CN1706459A - 一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法和应用 - Google Patents
一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1706459A CN1706459A CN200510039258.3A CN200510039258A CN1706459A CN 1706459 A CN1706459 A CN 1706459A CN 200510039258 A CN200510039258 A CN 200510039258A CN 1706459 A CN1706459 A CN 1706459A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- selenium
- lactobacillus
- rich
- preparation
- centrifugal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000011669 selenium Substances 0.000 title claims abstract description 96
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 82
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 79
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 50
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 49
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 claims abstract description 81
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 49
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 19
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 claims abstract description 11
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 claims description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 10
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 claims description 8
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 claims description 8
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 claims description 6
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 claims description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 6
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 5
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 4
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001393 triammonium citrate Substances 0.000 claims description 2
- 235000011046 triammonium citrate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 6
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 7
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 7
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 4
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 4
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 4
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 150000003342 selenium Chemical class 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 2
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N selenocystine Chemical group OC(=O)C(N)C[Se][Se]CC(N)C(O)=O JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003346 selenoethers Chemical class 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical group [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-n-naphthalen-2-ylnaphthalene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4C=C3O)=CC=C21 PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007440 Agaricus campestris Species 0.000 description 1
- 235000004570 Agaricus campestris Nutrition 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DXIMSLPBBITCAX-UHFFFAOYSA-N C[Se].[Se] Chemical group C[Se].[Se] DXIMSLPBBITCAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N Selenium-L-methionine Chemical group C[Se]CC[C@H](N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N Selenomethionine Chemical group C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYUNNDAEUQFHGV-UHFFFAOYSA-N [Se].[Se] Chemical compound [Se].[Se] XYUNNDAEUQFHGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000012 chronic liver injury Toxicity 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000000881 depressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000014106 fortified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000037308 hair color Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000208 hepatic perisinusoidal cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- -1 lipid peroxide Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 229960002718 selenomethionine Drugs 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 229960001881 sodium selenate Drugs 0.000 description 1
- 239000011655 sodium selenate Substances 0.000 description 1
- 235000018716 sodium selenate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及生物制品领域，具体地说，涉及一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法，还涉及该富硒乳酸菌制剂的应用。本发明的富硒乳酸菌制剂，其主要成分是富含有机硒的乳酸菌，所说的有机硒是通过乳酸菌发酵转化无机硒而富集在菌体内，每克制剂中硒含量为6－15毫克。其制备方法是：a.将乳酸菌按常规培养扩增；b.向步骤a的发酵液中加入亚硒酸钠溶液，使发酵液的硒含量为30－120mg/L，继续恒温培养12－36小时；c.将步骤b得到的菌液离心后，洗涤沉淀物，再离心、去上清，即得产品。该富硒乳酸菌制剂能用于制备防治肝纤维化食品或药品。本发明的制剂兼具乳酸菌和硒的生物学功能，其生产工艺简单，该制剂特别是在防治肝纤维化方面有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品领域，具体地说，涉及一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法，还涉及该富硒乳酸菌制剂的应用。
背景技术
硒是人体必需的微量元素，研究表明，硒是机体赖以清除脂质过氧化物和自由基的谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)的必需组成成分，硒发挥作用的重要机制之一就是通过GSH-Px抗氧化活性实现的。硒能够通过提高肝细胞、Ito细胞GSH-Px活性，阻止脂质过氧化损伤而发挥防止肝病作用。肝纤维化是肝脏对各种原因刺激的慢性肝损伤反应，是肝脏疾病共同可逆病理过程，进一步可发展为不可逆肝硬变。目前，由于工艺和药价等原因，用于防病治病的硒主要还是以无机硒为主，如硒酸钠和亚硒酸钠，但研究证明，人体对无机硒化物的吸收效果差，利用率低，又会对人体产生程度不同的毒副作用；而有机硒化物利用率高、无任何毒副作用。
硒的有机化有两种手段：人工合成和生物转化。人工合成的产品很多，但价格昂贵，且转化的产物单一，难以在实际生产中应用。硒的生物有机化主要是通过动物、植物、微生物转化无机硒生产有机硒，如：富硒鸡蛋、富硒蘑菇、富硒酵母等，其中的硒主要是以硒代半胱氨酸、硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒-甲基硒代半胱氨酸等形式存在。一些发达国家通过酵母富硒获得的功能性富硒食品基料已进入工业化大规模生产和用于食品之中。但富硒酵母含硒量通常为0.3mg/g，最高达1mg/g(微生物学报，1990，30(1)：36-40；山西食品工业，1999，(2)：28-29)，对无机硒的转化利用仍不够理想。乳酸菌是食品加工和保藏的著名菌种，能分泌各种各样的酶类、提供丰富的氨基酸和维生素，具有抗菌、降低胆固醇、维持微生态环境、抗肿瘤、增强免疫力等生物功能，但不具备硒的生物学功能。
发明内容
本发明的目的是提供一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法，本发明还提供了该富硒乳酸菌制剂的用途。
本发明的富硒乳酸菌制剂，其主要成分是富含有机硒的乳酸菌，所说的有机硒是通过乳酸菌发酵转化无机硒而富集在菌体内，每克制剂中硒含量为6-15毫克。
以上所说的富硒乳酸菌制剂是由以下方法制得：
a.将乳酸菌按常规接种于培养基，培养扩增12-36小时；
b.向步骤a的发酵液中加入亚硒酸钠溶液，使发酵液的硒含量为30-120mg/L，继续恒温培养12-36小时；
c.将步骤b得到的菌液离心后，用水洗涤沉淀物至少3次，再离心、去上清，即得富含有机硒的乳酸菌制剂。
本发明优选的具体步骤如下：
a.将乳酸菌按常规接种于培养基，培养扩增24-36小时，
b.向步骤a的发酵液中加入质量百分浓度5-8％的亚硒酸钠溶液，使发酵液的硒含量为30-80mg/L，继续恒温培养24-36小时，
c.将步骤b得到的菌液离心、无菌生理盐水洗涤3-5次后，离心、去上清，即得富含有机硒的乳酸菌制剂。
本发明制备过程中所说的培养基优选MRS液体培养基。所说的乳酸菌优选保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)或乳链球菌(S.lactis)。上述微生物菌种由中科院微生物研究所微生物菌种保藏中心提供。
在上述步骤c中用水洗涤沉淀物的目的是洗去无机硒，其中所说的水，根据制备产品的不同要求可以是普通水、蒸馏水、无菌水或无菌生理盐水等。
发明人在实验中发现，乳酸菌混合培养的富硒效果不如单一菌种，因此，要得到(混合型)富硒乳酸菌制剂，最好是先用单一菌种转化无机硒，得到相应富硒乳酸菌制剂，再将得到的上述制剂混合。
本发明所说的富硒乳酸菌制剂在制备防治肝纤维化制品中的应用。本发明的富硒乳酸菌制剂富含有机硒，经动物实验表明：能明显抗肝纤维化，通过干预肝纤维化组织细胞脂质过氧化反应，特别是明显改善抗氧化酶活性系统发挥效应；在干预肝纤维化过程中，还通过改善和提高机体免疫细胞功能活性发挥积极有效的作用。因此，该制剂本身就具有防治肝纤维化的功效，此外，还可将其作为食品或药用基料来生产制备防治肝纤维化的食品或药品。
本发明的有益效果是，利用乳酸菌富集转化无机硒为有机硒，既提升了乳酸菌自身的营养及医疗保健功能，又增加了其附加值。
本发明的生产工艺简单、操作简便、转化率高于酵母富硒(见图1)。
本发明的富硒乳酸菌制剂能够提高正常机体抗氧化能力、免疫功能；干预肝纤维化组织细胞脂质过氧化反应，特别是明显改善抗氧化酶活性系统等优点。因为本发明是借助乳酸菌利用无机硒转变而成的一种生物制剂，安全可靠，既可作为功能性食品添加剂，又可作为防病治病的功能性调节剂。因此，市场实施可操作性强，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1是富硒酵母与富硒乳酸菌制剂有机硒含量对比示意图
图2是本发明富硒乳酸菌制剂对大鼠肝纤维化组织匀桨GSH-Px活性的影响
具体实施方式
实施例1：
配制乳酸菌MRS液体培养基：按1000mL蒸馏水中加入蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，葡萄糖20.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸三胺2.6g，吐温80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.25g，混合溶解，调pH至6.0-6.4，121℃灭菌15min。
取活化的保加利亚乳杆菌的菌落于MRS液体培养基中，在42℃下培养扩增后，加入5％亚硒酸钠溶液使培养基的硒含量为64mg/L，继续培养24h，收集菌液、离心(2000r/min，15min)、无菌生理盐水反复洗涤5次，再离心后，沉淀物即为富含有机硒的保加利亚乳杆菌制剂。
按以下方法测定硒含量：
(1)标准硒工作液准备
精密称取分析纯亚硒酸钠，加硝酸溶液制成每毫升含1.0mg硒的标准贮备液；精密量取标准贮备液1mL，用硝酸溶液定容至100mL即为标准硒工作液。
(2)样品消化
精密称取0.3g富硒保加利亚乳酸菌制剂干粉样品于小烧杯中，加少量水湿样，然后再加入消化液(双氧水∶高氯酸∶浓硫酸＝3∶3∶1)，摇匀。置通风橱内电炉上消化至终点后，加5％EDTA-2Na溶液2mL，摇匀，用40％氢氧化钠于冷水浴中调PH至中性，定容至100mL，同法做对照空白实验。
(3)样品测量和标准曲线制定
精密量取5mL消化液于分液漏斗中，另取7个分液漏斗，分别加入与消化液等量的空白溶液及标准硒工作液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，5％氢氧化钠溶液调PH至中性，加2mol/L甲酸溶液3mL，然后加水至35mL，摇匀。各分液漏斗中加入0.5％3，3’-二氨基联苯胺溶液5.0mL，摇匀后置暗处反应30min。用5％氢氧化钠溶液调PH6.5-7.0，精密加入甲苯10mL，震摇萃取1min，静置分层，取甲苯层滤液于1mL比色皿中，在波长420nm处测光密度(OD)值。用标准硒工作液的OD值绘制标准曲线，在曲线上查出与样品消化液对应的硒含量。
标准硒在0.02-0.1mg/mL范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝0.045+0.114x，拟合度超过0.99。测定消化液的OD值后代入回归方程即可得到该富硒乳酸菌制剂的硒含量为9.00-11.45mg/g。
实施例2：与实施1基本相同，不同之处在于，取活化的嗜热链球菌的菌落于MRS液体培养基中，在42℃下培养扩增12h后，加入8％亚硒酸钠溶液使培养基的硒含量为30mg/L，继续培养12h，收集菌液、离心(2000r/min，15min)、蒸馏水反复洗涤3次，再离心后，沉淀物即为富含有机硒的嗜热链球菌制剂，有机硒含量可达6-12mg/g。
实施例3：与实施1基本相同，不同之处在于，将所述的保加利亚乳杆菌用嗜酸乳杆菌替代，培养扩增24h后，加入9％亚硒酸钠溶液使培养基的硒含量为120mg/L，继续培养36h，收集菌液、离心(2000r/min，15min)、生理盐水反复洗涤3次，再离心后，去上清即制得富含有机硒的嗜酸乳杆菌制剂，有机硒含量可达8-15mg/g。
实施例4：与实施1基本相同，不同之处在于，将所述的保加利亚乳杆菌用乳链球菌替代，在37℃下培养36h，加入亚硒酸钠溶液使培养基的硒含量为80mg/L，继续培养36h，收集菌液、离心(2000r/min，15min)、无菌水反复洗涤6次，再离心后，沉淀物即为富含有机硒的乳链球菌制剂，有机硒含量可达8-12mg/g。
实施例5：取实施1、实施2、实施3和实施4制得的富硒乳酸菌制剂中的至少两种按比例配合在一起，混匀后即制成(混合型)富硒乳酸菌制剂。
实施例6：本发明制剂用于防治肝纤维化动物试验
将60只健康成年SD大鼠(雌雄各半)，经1周适应性饲养后，随机分成对照组、纤维化组、有机硒抗纤维化保护组，每组20只。纤维化组和保护组大鼠腹腔注射用橄榄油稀释的50％四氯化碳(CCl4)溶液诱发肝纤维化，对照组用同样方法注射同等剂量的橄榄油。对照组和纤维化组饲喂普通全价饲料，保护组饲喂添加含硒4mg/kg饲料的富硒乳酸菌制剂全价饲料。大鼠自由采食、饮水，环境温度20-25℃。整个试验持续4周。观察动物表现，并在试验的第2、4周宰杀大鼠取肝脏组织匀浆测定MDA含量和GSH-Px活性。
试验结果：注射CCl4后第1天，纤维化组大鼠即出现明显临床症状：精神抑郁，减食，毛色暗淡、紊乱，但在第2周剖检尚未见明显病理变化，在4周后剖检可见纤维化组大鼠肝脏纤维化，有粘连，器官呈苍白感，腹水严重，而日粮添加乳酸菌有机硒制剂的保护组大鼠，在整个实验期里没有明显的临床症状和剖检病理变化，对照组大鼠无异常表现。整个实验期内，富硒乳酸菌制剂能显著提高肝损伤组织匀浆GSH-Px活性(见图2)；纤维化组肝组织匀浆MDA含量显著升高，而保护组与对照组接近。表明富硒乳酸菌制剂能通过抗损伤保护，干预肝损伤脂质过氧化反应，改善抗氧化酶活性发挥正常有效的作用。
Claims (7)
1、一种富硒乳酸菌制剂，其特征在于，其主要成分是富含有机硒的乳酸菌，所说的有机硒是通过乳酸菌发酵转化无机硒而富集在菌体内，每克制剂中硒含量为6-15毫克。
2、如权利要求1所说的富硒乳酸菌制剂，其特征在于，其中所说的乳酸菌是保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)或乳链球菌(S.lactis)。
3、一种制备权利要求1或2所说的富硒乳酸菌制剂的方法，包括以下步骤：
a.将乳酸菌按常规接种于培养基，培养扩增12-36小时；
b.向步骤a的发酵液中加入亚硒酸钠溶液，使发酵液的硒含量为30-120mg/L，继续恒温培养12-36小时；
c.将步骤b得到的菌液离心后，用水洗涤沉淀物至少3次，再离心、去上清，即得富含有机硒的乳酸菌制剂。
4、如权利要求3所说的制备方法，其特征在于，具体是：
a.将乳酸菌按常规接种于培养基，培养扩增24-36小时，
b.向步骤a的发酵液中加入质量百分浓度5-8％的亚硒酸钠溶液，使发酵液的硒含量为30-80mg/L，继续恒温培养24-36小时，
c.将步骤b得到的菌液离心、无菌生理盐水洗涤3-5次后，离心、去上清，即得富含有机硒的乳酸菌制剂。
5、如权利要求4所说的制备方法，其特征在于，步骤a中所说的培养基是MRS液体培养基。
6、如权利要求5所说的制备方法，其特征在于，其中所说的MRS液体培养基具体按以下制得：按1000ml蒸馏水中加入蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，葡萄糖20.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸三胺2.6g，吐温80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O0.25g；混合溶解，调pH至6.0-6.4，121℃灭菌15min。
7、权利要求1或2所说的富硒乳酸菌制剂在制备防治肝纤维化制品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100392583A CN100493520C (zh) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | 一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100392583A CN100493520C (zh) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | 一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1706459A true CN1706459A (zh) | 2005-12-14 |
| CN100493520C CN100493520C (zh) | 2009-06-03 |
Family
ID=35580691
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2005100392583A Expired - Fee Related CN100493520C (zh) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | 一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100493520C (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101129174B (zh) * | 2007-09-06 | 2011-05-04 | 安徽省华鼎生物科技有限公司 | 有机硒松花粉的生产方法 |
| CN103805537A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-05-21 | 青岛碧水蓝天生物技术有限公司 | 一种富含有机硒的乳酸菌的生产方法 |
| CN105285327A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-02-03 | 珲春市龙裕农业发展集团有限公司 | 一种富硒乳酸菌生物饲料添加剂及其制备方法 |
| CN105969687A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-09-28 | 西北农林科技大学 | 一种富铁乳酸菌制剂及其生产方法 |
| CN106962497A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-07-21 | 陕西理工学院 | 一种富硒乳酪的制备方法 |
| CN110373347A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-10-25 | 宁波大学 | 一株富硒乳酸菌及其筛选方法和富含白藜芦醇和有机硒的风味酸奶的制备方法 |
| CN110951652A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-03 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN110951651A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-03 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN110982758A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-10 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111004754A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-14 | 光明乳业股份有限公司 | 一种具有抗氧化乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111088185A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-05-01 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111466503A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-07-31 | 江南大学 | 一种制备富硒酵素饮品的方法 |
| CN114271500A (zh) * | 2021-09-05 | 2022-04-05 | 江苏中农科食品工程股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌复合制剂制备方法 |
| CN115159475A (zh) * | 2022-07-20 | 2022-10-11 | 孙大利 | 一种从红碱蓬中提取硒的方法 |
-
2005
- 2005-05-11 CN CNB2005100392583A patent/CN100493520C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101129174B (zh) * | 2007-09-06 | 2011-05-04 | 安徽省华鼎生物科技有限公司 | 有机硒松花粉的生产方法 |
| CN103805537A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-05-21 | 青岛碧水蓝天生物技术有限公司 | 一种富含有机硒的乳酸菌的生产方法 |
| CN105285327A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-02-03 | 珲春市龙裕农业发展集团有限公司 | 一种富硒乳酸菌生物饲料添加剂及其制备方法 |
| CN105969687A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-09-28 | 西北农林科技大学 | 一种富铁乳酸菌制剂及其生产方法 |
| CN106962497A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-07-21 | 陕西理工学院 | 一种富硒乳酪的制备方法 |
| CN110373347A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-10-25 | 宁波大学 | 一株富硒乳酸菌及其筛选方法和富含白藜芦醇和有机硒的风味酸奶的制备方法 |
| CN110982758A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-10 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN110951651A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-03 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN110951652A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-03 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111004754A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-14 | 光明乳业股份有限公司 | 一种具有抗氧化乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111088185A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-05-01 | 光明乳业股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111004754B (zh) * | 2019-12-30 | 2022-05-06 | 光明乳业股份有限公司 | 一种具有抗氧化乳酸菌制剂及其制备方法 |
| CN111466503A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-07-31 | 江南大学 | 一种制备富硒酵素饮品的方法 |
| CN114271500A (zh) * | 2021-09-05 | 2022-04-05 | 江苏中农科食品工程股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌复合制剂制备方法 |
| CN114271500B (zh) * | 2021-09-05 | 2024-06-14 | 江苏中农科食品工程股份有限公司 | 一种富硒乳酸菌复合制剂制备方法 |
| CN115159475A (zh) * | 2022-07-20 | 2022-10-11 | 孙大利 | 一种从红碱蓬中提取硒的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100493520C (zh) | 2009-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100493520C (zh) | 一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法和应用 | |
| CN103751220A (zh) | 一种富硒乳酸菌制剂及其生产方法 | |
| US20070077238A1 (en) | Production of organic and inorganic selenium compounds by lactic acid bacteria | |
| CN103830279A (zh) | 一种富硒乳酸菌制剂生产方法及其富硒乳酸菌制剂 | |
| CN101253994B (zh) | 一种富含有机硒和有机锌的复合益生菌制剂 | |
| CN103805537A (zh) | 一种富含有机硒的乳酸菌的生产方法 | |
| CN1911062A (zh) | 植物源天然富硒肽及其制备方法和用途 | |
| CN106222158B (zh) | 一种包埋乳酸杆菌的微胶囊制备方法 | |
| KR101695038B1 (ko) | 셀레노히드록시산 화합물을 사용하여 셀레늄이 강화된 광합성 미생물, 영양물, 화장품 또는 약물에서의 그의 용도 | |
| CN101658243B (zh) | 用于调控牛羊围产期能量代谢障碍的微生物饲料添加剂 | |
| US20240277784A1 (en) | Bifidobacterium animalis in enriching organic zinc to promote growth and reproductive development | |
| CN115181682B (zh) | 一株高富集有机锌的发酵乳杆菌 | |
| CN114836342B (zh) | 一种乳酸菌gs-3及其在富硒中的应用 | |
| KR101703909B1 (ko) | 셀레늄-하이드록시산 화합물로부터 유래한 유기 셀레늄이 농축된 비광합성 미생물 및 그의 영양, 화장 및 의약 분야에의 적용 | |
| CN116333940A (zh) | 一株动物双歧杆菌的富硒培养方法与应用 | |
| CN116426574A (zh) | 一株嗜酸乳杆菌在高效富硒中的应用 | |
| Zommara et al. | Conversion of inorganic selenium to organic form (s) by Lactobacillus acidophilus | |
| CN105969687A (zh) | 一种富铁乳酸菌制剂及其生产方法 | |
| CN114250153B (zh) | 高耐硒灵芝Ganoderma lucidum JNUSE-200及其富硒发酵策略 | |
| Xiaoguang et al. | Improvement of Physiological Characteristic of Selenium‐Enriched Candida utilis with Amino Acids Addition | |
| CN109852661A (zh) | 一种使用微生物制备有机硒提取剂的方法 | |
| CN115197865B (zh) | 一株可促进生长与生殖发育的富锌长双歧杆菌 | |
| Zommara et al. | Whey Based Culture Media for The Production of Selenium Nanoparticles Rich Product by Three Lactic Acid Bacterial Strains | |
| CN115181683B (zh) | 一株高富集有机锌的短双歧杆菌 | |
| CN118109520A (zh) | 一种姜黄发酵滤液及其制备方法与用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090603 Termination date: 20100511 |