CN105954523A - 一种心肌肌钙蛋白i检测试剂盒 - Google Patents

一种心肌肌钙蛋白i检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，包括质量比为3:1的试剂1和试剂2，试剂1的组分为MOPSO缓冲液，氯化镁，脂肪醇聚氧乙烯醚，PC‑300；试剂2的组分为MOPSO缓冲液，曲拉通‑308，EMULGEN‑A90，牛血清白蛋白，PC‑300；TnI抗体包被胶乳颗粒。限定抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为60‑65nm，在提高检测灵敏度的前提下，检测试剂的检测准确性也得到相应的保证，有效改善了胶乳增强免疫比浊法的检测缺陷，提高检测结果的接受程度；对缓冲液、表面活性剂等进行优化选择，提高了检测试剂体系的稳定性，使采用的检测试剂检测灵敏度高，精密度和抗干扰性明显增强。

Description

一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，属于体外检测技术领域。
背景技术
心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一，具有较高的心肌特异性及敏感度，已越来越多地用于心肌梗死、心绞痛的诊断和鉴别诊断。心肌肌钙蛋白I测定开始于20世纪80年代中期，最早使用的是多克隆抗体检测的放射免疫比浊法，随后相继出现了运用单克隆抗体检测的各种不同的免疫法。
目前检测的方法有肌钙蛋白I的测定主要有免疫学方法，检测方法则包括胶乳增强免疫比浊法，夹心免疫放射法、夹心酶联免疫法，化学发光以及电化学发光等相关方法，其中普通夹心免疫放射法、夹心酶联免疫法两种方法成本相对较低，操作相对较简单，但是若试验中所用的抗体为多克隆抗体，会交叉反应，且分析灵敏度较低。而化学发光和电化学发光这两种方法，准确度较好且反应的分析灵敏度高，能够快速准确的检测出结果，但是这两种方法需要特定的化学发光仪器，并且对实验室操作人员的要求相对较高，因此在临床中无法真正的普及使用，只有一些相对较大的实验室才具备相应的条件。后期逐渐研发和使用的胶乳增强免疫比浊法操作简单，成本较低，能够较好的结合全自动生化分析仪器进行操作，方便快捷，但是同样具有分析灵敏度低的缺陷，在临床使用过程中针对于低浓度的临床样本，容易出现零值，甚至出现负值，这给临床使用者带来很大不方便。
发明内容
为了解决以上胶乳增强免疫比浊法检测心肌肌钙蛋白I中存在的灵敏度低的问题，本发明提供了一种灵敏度高、检测更准确的检测心肌肌钙蛋白I的检测方法。
本发明是通过以下步骤得到的：
本发明提供的肌钙蛋白I的检测试剂盒，包括体积比为3:1的试剂1和试剂2
试剂1的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
氯化镁 0.1mmol/L-0.5mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 1ml/L-3ml/L，
PC-300 0.5ml/L-1 ml/L；
2）试剂2的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 1ml/L-5 ml/L，
EMULGEN-A90 1ml/L-5 ml/L，
牛血清白蛋白(BSA) 1g/L-5 g/L，
PC-300 0.5ml/L-1 ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 15g/L。
所述的肌钙蛋白I检测试剂，所述TnI抗体包被胶乳颗粒为羊抗人单抗体TnI抗体，抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为60-65nm。
所述的肌钙蛋白I检测试剂来检测肌钙蛋白I的检测方法，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
本发明的有益效果：
1、本发明中限定抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为60-65nm，在提高检测灵敏度（达到0.040-0.050）的前提下，检测试剂的检测准确性也得到相应的保证，偏差小于5%，有效改善了胶乳增强免疫比浊法的检测缺陷，提高检测结果的接受程度；
2、本发明对缓冲液、表面活性剂等进行优化选择，提高了检测试剂体系的稳定性，储存13个月后，使采用的检测试剂检测灵敏度高，精密度和抗干扰性明显增强，低至0.01μg/L仍能灵敏的检测。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
试剂1中含有
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
氯化镁 0.1mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 1ml/L
防腐剂 0.5ml/L；
2）试剂2的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 1ml/L，
EMULGEN-A90 1ml/L，
牛血清白蛋白(BSA) 1g/L，
防腐剂 0.5ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 1g/L。
实施例2
试剂1中含有
咪唑缓冲液 100mmol/L，
氯化镁 0.5mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 3ml/L，
防腐剂 1 ml/L；
2）试剂2的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 5 ml/L，
EMULGEN-A90 3ml/L，
牛血清白蛋白(BSA) 5 g/L，
防腐剂 1 ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
实施例3
试剂1中含有
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
氯化镁 0.3mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 2ml/L
防腐剂 0.8/L；
2）试剂2的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 4 ml/L，
EMULGEN-A90 5ml/L，
牛血清白蛋白(BSA) 3 g/L，
防腐剂 0.8 ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 5g/L。
对比例1
同实施例2相比，试剂2中的EMULGEN-A90替换为脂肪醇聚氧乙烯醚，其余同实施例2相同。
对比例2
同实施例2相比，试剂2中抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为50-55nm。
对比例3
同实施例2相比，试剂2中抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为80-85nm。
准确度试验
分别配制下表中理论浓度的7个肌钙蛋白I样本，分别利用实施例1、2、3、对比例1、2、3的试剂进行检测，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。其具体数据如下表1：
表1 7个浓度准确度检测结果
从以上数据可以看出，实施例1、2、3、对比例1的检测结果与理论浓度没有显著性的差异，说明胶乳微球颗粒粒径为60-65nm时，检测结果准确度较高，偏差小于5%，而低比例2、3的检测结果同理论浓度差异显著，特别是在浓度较低时，说明胶乳微球颗粒粒径为50-55nm或80-85nm时，对肌钙蛋白I的检测准确度较差。
灵敏度实验
用已知浓度的样本测试试剂，记录在试剂规定参数下产生的吸光度改变即为吸光度差值（△A），换算为浓度5ng/mL的吸光度差值，结果如下表2：
表2灵敏度的测定
从表2内容可以看出，实施例1、2、3和对比例1灵敏度较好，对比例2、3灵敏度较差，说明乳胶颗粒的粒径分布，对灵敏度影响较大，而实施例1、2、3和对比例1中选择的乳胶颗粒的粒径分布，使试剂盒具有更高的灵敏度。
稳定性评价
将实施例1、2、3及对比例1、2、3的试剂在2～8℃避光冷藏储存13个月，然后配制10个已知不同浓度的肌钙蛋白I样本（如表3），然后将分别使用实施例1、2、3和对比例1、2、3的试剂检测肌钙蛋白，检测结果如下表3：
表3 10个不同低浓度梯度的肌钙蛋白四种方法检测结果对比情况
从以上数据可以看出，经过13个月的储存，实施例1、2、3的试剂对肌钙蛋白I浓度低至0.01μg/L仍能灵敏的检测，而对比例1的试剂在0.1μg/L时已不能准确检测，对比例2、3在0.1μg/L时已不能准确检测，说明本发明的试剂相对于对比例1、2、3具有更高的稳定性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种检测心肌肌钙蛋白I的检测试剂，其特征在于包括体积比为3:1的试剂1和试剂2，
试剂1中的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
氯化镁 0.1mmol/L-0.5mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 1ml/L-3ml/L，
EMULGEN-A90 1ml/L-5 ml/L，
PC-300 0.5ml/L-1 ml/L；
试剂2中的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 1ml/L-5 ml/L，
牛血清白蛋白 1g/L-5 g/L，
PC-300 0.5ml/L-1 ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 1-5g/L。
2.根据权利要求1所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于TnI抗体包被胶乳颗粒为羊抗人单抗体TnI抗体。
3.根据权利要求1所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于TnI抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为60-65nm。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于
试剂1中的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
氯化镁 0.1mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 1ml/L
防腐剂 0.5ml/L；
试剂2中的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 1ml/L，
EMULGEN-A90 1ml/L，
牛血清白蛋白 1g/L，
防腐剂 0.5ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 1g/L。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于
试剂1中的组分为：
咪唑缓冲液 100mmol/L，
氯化镁 0.5mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 3ml/L，
防腐剂 1 ml/L；
2）试剂2的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 5 ml/L，
EMULGEN-A90 3ml/L，
牛血清白蛋白 5 g/L，
防腐剂 1 ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于
试剂1中的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
氯化镁 0.3mmol/L，
脂肪醇聚氧乙烯醚 2ml/L
防腐剂 0.8/L；
2）试剂2的组分为：
MOPSO缓冲液 50mmol/L，
曲拉通-308 4 ml/L，
EMULGEN-A90 5ml/L，
牛血清白蛋白 3 g/L，
防腐剂 0.8 ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒 5g/L。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109490534A (zh) * 2018-12-29 2019-03-19 南京澳林生物科技有限公司 一种胃蛋白酶原ⅰ(pgⅰ)检测试剂盒及生产工艺

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102608325A (zh) * 2012-02-24 2012-07-25 南京诺尔曼生物技术有限公司 脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding proteins,H-FABP)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
CN103076454A (zh) * 2012-12-26 2013-05-01 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法
CN103076456B (zh) * 2012-12-26 2015-02-04 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用免疫透射比浊法检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒
CN105158473A (zh) * 2015-09-16 2015-12-16 浙江凯成生物科技有限公司 髓过氧化物酶测定试剂盒
CN105548571A (zh) * 2016-02-02 2016-05-04 潍坊三维生物工程集团有限公司 检测血清淀粉样蛋白a含量的试剂盒、方法及用途
US20160123976A1 (en) * 2002-07-29 2016-05-05 Abbott Point Of Care Inc. Multiple hybrid immunoassay
CN105628930A (zh) * 2015-12-22 2016-06-01 山东博科生物产业有限公司 一种灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法肌钙蛋白i检测试剂

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160123976A1 (en) * 2002-07-29 2016-05-05 Abbott Point Of Care Inc. Multiple hybrid immunoassay
CN102608325A (zh) * 2012-02-24 2012-07-25 南京诺尔曼生物技术有限公司 脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding proteins,H-FABP)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
CN103076454A (zh) * 2012-12-26 2013-05-01 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法
CN103076456B (zh) * 2012-12-26 2015-02-04 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用免疫透射比浊法检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒
CN105158473A (zh) * 2015-09-16 2015-12-16 浙江凯成生物科技有限公司 髓过氧化物酶测定试剂盒
CN105628930A (zh) * 2015-12-22 2016-06-01 山东博科生物产业有限公司 一种灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法肌钙蛋白i检测试剂
CN105548571A (zh) * 2016-02-02 2016-05-04 潍坊三维生物工程集团有限公司 检测血清淀粉样蛋白a含量的试剂盒、方法及用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109490534A (zh) * 2018-12-29 2019-03-19 南京澳林生物科技有限公司 一种胃蛋白酶原ⅰ(pgⅰ)检测试剂盒及生产工艺

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