CN105969687A - 一种富铁乳酸菌制剂及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
一种富铁乳酸菌制剂及其制备方法,所述富铁乳酸菌制剂,可由乳酸菌先按常规方法接种于培养基进行发酵,然后加入8~10%硫酸亚铁溶液,富集,制得富铁乳酸菌制剂,其中,每克富铁乳酸菌制剂中铁含量为12~17毫克。本发明还包括富铁乳酸菌制剂。本发明的制剂具有强抗氧化性、还原力强以及对于胆盐的高耐受度,同时对于大肠杆菌及沙门氏菌的抗性也较为突出,既可作为功能性乳制品添加剂,又可作为防治地方性缺铁症的功能性调节剂,兼具乳酸菌和铁的生物学功能。本发明的生产工艺简单、操作简便、转化率高、安全可靠,可用于制备防缺铁性贫血乳制品、药品或保健品,特别是在防治地方性缺铁方面具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种乳酸菌制剂及其制备方法,具体涉及一种富铁乳酸菌制剂及其制备方法。
背景技术
铁元素是人体所必需的微量元素之一,是亚铁血红蛋白的组成成分,参与氧的运输,对维持其他携氧蛋白如亚铁血红蛋白酶、肌红蛋白、细胞色素的正常功能也必不可少,同时它也是许多参与能量代谢酶的重要成份,如过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶和一系列脱氢酶。因此,缺铁可导致诸如血红蛋白等多种含铁酶活性降低,阻碍氧气的运输,诱发细胞氧代谢水平与机体免疫力下降,红细胞生成障碍引起贫血,以及引发注意力不集中、记忆力减退等症状。缺铁症状主要存在于妇女和儿童中,女性所流失的铁大约为男性的两倍,而6个月至2岁的儿童常常会出现缺铁营养性贫血。通常通过两种方式补铁,一是在普通膳食中,通过食用铁元素含量丰富的食物,诸如菠菜、动物内脏等,可以补充一定量的铁元素。二是通过服用无机铁化合药物和复合微量元素药物等进行补充也是当前比较热门的补铁方法,但副作用大而不利于广泛应用。
近年来,利用益生微生物,如酵母、乳酸菌,作为微量元素的载体,通过微生物生理生化作用,将无机态微量元素转化为有机形式(主要是与蛋白结合的方式),而人体对于有机态营养元素的吸收利用率较高。因此,通过人体饮食摄入已成为一种补充营养元素新途径。与 传统的天然食物或化学药物补充相比,益生菌转化富集有机态的微量元素的产品具有生产成本低,安全性高,食用方便与普及以及益生性强的优势。
目前,食用富铁酵母是一种成功的补铁模式,现已发展成相关的食品,如富铁面包、饼干等。酸奶也是日常普遍食用的功能性食品之一,不仅富含多种蛋白质,氨基酸,而且味道醇香、口感好,而其中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌等活性菌种更能起到很好的益生效果,从而促进健康。因此,如能将这种富铁型保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌发酵而成的酸奶,不仅具有普通酸奶的优良特性,同时以有机态铁的形式补充人体所需的铁元素。必将在发酵乳制品工业中具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,提供一种富铁乳酸菌制剂及其制备方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是,一种富铁乳酸菌制剂,可由乳酸菌先按常规方法接种于培养基进行发酵,然后加入8~10%硫酸亚铁溶液,富集,制得富铁乳酸菌制剂,其中,每克富铁乳酸菌制剂中铁含量为12~17毫克。
进一步,所述乳酸菌为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)或保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus)。
本发明进一步解决其技术问题采用的技术方案是,一种富铁乳酸 菌制剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将乳酸菌按常规方法接种于培养基,培养扩增14~26小时(优选16~24小时);
(2)在步骤(1)得到的发酵液中加入8~10%硫酸亚铁溶液(优选8%硫酸亚铁溶液),使发酵液的铁含量为80~100mg/L(优选80mg/L),继续恒温培养18~30小时(优选20~30小时);
(3)将步骤(2)中得到的菌液在转速5000~6000r/min(优选6000r/min),离心20~30min(优选20min),并用水洗涤沉淀物至少3次,目的是洗去无机铁,然后再次在转速5000~6000r/min(优选6000r/min),离心20~30min(优选20min),去上清液,得沉淀物即为富铁乳酸菌制剂。
进一步,步骤(1)中,所述培养基为MRS液体培养基。
进一步,步骤(3)中,所述水为蒸馏水、去离子水或无菌生理盐水。
本发明是借助乳酸菌转化无机铁为有机铁的一种生物制剂,具有强抗氧化性、还原力强以及对于胆盐的高耐受度,同时对于大肠杆菌及沙门氏菌的抗性也较为突出,既可作为功能性乳制品添加剂,又可作为防治地方性缺铁症的功能性调节剂,兼具乳酸菌和铁的生物学功能。本发明的生产工艺简单、操作简便、转化率高、安全可靠,可用于制备防缺铁性贫血乳制品、药品或保健品,特别是在防治地方性缺铁方面具有广阔的应用前景。
实验证明,本发明的富铁乳酸菌制剂富含有机铁,经体外生物活 性试验表明,在抗氧化性试验中,富铁乳酸菌对于DPPH、ABTS自由基的清除率显著提高,同时还原力也有所增强;在胆盐耐受试验中,富铁乳酸菌抗性显著提高;在抗菌活性试验中,富铁乳酸菌对于大肠杆菌及沙门氏菌的抗性有所增强。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus)微生物菌种由西北农林科技大学食品科学与工程学院提供。
实施例1
1、配制MRS培养液:葡萄糖20.0g、牛肉膏5.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸锰0.05g、蛋白胨10.0g、乙酸钠5.0g、七水硫酸镁0.2g、吐温801mL、柠檬酸三铵2.0g、酵母菌粉4.0g、无菌蒸馏水1000mL、琼脂粉(固体培养)15.0~20.0g,分装后121℃高压灭菌20min。
2、富铁乳酸菌制剂的制备:取活化后的嗜热链球菌菌落于MRS培养液中,在37℃下培养扩增24h后,然后加入10%的硫酸亚铁溶液使培养液的铁含量为80mg/L,继续培养24h,收集菌液,在转速6000r/min,离心20min,无菌去离子水反复清洗6次,最后再次离心得沉淀物,即为富含有机铁的嗜热链球菌制剂。
3、测定铁含量的方法
(1)标准铁工作液准备
准确称取金属铁1.000g,分别加硝酸溶解并移入1000mL容量瓶 中,加0.5mol/L硝酸溶液并稀释至刻度;贮存于聚乙烯瓶内,4℃保存,此溶液每毫升相当于1mg铁。用0.5mol/L硝酸溶液稀释成浓度为100μg/mL的使用液,取0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL使用液并分别稀释到100μg/mL,即为标准铁工作液。
(2)样品消化
精密称取0.2g富铁嗜热链球菌干粉样品于消化管中,加混合酸(硝酸:高氯酸=4∶1)10ml,消化直至无色为止,冷却,然后加入5ml去离子水,继续加热,直至液体剩2ml左右,冷却,最后去离子水定容至10ml。采用原子吸收分光光度法测定样品中的铁含量。
(3)标准曲线制定和样品测定
采用原子吸收分光光度计,将铁标准工作液上机测定,得到铁标准工作曲线;然后将待测样品上机测试,得到样品中铁浓度,即可得每克嗜热链球菌制剂中铁含量为12~17.07mg/g。
实施例2
与实施1不同之处在于,取活化的保加利亚乳杆菌菌落于MRS培养液中培养,在37℃下培养扩增14h后,加入8%的硫酸亚铁溶液使培养液的铁含量为100mg/L,继续培养20h,收集菌液,在转速6000r/min离心20min,无菌去离子水反复清洗6次,最后再次离心得沉淀物,即为富含有机铁的保加利亚乳杆菌制剂,有机铁含量可达15~17mg/g。
实施例3
取实施例1、实施例2制得的富铁乳酸菌制剂,按比例1∶1配合 在一起,混匀后即制成(混合型)富铁乳酸菌制剂。
发明人在试验中发现,乳酸菌混合培养的富铁效果不如单一菌种;因此,要得到(混合型)富铁乳酸菌制剂,可先用单一菌种转化无机铁,得到相应富铁乳酸菌制剂,再将得到的上述制剂混合。
在生物活性试验中,通过DPPH、ABTS自由基清除以及还原力试验,本发明富铁乳酸菌制剂表现出强抗氧化性(表1);同时,其对于胆盐的耐受力也有所提高(表2);在体外抗菌活性试验中,本发明富铁乳酸菌制剂表现出较好的抗菌活性,尤其对于大肠杆菌的抑制作用较为突出(表3)。
表1-富铁乳酸菌抗氧化活性
注:Lb:Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus;St:Streptococcus thermophilus
同一行不同小写字母表示差异显著(p<0.05)
表2-富铁乳酸菌在0.1%的牛胆盐中的耐受力
菌株编号 | 对照组(%) | 富铁组(%) |
Lb | 7.11±0.11a | 29.64±0.10b |
St | 33.37±0.10a | 39.49±0.22b |
注:1.Lb:Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus;St:Streptococcus thermophilus
2.胆盐耐受力=(含胆盐的培养基的OD值/空白培养基的OD值)×100%
3.同一行不同小写字母表示差异显著(p<0.05)
表3-富铁乳酸菌对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌效果
注:Lb:Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus;St:Streptococcus thermophilus
同一行不同小写字母表示差异显著(p<0.05)。
Claims (6)
1.一种富铁乳酸菌制剂,其特征在于,可由乳酸菌先按常规方法接种于培养基进行发酵,然后加入8~10%硫酸亚铁溶液,富集,制得富铁乳酸菌制剂,其中,每克富铁乳酸菌制剂中铁含量为12~17毫克。
2.根据权利要求1所述的富铁乳酸菌制剂,其特征在于,所述乳酸菌为嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌。
3.一种如权利要求1或2所述的富铁乳酸菌制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将乳酸菌按常规方法接种于培养基,培养扩增14~26小时;
(2)在步骤(1)得到的发酵液中加入8~10%硫酸亚铁溶液,使发酵液的铁含量为80~100mg/L,继续恒温培养18~30小时;
(3)将步骤(2)中得到的菌液在转速5000~6000r/min,离心20~30min,并用水洗涤沉淀物至少3次,然后再次在转速5000~6000r/min,离心20~30min,去上清液,得沉淀物即为富铁乳酸菌制剂。
4.根据权利要求3所述的富铁乳酸菌制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将乳酸菌按常规方法接种于培养基,培养扩增16~24小时;
(2)在步骤(1)得到的发酵液中加入8%硫酸亚铁溶液,使发酵液的铁含量为80mg/L,继续恒温培养20~30小时;
(3)将步骤(2)中得到的菌液在转速6000r/min,离心20min,并用水洗涤沉淀物3~5次,然后再次在转速6000r/min,离心20min,去上清液,得沉淀物即为富铁乳酸菌制剂。
5.根据权利要求3或4所述的富铁乳酸菌制剂的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述培养基为MRS液体培养基。
6.根据权利要求3~5之一所述的富铁乳酸菌制剂的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,所述水为蒸馏水、去离子水或无菌生理盐水。
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