CN105941484A - 一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素两种活性成分的杀菌组合物，其组份及质量百分含量为：棘孢木霉孢子粉：0.1‑30％，申嗪霉素：0.1‑15％，润湿剂：1‑15％，分散剂：2‑8％，稳定剂：6‑10％，载体补余；其中棘孢木霉孢子粉经热贮培养筛选并培养至少三代后，繁殖获得。本发明的组合可制备为可湿性粉剂，产品在高温及热贮下仍具有较高的存活率，并高温条件下施药有较长的持效期，同时本发明的组合物速效性好、持效期长、用量相对较少，可降低用药成本，可有效防治水稻、小麦、蔬菜等作物的土传病害，并降低对土壤环境的污染。

Description

一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物

技术领域

本发明涉及生物农药技术领域，具体地说是一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物。

背景技术

棘孢木霉：属于半知菌门，丝孢目，木霉属。是一类分布广、繁殖快、具有较高生防价值且对一些广谱性杀菌剂不敏感的生防有益真菌，具有适应性强、抗菌谱广的特点，还能促进植物生长，具有：重寄生作用、竞争作用、产生裂解酶、产生拮抗化合物，抑制或杀死病原菌、诱导寄主植物对病原菌的防卫反应等作用方式，具有重要的经济意义。

申嗪霉素(phenazino-1-carboxylic acid)是由荧光假单胞菌M18经生物培养分泌的一种抗菌素，同时具有广谱抑制植物病原菌并促进植物生长作用的双重功能的杀菌剂，具有广谱、高效的特点，有效防治水稻、小麦、蔬菜等作物上的枯萎病、蔓枯病、疫病、纹枯病、稻曲病、稻瘟病、霜霉病、条锈病、菌核病、赤霉病、炭疽病、灰霉病、黑星病、叶斑病、青枯病、溃疡病、姜瘟及土传病害土壤处理。

土传病害的化学农药防治用药量大，超剂量使用导致残留严重超标，随着人们对环境保护的重视和农业的可持续发展，对环境较为友好的生物防治类农药(以下简称生防农药)越来越受到关注，生防农药的开发越来越受国家政策支持。

可湿性粉剂是一种基本的农药剂型，可制成悬浮液，进行喷雾、土壤处理等，在运输、贮藏、使用等方面具有诸多优点。对可湿性粉剂的热储稳定性的一般规定，FAO要求在(54±2)℃储存14天或以上，但当制剂既不适宜也不打算在炎热气候条件下使用，以及高温对制剂有负面影响时，可以变更试验条件，变更条件(45±2)℃储存6周或以上，(40±2)℃储存8周或以上，(35±2)℃储存12周或以上，(30±2)℃储存18周或以上。有效成分为活体的真菌袍子类可湿性粉剂，在要求温度的贮藏中容易失去活力，因此在制剂加工中，不仅要提高其使用的便利性，更重要的是如何通过制剂保持孢子的活力，延长货架寿命。

发明内容

本发明所要解决的上述中的技术问题，提供一种具有增效作用的棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物。

本发明所采用的技术方案为：

一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其组份及质量百分含量为：

棘孢木霉孢子粉：0.1-30％，申嗪霉素：0.1-15％，润湿剂：1-15％，分散剂：2-8％，稳定剂：6-10％，载体补余；

棘孢木霉孢子粉经热贮培养筛选并培养至少三代后，繁殖获得。

所述润湿剂为烷基苯磺酸钠盐、烷基硫酸钠盐、茶皂素中的一种或几种。

所述分散剂为木质素磺酸盐、萘磺酸盐、聚羧酸盐、聚萘甲醛磺酸盐、阴-非离子复合剂中的一种或几种。

所述载体为硫铵、轻钙、膨润土、高岭土、白炭黑中一种或几种的混合。

所述稳定剂为环糊精、玉米淀粉中的一种或几种。

所述热贮培养的温度为40℃-55℃。

所述棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物的制备剂型为可湿性粉剂。

所述棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物应用于防治农作物的土传病害。

所述棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物的施药方式为叶面喷雾、拌土、灌根、种子处理。

本发明的木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，具有如下技术效果：

1、产品中的棘孢木霉孢子粉经热贮培养多次后筛选获得，在高温及热贮下仍具有较高的存活率，在规定的温度下可贮存较长的时间，使产品具有较长的货架寿命，以及高温条件下施药有较长的持效期，适合在高温季节较长的南方地区贮存和施用；

2、速效性好、持效期长、用量相对较少，可降低用药成本，且具有增效作用，可有效防治水稻、小麦、蔬菜等作物的土传病害，并降低对土壤环境的污染。

具体实施方式：

一、耐高温棘孢木霉菌孢子粉的培育与筛选

1)将初代的棘孢木霉孢子粉分别在45℃和54℃的温度下热贮30天，并筛选出仍存活的初代棘孢木霉孢子粉；

2)将上述中存活的初代棘孢木霉孢子粉进行繁殖获得下一代孢子粉F1，并批量培育；

3)再次分别以45℃和54℃的温度下对所得的棘孢木霉孢子粉热贮，获得孢子粉F2；

4)重复上述步骤两次，获得可耐高温的棘孢木霉孢子粉。

由上述中获得的棘孢木霉孢子粉萌发为棘孢木霉菌株，并于各温度下热贮8周，再于40℃热贮30天，测定活孢率如下：

表1高温培育棘孢木霉活孢率

序号	热贮温度	活孢率
			1	F	45％
2	45℃F1	56％
			3	54℃F1	80％
4	45℃F2	67％
			5	54℃F2	89％

结果表明，通过高温热贮筛选出的孢子通过培育后较原孢子具有耐高温的特性，且经过试验大量数据得知，经高温热贮后并繁殖的的棘孢木霉菌株，具有存活率高、萌发快的优势。

二、申嗪霉素对棘孢木霉孢子萌发及菌丝生长的影响

因棘孢木霉孢子粉为生物活体，首先需确认申嗪霉素对棘孢木霉孢子萌发及菌丝的影响，故而开展室内生测试验。采用菌丝生长速率测定法测定不同杀菌剂对棘孢木霉菌丝生长的抑制作用，筛选出申嗪霉素能与棘孢木霉孢子粉复配的比例范围。

方法：将各棘孢木霉孢子粉与申嗪霉素按不同比例配制成母液，用甲醇溶解，根据设定的浓度吸取所需要的体积，加入到三角瓶中。三角瓶含有融化了的PDA培养基(约40℃加入)，混合均匀后分别倒入灭菌的培养皿，为使观察更持久，选用12cm培养皿。置于28℃培养，每个浓度4次重复。10-12小时后，显微镜下观察孢子萌发情况并计算萌发抑制率。3天后测量各处理的菌落直径，与对照比较计算各配比处理对菌落扩展的生长抑制率。并观察各处理长满培养皿的天数。

表2申嗪霉素对棘孢木霉孢子萌发及菌丝生长抑制情况

由表2数据可知，棘孢木霉孢子粉：申嗪霉素在300:1～1:150范围内申嗪霉素对棘孢木霉的影响很小，可以复配。

三、棘孢木霉和申嗪霉素的增效作用室内生测

为确定棘孢木霉和申嗪霉素两种成分的增效作用，首先将这两种成分进行了室内生测实验，实验方法及结果如下：

根据组合物的特性和市场需求，我们将生测对象定位为辣椒疫病。疫病的病原菌的卵孢子可存活3年以上，主要以卵孢子在土壤中和病残体上越冬，可度过不种植寄主作物的季节，田间最初仅有少数植株发病，但也形成传病中心，很快向周围扩散,侵染邻近植株。

室内生测试验方法：采用生长速率法测定药剂对辣椒疫病菌丝生长抑制率。在预备试验的基础上，从各药剂对病菌菌丝生长抑制率达10-90％范围内设计5个浓度，先将棘孢木霉孢子粉(3.3亿/克)和95％申嗪霉素以甲醇为溶剂配成系列浓度的药液，然后将药液按1％比例加入已融化的PDA培养基中(培养基温度控制在40℃)，充分摇匀，制成带毒平板，以1％甲醇为对照，每处理4次重复。用5mm打孔器接入带毒平板内，于26℃恒温培养，培养5天后采用十字交叉法测量菌落直径，计算各药剂的EC50。

本次试验菌丝生长抑制率计算均采用以下公式：

用DPS对各单剂及不同混剂的浓度对数值和相应抑制率几率值进行回归分析，计算毒力方程、EC50值及、相关系数。根据Wadlcy的方法计算混配剂的相互作用，A、B分别表示两种药剂，a、b分别表示A、B在混剂中含量的比率。以SR值分析混配的效果。

SR＝0.5～1.5，则混剂有加和作用

SR≤0.5，则混剂有拮抗作用

SR≥1.5，则混剂有增效作用

EC50(理论值)＝(a+b)/(a/EC50+b/EC50)

SR＝EC50(理论值)/EC50(实际值)

表3棘孢木霉孢子粉、申嗪霉素及其不同配比对辣椒疫病共毒系数的测定结果

分析上述数据可知，棘孢木霉孢子粉、申嗪霉素不同配比时，对辣椒疫病均有不同比例的增效作用。

四、配方实例：

实例一：0.1％棘孢木霉·15％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉0.1％，申嗪霉素15％,烷基苯磺酸钠盐4％，聚羧酸盐3％，木质素磺酸盐5％，稳定剂玉米淀粉8％，白炭黑5％，轻钙10％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

实例二：0.8％棘孢木霉·12％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉0.8％，申嗪霉素12％,烷基硫酸钠盐2％，萘磺酸盐2.5％，聚萘甲醛磺酸盐3.5％，稳定剂环糊精10％，轻钙5％，硫铵10％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

实例三：6％棘孢木霉·6％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉6％，申嗪霉素6％,阴-非离子复合剂3％，萘磺酸盐2.5％，聚羧酸盐2.5％，稳定剂玉米淀粉10％，膨润土15％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

实例四：10％棘孢木霉·5％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉10％，申嗪霉素5％,烷基硫酸钠盐1％，茶皂素2％,聚羧酸盐6.5％，稳定剂环糊精7％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

实例五：15％棘孢木霉·3％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉15％，申嗪霉素3％,烷基苯磺酸钠盐3.5％,聚萘甲醛磺酸盐3.5％，木质素磺酸盐2％,稳定剂玉米淀粉6％，白炭黑5％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

实例六：25％棘孢木霉·1％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉25％，申嗪霉素1％,烷基苯磺酸钠盐2.5％,茶皂素1％，木质素磺酸盐10％,稳定剂环糊精6％，轻钙4％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

实例七：30％棘孢木霉·0.1％申嗪霉素WP

棘孢木霉孢子粉30％，申嗪霉素0.1％,茶皂素5％，聚羧酸盐5％，木质素磺酸盐5％,稳定剂玉米淀粉5％，环糊精5％，硫铵4.5％，水洗高岭土补足。先将原药、分散剂、润湿剂、稳定剂和填料充分混匀，进行超微气流粉碎，形成可湿性粉剂的成品。

五、田间药效评价

选择以上实例进行西瓜枯萎病的田间试验，确定防治西瓜枯萎病的效果，验证复配后的增效效果。具体实验方法如下：

参照《GB/T 17980.113-2004田间药效实验准则(二)杀菌剂防治瓜类枯萎病》，移栽后采用背负式喷雾器(华丰-16型，喷口孔径1.5mm,操作压力3-4kg/cm³)喷雾，每公顷用药量加水750kg稀释后喷雾，间隔7-10d西瓜基部及茎叶喷雾1次，于药前调查基数，在第一次施药后7天和第二次用药后18天各调查一次病情。测定复配与单剂对西瓜枯萎病效果的影响。

表4 26％木霉·申嗪霉素WP对西瓜枯萎病防效试验数据

说明：表中“a”“b”表示5％水平显著差异性。

田间实验表明：实验药剂防治西瓜枯萎病防效较好，木霉·申嗪霉素(25+1)WP20m/亩复配防效和持效性均优于各单剂单独使用。

Claims (9)

1.一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其组份及质量百分含量为：

棘孢木霉孢子粉：0.1-30％，申嗪霉素：0.1-15％，润湿剂：1-15％，分散剂：2-8％，稳定剂：6-10％，载体补余；

棘孢木霉孢子粉经热贮培养筛选并培养至少三代后，繁殖获得。

2.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其特征在于，所述润湿剂为烷基苯磺酸钠盐、烷基硫酸钠盐、茶皂素中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其特征在于，所述分散剂为木质素磺酸盐、萘磺酸盐、聚羧酸盐、聚萘甲醛磺酸盐、阴-非离子复合剂中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其特征在于，所述载体为硫铵、轻钙、膨润土、高岭土、白炭黑中一种或几种的混合。

5.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其特征在于，所述稳定剂为环糊精、玉米淀粉中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物，其特征在于，所述热贮培养的温度为40℃-55℃。

7.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物的制备剂型为可湿性粉剂。

8.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物应用于防治农作物的土传病害。

9.根据权利要求1或7所述的一种棘孢木霉孢子与申嗪霉素复配杀菌组合物的施药方式为叶面喷雾、拌土、灌根、种子处理。