2：葡聚糖部分酸水解产物；S3：木聚糖部分酸水解产物
具体的实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解本发明。
若无特殊说明，所用实验方法为常规实验方法；所使用的试剂和材料等均可通过商业途径获得。
按照本发明所实施的优选实施例的分析检测方法如下
实施例1
取低聚木糖原料10mg(样品XY1-XY14)，加溶剂1mL，涡旋混匀，10000g，离心10min，取上清作为供试品溶液；另取单糖及二糖标品：木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖；葡聚糖部分酸水解产物及木聚糖部分酸水解产物，配制对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开(以正丁醇、异丙醇、乙酸和水的混合物为展开剂，所述体积比正丁醇:异丙醇:乙酸:水为6:4:1:3)，取出，吹干，喷以苯胺-二苯胺-丙酮溶液(4mL苯胺，4g二苯胺，20mL85％磷酸溶于200mL丙酮)显色，加热至条带清晰；对照品及供试品薄层色谱中，木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带，具体见图1。由图1可见：样品XY1至XY11中含低聚木糖，其中XY1－XY3、XY8和XY10明显含葡萄糖系列杂质(蓝色)；样品XY12－XY14中只含有蓝色条带，说明为低聚葡萄糖。
实施例2
取低聚木糖原料2mg(样品XY1-XY14)，加溶剂1mL，涡旋混匀，10000g，离心10min，取上清作为供试品溶液；另取单糖及二糖标品：木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖；葡聚糖部分酸水解产物及木聚糖部分酸水解产物，配制对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开(以正丁醇、异丙醇、乙酸和水的混合物为展开剂，所述体积比正丁醇:异丙醇:乙酸:水为5:8:1:1)，取出，吹干，喷以苯胺-二苯胺-丙酮溶液(4mL苯胺，4g二苯胺，20mL85％磷酸溶于200mL丙酮)显色，加热至条带清晰；对照品及供试品薄层色谱中，木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带。
实施例3
取低聚木糖原料5mg(样品XY1-XY14)，加溶剂1mL，涡旋混匀，10000g，离心10min，取上清作为供试品溶液；另取单糖及二糖标品：木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖；葡聚糖部分酸水解产物及木聚糖部分酸水解产物，配制对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开(以正丁醇、异丙醇、乙酸和水的混合物为展开剂，所述体积比正丁醇:异丙醇:乙酸:水为10:3:1:3)，取出，吹干，喷以苯胺-二苯胺-丙酮溶液(4mL苯胺，4g二苯胺，20mL85％磷酸溶于200mL丙酮)显色，加热至条带清晰；对照品及供试品薄层色谱中，木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带。
实施例4
取低聚木糖原料8mg(样品XY1-XY14)，加溶剂1mL，涡旋混匀，10000g，离心10min，取上清作为供试品溶液；另取单糖及二糖标品：木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖；葡聚糖部分酸水解产物及木聚糖部分酸水解产物，配制对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开(以正丁醇、异丙醇、乙酸和水的混合物为展开剂，所述体积比正丁醇:异丙醇:乙酸:水为8:5:1:2)，取出，吹干，喷以苯胺-二苯胺-丙酮溶液(4mL苯胺，4g二苯胺，20mL85％磷酸溶于200mL丙酮)显色，加热至条带清晰；对照品及供试品薄层色谱中，木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带。
上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。

Claims (4)

1.一种低聚木糖快速鉴别方法，其特征在于，所述低聚木糖快速鉴别方法包括如下步骤：
1)取低聚木糖原料于溶剂中溶解，涡旋混匀、离心，取上清液作为供试品溶液；
2)另取木糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡聚糖部分酸水解产物、木聚糖部分酸水解产物，分别配成60％乙醇对照品溶液；
3)吸取上述对照品溶液和供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-异丙醇-乙酸-水为展开剂，展开、取出、吹干、喷苯胺-二苯胺-丙酮溶液显色，加热至条带清晰，对照品及供试品薄层色谱中，木糖系列显灰绿色条带，葡萄糖系列显蓝色条带，果糖系列则显红色条带，
其中，展开剂各组分之间的体积比正丁醇:异丙醇:乙酸:水为5～10:3～8:1:1～5。
2.根据权利要求1所述的低聚木糖快速鉴别方法，其特征在于：所述步骤1)中的溶剂为水或醇。
3.根据权利要求2所述的低聚木糖快速鉴别方法，其特征在于：所述醇为甲醇或乙醇。
4.根据权利要求1所述的低聚木糖快速鉴别方法，其特征在于：所述步骤1)中，取低聚木糖原料2～10mg，加60％乙醇1mL，涡旋混匀，10000g离心10min，取上清液作为供试品溶液。
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