CN105949340A - 一种玉竹多糖和平菇多糖的同步提取方法 - Google Patents

一种玉竹多糖和平菇多糖的同步提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种利用双水相萃取技术同步高收率提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，以玉竹和平菇为原料得到玉竹和平菇的混合粗提取液，将其经过低分子醇/盐双水相体系提取分离，再经分离纯化得到玉竹多糖和平菇多糖萃取液。以及将玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液应用于皮肤外用剂中，以起到美容、保湿的护肤作用。

Description

一种玉竹多糖和平菇多糖的同步提取方法
技术领域
本发明属于天然产物提取及化妆品技术领域，具体涉及一种从玉竹和平菇中同步提取玉竹多糖和平菇多糖的方法。
背景技术
平菇(Pleurotus ostreatus)，又名侧耳，糙皮侧耳，蚝菇等，属担子菌亚门(Basidiomycotina)，是一种相当常见的灰色食用菇。平菇中平菇多糖含量较高，现有技术中也有限地公开了一些平菇多糖的提取方法(CN103202864A,20130717; CN104342467A, 20150211; CN101492705A, 20090729; “平菇多糖的提取及其抗氧化保湿功效研究”，董银卯等，《香料香精化妆品》，2008年8月第4期)。
玉竹（polygonatum odoratum），为百合科多年生草本植物，主要含有玉竹多糖、甾体皂苷、黄酮、鞣质、甾醇、粘液质、生物碱和强心苷等成分。现有技术中也有限地公开了一些玉竹多糖的提取方法（CN103479875A,20140101; CN101585885A,20091125）。
目前，玉竹多糖和平菇多糖的提取采用的是超声波或者微波辅助的水溶醇沉法。由于分离沉淀后获得的多糖提取物中,常会有蛋白质、色素等杂质,必须继续采用吸附法做进一步分离纯化，这种提取方法操作复杂，对设备的性能要求高，生产成本也高。双水相体系（ATPE）以其具有操作方便，分离效率高，对分离物质零破坏等诸多特性，被广泛应用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。尤其是低分子醇/盐双水相体系具有价廉、低毒、粘度较小等优势，可以用于天然产物的提取和分离。目前利用双水相体系分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的研究尚未见报道。为此，我们通过对低分子醇与钾盐、钠盐和铵盐的双水相体系的稳定性以及对体系中的醇盐比进行研究，建立简单高效同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的提取方法，并将玉竹多糖和平菇多糖的混合萃取液用于保湿面膜的制备。该方法通过双水相技术将玉竹多糖和平菇多糖萃取物直接进入水层，避免了现行玉竹多糖提取工艺中有机溶剂的残留，同时将多糖混合萃取物直接用于保湿面膜的制备，克服了已有面膜制备技术中溶解多糖操作的繁琐。该技术操作简便，绿色高效，经济省时、易于放大。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺点与不足，提供一种利用双水相萃取技术同步高收率提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，以玉竹和平菇为原料得到玉竹和平菇的混合粗提取液，将其经过低分子醇/盐双水相体系提取分离，再经分离纯化得到玉竹多糖和平菇多糖萃取液。
本发明的另一目的在于提供所述玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液直接应用于保湿面膜的制备，克服了已有面膜制备技术中溶解多糖操作的繁琐。
所述的一种同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：室温下配制低分子醇与盐双水相体系并绘制相图，根据成相稳定性确定适宜的双水相体系。
所述的一种同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：绘制双水相图所用的低分子醇类为C1-C5的直链或支链的烷基醇。特别优选为乙醇、异丙醇或丙醇，所述的盐类为碱土金属盐、碱金属盐或铵盐。可以选自钾盐、钠盐和铵盐。具体而言，所述钾盐可以为：碳酸钾、磷酸氢二钾；钠盐为柠檬酸三钠、碳酸钠、硫酸钠；铵盐为硫酸铵、碳酸铵。
所述的一种同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：室温下配制低分子醇与无机盐双水相体系，将玉竹和平菇混合粗提取液加入到该双水相体系，在10～50℃，300r/min条件下恒温磁力搅拌30～60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60～100min，经1000～2000rpm离心20～40min，分离出玉竹多糖和平菇多糖富集相，将双水相萃取的多糖液经4℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。
所述的玉竹和平菇按质量比0.01:1～100：1配比进行粗提；优选为按0.1:1～20:1配比。
本发明利用低分子醇/盐双水相萃取技术同步分离纯化玉竹和平菇混合粗提取液，经分离纯化后得到玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。该方法不仅开创了双水相萃取技术同步提取玉竹多糖和平菇多糖的应用，而且操作简单，绿色高效，经济省时，易于放大。
按上述方法得到的含有保湿功效的混合多糖萃取液可以作为面膜添加成分使用，取 5 ～ 50g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 15 ～ 45 分钟后，温水洗干净即可。
本发明协同增效作用明显，玉竹多糖具有较强的吸水能力和抗氧化能力，并且协同平菇多糖增强保湿效果，补充皮肤水分。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例 1
将玉竹和平菇按质量比1:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按碳酸钠与乙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（10℃，300r/min）40min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置80min，经1500rpm离心30min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 15 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为11.6%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为30.7%。
实施例 2
将玉竹和平菇按质量比10:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按碳酸钠与异丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（35℃，300r/min）30min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60min，经1000rpm离心20min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为16.1%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为41.6%。
实施例 3
将玉竹和平菇按质量比4:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按硫酸铵与异丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（50℃，300r/min）60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置100min，经2000rpm离心40min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为15.8%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为36.2%。
实施例 4
将玉竹和平菇按质量比10:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按磷酸氢二钾与丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（35℃，300r/min）30min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60min，经1000rpm离心20min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为12.9%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为29.7%。
进行单组分对照，分别设置玉竹多糖单品、平菇多糖单品作为对照。
对照例 1
将玉竹100g洗净进行粗提并浓缩至50mL，室温下按碳酸钠与乙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（50℃，300r/min）60min，使玉竹多糖富集，静置100min，经2000rpm离心40min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖萃取液；取 10 g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，萃取液中玉竹多糖含量为9.5%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为21.2%。
对照例 2
将平菇100g洗净进行粗提并浓缩至50mL，室温下按柠檬酸钠与异丙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（50℃，300r/min）60min，使平菇多糖富集，静置100min，经2000rpm离心40min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得平菇多糖混合萃取液；取 10 g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，萃取液中平菇多糖含量为10.3%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为28.1%。
保湿效果的检测：测量受试者皮肤角质层水合率，测试原理是以电容器为仪器探头，由于水是皮肤上介质常数最大的物质，当皮肤水分含量发生变化时，皮肤的电容值也发生变化，所以可以通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面水分含量；常用的仪器是CorneometerCM825水分测试仪，通过测量使用产品前后皮肤角质层电容值的变化来衡量角质层含水量的变化，从而来评价化妆品的保湿功效，此种方法对皮肤角质层的水分含量进行定量化，能够灵敏地反应皮肤水分含量的变化，且重现性好，是目前保湿化妆品功效评价常用的方法之一。
实验方法
按照自愿原则选择 20-40 岁之间无皮肤病史及化妆品过敏史的人员作为受试者。
试验样品如上述所示共6个，每个样品随机选用10名受试者，每名受试者只使用一个样品，每次使用样品约 20 g均匀涂抹于面部，试验期间不再使用其他保湿产品，采用定位膜标记好测试点位置。
用水分测试仪测定受试者使用样品前和连续使用 15d 后的含水量变化，每个测试点平行测 5 次取平均值，结果用水分含量表示，单位为 a.u.。
保湿效果的检测结果，如表1所示：
表1
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 对照例1 对照例2
使用前 46.52 40.84 43.09 43.56 41.94 43.11
15d后 84.93 89.22 88.30 85.66 60.00 66.30
由表1可以看出，本发明玉竹多糖和平菇多糖单品单独使用时，对皮肤具有一定的保湿作用（对照例1-2），而本发明所得的组合样品（实施例1-4）显示出协同保湿效果明显增强。
试验过程均无过敏等不良反应。

Claims (7)

1. 一种化妆品组合物，其特征在于所述化妆品组合物含有玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液，所述的玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液按以下方法制备得到：
（1）室温下配制低分子醇与无机盐双水相体系；
（2）将玉竹和平菇混合粗提取液加入到该双水相体系，在10～50℃，300r/min条件下恒温磁力搅拌30～60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60～100min，经1000～2000rpm离心20～40min，分离出玉竹多糖和平菇多糖富集相，将双水相萃取的多糖液经4℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。
2. 如权利要求1所述的化妆品组合物，其特征在于所述的玉竹和平菇混合粗提取液按如下方法制备获得：将玉竹和平菇按质量比0.01:1～100：1配比进行粗提；优选为按0.1:1～20:1配比进行粗提。
3. 如权利要求1所述的化妆品组合物，其特征在于所述的低分子醇为为C1-C5的直链或支链的烷基醇。
4. 如权利要求1所述的化妆品组合物，其特征在于所述的无机盐为碱土金属盐、碱金属盐或铵盐。
5. 如权利要求3或4任一项所述的化妆品组合物，其特征在于所述的低分子醇为乙醇、异丙醇或丙醇；所述的无机盐为钾盐、钠盐、铵盐或其混合物。
6. 如权利要求5所述的化妆品组合物，其特征在于所述的钾盐为：碳酸钾、磷酸氢二钾；钠盐为柠檬酸三钠、碳酸钠、硫酸钠；铵盐为硫酸铵、碳酸铵。
7. 一种权利要求1-6任一项所述的化妆品组合物的应用，其特征在于将所述的化妆品组合物用于制备保湿面膜。
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