CN105935064A - 防治根结线虫的复合制剂及其制备方法 - Google Patents

防治根结线虫的复合制剂及其制备方法 Download PDF

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CN105935064A CN201610009038.4A CN201610009038A CN105935064A CN 105935064 A CN105935064 A CN 105935064A CN 201610009038 A CN201610009038 A CN 201610009038A CN 105935064 A CN105935064 A CN 105935064A
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Abstract

本发明提供一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法，其中复合制剂包括厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、阿维菌素和助剂。本发明提供的一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法，本发明提供的一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法，通过将微生物制剂和生物制剂进行有效的结合，在保证药效的同时，延缓了病虫害抗药性，并且在保证药效的同时，避免了农药使用量，降低了成本和对环境的污染。

Description

防治根结线虫的复合制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法。
背景技术
线虫属于无脊椎动物线形门线形纲。植物和土壤中的植物寄生性线虫是植物侵染性病害的主要病原之一。植物寄生线虫主要包括：根结线虫属(Meloidogyne)、肾形线虫属(Rotylenchulus)、孢囊线虫(异皮线虫属(Heterodera))、根斑线虫(短休线虫属(Pratykenchus))，线虫的危害可以大幅减少植物对营养和水分的吸收，线虫为害植物造成伤口，造成植物病原菌侵入；由于线虫具有能主动趋向和用口针刺入寄主，并自行转移为害的特点，其给农作物造成的损失比其他病害更难于估测。
目前防治线虫的化学制剂主要有灭线磷、克百威、特丁硫磷、硫线磷等，生物制剂主要包括以阿维菌素为主要成分的各类农药，经调查统计，目前各地区均出现了对以上各药物成分具备抗药性的线虫品种，因此市场上急需一种更高效的，污染少的杀线虫药剂。
发明内容
本发明旨在解决上面描述的问题。本发明的目的是提供一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法。
根据本发明的一个方面，提供了一种防治根结线虫的复合制剂，包括：厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、阿维菌素和助剂。
其中，每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，阿维菌素0.03～0.05g。
其中，每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.03g。
其中，助剂包括润湿剂、展着剂、防漂移剂和粘着剂，其中各组分的组分含量为：
其中，润湿剂为烷基酚甲醛树脂、聚氧乙烯醚，十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、拉开粉中的一种或多种；展着剂为酪蛋白；防漂移剂为是聚乙烯醇丙烯酸钠、聚甲基丙烯酸钠中一种或多种；粘着剂为聚醋酸乙酯、明胶、聚乙烯醇、阿拉伯胶、黄原胶中的一种或多种。
根据本发明的另一方面，提供一种防治根结线虫的复合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料准备，使用单菌种纯发酵的方法分别制取厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液。
(2)将制得的厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌液、短小芽孢杆菌菌液进行复配，在复配后的复合菌液中加入阿维菌素混合震荡，制得防治根结线虫的复合制剂的原液。
(3)在制得原液中加入助剂得到防止根结线虫的复合制剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌孢子个数为1.0×108～1.0×109个，阿维菌素0.03～0.05g。
其中，步骤(3)包括：
在制得原液中加入如权利要求3所述的组分含量加入润湿剂、展着剂、防漂移剂和粘着剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，阿维菌素0.03～0.05g。
其中，步骤(3)包括：
在制得原液中加入20～100ml助剂得到防止根结线虫的复合制剂。
本发明提供的一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法，本发明提供的一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法，通过将微生物制剂和生物制剂进行有效的结合，在保证药效的同时，延缓了病虫害抗药性，并且在保证药效的同时，避免了农药使用量，降低了成本和对环境的污染。
参照附图来阅读对于示例性实施例的以下描述，本发明的其他特性特征和优点将变得清晰。
附图说明
并入到说明书中并且构成说明书的一部分的附图示出了本发明的实施例，并且与描述一起用于解释本发明的原理。在这些附图中，类似的附图标记用于表示类似的要素。下面描述中的附图是本发明的一些实施例，而不是全部实施例。对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，可以根据这些附图获得其他的附图。
图1示出了根据本发明的一个实施例的一种防治根结线虫的复合制剂的制备方法的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
实施例1
一种防治根结线虫的复合制剂X1，主要包括：
厚垣轮枝菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、阿维菌素、聚氧乙烯醚、酪蛋白、聚乙烯醇丙烯酸钠和聚醋酸乙酯，其中每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108个，短小芽孢杆菌菌液的孢子个数为1.0×108个，阿维菌素0.03g。
其中，每毫升X1中，含有0.12个重量份的聚氧乙烯醚、0.31个重量份的酪蛋白、0.05个重量份的聚乙烯醇丙烯酸钠和0.01个重量份的聚醋酸乙酯。
如图1所示，该复合制剂X1的制备方法包括以下步骤:
(1)原料准备
制备厚垣轮枝菌菌液：
将厚垣轮枝菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶培养基的PH值为6.8，包括：去皮马铃薯0.5个重量份，葡萄糖0.05个重量份，琼脂0.06个重量份，水250个重量份；将150ml的三角瓶中放入50ml的培养基，高压灭菌后接入活化后的菌种，置于25℃的摇床上，培养60个小时得到厚垣轮枝菌菌液；
制备枯草芽孢杆菌菌液：
枯草芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为6.9，包括酵母膏2个重量份，蛋白胨4个重量份，葡萄糖4个重量份，水200个重量份，将150ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于30℃的摇床上，培养48个小时得到枯草芽孢杆菌菌液；
短小芽孢杆菌菌液：
将短小芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为7.1,包括1个重量份的酵母膏、0.1个重量份的蛋白胨、0.8个重量份的牛肉膏和0.5个重量份的淀粉、200个重量份的水，在培养基中加入2％的乙醇作为生长因子，将150ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于27℃的摇床上，培养72个小时得到短小芽孢杆菌菌液。
(2)将制得的厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌液、短小芽孢杆菌进行复配，在复配后的复合菌液中加入21g阿维菌素，混合震荡，制得防治根结线虫的复合制剂的原液。
(3)在制得原液中加入成分为聚氧乙烯醚、酪蛋白、聚乙烯醇丙烯酸钠和聚醋酸乙酯的助剂共20ml得到防止根结线虫的复合制剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×108个，短小芽孢杆菌孢子个数为1.0×108个，阿维菌素0.03g。
实施例2
一种防治根结线虫的复合制剂X2，主要包括：
厚垣轮枝菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、阿维菌素、聚氧乙烯醚、酪蛋白、聚乙烯醇丙烯酸钠和明胶，其中每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.04g。
其中，每毫升X2中，含有0.78个重量份的聚氧乙烯醚、0.92个重量份的酪蛋白、0.87个重量份的聚乙烯醇丙烯酸钠和0.65个重量份的明胶。
该复合制剂X2的制备方法包括:
(1)原料准备
制备厚垣轮枝菌菌液：
将厚垣轮枝菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶培养基的PH值为6.6，包括：去皮马铃薯0.3个重量份，葡萄糖0.03个重量份，琼脂0.05个重量份，水200个重量份；将200ml的三角瓶中放入50ml的培养基，高压灭菌后接入活化后的菌种，置于26℃的摇床上，培养48个小时得到厚垣轮枝菌菌液；
制备枯草芽孢杆菌菌液：
枯草芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为6.8，包括酵母膏2.5个重量份，蛋白胨4.5个重量份，葡萄糖4.5个重量份，水250个重量份，将250ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于34℃的摇床上，培养60个小时得到枯草芽孢杆菌菌液；
制备短小芽孢杆菌菌液：
将短小芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为7.2,包括1.5个重量份的酵母膏、0.2个重量份的蛋白胨、1.0个重量份的牛肉膏和1.0个重量份的淀粉、220个重量份的水，在培养基中加入3％的乙醇作为生长因子，将200ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于28℃的摇床上，培养84个小时得到短小芽孢杆菌菌液。
(2)将制得的厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液进行复配，在复配后的复合菌液中加入28g阿维菌素混合震荡，制得防治根结线虫的复合制剂的原液。
(3)在制得原液中加入成分为聚氧乙烯醚、酪蛋白、聚乙烯醇丙烯酸钠和明胶的助剂共100ml得到防止根结线虫的复合制剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×109个，枯草芽孢杆菌菌液的孢子为1.0×109个，短小芽孢杆菌菌液的孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.04g。
实施例3
一种防治根结线虫的复合制剂X3，主要包括：
厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、阿维菌素、十二烷基硫酸钠、酪蛋白、聚甲基丙烯酸钠和聚乙烯醇，其中每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.05g。
其中，每毫升X3中，含有0.56个重量份的十二烷基硫酸钠、0.60个重量份的酪蛋白、0.32个重量份的聚甲基丙烯酸钠和0.32个重量份的聚乙烯醇。
该复合制剂X3的制备方法包括:
(1)原料准备
厚垣轮枝菌菌液：
将厚垣轮枝菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶培养基的PH值为6.7，包括：去皮马铃薯0.6个重量份，葡萄糖0.06个重量份，琼脂0.07个重量份，水220个重量份；将250ml的三角瓶中放入50ml的培养基，高压灭菌后接入活化后的菌种，置于27℃的摇床上，培养72个小时得到厚垣轮枝菌菌液；
枯草芽孢杆菌菌液：
枯草芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为6.9，包括酵母膏1.5个重量份，蛋白胨3.5个重量份，葡萄糖3.5个重量份，水150个重量份，将200ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于32℃的摇床上，培养72个小时得到枯草芽孢杆菌菌液；
短小芽孢杆菌菌液：
将短小芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为7.3,包括3个重量份的酵母膏、0.3个重量份的蛋白胨、1.5个重量份的牛肉膏和1.5个重量份的淀粉、180个重量份的水，在培养基中加入5％的乙醇作为生长因子，将250ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于27℃的摇床上，培养96个小时得到短小芽孢杆菌菌液。
(2)将制得的厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液进行复配，在复配后的复合菌液中加入35g阿维菌素混合震荡，制得防治根结线虫的复合制剂的原液。
(3)在制得原液中加入成分为十二烷基硫酸钠、酪蛋白、聚甲基丙烯酸钠和聚乙烯醇的助剂共50ml得到防止根结线虫的复合制剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×109个，短小芽孢杆菌孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.05g。
实施例4
一种防治根结线虫的复合制剂X4，主要包括：
厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、阿维菌素、十二烷基苯磺酸钠、酪蛋白、聚乙烯醇丙烯酸钠和聚甲基丙烯酸钠的混合物以及阿拉伯胶和黄原胶的混合物，其中每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×109个，、短小芽孢杆菌孢子个数为1.0×108个，阿维菌素0.035g。
其中，每毫升X4中，含有0.30个重量份的十二烷基苯磺酸钠、0.56个重量份的酪蛋白、0.79个重量份的聚乙烯醇丙烯酸钠和聚甲基丙烯酸钠的混合物以及0.23个重量份的阿拉伯胶和黄原胶的混合物。
该复合制剂X4的制备方法包括:
(1)原料准备
制备厚垣轮枝菌菌液：
将厚垣轮枝菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶培养基的PH值为6.7，包括：去皮马铃薯0.6个重量份，葡萄糖0.06个重量份，琼脂0.07个重量份，水220个重量份；将250ml的三角瓶中放入50ml的培养基，高压灭菌后接入活化后的菌种，置于27℃的摇床上，培养72个小时得到厚垣轮枝菌菌液；
制备枯草芽孢杆菌菌液：
枯草芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为6.9，包括酵母膏1.5个重量份，蛋白胨3.5个重量份，葡萄糖3.5个重量份，水150个重量份，将200ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于32℃的摇床上，培养72个小时得到枯草芽孢杆菌菌液；
制备短小芽孢杆菌菌液：
将短小芽孢杆菌菌种活化后，接入摇瓶中培养，其中摇瓶的培养基的PH值为7.3,包括3个重量份的酵母膏、0.3个重量份的蛋白胨、1.5个重量份的牛肉膏和1.5个重量份的淀粉、180个重量份的水，在培养基中加入5％的乙醇作为生长因子，将250ml的三角瓶放入50ml的培养基，高温灭菌后接入活化后的菌种，置于27℃的摇床上，培养96个小时得到短小芽孢杆菌菌液。
(2)将制得的厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液进行复配，在复配后的复合菌液中加入24.5g阿维菌素混合震荡，制得防治根结线虫的复合制剂的原液。
(3)在制得原液中加入成分为十二烷基苯磺酸钠、酪蛋白、聚乙烯醇丙烯酸钠和聚甲基丙烯酸钠的混合物以及阿拉伯胶和黄原胶的混合物的助剂共30ml得到防止根结线虫的复合制剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×109个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×108个，短小芽孢杆菌孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.035g。
另外，复合制剂中助剂的可能组成也可以用表格的形式表示，具体如表1：
表1：助剂的组成(重量份)
实验例 防治根结线虫的复合制剂的实验效果对比
1.供试菌剂
1.1实验菌剂：实施例1～4所制备的复合制剂，按次序编号分别为供试细菌1～4。
1.2对照菌剂：
1.2.1对照菌剂1：厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液复合的微生物菌剂，其中每毫升微生物菌剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌菌液孢子个数为1.0×108～1.0×109个。
1.2.2对照菌剂2：以阿维菌素为药剂防治成分的生物制剂，其中阿维菌素的含量为4％。
1.2.3对照菌剂3：以噻唑磷为药剂防治成分的化学制剂，其中噻唑磷的含量为2％。
2.供试作物
山东省寿光花生种植地种植的花生。
3.实验设计
3.1实验地点选在线虫分布大量且均匀的花生种植区，设置第1～4处理为实验组，第5～7处理为对照组，第8处理为空白组。具体实验设计如下：
3.2每个处理3个重复(分三列，每列100株花生)，各处理随机排列。
3.3.1八月中旬至九月初进行菌剂小区试验，在花生根部四周扒开根表面10cm厚、半径为50cm的土层，将1毫升的供试菌剂用水稀释后采用喷雾方式将稀释后的菌剂均匀喷洒在挖好的坑中，使菌剂分布在根围，再使扒开土壤复位。施药50d后调查花生树根结指数评价防治效果。
3.3.2清水对照组用清水代替稀释的菌剂，不作防线虫处理。
3.4根结指数(病情指数)计算方法：挖出每处理花生根，按照根结线虫分级调查指标进行调查，根结严重度分0-10级，分级标准参照Benjamin等(Benjamin D，Grover CBJ.Comparison of compatible and incompatible response of potatotoMeloidogyneincognita.Journal of Nematology，1987，19218-221)。根结指数计算公式如下：
4.实验结果：
由上表可以看出，相对于处理8，处理5～7(即对照组)和处理1～4(即实验组)的花生根结指数均有明显降低，也就是说，处理1～4能够取得与处理5～7相近的花生根结防治效果即防治线虫效果，另外，由于本发明提供的复合制剂相较于常规的生物、化学制剂，对土地的毒性低、环保度高，同时因为应用的生物和化学药剂较少，可以延缓线虫产生抗药性，从而保障药效持久。
综上所述，本发明提供的一种防治根结线虫的复合制剂及其制备方法，通过将微生物制剂和生物制剂进行有效的结合，在保证药效的同时，延缓了病虫害抗药性，并且在保证药效的同时，避免了农药使用量，降低了成本和对环境的污染。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种防治根结线虫的复合制剂，其特征在于，包括厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液、阿维菌素和助剂；
其中，每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，阿维菌素0.03～0.05g。
2.如权利要求1所述的复合制剂，其特征在于，
每毫升复合制剂中厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×109个，阿维菌素0.03g。
3.如权利要求1所述的复合制剂，其特征在于，
所述助剂包括润湿剂、展着剂、防漂移剂和粘着剂，其中各组分的组分含量为：
4.如权利要求3所述的复合制剂，其特征在于，
所述润湿剂为聚氧乙烯醚，十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、拉开粉中的一种或多种；
所述展着剂为酪蛋白；
所述防漂移剂为是聚乙烯醇丙烯酸钠、聚甲基丙烯酸钠中一种或多种；
所述粘着剂为聚醋酸乙酯、明胶、聚乙烯醇、阿拉伯胶、黄原胶中的一种或多种。
5.一种如权利要求1～4中的任意一项所述的防治根结线虫的复合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料准备，使用单菌种纯发酵的方法分别制取厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、短小芽孢杆菌菌液；
(2)将制得的厚垣轮枝菌菌液、枯草芽孢杆菌液、短小芽孢杆菌菌液进行复配，在复配后的复合菌液中加入阿维菌素混合震荡，制得防治根结线虫的复合制剂的原液；
(3)在制得原液中加入助剂得到防止根结线虫的复合制剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌孢子个数为1.0×108～1.0×109个，阿维菌素0.03～0.05g。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：
在制得原液中加入如权利要求3所述的组分含量加入润湿剂、展着剂、防漂移剂和粘着剂，使得每毫升复合制剂中含有厚垣轮枝菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，枯草芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，短小芽孢杆菌的孢子个数为1.0×108～1.0×109个，阿维菌素0.03～0.05g。
7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：
在制得原液中加入20～100ml助剂得到防止根结线虫的复合制剂。
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