CN105934674A

CN105934674A - 用于在由利钠肽指导的心力衰竭患者中风险评估和治疗监测的生物标记物

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Publication number: CN105934674A
Application number: CN201580005871.5A
Authority: CN
Inventors: D.布洛克; H.布伦纳; U-H.魏因休斯-泰伦; C.曹格; T.迪特勒; C.米歇尔; J.乌拜; S.桑德斯-范维吉克
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2014-01-28
Filing date: 2015-01-22
Publication date: 2016-09-07
Anticipated expiration: 2035-01-22
Also published as: US20160334419A1; CA2945680A1; JP6672154B2; CN110068683A; JP2020109412A; US20200271670A1; EP2899544A1; ES2712201T3; CN115128279A; CN105934674B; CA2945680C; JP6977081B2; JP2017505906A; EP2899544B1; US10684291B2; EP3470848A2; WO2015113889A1; EP3470848A3; CN110068683B

Abstract

本发明涉及鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法。此外，本发明涉及优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的方法。所述方法基于测量来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中至少一种标记物的水平。本发明进一步考虑的是适配于进行本发明的试剂盒和装置。

Description

用于在由利钠肽指导的心力衰竭患者中风险评估和治疗监测的生物标记物

本发明涉及鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法。此外，本发明涉及优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的方法。所述方法基于测量来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中至少一种标记物的水平。本发明进一步考虑的是适于进行本发明的试剂盒和装置。

心力衰竭（HF）是世界上许多国家中发病率和死亡率的主导原因之一。尽管可用的治疗选项可以降低具有HF的患者中的发病率和死亡率，但接受这些治疗的合适患者的相对数目仍难以令人满意地低(O’Donoghue M.和Braunwald E., Nat. Rev. Cardiol.2010;7:13-20)。此外，在适于治疗的患者中，疗法已主要通过HF的体征和症状到药物的最大耐受性来指导和调节（例如，通过NYHA阶段、ACC/AHA阶段、或充血评分(congestion scores)）。

利钠肽标记物诸如B型利钠肽（BNP）、或其氨基末端片段N末端proBNP（NT-proBNP）的测量已作为具有HF的患者的诊断和风险分层(stratification)的重要工具而出现。此外，正在出现关于NT-proBNP可用于指导心力衰竭中医学疗法的证据(Januzzi J, Journalof Cardiac Failure, 2011; 17:622-625)。

然而，NT-proBNP指导的HF疗法不能鉴定处于HF失代偿和不利事件的风险的所有患者。因此，一些患者即使关于其NT-proBNP水平显示对疗法的有利应答，但他们仍处于风险中。因此，并非所有患者均会从心力衰竭疗法的强化中受益。

WO2008/015254公开了基于测量NT-proBNP和GDF-15来预测心力衰竭患者中死亡或进一步的心血管事件的风险的方法。

WO2010/0070411公开了基于GDF-15、NT-proANP、NT-proBNP和心肌肌钙蛋白检测的监测患有心力衰竭的表面上稳定的患者的方法。此外，它还公开了诊断和/或决定何种疗法/药疗法将在患有心力衰竭并经历其生理状态的改变的表面上稳定的患者中应用的方法。

Böhm 等人2011 (Clin Res Cardiol, 100:973-981)综述了基于NTproBNP检测的在心力衰竭患者中疗法指导和监测的方法。其还提及组合BNP与肌钙蛋白用于指导心力衰竭疗法的可能性。

Miyata 等人(J. of Cardiology 2012, 59, 352-358)检查了在CHF患者组中经强化的疗法对不同标记物和临床参数在3个月相对于基线处的作用。组的一半切换至长效利尿剂阿佐塞米而另一半保持在短效利尿剂（呋塞米）。作者发现在阿佐塞米组中3个月后BNP和ANP的血浆水平的显著降低。两组中在肌酸酐、BUN（＝血液尿素氮）、钠、钾和血细胞比容的改变中没有显著差异。

有利地，已在进行本发明的研究中发现除了目前的调节和滴定(titrate) HF患者（稳定后的慢性或急性HF）中疗法的标准治疗(standard-of-care)以外，NT-proBNP或BNP与其他标记物和临床参数的组合可用于监测目的和作为疗法指导。这些标记物和参数是肌酸酐、BUN（尿素）、葡萄糖、HbA1c、hsCRP、胱抑素C、IL-6、前白蛋白、sFlt-1、尿酸、GDF-15、sST2、半乳糖凝集素-3、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7、骨桥蛋白、钠、血红蛋白和血细胞比容，以及心率和QRS持续时间。具体地，向NT-proBNP或BNP加入这些测量连同目前的标准治疗能够对已通过NT-proBNP指导但可能需要更加强化的疗法和更密切观察的HF患者进行进一步风险分层。因此，本发明通过考虑利钠肽与其他标记物和/或临床参数的组合来优化NT-proBNP之外的心力衰竭疗法指导。

具体而言，在本发明的研究中已发现如上所述的参数标记物的另外测定允许鉴定展示低于BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平但尽管如此仍适于强化心力衰竭治疗的患者的亚组，所述BNP型肽的参考水平指示心力衰竭疗法的强化。由于本发明，可以鉴定需要心力衰竭疗法的强化的患者，所述患者基于单独BNP型水平的测量将不会接受强化的心力衰竭疗法。

因此，本发明涉及用于鉴定或选择适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，所述方法包括步骤

（a）在来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法尤其是NP-proBNP指导的心力衰竭疗法或BNP指导的心力衰竭疗法的患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFLt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，和

（b）将（a）中测量的一种（或多种）标记物的一种（或多种）水平与一种（或多种）参考水平进行比较。

在一个实施方案中，方法进一步包括鉴定或选择适于强化心力衰竭疗法即BNP型肽指导的疗法的患者的步骤（c）。

此外，方法可以包括强化心力衰竭疗法或推荐强化心力衰竭疗法（如果患者已鉴定为适于强化心力衰竭疗法）的步骤（d）。因此，本发明还考虑强化心力衰竭疗法的方法，所述方法包括如上所述的步骤（a）至（d）。

本发明的方法优选地是先体外后体内或体外方法。此外，其可以包括除了上文明确提及的以外的步骤。例如，进一步的步骤可以涉及样品预处理或对由所述方法获得的结果的评价。所述方法可以人工地或辅助以自动化实施。优选地，步骤（a）和/或（b）可以全部或部分由自动化辅助，例如，通过合适的机器和传感器装置用于在步骤（a）中的测量或在步骤（c）中的计算机实现的鉴定。

在一个实施方案中，上述方法可以另外包括评估或提供QRS持续时间和将因此测定的QRS持续时间与参考进行比较。

此外，考虑评价或提供QRS持续时间代替步骤a）中测量至少一种标记物的水平和将因此测定的QRS持续时间与参考进行比较。

因此，本发明进一步考虑用于鉴定或选择适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，所述方法包括步骤

（a）评估或提供具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的QRS持续时间，和

（b）将QRS持续时间与参考进行比较，

其中相比于参考增加的QRS持续时间表明患者适于强化心力衰竭疗法，而相比于参考降低的QRS持续时间表明患者不适于强化心力衰竭疗法。

如本文所指的“患者”优选为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物（例如牛、绵羊、猫、犬和马）、灵长类动物（例如人和非人灵长类动物诸如猴）、兔和啮齿类动物（例如小鼠和大鼠）。在某些实施方案中，患者是人患者。术语“主体”和“患者”本文可以互换使用。

如本文所用的短语“选择患者”或“鉴定患者”指使用生成的关于在患者样品中在本发明的背景下所指的至少一种标记物的水平的信息或数据来鉴定或选择患者作为更可能或更不可能从强化心力衰竭疗法中受益。优选地，适于所述强化的主体需要所述强化，而不适于所述强化的主体不需要所述强化。

应理解适于强化心力衰竭疗法的主体将从强化中受益，而不适于所述强化的主体可能不会从所述强化中受益，例如，可能从所述强化中经历不利的副作用或受害。尤其是，如果强化降低了所述主体的死亡风险和/或降低了所述主体住院治疗和/或心脏失代偿的风险（尤其是在已获得样品后的18个月或3年的窗口期之内），则所述主体从强化中受益。优选地，前述风险降低5％，更优选降低10％，甚至更优选降低15％，并且最优选降低20％。优选地，本文所指的住院治疗和死亡应是由于心力衰竭。

相反，不适于强化心力衰竭疗法的主体将不会从强化中受益（尤其是将不会显著受益）。尤其是，如果强化不降低（尤其是不显著降低）所述主体死亡的风险和/或不降低（尤其是不显著降低）所指主体住院治疗和/或心脏失代偿的风险和/或增加不想要的副作用的风险（尤其是在已获得样品后的18个月或3年的窗口期之内），则所述主体不从强化中受益。在该情况下，如果不强化疗法，则可以避免不需要的医疗保健费用。此外，可以避免可能从强化导致的不利的副作用。

因此，通过鉴定适于强化心力衰竭疗法的主体，可以评价所述主体是否将从强化心力衰竭疗法中受益。因此，本发明还涉及基于本文其他地方所述的步骤鉴定将从强化心力衰竭疗法中受益的主体的方法。

所使用或生成的信息或数据可以以任何形式，书写的、口头的或电子的。在一些实施方案中，使用生成的信息或数据包括交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些实施方案中，通过计算机装置、分析仪单元或其组合执行交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些进一步的实施方案中，通过实验室或医学专业人员执行交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些实施方案中，信息或数据包括至少一种标记物的水平与参考水平的比较。

如本文以下更详细地描述，适于强化心力衰竭治疗的主体还应以短的时间间隔进行监测，而不适于强化心力衰竭治疗（即不需要强化心力衰竭治疗）的主体应以长的时间间隔来监测。因此，除了确定心力衰竭治疗是否应强化外，还可以评价主体是否应以短时间间隔或长时间间隔来监测。

如本领域技术人员将理解的，通过本发明的方法进行的评估通常不意在对待诊断的主体是100%正确的。然而，该术语要求评估对于统计学显著部分的主体（例如，群组研究中的群组）是正确的。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种熟知的统计评估工具，例如置信区间的确定，p-值确定、学生t-检验、Mann-Whitney检验等而无需进一步费力来确定。详述在Dowdy和Wearden, Statistics for Research, John Wiley& Sons, New York 1983中发现。优选的置信区间是至少 90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99 %。p-值是，优选地， 0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。

在本发明的背景中设想的是，主体患有心力衰竭（HF），特别是慢性心力衰竭。进一步，主体可以患有稳定的急性心力衰竭。

如本文使用的术语“心力衰竭”涉及心脏的舒张功能障碍或，尤其是，收缩功能障碍，其伴随有本领域技术人员已知的明显的心力衰竭体征。优选地，在本文中所指的心力衰竭是慢性心力衰竭（其优选由收缩功能障碍引起）。根据本发明的心力衰竭包括明显心力衰竭和/或晚期心力衰竭。在明显心力衰竭中，患者显示出本领域技术人员已知的心力衰竭症状。

HF可以被分类至严重性的多个程度。

根据NYHA (New York Heart Association)分类，心力衰竭患者可以被分类为属于NYHA类型I、II、III和IV。具有心力衰竭的患者已经经历了他的心包、心肌、冠状循环或心瓣膜的结构和功能变化。他将不能完全恢复他的健康，且需要进行治疗性治疗。NYHA类型I的患者没有心血管疾病的明显症状，但已经具有功能损伤的客观证据。NYHA类型II的患者具有身体活动的轻微限制。NYHA类型III的患者显示出身体活动的显著限制。NYHA类型IV的患者不能没有不适地进行任何身体活动。他们显示出静止时心功能不全的症状。

该功能分类由American College of Cardiology and the American HeartAssociation (参见J.Am. Coll.Cardiol.2001;38;2101-2113, 更新于2005, 参见J.Am.Coll.Cardiol.2005;46;e1-e82)的更新的分类补充。定义了4个阶段A、B、C和D。阶段A和B不是HF但是被认为有助于在发展为“真正的”HF前较早鉴定患者。阶段A和B患者最好定义为具有HF发展的风险因素的患者。例如，具有冠状动脉疾病、高血压或糖尿病的还没有证实受损的左心室（LV）功能、肥大或几何室变形的患者将被视为阶段A，而无症状但证实了LV肥大和/或LV功能受损的患者将被指定为阶段B。然后阶段C表示具有目前或过去与潜在的结构性心脏病相关的HF的症状的患者（具有HF的大多数患者），和阶段D指定的是具有真正的难治HF的患者。

如本文所用，术语“心力衰竭”尤其指上文所述的ACC/AHA分类的阶段B和C。在这些阶段，主体显示典型的心力衰竭症状。因此，患者优选地具有根据ACC/AHA分类分类为阶段B或C的心力衰竭。还优选地，患者具有根据NYHA分类的II或III类的心力衰竭。

优选地，心力衰竭是由于受损的收缩功能。因此，尤其考虑患者患有收缩性心力衰竭。优选地，患者具有低于50％、更优选低于45％、并最优选低于40％的左心室射血分数（LVEF）。

根据本发明的方法待测试的患者应接受BNP型肽指导的疗法，即BNP型肽指导的心力衰竭疗法。术语“BNP型肽指导的疗法”和“BNP型肽指导的心力衰竭疗法”是本领域众所周知的。因此，待测试的患者应接受通过BNP型肽指导的心力衰竭疗法（更精确地，在获得样品的时候）。因此，考虑关于所述患者的心力衰竭疗法的至少一个决定已经在过去（并因此在获得待测试的样品之前）基于所述患者中BNP型肽的水平，尤其是基于所述患者中BNP型肽的血液、血清或血浆水平而做出。因此，患者的BNP型肽的水平可以已经对心力衰竭治疗的过去决定进行考虑。进一步，考虑关于心力衰竭疗法的目前决定是涉及考虑BNP型肽水平的首次决定。因此，接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者可以是其中起始（尤其是已获得待测试样品后立即起始）BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者。尽管如此，所述患者可能之前已接受没有被BNP型肽指导的心力衰竭疗法。

优选的BNP型肽公开于本文别处。BNP型肽指导的疗法，优选地，可以是BNP（脑利钠肽）指导的疗法或者尤其是NT-proBNP (N-末端脑利钠肽前体)指导的疗法（这些标记物的解释参见别处）。

在BNP型肽指导的疗法中，BNP型肽的水平用于管理心力衰竭治疗。基于该水平，做出对心力衰竭疗法的决定。原则上，具有增加的BNP型肽水平的患者接受比具有降低的该标记物水平的患者更强化的疗法。BNP型肽指导的疗法在本领域中是熟知的并且例如由Sanders-van Wijk 等人Eur J Heart Fail (2013) 15 (8):910-918描述。此外，BNP型肽指导的疗法由Januzzi综述，参见Archives of Cardiovascular disease (2012), 105,40-50。两篇文献均关于其完整公开内容通过应用并入本文。

在优选的实施方案中，患者展示低于BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平（尤其是血液、血清或血浆水平），所述参考水平指示心力衰竭疗法的强化。因此，患者应是具有这样的BNP型肽水平的患者，所述BNP型肽水平当单独采用时（即不与上述方法的步骤（a）中所述的至少一种进一步的标记物组合），指示不适于强化心力衰竭疗法的患者。在本发明的背景下待应用的指示强化心力衰竭疗法的所述BNP型肽的优选的参考水平为实施例中描述的那些。优选的参考水平对于BNP在约80-400 pg/ml的范围内、或具体为约80-200pg/ml，或者对于NT-proBNP在约450-2200 pg/ml的范围内、或具体为约800 pg/ml-1200pg/ml。进一步优选的参考水平对于BNP为约100 pg/ml或400 pg/ml，并且对于NT-proBNP为约1000 pg/ml或1200 pg/ml。因此，根据本发明的患者可以展示低于1000 pg/ml或1200pg/ml的NT-proBNP的水平，尤其是NP-proBNP的血液、血清或血浆水平。

进一步，考虑展示低于指示强化心力衰竭疗法的BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平的患者具有在约80至约400 pg/ml范围内、尤其是在约80至约200 pg/ml范围内的BNP水平（尤其是血液、血清或血浆水平）。而且，展示低于指示强化心力衰竭疗法的BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平的患者可以具有在450至2200 pg/ml范围内、尤其是在800至1200 pg/ml范围内的NT-proBNP水平（尤其是血液、血清或血浆水平）。

优选地，如本文所用的术语“约”涵盖相对于特定量的+/-20％的范围、更优选+/-10％的范围、甚至更优选+/-5％的范围、且最优选+/-2％的范围，例如，指示“约100”的量意指涵盖在80-120范围内的量。而且，术语“约”指精确量。优选地，如实施例中所述测量水平。

如本文所用的术语“心力衰竭疗法”（本文也称为“心力衰竭治疗”）优选指允许治疗心力衰竭的任何治疗。优选地，术语涵盖用于治疗患有心力衰竭的患者的生活方式改变、膳食疗法、身体介入以及施用合适的药物、使用装置和/或器官移植。

生活方式改变包括戒烟、减少酒精消耗、增加的体力活动、体重减轻、钠（盐）限制、体重管理和健康饮食（诸如每日鱼油）。

待应用的优选装置为起搏器和再同步装置、除颤器、主动脉内囊反搏器和左心室辅助装置。

在优选的实施方案中，心力衰竭疗法是药物心力衰竭疗法。因此，心力衰竭疗法优选涵盖施用一种或多种药物。如本文所用的术语“施用”以最宽泛的含义使用且尤其包括口服、肠内、局部施用和“肠胃外施用”。如本文所用的“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”意指除肠内和局部施用外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、胸骨内注射和输注。在实施方案中，药物口服施用。

适合于治疗心力衰竭的药物是本领域所熟知的，例如参见Heart Disease, 2008,第八版，Braunwald编辑, Elsevier Sounders, 第24章或者用于诊断和治疗急性和慢性心力衰竭的ESC Guidelines (European Heart Journal (2008) 29, 2388–2442)。优选地，心力衰竭治疗包括施用选自以下的至少一种药物：血管紧张素转换酶抑制剂（ACE抑制剂）、血管紧张素II受体阻滞剂（经常也称为血管紧张素II受体拮抗剂）、β肾上腺素能阻滞剂（本文也称为β阻滞剂）、利尿剂、醛固酮拮抗剂、肾上腺素能激动剂、正性肌力药、钙拮抗剂、肼屈嗪、硝酸盐类和阿司匹林。尤其优选的是药物是血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β阻滞剂和/或醛固酮阻滞剂。

优选的ACE抑制剂包括贝那普利、卡托普利、西拉普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、螺普利和群多普利。特别优选的抑制剂是依那普利。

优选的β阻滞剂包括醋丁洛尔(cebutolol)、阿普洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、布拉洛尔、卡拉洛尔、卡替洛尔、卡维地洛、塞利洛尔、美替洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、奈必洛尔、氧烯洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔、索他洛尔、他林洛尔(tanilolol)和噻吗洛尔。特别优选的β阻滞剂是阿替洛尔、比索洛尔、卡维地洛或美托洛尔。

优选的血管紧张素II受体拮抗剂是氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、坎地沙坦、替米沙坦、和依普沙坦。特别优选的拮抗剂是氯沙坦或缬沙坦。

优选的利尿剂是髓袢利尿剂、噻嗪和噻嗪样利尿剂、留钾利尿剂、盐皮质激素受体拮抗剂和加压素拮抗剂。

优选的醛固酮拮抗剂是Eplerone、螺内酯、坎利酮、Mexrenone、Prorenone；和他汀类药物(statines)，具体为阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀、和辛伐他汀。特别优选的拮抗剂是螺内酯。

优选的正性肌力药是地高辛和洋地黄毒苷。

优选的钙拮抗剂是二氢吡啶类、维拉帕米和地尔硫卓。

优选的肾上腺素能激动剂是多巴酚丁胺、多巴胺、肾上腺素、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素和去氧肾上腺素。

待强化与否的心力衰竭疗法可以是如本文上文所述的任何治疗。在优选的实施方案中，然而，心力衰竭疗法包括施用至少一种如上所述的药物。在甚至更优选的实施方案中，心力衰竭疗法包括施用至少一种选自血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β阻滞剂、利尿剂、和醛固酮拮抗剂的药物。更优选地，待强化的心力衰竭疗法包括组合施用β阻滞剂和ACE抑制剂。

根据本发明的方法，应评估待测试患者的心力衰竭治疗是否应该强化。优选地，强化心力衰竭治疗包括以下至少一种：

• 增加之前施用的一种或多种药物的剂量，

• 施用另外的或另一种（或多种）药物，尤其是施用具有不同于之前施用药物的作用方式的另外一种（或多种）药物，

• 装置疗法，尤其是使用起搏器装置、心脏再同步治疗（CRT）、可植入除颤器装置（ICD）或左心室辅助装置（LVAD），生活方式改变，及

• 其组合。

优选地，强化包括增加之前施用的一种或多种药物的剂量，尤其是增加选自利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、醛固酮拮抗剂和β阻滞剂的药物的剂量。如何增加剂量是本领域所熟知的并且例如可以来源于指南。优选地，这些药物的剂量可以增加直至最大推荐治疗剂量或直至最大耐受剂量，以先到者为准。还优选地，剂量可以增加至少30％或至少50％。

还优选地，强化包括施用另外的一种（或多种）药物，尤其是，施用具有不同于之前施用的药物的作用方式的另外一种（或多种）药物，或应用另外的装置（即，应用在进行本发明的方法前没有施用/使用过的药物/装置）。优选的另外的药物包括肼屈嗪、硝酸盐类、肌力药(inotropic agents)和肾上腺素能药。优选的装置包括起搏器装置、心脏再同步治疗（CRT）和可植入除颤器装置（ICD）。

而且，强化心力衰竭治疗可以进一步包括以短时间间隔监测患者。因此，通过进行本发明的方法，可以鉴定需要更密切的监测，尤其是关于心力衰竭疗法（并因此，更密切的观察）的患者。“更密切监测”优选地意指与本发明方法相关的如本文所指的标记物的水平在至少一个在本发明方法的步骤a）中所指的样品后的短时间间隔后获自患者的另外的样品中进行测量。优选的短时间间隔下文提及。

不需要强化心力衰竭治疗的患者优选可以持续心力衰竭治疗而无需改变治疗方案。因此，不需要更改施用的药物的剂量和/或改变药物。

术语“样品”指的是体液样品，指的是分离的细胞的样品或来自组织或器官的样品。体液的样品可以通过熟知技术获得，且包括，血液、血浆、血清、尿液、淋巴液、唾液、腹水、支气管灌洗液或其它任何身体分泌物或其衍生物的样品。组织或器官样品可以通过例如活组织检查从任何组织或器官获得。分离的细胞可以通过分离技术诸如离心或细胞分选从体液或组织或器官获得。例如，细胞-、组织-或器官样品可以从表达或产生生物标记物的那些细胞、组织或器官获得。样品可以是冷冻的、新鲜的、固定的（例如福尔马林固定）、离心的和/或包埋的（例如，石蜡包埋）等。细胞样品当然可以在评价样品中标记物的量之前经历多种熟知的收集后制备和储藏技术（例如，核酸和/或蛋白质提取、固定、储藏、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心等）。同样地，活组织检查也可以经历收集后制备和储藏技术，例如固定。

在一个实施方案中，样品是血液、血清或者，尤其是血浆样品。

样品可以在开始心力衰竭疗法、尤其是BNP型肽指导的疗法后的至少一个月、至少六个月、或至少12个月（以增加的优先次序）获自患者。优选地，所述疗法是药物心力衰竭疗法。

如本文所指的生物标记物的水平可以在来自患者的相同样品或在不同样品（即，在两个或三个不同样品中）进行测定。

如本文所指的术语“测量”标记物的水平指定量生物标记物，例如，以测定样品中生物标记物的水平，采用本文别处所述的合适的检测方法。在一个实施方案中，至少一种生物标记物的水平通过以下测量：将样品与特异性结合各标记物的检测试剂接触，从而形成试剂和所述标记物之间的复合物，检测所形成的复合物的水平，和由此测量所述标记物的水平。如果生物标记物是尿酸，则所述生物标记物的水平可以通过将样品与允许所述生物标记物转变例如允许尿酸氧化的检测试剂尤其是酶或化合物接触来进行测量。酶可以是催化尿酸氧化为5-羟基异尿酸(5-hydroxyisourate)的尿酸酶(EC 1.7.3.3)。而且，酶可以是过氧化物酶。化合物可以是磷钨酸。如果标记物是尿素，则检测试剂可以是脲酶。如果标记物是葡萄糖，则检测试剂可以是己糖激酶。如果标记物是肌酸酐，则检测试剂可以是苦味酸（其与肌酸酐形成复合物）。苦味酸和肌酸酐的复合物的水平可以测量。

术语“生长分化因子-15”或“GDF-15”涉及作为转化生长因子（TGF）细胞因子超家族的成员的多肽。术语多肽、肽和蛋白质在整个本说明书中可互换地使用。GDF-15最初作为巨噬细胞抑制细胞因子1克隆，并且稍后还被鉴定为胎盘转化生长因子-15、胎盘骨形态形成蛋白、非甾体抗炎症药物活化基因1和前列腺衍生因子（Bootcov loc cit; Hromas,1997 Biochim Biophys Acta 1354:40-44; Lawton 1997, Gene 203:17-26; Yokoyama-Kobayashi 1997, J Biochem (Tokyo), 122:622-626; Paralkar 1998, J Biol Chem273:13760-13767）。与其它TGF相关细胞因子相似，GDF-15被作为无活性的前体蛋白合成，其经历了二硫键连接的同源二聚化。在N末端前导肽的蛋白质水解切割后，GDF-15作为~28kDa的二聚体蛋白分泌（Bauskin 2000, Embo J 19:2212-2220）。GDF-15的氨基酸序列在WO99/06445、WO00/70051、WO2005/113585、Bottner 1999, Gene 237:105-111, Bootcovloc. cit, Tan loc. cit., Baek 2001, Mol Pharmacol 59:901-908, Hromas loc cit,Paralkar loc cit, Morrish 1996, Placenta 17:431-441或Yokoyama-Kobayashi loccit.中公开。在本文中使用的GDF-15还涵盖上文提及的特定GDF-15多肽的变体。这样的变体至少具有与特定GDF-15多肽相同的基本生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中指出的相同的特异性测定检测（例如，通过使用特异性识别所述GDF-15多肽的多克隆抗体或单克隆抗体的ELISA测定），它们共享相同的基本生物学和免疫学特性。优选的测定在所附的实施例中描述。此外，应当理解的是根据本发明指出的变体应当具有不同的氨基酸序列，其由于至少一个氨基酸取代、缺失和/或添加而不同，其中所述变体的氨基酸序列还优选地与特定GDF-15多肽氨基酸序列，优选地与人GDF-15氨基酸序列，更优选地在特定GDF-15，例如人GDF-15的全长上具有至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约92%、至少约95%、至少约97%、至少约98%或至少约99%的同一性。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以如上文描述的确定。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种的特定同源物、横向同源物或直向同源物。此外，本文所指的变体包括特定GDF-15多肽或上文提及的变体的类型的片段，只要这些片段具有上文所指的基本免疫学和生物学特性。这样的片段可以是，例如，GDF-15多肽的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰诸如磷酸化作用或十四烷基化而不同的变体。

胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）系统在细胞生长和分化中起重要作用。其包含两个配体IGF-I和IGF-II，两个受体1型和2型IGF受体，并且作为1995六个IGF结合蛋白（IGFBP）IGFBP-1至-6 (Jones, J.I., 等人, Endocr.Rev. 16 (1995) 3-34)。近期，IGFBP家族已扩大到包括IGFBP相关蛋白（IGFBP-rPs），其与IGFBP具有显著的结构相似性 (Hwa,V., 等人, Endocr.Rev 20 (1999) 761-787)。因此，IGFBP超家族包括六个常规IGFBP，其具有对IGF的高亲和力，和至少10个IGFBP-rP，其不仅具有IGFBP的保守氨基末端结构域还显示对于IGF和胰岛素的一定程度的亲和力。IGFBP-rP是一组富含半胱氨酸的蛋白，其控制不同的细胞功能，诸如细胞生长、细胞黏着和迁移、和胞外基质的合成。此外，这些蛋白可能参与生物过程如组织增生和分化、再生、血管发生、损伤修复、炎症、纤维化和肿瘤发生(Hwa, V., 等人, Endocr.Rev 20 (1999)761-787)。

IGF结合蛋白7（=IGFBP7）是已知由内皮细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞和上皮细胞分泌的30-kDa的模块糖蛋白(Ono, Y., 等人, Biochem Biophys Res Comm 202(1994) 1490-1496)。在文献中，该分子还已命名为FSTL2；IBP 7；IGF结合蛋白相关蛋白I；IGFBP 7；IGFBP 7v；IGFBP rPl；IGFBP7；IGFBPRP1；胰岛素样生长因子结合蛋白7；胰岛素样生长因子结合蛋白7前体；MAC25；MAC25蛋白；PGI2刺激因子；和PSF或前列腺环素刺激因子。Northern印迹研究揭示该基因在人组织中包括心、脑、胎盘、肝、骨骼肌和胰中的广泛表达(Oh, Y., 等人, J. Biol.Chem.271 (1996) 30322-30325)。

IGFBP7起初鉴定为在正常柔脑膜和乳房上皮细胞中相比于其对应的肿瘤细胞差异表达的基因，并且命名为脑膜瘤相关的cDNA (MAC25) (Burger, A.M., 等人, Oncogene16 (1998) 2459-2467)。所表达的蛋白作为肿瘤衍生的黏着因子（后来重命名为angiomodulin）(Sprenger, C.C., 等人, Cancer Res 59 (1999) 2370-2375)并且作为前列腺环素刺激因子(Akaogi, K., 等人, Proc Natl Acad Sci USA 93 (1996) 8384-8389)而独立纯化。其另外被报道为T1Al2，在乳腺癌中下调的基因(StCroix, B., 等人,Science 289 (2000) 1197-1202)。

IGFBP7 mRNA的差异表达在患有不同疾病包括心脏病、肾病、炎性疾病(SciosInc.的US 6,709,855)和血管移植物疾病(US 2006/0,003,338)的患者中进行测量。

许多不同的测定已描述并用于测试IGFBP7的激素结合特性。低亲和力IGF结合经竞争性亲和力交联测定进行分析。重组人mac25蛋白特异性结合IGF-I和-II (Oh, Y., 等人, J. Biol.Chem.271 (1996) 20322-20325; Kim, H.S., 等人, Proc.Natl.Acad.SciUSA 94 (1997) 12981-12986.)。IGFBP活性还可以通过在Western配体印迹中测量蛋白结合放射性标记的IGF的能力来检测。

优选地，术语“IGFBP7”指人IGFBP7。蛋白的序列是本领域所熟知的并且是例如经GenBank (NP_001240764.1)可访问的。如本文所用的IGFBP7优选还包括特定IGFBP7多肽的变体。对于术语“变体”的解释，请参见上文。

免疫测定循环IGFBP7近期进行。在随机人血清中检测到低水平的该分析物并且增加的血清水平已发现与胰岛素抵抗有关(Lopez-Bermejo, A., 等人, J. ClinicalEndocrinology and Metabolism 88 (2003) 3401-3408, Lopez-Bermejo, A., 等人,Diabetes 55 (2006) 2333-2339)。

标记物内皮他丁是本领域中众所周知的。内皮他丁最初作为XVIII型胶原的20kDA蛋白水解片段分离自鼠血管内皮瘤(O'Reilly, M.S. 等人, Cell 88 (1997) 277-285)。胶原代表具有形成在维持组织结构完整性中起主导作用的超分子聚集体的特征性三螺旋构象的胞外基质蛋白的家族。过度的胶原沉积导致破坏周围组织的正常功能的纤维化。胶原XVIII是主要在基膜中的胶原的Multiplexin家族的成员，其具有在中心三螺旋结构域中的多个间断和在C末端的独特的非三螺旋结构域。胶原XVIII的人α-1型链的短同工型的序列(SwissProt:P39060)例如公开于WO2010/124821，其在此关于其完整公开内容通过引用并入。

内皮他丁通过各种蛋白水解酶的作用释放自胶原XVIII的α1链(细节参见Ortega,N.和Werb, Z., Journal of Cell Science 115 (2002) 4201-4214 - 该论文的完整公开通过引用并入本文)。如本文所用的内皮他丁由如WO2010/124821中所公开的胶原XVIII的从氨基酸位置1337跨至氨基酸位置1519的胶原XVIII片段所代表。胶原XVIII的α链的C末端的铰链区包含若干蛋白酶敏感位点，并且许多酶包括中性粒细胞弹性蛋白酶、组织蛋白酶和基质金属蛋白酶已知通过切割该区域中的胶原链来产生内皮他丁。这些蛋白酶不是排他地释放内皮他丁而是还释放包含内皮他丁序列的其他的、更大的片段。如技术人员显而易见的，此类更大的片段还可通过内皮他丁的免疫测定来测量。

骨桥蛋白（OPN），也被称为骨唾液蛋白I（BSP-1或BNSP），早期T-淋巴细胞活化（ETA-1）、分泌型磷蛋白质1（SPP1）、2ar和立克次氏体抗性（Ric），其是作为高度带阴性电荷的、胞外基质蛋白的多肽，其缺乏广泛的二级结构。其由约300个氨基酸（在小鼠中297、在人中314）构成，且表达为33-kDa初生蛋白；还有功能重要的切割位点。OPN可以经历翻译后修饰，这增加其表观分子量至约44 kDa。骨桥蛋白的序列是本领域熟知的(人骨桥蛋白:UniProt P10451, GenBank NP_000573.1)，骨桥蛋白在正常血浆、尿液、乳和胆汁中被发现(US 6,414,219; US 5,695,761; Denhardt, D.T.和Guo, X., FASEB J. 7 (1993) 1475-1482; Oldberg, A.,等人, PNAS 83 (1986) 8819-8823; Oldberg, A.,等人., J.Biol.Chem.263 (1988) 19433-19436; Giachelli, CM., 等人, TrendsCardiovasc.Med.5 (1995) 88-95)。人OPN蛋白和cDNA已被分离并测序（Kiefer M. C, 等人, Nucl.Acids Res.17 (1989) 3306）。OPN在细胞粘附、趋化性、巨噬细胞指向的白介素-10中起作用。OPN已知与数种整联蛋白受体相互作用。增加的OPN表达已经在数种人癌症中报导，且已经鉴定了它的同源受体（av-b3、av-b5和av-bl整联蛋白和CD44）。通过Irby,R.B.,等人, Clin.Exp.Metastasis 21 (2004) 515-523的体外研究指示内源性OPN表达（通过稳定转染）以及外源性OPN（添加至培养基）均在体外增加人结肠癌细胞的移动性和侵袭能力。

内皮他丁是血管发生和血管生长的有效抑制剂。内皮他丁和细胞因子网络之间的关系尚未明确，但已知内皮他丁能够改变大范围基因的表达(Abdollahi, A. 等人,MoI.Cell 13 (2004) 649-663)。

如本文所用的内皮他丁优选还包括特定内皮他丁多肽的变体。对于术语“变体”的解释，请参见上文。

Mimecan是具有富含亮氨酸重复和包含298个氨基酸的前体的小的蛋白聚糖。mimecan的其他名称是OGN、骨甘氨酸、OG、OIF、SLRR3A。

Mimecan是具有结构相关核心蛋白的分泌型小的富含亮氨酸的蛋白聚糖（SLRP）家族的成员。所有SLRP具有的共同特征是在核心蛋白的C末端一半中的串联富含亮氨酸的重复（LRR）单元。然而，在N末端区域，SLRP的每一类具有称为LRR N-结构域的独特结构域，所述独特结构域包含具有保守间隔的半胱氨酸簇。III类SLRP包含六个羧基LRR并且包括mimecan、骺蛋白聚糖和旋光蛋白(opticin)。

从I和II类成员诸如核心蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖、lumecan和纤维调节素的小鼠敲除的功能研究显示SLRP缺乏小鼠展示促成异常胶原微纤维生成的宽范围的缺陷，表明这些SLRP在建立和维持胶原基质中起重要作用(Ameye, L.和Young, M.F., Glycobiology12 (2002) 107R-116R)。III类mimecan的缺乏还引起胶原原纤维异常(Tasheva, E.S. 等人, MoI.Vis. 8 (2002) 407-415)。

mimecan是胞外基质的多功能组分。其结合多种其他蛋白(IGF2、IKBKG、IFNBl、INSR、CHUK、IKBKB、NFKBIA、ILl 5、Cd3、视黄酸、APP、TNF、脂多糖、c-abl癌基因1、受体酪氨酸激酶、v-src肉瘤病毒癌基因)。这些不同的结合活性可以导致mimecan在许多组织中执行不同功能的能力。

mimecan已在角膜、骨、皮肤和其他组织中发现。其表达模式在不同病例状况下发生改变。尽管mimecan的生物作用的数据量逐渐增加，但其功能仍不清楚。mimecan已显示参与调节胶原微纤维生成，胶原微纤维生成是发育、组织修复和转移中的必需过程(Tasheva等人, MoI.Vis. 8 (2002) 407-415)。它在与TGF-β-1或TGF-β-2相关的骨形成中起作用。

人mimecan多肽的序列是本领域众所周知的并且可以例如经GenBank检索号NP_054776.1 GI:7661704进行评估。进一步，序列公开于WO2011/012268。如本文所用的mimecan优选还包括特定mimecan多肽的变体。对于术语“变体”的解释，请参见上文。在本发明的上下文中，mimecan优选如WO2011/012268中所述测定。

如本文使用的术语“可溶性 Flt-1”或“sFlt-1”指的是多肽，其是VEGF受体Flt1的可溶形式。其在人脐带静脉内皮细胞的条件性培养基中鉴定。内源可溶性 Flt1(sFlt1)受体在层析和免疫学上与重组人sFlt1相似且以相当高的亲和性结合[125I] VEGF。人sFlt1显示与 KDR/Flk-1的胞外结构域在体外形成VEGF-稳定复合体。优选地，sFlt1指的是人sFlt1。更优选地，人sFlt1可以从Genbank登录号P17948, GI:125361中显示的Flt-1的氨基酸序列推出。小鼠sFlt-1的氨基酸序列在Genbank登录号BAA24499.1, GI:2809071中显示。

如本文使用的术语“sFlt-1”还涵盖上文提及的特定sFlt-1多肽的变体。这样的变体至少具有与特定sFlt-1多肽相同的基本生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中指出的相同的特定测定检测（例如，通过使用特异性识别所述sFlt-1多肽的多克隆抗体或单克隆抗体的ELISA测定），则它们共享相同的基本生物学和免疫学特性。对术语“变体”的更详细的解释，请参见上文。

半乳糖凝集素-3（Gal-3）是β半乳糖苷结合凝集素家族的结构上独特的成员。半乳糖凝集素-3的表达已与上皮和炎症细胞包括巨噬细胞、中性粒细胞和肥大细胞相关。半乳糖凝集素-3已涉及心力衰竭中重要的多个生物过程包括肌成纤维细胞增殖、纤维形成、组织修复、心脏重构和炎症。半乳糖凝集素-3约30 kDa并且如所有半乳糖凝集素一样包含能够特异性结合β-半乳糖苷的约130个氨基酸的碳水化合物识别结合结构域（CRD）。半乳糖凝集素-3由单一基因LGALS3编码。其包含连接至约130个氨基酸的单一C末端CRD的具有短氨基酸区段的串联重复（总计110-130个氨基酸）的N末端结构域。其表达在细胞核、细胞质、线粒体、细胞表面和胞外空间。该蛋白已显示参与以下生物过程：细胞黏着、细胞活化和趋化作用(chemoattraction)、细胞生长和分化、细胞周期和凋亡。半乳糖凝集素-3水平升高已发现与急性代偿失调的心力衰竭和慢性心力衰竭群体中更高的死亡风险显著相关(参见例如, DeFilippi C, Christenson R, Shah R, 等人(2009).Clinical validation of anovel assay for galectin-3 for risk assessment in acutely destabilized heartfailure.)。

半乳糖凝集素-3的蛋白序列是本领域熟知的，例如参见uniprot检索号P17931(版本5, 2008年11月25日), GenBank检索号NP_002297.2 NM_002306.3。

ST2是IL-1受体家族的成员，其通过心肌成纤维细胞和心肌细胞在机械应力状况下产生。ST2是白介素-1受体家族成员且以膜结合同种型和可溶性同种型（sST2）两者存在。在本发明的背景下，可溶性ST2的量应当被确定（参见Dieplinger 等人(ClinicalBiochemistry, 43, 2010:1169至1170）。ST2也被称为白介素1受体样1或IL1RL1，其在人中通过IL1RL1基因编码。人ST2多肽的序列是本领域熟知的，且例如可以通过GenBank,参见NP_003847.2 GI:27894328获得。可溶性ST2（sST2）被认为通过结合IL-33作为诱饵受体作用，且通过ST2的细胞膜结合形式消除IL-33信号传导的另外的心脏保护效果。

CRP，本文中也被称为C反应蛋白，其是急性期蛋白，在多于75年前作为结合肺炎球菌（pneumococci）的C多糖的血液蛋白被发现。已知CRP作为反应性炎症标记物，且通过远端器官（即肝）产生，以应答或对源自主要病变部位的趋化因子或白介素反应。CRP由五个信号亚基组成，其是非共价连接的，且组装为环形五聚体，具有大约110-140 kDa的分子量。优选地，如本文使用的CRP涉及人CRP。人CRP的序列是熟知的，且被公开在例如Woo 等人(J.Biol.Chem.1985.260 (24), 13384-13388)。CRP的水平通常在正常个体中较低，但由于炎症、感染或受伤可以提高100-200倍或更高(Yeh (2004) Circulation.2004; 109:II-11-II-14)。已知CRP是用于心血管风险预测的独立因子。特别地，已显示CRP适合作为心肌梗死、中风、外周动脉疾病和心脏性猝死的预测物。此外，提升的CRP量还可以预测具有急性冠脉综合征（ACS）的患者和经历冠状动脉介入的患者中的复发性局部缺血和死亡。专家组（例如，通过American Heart Association）推荐在具有冠心病风险的患者中测定CRP（还参见Pearson 等人(2003) Markers of Inflammation and CardiovascularDisease.Circulation, 107:499-511）。术语CRP也涉及其变体。

优选地，在患者样品中CRP的量通过使用具有高灵敏性的CRP测定进行确定。通过这样的测定确定CRP还经常称为高敏感CRP（hsCRP）。hsCRP测定，例如用于预测心脏病的风险。合适的hsCRP测定是本领域已知的。在本发明背景下特别优选的hsCRP测定是具有0.1mg/l检测限值的Roche/Hitachi CRP (Latex) HS测试。

白细胞介素6（缩写为IL-6）是由T细胞和巨噬细胞分泌的白细胞介素以刺激免疫应答，例如在感染过程中和在外伤尤其是烧伤或其他导致炎症的组织损伤后。其作为促炎性细胞因子和抗炎性细胞因子起作用。在人中，它由IL6基因编码。人IL-6的序列可以经GenBank (多核苷酸序列参见NM_000600.3且氨基酸序列参见NP_000591.1)来评估。IL-6经由结合配体的IL-6Rα链(CD126)和信号转导组分gp130 (也称为CD130)组成的细胞表面I型细胞因子受体复合体来信号传递。CD130是包括白血病抑制因子（LIF）、睫状神经因子、制癌蛋白M、IL-11和心肌营养蛋白-1在内的若干细胞因子的共同信号转导物，并且几乎广泛地表达于大部分组织中。相反，CD126的表达限制于某些组织。由于IL-6与其受体相互作用，因此其引发gp130和IL-6R蛋白形成复合物，从而活化受体。这些复合物将gp130的胞内区带到一起以经过某些转录因子Janus激酶（JAK）和转录的信号转导蛋白和激活蛋白来起始信号转导级联。

标记物胱抑素C是本领域中众所周知的。胱抑素C由CST3基因编码且由所有有核细胞以恒定速率产生，并且在人中的产生速率在整个一生中是显著地恒定的。从循环中消除几乎完全通过肾小球过滤。为此，胱抑素C的血清浓度在1-50岁的年龄范围中独立于肌肉质量和性别。因此，血浆和血清中的胱抑素C已提出作为GFR的更敏感的标记物。人胱抑素C多肽的序列可以经Genbank (参见例如检索号NP_000090.1)进行评估。生物标记物可以通过颗粒增强的免疫比浊测定来测定。将人胱抑素C与包被有抗胱抑素C抗体的乳胶颗粒凝集。聚集体进行比浊测定。

标记物前白蛋白是技术人员所熟知的。它是色氨酸富集蛋白，其在肝细胞中合成且具有55000道尔顿的摩尔质量。由于其向阳极更大的分散速率，在pH 8.6在白蛋白前以 <2.5 %的相对量出现一条电泳带。其功能是结合和运输低分子量的视黄醇结合蛋白（小于21000道尔顿的摩尔质量），防止它们的肾小球过滤。30-50%的循环前白蛋白与视黄醇结合蛋白形成复合体。此外，其结合和运输甲状腺素（T4），尽管如此，其与该激素的亲和力小于甲状腺结合球蛋白的亲和力。人前白蛋白多肽的序列可以经Genbank (例如参见检索号NP_000362.1)进行评估。测定前白蛋白的各种方法是可获得的，诸如放射免疫扩散（RID）、浊度法和比浊法。

标记物“肌酸酐”是本领域中众所周知的。在肌肉代谢中，肌酸酐从肌酸和磷酸肌酸内源合成。在正常肾功能条件下，肌酸酐由肾小球过滤排泄。进行肌酸酐测定用于诊断和监测急性和慢性肾病以及用于监测肾透析。尿中的肌酸酐浓度用作某些分析物（白蛋白、α-淀粉酶）排泄的参考值。肌酸酐可以如由以下所述来测定：Popper 等人, (Popper H 等人Biochem Z 1937;291:354)、Seelig和Wüst (Seelig HP, Wüst H. Ärztl Labor 1969;15:34)或Bartels (Bartels H 等人Clin Chim Acta 1972;37:193)。例如，氢氧化钠和苦味酸可以添加到样品中以开始形成肌酸酐-苦味酸复合物。在碱性溶液中，肌酸酐与苦味酸形成黄橙色复合物。颜色强度与肌酸酐浓度成正比并且可以进行光度测量。

尿酸是主体生物体中嘌呤代谢的终产物。IUPAC名称为7,9-二氢-3H-嘌呤-2,6,8-三酮。所述化合物经常被称为尿酸(urate)、尿酸(Lithic acid)、2,6,8-三氧基嘌呤、2,6,8-三羟基嘌呤、2,6,8-三氧代嘌呤、1H-嘌呤-2,6,8-三醇(化学式C₅H₄N₄O₃, PubChem CID1175, CAS号69-93-2)。

尿酸测量被用于诊断和治疗多种肾和代谢病症，包括肾衰竭、痛风、白血病、银屑病、饥饿或其它消耗状况，和接受细胞毒性药物的患者。尿酸的氧化提供了定量确定这一嘌呤代谢的两种方法的依据。一种方法是在碱溶液中还原磷钨酸至钨蓝，其通过光度测定进行测量。第二种方法由Praetorius和Poulson描述，其利用酶尿酸酶氧化尿酸；该方法消除了化学氧化固有的干扰（Praetorius E, Poulsen H. Enzymatic Determination of UricAcid with Detailed Directions.Scandinav J Clin Lab Investigation 1953;3:273-280）。可以将尿酸酶用于涉及尿酸消耗的UV测量的方法中或与其它酶组合以提供比色测定。另一种方法是由Town 等人(Town MH, Gehm S, Hammer B, Ziegenhorn J. J ClinChem Clin Biochem 1985;23:591)开发的比色法。开始将样品与含有抗坏血酸氧化酶和透明体系的试剂混合物孵育。在该测试系统中重要的是在样品中存在的任何抗坏血酸在初期反应中被消除；这排除了任何抗坏血酸干扰后续的POD指示物反应。在添加初始试剂后，开始通过尿酸酶氧化尿酸。

在本发明的背景下，尿酸可以通过任何被认为合适的方法确定。优选地，生物标记物通过上文提及的方法确定。更优选地，通过应用稍微改变的上文描述的比色法来确定尿酸。在该反应中，在过氧化物酶（POD）、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)和4-氨基比林存在的情况下将过氧化物反应以形成醌二亚胺染料。形成的红色的强度与尿酸浓度成正比且通过光度确定。

尿素是蛋白氮代谢的主要终产物。其具有化学式CO(NH₂)₂且通过肝中的尿素循环从由氨基酸脱氨产生的氨合成。尿素大多通过肾排出，但是少量也通过汗液排出和通过细菌作用在肠道内降解。血液尿素氮的确定是最广泛使用的肾功能筛选测试。尿素可以通过在Roche/Hitachi cobas c系统上定量测定人血清、血浆和尿中尿素/尿素氮的体外测试来测量。测试使用包括cobas c 311和cobas c 501/502的不同分析仪自动进行。测定是用脲酶和谷氨酸脱氢酶的动力学测定。尿素被脲酶水解以形成铵和碳酸盐。在第二反应中，2-酮戊二酸与铵在谷氨酸脱氢酶（GLDH）和辅酶NADH存在的情况下反应以产生L-谷氨酸。在该反应中，对于每摩尔水解的尿素，2摩尔的NADH氧化为NAD⁺。NADH浓度中降低的速率与样本中尿素浓度成正比并且光度测量。

标记物葡萄糖是本领域中众所周知的。如本文所用，标记物优选指D-葡萄糖。标记物的水平可以通过众所周知的方法来测定。例如，标记物可以在酶己糖激酶（HK）和腺苷5'-三磷酸（ATP）的存在下磷酸化为D-葡萄糖-6-磷酸，同时形成腺苷5'-二磷酸（ATP）。在酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶存在的情况下，D-葡萄糖-6-磷酸通过NADP氧化为D-葡萄糖酸磷酸，并形成还原的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）。该反应中形成的NADPH的量对于D-葡萄糖的量是化学计量的。NADPH可以通过光吸收来测量。

标记物钠是本领域中众所周知的。钠是主要的胞外阳离子并且功能是维持流体分布和渗透压。钠水平降低的一些原因包括延长的呕吐或腹泻、肾中重吸收减少和过度的液体潴留。钠增加的一般原因包括过度的液体丢失、高盐摄入和增加的肾重吸收。标记物的水平可以通过施加离子选择性电极（ISE）来测定，所述ISE采用某些膜材料的独特性质来发生电势（电动势，EMF）用于测量溶液中的离子。电极具有与测试溶液和内部灌注溶液接触的选择性膜。内部灌注溶液包含以固定浓度的测试离子。由于膜的特定性质，测试离子将与膜在每一侧密切结合。膜EMF通过在测试溶液和内部灌注溶液中测试离子浓度的差异而测定。EMF根据溶液中具体离子的能斯特方程而发生。

标记物血红蛋白（Hb）是本领域中众所周知的。血红蛋白包含四个蛋白亚基（每一个包含血红素部分）并且是位于红细胞中的红色素化的蛋白。其主要功能是在血液中转运氧和二氧化碳。每一Hb分子能够结合四个氧分子。Hb由多种亚级分和衍生物组成。如本文所用的术语“血红蛋白”优选地指总血红蛋白。血红蛋白水平可以通过熟知的方法来测量，例如通过血红蛋白由亚铁氰化钾(III) (Fe²⁺ Fe³⁺)氧化为高铁血红蛋白。血红蛋白水平与颜色强度成比例并且例如可以以567 nm的波长和在37℃下测量。血红蛋白水平也可以通过将样品与特异性结合血红蛋白的抗体接触来测量。

标记物HbA1c（糖化血红蛋白，糖血红蛋白）是本领域中众所周知的。HbA1c是糖化血红蛋白之一，通过各种糖连接至Hb分子形成的亚级分。HbA1c通过葡萄糖与正常成年人Hb（HbA）的β链的N末端氨基的非酶促反应在两步中形成。第一步骤是可逆的并产生不稳定的HbA1c。这在第二反应步骤中重排以形成稳定HbA1c。在红细胞中，转化为稳定HbA1c的HbA的相对量随血液中葡萄糖的平均浓度而增加。转化为稳定HbA1c受约100-120天的红细胞寿命所限。血红蛋白水平可以通过众所周知的方法来测定。优选地，测量HbA1c水平涵盖测量在HbA（成年人血红蛋白）的β链N末端糖化的所有血红蛋白变体的水平。在实施方案中，该标记物的水平通过将样品与特异性结合该标记物的抗体接触而测量。在这种情况下，样品中的糖血红蛋白(Clycohemoglobin)(HbA1c)与抗HbA1c抗体反应以形成可溶的抗原-抗体复合物。

血细胞比容（Ht或HCT）也称为血细胞压积（PCV）或红细胞体积分数（EVF），是血液中红细胞的体积百分比（％）。如所用的，术语“血细胞比容”优选地指全血体积中压积的红细胞的百分比。红细胞比容可以通过在毛细管（也称为微量血细胞比容管）中以10,000 RPM将肝素化血液离心五分钟来测定。这将血液分层。压积的红细胞体积除以血液样品的总体积产生PCV。由于使用试管，因此这可以通过测量层的长度来计算。采用现代实验室装置，血细胞比容通过自动化分析仪来计算且不直接测量。其通过将红细胞计数乘以平均细胞体积来测定。血细胞比容略微更准确一些，因为PCV包括少量的红细胞间陷住的血浆。作为百分比估计的血细胞比容可以通过将以g/dL计的血红蛋白浓度乘以三并去除单位而衍生出来。

术语“QRS持续时间”是本领域中众所周知的。QRS持续时间是医学中的标准量度并且描述QRS组在体表心电图（ECG）上的持续时间，其指示心室电兴奋的持续时间。优选地，QRS持续时间通过ECG装置测量。

在本文中所指的生物标记物可以使用本领域通常已知的方法进行检测。检测方法通常涵盖在样品中对生物标记物水平定量的方法（定量方法）。以下哪些方法适合于生物标记物的定性和/或定量检测是本领域技术人员通常已知的。样品可以被方便地测定，例如对于蛋白使用蛋白质印迹和免疫测定，如 ELISA、RIA、基于荧光的免疫测定，其是可商购获得的。检测生物标记物的进一步的合适的方法包括测量对肽或多肽特定的物理或化学特性，诸如其确切的分子量或NMR谱。所述方法包括，例如，生物传感器、偶联至免疫测定的光学装置、生物芯片、分析装置诸如质谱仪、NMR-分析仪或层析装置。进一步，方法包括基于微孔板ELISA的方法，全自动或机器免疫测定（例如可在Elecsys^TM分析仪获得）、CBA（酶钴结合测定，例如可以在Roche-Hitachi^TM分析仪获得）和胶乳凝集测定（例如可以在Roche-Hitachi^TM分析仪获得）。

对于本文所指的生物标记物蛋白检测，可以获得使用此类测定形式的广范围的免疫测定技术，参见例如美国专利号4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争型的单位点和双位点或“夹心”测定，以及传统的竞争性结合测定。这些测定可以包括标记抗体与靶生物标记物的直接结合。

其中的夹心测定是最有用且常用的免疫测定。

测量电化学发光现象的方法是熟知的。这样的方法使用特定金属络合物的能力以通过氧化实现激发态，从激发态它们从衰变至基态，发出电化学发光。综述参见Richter,M.M., Chem.Rev. 104 (2004) 3003-3036。

生物标记物还可以通过通常已知的方法检测，包括磁共振光谱法（NMR光谱法）、气相层析-质谱(GC-MS)、液相层析-质谱(LC-MS)、高和超-HPLC HPLC，诸如反相HPLC，例如，具有双UV波长检测的离子配对HPLC，具有激光诱导荧光检测的毛细管电泳、阴离子交换层析和荧光检测、薄层层析。

优选地，测量本文所指的生物标记物水平包括以下步骤：（a）将能够激发细胞应答（其强度指示了肽或多肽的水平）的细胞与所述肽或多肽接触充足的时间，（b）测量细胞应答。对于测量细胞应答，样品或被处理的样品，优选地被添加至细胞培养物中，并测量内部或外部细胞应答。细胞应答可以包括可测量的报告基因的表达或物质例如肽、多肽或小分子的分泌。所述表达或物质应当生成强度信号，其与肽或多肽的水平相关。

还优选地，测量肽或多肽的水平包括测量从样品中的肽或多肽可获得的特定强度信号的步骤。如上文描述的，这样的信号可以是在m/z变量观察到的对肽或多肽特异的信号强度，其在对肽或多肽特异的质谱或NMR谱中观察到。

测量肽或多肽的水平，优选地包括以下步骤，（a）将肽与特异性结合剂接触，（b）（任选地）去除未结合的结合剂，（c）测量结合的结合剂的水平，即在步骤（a）中形成的结合剂的复合体。根据优选的实施方案，接触、去除和测量的所述步骤可以通过本文描述的系统的分析仪单元执行。根据一些实施方案，所述步骤可以通过所述系统的单一分析仪单元或通过彼此可操作通讯的多于一个的分析仪单元执行。例如，根据特定的实施方案，本文公开的所述系统可以包括用于执行接触和去除的所述步骤的第一分析仪单元，和第二分析仪单元，其可操作地与所述第一分析仪单元通过传送单元（例如机械臂）连接，所述第二分析仪单元执行测量的所述步骤。

结合的结合剂，即结合剂或结合剂/肽复合体，将生成强度信号。根据本发明的结合包括共价结合和非共价结合两种。根据本发明的结合剂可以是任何化合物，例如肽、多肽、核酸或小分子，其结合至本文描述的肽或多肽。优选的结合剂包括抗体、核酸、肽或多肽，诸如肽或多肽的受体或结合配偶体和包含所述肽结合结构域的其片段，和适配子，例如核酸或肽适配子。制备这样的结合剂的方法是本领域熟知的。例如，鉴定和生产合适的抗体或适配子也由商业供应商提供。本领域技术人员对开发具有更高亲和力或特异性的这样的结合剂的衍生物的方法是熟悉的。例如，随机突变可以被引入核酸、肽或多肽。这些衍生物随后可以根据本领域已知的筛选程序例如噬菌体展示测试结合。如本文所指的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体两者，以及其片段诸如Fv、Fab和F(ab)2片段，其能够结合抗原或半抗原。本发明还包括单链抗体和人源化杂合抗体，其中展示期望的抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。供体序列将通常至少包括供体的抗原结合氨基酸残基，但也可以包括供体抗体的其它结构和/或功能相关氨基酸残基。这样的杂合体可以通过本领域熟知的数种方法制备。优选地，结合剂或试剂特异地结合肽或多肽。根据本发明的特异性结合意为配体或试剂不应当实质上与被分析的样品中存在的另一肽、多肽或物质结合（与之“交叉反应”）。优选地，特异性结合肽或多肽应当以比任何其它相关肽或多肽高至少3倍、更优选地高至少10倍和甚至更优选地高至少50倍的亲和力进行结合。非特异性结合可以是可容许的，如果其仍可以明确区分和测量，例如根据其在蛋白质印迹上的大小，或其在样品中相对更高的丰度。结合剂的结合可以通过本领域已知的任何方法测量。优选地，所述方法是半定量或定量的。用于确定多肽或肽的进一步合适的技术在以下描述。

结合剂的结合可以通过例如NMR或表面等离子体共振直接测量。结合剂的结合的测量，根据优选的实施方案，是通过本文公开的系统的分析仪单元执行的。此后，测量的结合的水平可以通过本文公开的系统的计算机装置进行计算。如果结合剂还作为目的肽或多肽的酶活性的物质提供，可以测量酶反应产物（例如，通过例如在蛋白质印迹上测量被切割底物的水平测量蛋白酶的水平）。可选地，结合剂可以自身展现酶特性，且“结合剂/肽或多肽”复合体或分别被肽或多肽结合的结合剂可以与合适的底物接触，允许通过强度信号生成进行检测。对于测量酶反应产物，优选地底物的水平是饱和的。底物还可以在反应前使用可检测标记进行标记。优选地，将样品与底物接触足够长的时间段。足够长的时间段指的是待产生的产物的水平可检测，优选地可测量的水平所需的时间。除了测量产物的水平，可以测量出现产物的给定（例如可检测的）的水平所需的时间。第三，结合剂可以共价地或非共价地与允许结合剂检测和测量的标记偶联。标记可以通过直接或间接的方法完成。直接标记涉及标记对结合剂的直接（共价地或非共价地）偶联。间接标记涉及第二结合剂与第一结合剂的结合（共价地或非共价地）。第二结合剂应当特异地结合第一结合剂。所述第二结合剂可以与合适的标记偶联和/或是结合第二结合剂的第三结合剂的靶（受体）。第二、第三或更高级的结合剂的使用通常用于增加信号。合适的第二和更高级的结合剂可以包括抗体、二级抗体和熟知的链霉亲和素-生物素系统（Vector Laboratories, Inc.）。结合剂或底物还可以使用本领域已知的一种或多种标签“标签化”。这样的标签可以随后是更高级的结合剂的靶标。合适的标签包括生物素、地高辛、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、甲型流感病毒血凝素（HA）、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情况中，标签优选地在N-末端和/或C末端。合适的标签是可以通过合适的检测方法检测的任何标签。典型的标签包括金颗粒、乳胶小珠、9,10-二氢吖啶酯、鲁米诺、钌、酶促活性标记、放射性标记、磁性标记（“例如磁珠”，其包括顺磁性和超顺磁性标记），和荧光标记。酶促活性标记包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶及其衍生物。用于检测的合适的底物包括二-氨基-联苯胺(DAB)、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、NBT-BCIP（4-氯化硝基四氮唑蓝和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸酯，可以作为现成储液从Roche Diagnostics获得）、CDP-Star™(Amersham Bio-sciences)、ECF™ (Amersham Biosciences)。合适的酶-底物组合可以导致显色反应产物、荧光或化学发光，其可以根据本领已知的方法测量（例如，使用光敏胶片或合适的照相系统）。对于测量酶促反应，相似地应用上文给出的标准。典型荧光标记包括荧光蛋白（诸如GFP及其衍生物）、Cy3、Cy5、德克萨斯红、荧光素和Alexa染料(例如Alexa568)。进一步的荧光标记可以从例如Molecular Probes (Oregon)获得。使用量子点作为荧光标记也是考虑的。放射性标记可以通过任何已知且合适的方法检测，例如光敏胶片或磷光成像仪。

肽或多肽的水平还可以优选地如下确定：（a）将包含用于上文说明的肽或多肽的结合剂的固体支持物与包含肽或多肽的样品接触和（b）测量结合至支持物的肽或多肽水平。结合剂，优选地选自以下：核酸、肽、多肽、抗体和适配子，其优选地以固定形式存在于固体支持物上。用于制备固体支持物的材料是本领域熟知的且包括，尤其包括：商业可获得的柱材料、聚苯乙烯小珠、乳胶小珠、磁性小珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅芯片和表面、硝酸纤维素带、膜、薄片、duracytes、反应托盘的孔和壁、塑料管等。结合剂或试剂可以结合多种不同载体。熟知载体的实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然的和修饰的纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。对于本发明目的，载体的性质可以是可溶的或不可溶的。固定/固定化所述结合剂的合适的方法是熟知的且包括，但不限于离子相互作用、疏水相互作用、共价相互作用等。根据本发明还考虑的是使用“悬浮阵列”作为阵列(Nolan 2002, Trends Biotechnol.20(1):9-12)。在这样的悬浮阵列中，载体例如微珠或微球悬浮存在。阵列由不同微珠或微球组成，其可能被标记，携带不同的结合剂。生产这样的阵列的方法，例如基于固相化学或光不稳定保护基团，是通常已知的(US 5,744,305)。

在本发明的方法的实施方案中，本文中所指的生物标记物的水平通过使用实施例部分描述的测定测量。

在本发明方法的另一个实施方案中，步骤a）中的测量可以通过分析仪单元实施，特别地通过如本文别处定义的分析仪。

术语“结合剂”指的是包括特异性结合相应的各自生物标记物的结合部分的分子。“结合剂”的实例为适配子、抗体、抗体片段、肽、肽核酸（PNA）或化合物。

术语“特异性结合”或“特异地结合”指的是结合反应，其中在它们不显著结合其它分子的条件下结合对分子展现出相互的结合。当指的是作为生物标记物的蛋白或肽时，术语“特异性结合”或“特异地结合”指的是结合反应，其中结合剂以至少10^-7 M的亲和力结合相应的生物标记物。术语“特异性结合”或“特异地结合”优选地指的是对其靶分子至少10^-8M或甚至更优选地至少10^-9 M的亲和力。使用术语“特异性的”或“特异地”以指示存在于样品中的其它分子不显著结合对靶分子特异的结合剂。优选地，结合不是靶分子的分子的水平导致对靶分子的亲和力的仅10%或更少，更优选地仅5%或更少的结合亲和力。

“结合剂”的实例是核酸探针、核酸引物、DNA分子、RNA分子、适配子、抗体、抗体片段、肽、肽核酸（PNA）或化合物。优选的结合剂是抗体，其特异性结合被测量的生物标记物。本文的术语“抗体”在最广泛意义上使用且涵盖多种抗体结构，其包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原-结合活性。优选地，抗体是多克隆抗体。更优选地，抗体是单克隆抗体。

在一方面中，另一可以应用的结合剂可以是适配子，其特异地结合样品中的至少一种生物标记物。当指的是作为结合剂的核酸适配子时，术语“特异性结合”或“特异地结合”指的是结合反应，其中核酸适配子以低nM至pM范围的亲和力结合相应的靶分子。

在还一个方面中，在测量形成的复合体的水平之前，样品从结合剂和至少一种标记物之间形成的复合体移除。因此，在一个方面中，结合剂可以固定在固体支持物上。在还一个方面，样品可以通过应用洗涤溶液从在固体支持物上形成的复合体移除。形成的复合体应当与样品中存在的至少一种标记物的水平成比例。应当理解的是待应用的结合剂的特异性和/或灵敏性定义了样品中包含的能够被特异性结合的至少一种标记物的比例的程度。如何实施确定的进一步的细节也可以在本文别处中发现。形成的复合体的水平应当转化为反映在样品中实际存在的水平的至少一种标记物的水平。在一个方面中，这样的水平可以基本是样品中存在的量或可以在另一个方面中，是其某一部分的量（由于形成的复合体和原始样品中存在的量之间的关系）。

如本文使用的术语“水平”涵盖了如本文指出的生物标记物的绝对量，所述生物标记物的相对量或浓度，以及与其相关或可以从其衍生的任何值或参数。这样的值或参数包括通过直接测量，从所述肽获得的全部特定物理或化学特性的强度信号值，例如在质谱或NMR谱中的强度值。此外，涵盖了由本说明书中别处说明的直接测量获得的全部值或参数，例如，从对从特定结合配体获得的肽或信号强度应答的生物学读出系统确定的应答量。应理解的是与上文提及的量或参数相关的值还可以通过标准数学操作获得。

如本文使用的术语“比较”指的是将个体或患者的样品中的生物标记物的水平与本说明书中别处说明的生物标记物的参考水平相比较。应当理解的是如本文使用的比较通常指的是相应参数或值的比较，例如绝对值是与绝对参考量比较，而浓度与参考浓度相比较或从样品生物标记物获得的强度信号是与从参考样品获得的相同类型的强度信号比较。所述比较可以人工地或辅助以计算机执行。因此，比较可以通过（例如本文公开的系统的）计算机装置进行实施。个体或患者样品中的生物标记物的测量或检测水平的值和参考水平可以例如与各自比较且所述比较可以通过执行比较的算法的计算机程序自动实施。实施所述评价的计算机程序将以合适的输出形式提供期望的评估。对于辅以计算机的比较，被确定量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述参考通过计算机程序储存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较结果，即以合适的输出形式自动提供期望的评估。对于辅以计算机的比较，被确定量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述参考通过计算机程序储存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较结果，即以合适的输出形式自动提供期望的评估。

在某些实施方案中，本文的术语“参考水平”优选指的是各生物标记物的预定值。在该背景下“水平”涵盖了绝对量、相对量或浓度，以及与其相关或可以从其衍生的任何值或参数。优选地，参考水平是允许将患者分配至适于强化心力衰竭疗法的患者组、或分配至不适于强化心力衰竭疗法的患者组的水平。因此，参考水平应该允许在适于强化心力衰竭疗法的患者和不适于强化心力衰竭疗法的患者之间进行区分。

如本领域技术人员将理解的，参考水平是预定的且被设置在例如特异性和/或灵敏性上符合常规要求。这些要求可以变化，例如，从一个管理部门到另一个管理部门。可以举例的是测定灵敏性或特异性分别必须设置在某些限值，例如分别为80%、90%、95%或98%。这些要求还可以被定义为阳性或阴性预测值。尽管如此，基于本发明给出的教导，技术人员将总是可能达到参考值，满足那些要求。在一个实施方案中，参考水平在来自具有心力衰竭并且适于强化心力衰竭疗法的患者（或患者组）的参考样品或样品中确定，或者在来自具有心力衰竭并且不适于强化心力衰竭疗法的患者（或患者组）的参考样品或样品中确定。在一个实施方案中参考水平已经在患者所属的疾病实体的参考样品中预先确定。在某些实施方案中，参考水平可以例如被设置为被研究的疾病实体中的值的总体分布的25%和75%之间的任何百分比。在另外的实施方案中，参考水平可以例如被设置为被研究的疾病实体的参考样品中值的总体分布确定的中值、三分位数、四分位数。在一个实施方案中，参考水平可以被设置为被研究的疾病实体的值的总体分布确定的中值。参考水平可以变化，取决于多个生理参数，诸如年龄、性别或亚群，以及用于确定本文所指的生物标记物的方法。在一个实施方案中，参考样品基本来自相同类型的细胞、组织、器官或体液来源，如经历本发明方法的个体或患者的样品，例如，如果根据本发明使用血液作为样品以确定个体中生物标记物水平，则参考水平也在血液或其部分中确定。

在某些实施方案中，术语“大于参考水平”或“高于参考水平”指的是个体或患者的样品中生物标记物的水平高于参考水平或整体增加5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、100%或更多，其通过本文描述的方法与参考水平比较确定。在某些实施方案中，术语增加指的是在个体或患者样品中的生物标记物水平的增加，其中所述增加相比于参考水平（例如从参考样品预先确定的）为至少高约1.5-、1.75-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、15-、20-、25-、30-、40-、50-、60-、70-、75-、80-、90-或100-倍。

在某些实施方案中，本文术语“低于参考水平”或“低于”指的是个体或患者的样品中生物标记物的水平低于参考水平或整体减少5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多，其通过本文描述的方法与参考水平比较确定。在某些实施方案中，在个体或患者样品中的生物标记物水平中术语减少，其中所述减少的水平为参考水平（例如从参考样品预先确定的）的至多约0.9-、0.8-、0.7-、0.6-、0.5-、0.4-、0.3-、0.2-、0.1-、0.05-或0.01-倍或更低。

如果至少一种标记物选自肌酸酐、尿素、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，则以下应用为诊断算法：

优选地，来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于所述标记物的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平低于所述标记物的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法。

如果至少一种标记物选自钠、血红蛋白、血细胞比容和IGFBP-7，则以下应用为诊断算法：

优选地，来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平低于所述标记物的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于所述标记物的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法。

以下表A提供各种标记物的参考水平的优选范围（第三列）以及优选的具体参考水平（第四列）。本领域技术人员能够确定另外的参考水平而无需额外费力。

表A

标记物/参数	单位	范围内的参考水平，从	参考水平
				肌酸酐	mg/dL	约1.2-1.8	约1.5
BUN (尿素)	mmol/L	约10-12	约11.1
				葡萄糖	mmol/L	约10-13	约11.6
HbA1c	%	约0.05-0.07	约0.06
				hsCRP	mg/mL	约9-13	约10.4
胱抑素C	mg/L	约1.8-2.0	约1.9
				IL-6	pg/mL	约8-10	约9.1
前白蛋白	g/L	约0.14-0.18	约0.16
				sFlt-1	pg/mL	约85-100	约87
尿酸	mg/dL	约9-10	约9.1
				GFD-15	pg/mL	约2500-5000	约3210
sST2	ng/mL	约38-47	约41.5
				半乳糖凝集素-3	ng/mL	约24-30	约25
内皮他丁	ng/mL	约230-277	约243
				Mimecan	ng/mL	约44-50	约45.2
IGFBP-7	ng/mL	约70-77	约71.4
				骨桥蛋白	ng/mL	约110-120	约113.5
血红蛋白	g/dL	约7.5-8.5	约8.04
				血细胞比容	%	约0.37-0.43	约0.40
QRS持续时间	ms	约140-180	约160
				钠	mmol/L	约138-142	约141

关于QRS持续时间，参考可以在约140至约180 ms的范围内。在实施方案中，参考为约160 ms。

在本发明的上下文中，考虑测量单一标记物或多种标记物组合的水平。因此，考虑测量两种、三种、四种或甚至更多种标记物的水平。优选的实施方案如下：

例如，考虑以下标记物组合：

• 肌酸酐和钠

• 血红蛋白和QRS持续时间

• 尿素和HbA1c

• 血细胞比容和肌酸酐。

根据本发明，可以测量某些标记物的水平以鉴定适于强化某一心力衰竭疗法、尤其是用某一药物的强化的治疗的患者。例如，可以使用标记物以评估用药物的治疗是否应强化（例如，是否施用的药物的剂量应增加）。例如，如果待测量的标记物是肌酸酐，则待强化的心力衰竭疗法优选为用β阻滞剂治疗。

本文以上给出的定义加上必要的改变应用于以下。而且，与本文上述方法相关进行的步骤可以根据以下方法来进行。

本发明还涉及用于鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，尤其是体外方法，所述方法包括步骤

(a) 测量来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中BNP型肽的水平；

(b) 测量来自所述患者的样品中选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1 (可溶性fms样酪氨酸激酶-1)、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2(可溶性ST2)和骨桥蛋白，

(c) 将（a）中测量的BNP型肽水平与一种（或多种）参考水平进行比较，和

(d) 将（b）中测量的至少一种标记物的一种（或多种）水平与一种（或多种）参考水平进行比较。

通过进行步骤（c）或（d），鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者。在一个实施方案中，方法进一步包括鉴定或选择适于强化心力衰竭疗法的患者的步骤（e）。此外，方法可以包括强化心力衰竭疗法或推荐强化心力衰竭疗法（如果患者鉴定为适于强化心力衰竭疗法）的步骤（f）。因此，本发明还考虑强化心力衰竭疗法的方法，所述方法包括如上所述的步骤（a）至（f）。

除了步骤a）中所指的标记物，或者可选地，QRS持续时间可以测量或提供并与参考进行比较（如本文别处所概述）。

除了上述方法，方法进一步包括测量BNP型肽的水平的步骤。

如本文所用，术语“BNP型肽”包括前proBNP、proBNP、NT-proBNP和BNP。前肽原(pre-pro peptide)（在前proBNP的情况下为134个氨基酸）包含短信号肽，其被酶促切割以释放前肽（在proBNP的情况下为108个氨基酸）。前肽进一步切割为N末端前肽（NT-pro肽，在NT-proBNP的情况下为76个氨基酸）和活性激素（在BNP的情况下为32个氨基酸）。优选地，根据本发明的BNP型肽为NT-proBNP、BNP（脑利钠肽）及其变体。BNP是活性激素并且具有比各对应的无活性NT-proBNP更短的半衰期。BNP在血液中代谢，而NT-proBNP在血液中作为完整分子循环并因此经肾排出。NT-proBNP的体内半衰期比BNP的（其为20 min）长120 min(Smith 2000, J Endocrinol.167:239-46.)。用NT-proBNP的预分析学（Preanalytics）更为稳健，允许样品容易地运送到中心实验室 (Mueller 2004, Clin Chem Lab Med 42:942-4.)。血液样品可以在室温下储存数周或者可以邮寄或运输而无回收损失。相反，BNP在室温下或在4℃下储存48小时导致至少20％的浓度损失(Mueller loc.cit.; Wu 2004,Clin Chem 50:867-73.)。因此，取决于目标时间过程或特性，利钠肽的有活性或无活性形式的测量可以是有利的。根据本发明的最优选的BNP型肽是NT-proBNP或其变体。如上简述，人NT-proBNP，如根据本发明所述，是包含优选对应于人NT-proBNP分子的N末端部分的长度76个氨基酸的多肽。人BNP和NT-proBNP的结构已经详细地描述于现有技术中，例如WO 02/089657、WO 02/083913或Bonow loc. cit。优选地，如本文所用的人NT-proBNP是如EP 0648 228 B1中公开的人NT-proBNP。这些现有技术文件关于其中公开的NT-proBNP及其变体的具体序列通过引用并入本文。根据本发明所指的NT-proBNP进一步包括上文讨论的人NT-proBNP的所述具体序列的等位基因和其他变体。具体而言，考虑这样的变体多肽，其在氨基酸水平上优选与人NT-proBNP至少50％、60％、70%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%相同，优选在人NT-proBNP的整个长度上。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域熟知的算法来测定。优选地，同一性程度通过在比较窗口上比较两条最佳比对序列来测定，其中比较窗口中氨基酸序列的片段相比于参考序列（其不包含添加或缺失）可以包含添加或缺失（例如缺口或突出）以最佳比对。百分比是这样计算的，通过确定相同的氨基酸残基在两条序列中发生的位置数目以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中的位置总数并将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。用于比较的序列最优比对可以如下进行，通过Smith和Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444 (1988)的搜索相似性方法，通过这些算法的计算机化实现(GAP、BESTFIT、BLAST、PASTA和TFASTA，于Wisconsin GeneticsSoftware Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison,WI)，或通过目检。如果已鉴定两条序列用于比较，则优选采用GAP和BESTFIT来测定其最优比对，并因此测定同一性程度。优选地，对于缺口权重采用5.00的缺省值和对于缺口权重长度采用0.30的缺省值。上文所指变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同源物、横向同源物或直向同源物。实质上相似的并且也考虑的是蛋白水解降解产物，其仍被诊断方法或被针对个全长肽的配体所识别。还包括的是变体多肽，其相比于人NT-proBNP的氨基酸序列具有氨基酸缺失、取代、和/或添加，只要所述多肽具有NT-proBNP特性。如本文所指的NT-proBNP特性是免疫学和/或生物学特性。优选地，NT-proBNP变体具有与人NT-proBNP的那些相当的免疫学特性（即，表位组成）。因此，变体应可以被上述方法或用于测定利钠肽的量的配体所识别。生物学和/或免疫学NT-proBNP特性可以通过在以下中描述的测定来检测：Karl等人(Karl 1999, Scand J Clin Lab Invest 230:177-181)、Yeo 等人(Yeo2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115)。而且，用于测定NT-proBNP的测定由MuellerT. 等人, Clinica Chimica Acta 341 (2004) 41–48描述。在实施方案中，NT-proBNP如上述参考文献中任一者所述进行。变体还包括翻译后修饰的肽，诸如糖基化的肽。此外，根据本发明的变体还是这样的肽或多肽，其已在收集样品后修饰，例如通过共价或非共价连接标记，优选放射性或荧光标记至肽。

术语“参考水平”已在上文定义。BNP型肽的参考水平优选地应是这样的水平，所述水平当单独采用时（即不与在本发明的上下文中所指的另外标记物组合），指示不适于强化心力衰竭疗法的患者。在本发明的背景下待应用的指示强化心力衰竭疗法的所述BNP型肽的优选的参考水平为实施例中描述的那些。优选的参考水平对于BNP在约80-400 pg/ml的范围内、或具体为约80-200 pg/ml，和对于NT-proBNP在约450-2200 pg/ml的范围内、或具体为约800 pg/ml-1200 pg/ml。进一步优选的参考水平对于BNP为约100 pg/ml或400 pg/ml，并且对于NT-proBNP为约1000 pg/ml或1200 pg/ml。

标记物肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1 (可溶性fms样酪氨酸激酶-1)、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2(可溶性ST2)和骨桥蛋白（OPN）的优选参考水平或参考水平范围显示于上文表A中。

如果步骤（b）中测量的至少一种标记物选自肌酸酐、尿素、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，则以下应用为诊断算法：

(a) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，

(b) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，

(c) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或

(d) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法。

可选地或另外，如果步骤（b）中测量的至少一种标记物选自钠、血红蛋白、血细胞比容和IGFBP-7，则以下应用为诊断算法：

(a) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，

(b) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，

(c) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或

(d) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法。

根据上述方法待测试的患者可以展示BNP型肽的任何水平（尤其是任何血液、血清或血浆水平）。

此外，本发明涉及优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的方法，所述方法包括步骤

（a）在来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的疗法的患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，和

（b）将（a）中测量的一种（或多种）标记物的一种（或多种）水平与一种（或多种）参考水平进行比较，由此优化BNP型肽指导的疗法。

根据上述方法的患者优选展示低于BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平（尤其是血液、血清或血浆水平），所述参考水平指示心力衰竭疗法的强化。

本文以上给出的定义加上必要的改变应用于本发明以下实施方案。

用于预测心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险的方法

此外，本发明涉及用于预测具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡（死亡）的风险的方法，特别是体外方法，所述方法包括步骤

（a）在来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，和

方法可以进一步包括步骤（c），所述步骤（c）预测（或提供预测）患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险，特别是其中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于或低于一种（或多种）参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡增加的风险，和其中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于或低于一种（或多种）参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡降低的风险。

在优选的实施方案中，患者展示低于BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平（尤其是血液、血清或血浆水平），所述参考水平指示心力衰竭疗法的强化。

以下应用为诊断算法：

优选地，来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于所述标记物的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡增加的风险，和/或其中来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平低于所述标记物的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡降低的风险。

优选地，来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平低于所述标记物的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡增加的风险，和/或其中来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于于所述标记物的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡降低的风险。

优选的参考水平或参考水平的范围公开于本文别处（参见表A）。

如本文所用的短语“提供预测”指使用关于如本文所指的患者样品中至少一种生物标记物的水平生成的信息或数据来预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险。信息或数据可以以任何形式，书面、口头或电子形式。在一些实施方案中，使用生成的信息或数据包括沟通、呈现、报道、存储、发送、转移、提供、传递、分发或其组合。在一些实施方案中，沟通、呈现、报道、存储、发送、转移、提供、传递、分发或其组合通过计算装置、分析仪单元或其组合来进行。在一些进一步的实施方案中，沟通、呈现、报道、存储、发送、转移、提供、传递、分发或其组合通过实验室或医学专业人员来进行。在一些实施方案中，信息或数据包括将至少一种标记物的水平与参考水平进行比较。在一些实施方案汇总，信息或数据包括指示患者处于或不处于遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险中。

本发明还涉及用于预测具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡（死亡）的风险的方法，特别是体外方法，所述方法包括步骤

方法可以进一步包括预测（或提供预测）患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险的步骤（f）。预测优选基于比较步骤的结果。

(a) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的增加的风险，

(b) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的增加的风险，

(c) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的增加的风险，和/或

(d) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的降低的风险。

(a) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的增加的风险，

(b) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的增加的风险，

(c) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平高于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的增加的风险，和/或

(d) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平高于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者具有遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的降低的风险。

优选的参考水平或参考水平的范围公开于本文别处（例如参见表A）。

术语“心脏失代偿”是本领域中众所周知的。优选地，该术语指慢性心力衰竭的病况，其中心脏在无帮助的情况下无法确保机体所有部分中足够的细胞灌注。因此，机体的补偿性基质不再足以维持泵功能。

如本文所用的术语“死亡”涉及任何类型的死亡，特别是由心血管并发症引起的死亡。优选地，所述死亡由心力衰竭引起。

术语“住院治疗”是本领域中众所周知的。如本文所用，该术语涉及由心血管并发症引起的住院治疗。优选地，所述住院治疗由心力衰竭引起。

本文使用的术语“预测”指的是评估据此未来如本文所指的患者在界定的时间窗口（预测窗口）将遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的可能性。预测窗口是患者根据预测可能性将发生心脏失代偿、将住院治疗和/或将死亡的区间。预测窗口可以是在通过本发明的方法分析后患者的整个剩余寿命。然而，优选地，预测窗口是在本发明的方法已实施后（更优选和精确地，在通过本发明的方法分析的样品已被获得后）一年、两年、三年、四年、五年、十年、十五年或20年的区间。最优选地，所述预测窗口是四或五年的区间。如本领域技术人员将理解的，这样的评价通常不意在对100%被分析的患者正确。然而，该术语要求评估将对受分析的患者的统计学上显著的部分有效。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种熟知的统计评估工具，例如置信区间的确定，p-值确定、学生t-检验、Mann-Whitney检验等而没有进一步的麻烦而确定。详述在Dowdy和Wearden, Statisticsfor Research, John Wiley & Sons, New York 1983中发现。优选的置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99 %。p-值是，优选地， 0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。优选地，本发明设想的可能性允许预测将对至少60%、至少70%、至少80%或至少90%的给定群体的患者正确。

如本文使用的表达“预测心脏失代偿、住院治疗或死亡的风险”意为将通过本发明的方法分析的患者分配至具有升高的风险的群体的患者组中或具有降低的风险的组中。根据本发明所指的升高的风险优选地意为患者在预定的预测窗口中发生心脏失代偿的风险、住院治疗的风险或死亡的风险相对于此类事件在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导疗法的患者群体中的平均风险显著升高（即显著增加）。根据本发明所指的降低的风险优选地意为患者在预定的预测窗口中发生心脏失代偿的风险、住院治疗的风险或死亡的风险相对于此类事件在所述患者群体中的平均风险显著降低。特别地，风险的显著增加或减少是被认为对预后有意义的程度的风险增加或降低，特别是所述增加或降低被认为是统计学显著的。术语“显著的”和“统计学显著的”是本领域技术人员已知的。因此，风险的增加或降低是否是显著的或统计学显著的可以通过本领域技术人员使用多种熟知的统计学评价工具无需一步麻烦而确定。

优选地，对于三年的预测窗口，增加的风险在3.0 %-19.0 %的范围内，更优选在12.0 %-17.0 %的范围内，最优选在8.0 %-16.0 %的范围内。如本文所用的增加的，并因此增加的风险优选地涉及优选关于三年的预测窗口的多于3.0％的风险，优选多于12.0％，更优选多于17％，甚至更优选多于20％。如本文所用的降低的风险优选地涉及优选关于三年的预测窗口的少于8.0%的风险，优选少于6 %，甚至更优选少于4 %，并且最优选在3.0％和8.0%的范围内。

本发明还涉及选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的至少一种标记物，和/或所述至少一种标记物（即，肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）或骨桥蛋白）的至少一种检测试剂，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗和或死亡的风险的用途，或用于优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的用途。

本发明还涉及i）QRS持续时间，任选组合有BNP型肽，和/或用于测定QRS持续时间的装置诸如ECG装置（即能够生成心电图的装置），任选组合有至少一种BNP型肽的检测试剂，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗和或死亡的风险的用途，或用于优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的用途。如本文别处概述，患者应接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法。

本发明还涉及BNP型肽组合选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的至少一种标记物，和/或特异性结合BNP型肽的检测试剂组合选自选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的标记物组的标记物的至少一种检测试剂，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，或用于预测所述患者遭受心脏失代偿、住院治疗或死亡的风险的用途。

本发明还涉及选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的至少一种标记物，和/或所述至少一种标记物（即，肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）或骨桥蛋白）的至少一种检测试剂，用于制备诊断组合物的用途，所述诊断组合物用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法，或用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗或死亡的风险（尤其是，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者样品中）。

本发明还涉及BNP型肽组合选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的至少一种标记物，和/或特异性结合BNP型肽的检测试剂组合选自选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的标记物组的标记物的至少一种检测试剂，用于制备诊断组合物的用途，所述诊断组合物用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法，或用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗或死亡的风险（尤其是，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者样品中）。

如果标记物为多肽或肽，尤其是如果标记物为HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，则检测试剂优选特异性结合所述标记物。在该情况下，检测试剂优选为单克隆或多克隆抗体（对于术语“抗体”的定义，参见本文别处）。对于其余标记物，检测试剂可以是这样的试剂，所述试剂与标记物形成复合物，由此允许测量标记物的水平，或者是这样的酶，所述酶如本文别处所述允许转化标记物。

如果标记物是肌酸酐，则检测试剂可以是苦味酸（其与肌酸酐形成复合物）。

如果标记物是尿酸，则检测试剂可以是尿酸酶或过氧化物酶。

如果标记物是尿素，则检测试剂可以是脲酶。

如果标记物是葡萄糖，则检测试剂可以是己糖激酶。

因此，本发明还优选涉及鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的系统，所述系统包括

a）分析仪单元，其配置为将来自患者的一份样品与一种检测试剂（或多种试剂，如果测量至少一种标记物的水平）体外接触用于测量选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1 (可溶性fms样酪氨酸激酶-1)、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2(可溶性ST2)和骨桥蛋白，

b）分析仪单元，其配置为检测来自与试剂接触的患者样品份的信号，

c）计算装置，其具有处理器并且与所述分析单元可操作地通信，和

d）非瞬时机器可读介质，其包括多个处理器可执行的指令，当执行指令时，计算至少一种标记物的水平，并将至少一种标记物的水平与一种参考水平（或多种参考水平，如果测量多于一种标记物的水平）进行比较，由此鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者。

如上所述，患者应具有心力衰竭并应接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法。

此外，提供适配于进行本发明的方法的装置，所述装置包括

a）分析仪单元，其包含用于在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物水平的一种或多种检测试剂：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，和

b）分析仪单元，其用于将测量的水平与参考水平进行比较，由此鉴定适于强化心力衰竭疗法拮抗剂、利尿剂和肾素-血管紧张素系统抑制剂的患者，所述单元包含具有参考水平的数据库和进行比较的计算机实现的算法。

优选的参考水平和诊断算法在本文别处公开。

本公开的优选的实施方案包括用于鉴定主体为适于施用选自β阻滞剂、醛固酮拮抗药、利尿药和肾素血管紧张素系统抑制剂的至少一种药物的系统。系统的实例包括临床化学分析仪、混凝化学分析仪、免疫化学分析仪、尿分析仪、核酸分析仪，其用于检测化学或生物反应的结果或监视化学或生物反应的进程。更具体地，本公开的示例性的系统可以包括Roche Elecsys^TM Systems和Cobas^® e免疫测定分析仪、Abbott Architect^TM和Axsym^TM分析仪、Siemens Centaur^TM和Immulite^TM 分析仪和Beckman Coulter UniCel^TM和Acess^TM 分析仪等。

系统的实施方案可以包括用于实践本公开的一种或多种分析仪单元。本文公开的系统的分析仪单元与本文公开的计算装置通过已知的任何有线连接、蓝牙、LANS或无线信号可操作地通信。另外地，根据本公开，分析仪单元包括独立装置，或更大的仪器中的模块，其执行一种或两种检测，例如用于诊断目的的样品的定性和/或定量评价。例如，分析仪单元可以执行或帮助样品和/或试剂的吸取、剂量、混合。分析仪单元可以包括试剂固定单元，其用于固定试剂以执行测定。试剂可以例如以容器或盒的形式安排，其含有各个试剂或试剂组，在贮存间隔或输送机中被安置在合适的容器(receptacle)或位置。检测试剂还可以以固定形式在固体支持物上，其与样品接触。进一步，分析仪单元可以包括可对特定分析优化的处理和/或检测组件。

根据一些实施方案，分析仪单元可以被配置用于分析物例如标记物与样品的光学检测。示例性的配置为光学检测的分析仪单元包括配置为将电磁能量转换为电信号的装置，其包括单元件和多元件或阵列光学检测器。根据本公开，光学检测器能够监视光电-磁信号，且提供电输出信号或相对于基线信号的应答信号，其指示位于光路的样品中的分析物存在和/或浓度。这样的装置还可以包括，例如，光电二极管，包括雪崩光电二极管、光电晶体管、光电导探测器、线性传感器阵列、CCD探测器、CMOS探测器，包括CMOS阵列探测器、光电倍增管、和光电倍增管阵列。根据某些实施方案，光学检测器，诸如光电二极管或光电倍增管，可以含有另外的信号调节或处理电子装置。例如，光学检测器可以包括至少一种前置放大器、电子滤波器或集成电路。合适的预前置放大器包括，例如，集成化的、跨阻抗的和电流增益的（电流反射镜）前置放大器。

另外地，根据本公开的一种或多种分析仪单元可以包括用于发光的光源。例如，分析仪单元的光源可以由用于测量被测试的样品的分析物浓度或用于能够能量转移（例如，通过荧光共振能量转移或催化酶）的至少一个光发射元件（诸如发光二极管、电动辐射源诸如白炽灯、电离发光灯、气体放电灯、高强度气体放电灯、激光）组成。

此外，系统的分析仪单元可以包括一个或多个温育单元（例如，用于维持样品或试剂在特定温度或温度范围）。在一些实施方案中，分析仪单元可以包括热循环仪，包括实时热循环仪，用于使样品经历重复的温度循环且监视样品扩增产物的水平的变化。

另外地，本文公开的系统的分析仪单元可以包括反应容器或小杯加液单元(cuvette feeding unit)或与其操作上连接。示例性的加液单元包括液体处理单元，诸如吸取单元，以将样品和/或试剂递送至反应容器。吸取单元可以包括可再利用的可洗的针，例如，钢针或一次性吸头。分析仪单元可以进一步包括一种或多种混合单元，例如振动器以振动包含液体的小杯，或搅拌桨以混合小杯或试剂容器中的液体。

跟随上文后的是，根据本公开的一些实施方案，本文公开和描述的方法的一些步骤的部分可以通过计算装置执行。计算装置可以是例如通用计算机或便携式计算装置。应当理解的是，可以一同使用多个计算装置，诸如通过网络或其它数据传输方法，用于执行本文公开的方法的一个或多个步骤。示例性的计算装置包括台式电脑、手提电脑、个人数据助理（“PDA”），诸如BLACKBERRY品牌装置、移动装置、平板电脑、服务器等。通常，计算装置包括能够执行多种指令（诸如软件程序）的处理器。

计算装置访问存储器。存储器是计算机可读介质，且可以包括单一储存装置或多个存储装置，其例如与计算装置本地放置或通过网络可与计算装置连接。计算机可读介质可以是任何可以获得的介质，其可以通过计算装置访问且包括易失性介质和非易失性介质两者。此外，计算机可读介质可以是可移除介质和不可移除介质中的一种或两种。通过示例的方式，且非限制性的，计算机可读介质可以包括计算机储存介质。示例性的计算机储存介质包括，但不限于RAM、ROM、EEPROM、闪存或任何其它存储技术，CD-ROM、数字通用光盘（DVD）或其它光盘存储、磁盒、磁带、磁盘存储或其它磁存储装置，或任何其它介质，其可以用于储存多个指令，所述指令能够被计算装置访问且通过计算装置的处理器执行。

根据本公开的实施方案，软件可以包括指令，当通过计算装置的处理器执行时，所述指令可以执行本文公开的方法的一个或多个步骤。一些指令可以适用于产生信号，所述信号控制其他机器的操作且因此可以通过那些控制信号操作以将远离计算机本身的材料转化。这些说明和代表是数据处理领域技术人员使用的方法，例如，以最有效地将他们工作的内容输送给本领域其他技术人员。

多个指令还可以包括通常构想为导致期望结果的步骤的自相容顺序(self-consistent sequence)的算法。这些步骤是需要物理量的物理操作的那些。通常，虽然不是必需的，这些量采用能够被储存、转移、转化、组合、比较或另外操作的电或磁脉冲或信号的形式。当提及此类信号具体化或表达于其中的物理项或表现时，有时候证明（主要是由于共同使用的原因）指代这些信号为值、特征、显示数据、数量等是方便的。但是，应当牢记的是，全部这些和相似的术语与合适的物理量相关，且此处仅用作应用于这些量的方便标记。根据本公开的一些实施方案，用于实施本文公开的一种或多种标记物的确定水平和合适的参考之间的比较的算法通过执行指令而具体化并进行。这些结果可以作为参数诊断的原始数据的输出或作为绝对或相对水平给出。根据本文公开的系统的多个实施方案，“诊断”可以通过本文公开的系统的计算装置基于经计算的“水平”与参考或阈值的所述比较来提供。例如，系统的计算装置可以提供以指示具体诊断的文字、符号或数值形式的指示符。

计算装置还可以访问输出装置。示例性的输出装置包括例如传真机、显示器、打印机和文件。根据本公开的一些实施方案，计算装置可以执行本文公开的方法的一个或多个步骤，且随后通过输出装置提供关于方法的结果、指示、比例或其它因素的输出。

最后，本发明涉及适用于执行本发明方法的试剂盒，所述试剂盒包含至少一种检测试剂（或多种检测试剂，如果测量至少一种标记物的水平的话），所述检测试剂用于测量选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c (糖化血红蛋白)、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C 、IL-6 (白介素6)、前白蛋白、sFlt-1 (可溶性 fms-样酪氨酸激酶-1)、尿酸、GDF-15 (生长分化因子15)、半乳糖凝集素-3 (Gal-3)、内皮抑素、Mimecan、IGFBP7 (胰岛素生长因子结合蛋白7)、sST2（可溶性ST2）、和骨桥蛋白的至少一种标记物的水平，参考标准品以及实施所述方法的说明书。

如在本文中使用的术语“试剂盒”指的是优选地以分开地或在单一容器中提供的上文提及的组分的集合。容器还包含用于实施本发明方法的说明书。这些说明书可以以手册的形式或可以通过计算机程序代码（其能够实施关于本发明的方法的比较，且当在计算机或数据处理装置实施时因此建立诊断）提供。计算机程序代码可以在数据存储介质或装置诸如光存储介质（例如光盘）上提供，或直接在计算机或数据处理装置上提供。此外，试剂盒应包含用于上文定义的参考的至少一种标准品，即如本文提及的代表参考水平的具有预定水平的生物标记物的溶液。

在一些实施方案中，本文公开的试剂盒包括至少一种用于实践公开的方法的组分或组分包装的组合。“包装的组合”意为试剂盒提供了含有一种或多种组分的组合的单一包装，所述组分诸如探针（例如抗体）、对照、缓冲液、试剂（例如，缀合物和/或底物）说明书等，如本文公开的。含有单一容器的试剂盒也包括在“包装的组合”的定义中。在一些实施方案中，试剂盒包括至少一种探针，例如抗体（对本文公开的生物标记物的表位具有特定亲和力）。例如，试剂盒可以包括使用荧光团标记的抗体或是融合蛋白成员的抗体。在试剂盒中，探针可以被固定化，且可以以特定构象固定化。例如，固定化的探针可以在试剂盒中提供，以特异性地结合靶蛋白，以检测样品中的靶蛋白和/或去除样品的靶蛋白。

根据一些实施方案，试剂盒包括在至少一个容器中的至少一种探针，其可以是被固定。试剂盒还可以包括在一个或多个容器中的多种探针，任选是被固定的。例如，多种探针可以存在于单一容器中，或在分别的容器中，例如，其中每种容器含有单一探针。

在一些实施方案中，试剂盒可以包括一种或多种非固定化的探针和一个或多个固体支持物，所述支持物可以包括或不包括固定化的探针。一些这样的实施方案可以包括用于固定一种或多种探针至固体支持物上所需的一些或全部的试剂或供应品，或用于将固定化的探针结合至样品中特定蛋白所需的一些或全部的试剂或供应品。

在某些实施方案中，单一探针（其包括相同探针的多个拷贝）可以被固定于单一固体支持物且在单一容器中提供。在其它实施方案中，各自对不同靶蛋白或单一靶蛋白的不同形式（诸如特定表位）特异的两种或多种探针在单一容器中提供。在一些这样的实施方案中，固定化的探针可以以多个不同容器（例如单次使用形式）提供，或多种固定化探针可以以多个不同容器提供。在进一步的实施方案中，探针可以在多个不同类型的固体支持物上固定。固定化探针和容器的任何组合是本文公开的试剂盒所设想的，且可以选择其任何组合以实现用于期望用途的合适的试剂盒。

试剂盒的容器可以是任何容器，其适合于包装和/或含有本文公开的一种或多种组分，其包括例如探针（例如抗体）、对照、缓冲液和试剂（例如缀合物和/或底物）。合适的材料包括但不限于，玻璃、塑料、硬纸板或其它纸产品、木材、金属及其任何合金。在一些实施方案中，容器可以完全包围固定的探针或可以简单地覆盖探针以最小化由于灰尘、油等的污染和暴露于光。在一些进一步的实施方案中，试剂盒可以包括单一容器或多个容器，且当多个容器存在时，每个容器可以与全部其它容器相同，与其它容器不同，或与一些而非全部其它容器不同。

本发明优选的实施方案

在下文中，公开本发明优选的实施方案。本文上文和权利要求中给出的定义和解释加上必要的改变进行应用。

1. 鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，所述方法包括步骤

(a) 在来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，和

(b) 将（a）中测量的一种（或多种）标记物的一种（或多种）水平与一种（或多种）参考水平进行比较。

2. 根据实施方案1的方法，其进一步包括鉴定是否适于强化心力衰竭疗法的患者的步骤（c）。

3. 实施方案1或2的方法，其中所述患者展示低于BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平，所述参考水平指示心力衰竭疗法的强化。

4. 实施方案1-4中任一项的方法，其中

i) 至少一种标记物选自肌酸酐、尿素、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，并且其中来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于所述标记物的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或其中来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平低于所述标记物的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法，和/或

ii) 至少一种标记物选自钠、血红蛋白、血细胞比容和IGFBP-7，并且其中来自患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平低于所述标记物的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或其中来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种（或多种）水平高于所述标记物的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法。

5. 鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，所述方法包括步骤

6. 实施方案5的方法，其中

i）至少一种标记物选自肌酸酐、尿素、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，并且其中

(d) 来自患者的样品中至少一种标记物的水平低于所述标记物的参考水平并且所述BNP型肽的水平低于所述BNP型肽的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法，和/或

ii）至少一种标记物选自钠、血红蛋白、血细胞比容和IGFBP-7，

7. 优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的方法，所述方法包括步骤

(a) 在来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的疗法的患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、IGFBP7（胰岛素生长因子结合蛋白7）、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白，和

(b) 将（a）中测量的一种（或多种）标记物的一种（或多种）水平与一种（或多种）参考水平进行比较，由此优化BNP型肽指导的疗法。

8. 根据实施方案1-7中任一项的方法，其中所述患者是人。

9. 根据实施方案1-8中任一项的方法，其中所述患者具有根据ACC/AHA分类分类为阶段B或C的心力衰竭，和/或其中所述患者具有根据NYHA分类的II或III类的心力衰竭。

10. 根据实施方案1-9中任一项的方法，其中所述样品为血液、血清或血浆样品。

11. 根据实施方案1-10中任一项的方法，其中所述心力衰竭疗法为药物心力衰竭疗法，具体地其中所述心力衰竭疗法包括施用至少一种选自利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β阻滞剂和醛固酮拮抗剂的药物。

12. 实施方案11的方法，其中所述心力衰竭疗法包括β阻滞剂和ACE抑制剂的组合施用。

13. 根据实施方案1-12中任一项的方法，其中所述强化心力衰竭疗法包括增加之前施用的药物的剂量、施用另外的一种或多种药物、尤其是施用具有不同于之前施用的药物的作用方式的另外的一种或多种药物、装置疗法、生活方式改变、及其组合。

14. i）选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的至少一种标记物，和/或ii）所述至少一种标记物的至少一种检测试剂，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险的用途，或用于优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的用途。

15. BNP型肽组合选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的至少一种标记物，和/或特异性结合BNP型肽的检测试剂组合选自选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白、血细胞比容、IGFBP7、CRP（C反应蛋白，尤其是高敏性CRP）、胱抑素C、IL-6（白细胞介素6）、前白蛋白、sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶-1）、尿酸、GDF-15（生长分化因子15）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）、内皮他丁、Mimecan、sST2（可溶性ST2）和骨桥蛋白的标记物组的标记物的至少一种检测试剂，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，或用于预测所述患者遭受心脏失代偿、住院治疗或死亡的风险的用途。

上文所指的所有文献关于其完整公开内容以及其在上文描述中明确提及的具体公开内容通过引用并入本文。

实施例

本发明现将通过以下实施例进行说明，所述实施例不旨在限制或限定本发明的范围。

实施例1：患者

患有HF（NYHA类别II-IV收缩性HF (LVEF ≤45%）的499位患者根据NT-proBNP靶标或常规护理进行指导(Pfisterer M. 等人JAMA.2009; 301:383-92)。总体上，具有NT-proBNP水平<1000 pg/ml（之前鉴定的良好结果的截止值）的患者比具有无法降低至这些水平的NT-proBNP水平的那些患者具有明显更好的结果。然而，具有低NT-proBNP水平< 1000 pg/mL的一些患者仍处于风险中。另外，NT-proBNP水平略微高于1000 pg/mL的一些患者出人意料地处于高风险。该风险可以通过标记物另外的测量和临床参数水平，例如在疗法的6个月之后，以良好的准确性来鉴定。此外，这些额外的标记物和参数还提供在具有更高风险的组（即NT-proBNP水平在6个月后>1000pg/ml）中潜在的疗法指导的额外重要信息。

BNP和/或NT-proBNP水平连同一种或几种标记物和/或临床参数以每几周高至每6个月的规律间隔进行测量。如果强化医学疗法是临床上必需的和/或由BNP / NT-proBNP和/或这些额外标记物和/或参数之一所指示，则这些主体以临床每几周进行随访，直至实现最佳/最大医学疗法，达到BNP / NT-proBNP靶目标分别≤100-200 pg/mL和≤1,000 pg/mL，和以下目标实现或主体需要住院治疗。

表1显示额外标记物和临床参数的截止值（基于ROC优化的截止值和风险十分位数的拐点；两种方法产生鉴定剩余风险相似的截止值；当两种均可用时，应采用更低的截止值）：

表1：

表2显示根据NT-proBNP指导的患者中生物标记物和临床参数的Wald评分、p值和风险比（HR，具有95％置信区间）。Wald评分和风险比指示用BNP型肽指导的患者中心脏失代偿、住院治疗或死亡的剩余风险。

将所有具有BNP / NT-proBNP 浓度分别 >100-200 pg/mL和>1,000 pg/mL和标记物/参数水平高于上表中的截止值（或者对于血红蛋白、血细胞比容、IGFBP-7和钠而言低于截止值）的主体考虑为药物疗法和/或装置疗法强化，而与症状状态、感知的稳定性无关，并关于存在“最佳”医疗程序谨慎重新评估。另外，将具有BNP / NT-proBNP 浓度分别 <100-200 pg/mL 和 <1,000 pg/mL和标记物/参数水平高于如上所示的截止值的主体考虑为药物疗法和/或装置疗法强化。根据此类指导的组合标记物指导的HF疗法的HF患者的管理与标准治疗相同且涵盖如实践指南所推荐的所有药物、装置和治疗选项。疗法强化由以下组成：增加之前开具的药物的剂量或添加不同作用方式的药物或装置疗法、依从于实践指南和与最佳临床实践一致的锻炼、饮食、或其组合。不使用药物滴定或药物选择的特殊算法。尽管髓袢利尿剂可能降低NT-proBNP浓度，但考虑到在慢性HF背景中缺乏此类药剂的死亡率益处，因此通常不将其认为是用于具有升高NT-proBNP的非充血(non-congested)患者的“一线”疗法。

一旦药物调整导致实现目标值或者主体症状上稳定，则将主体认为是处于“组合的标记物靶向的最佳医疗方案”并因此从几周的随访环(follow-up loop)中移除并在下一次排定的临床探视（规律的监测间隔）看见。在进一步探视过程中或在近患者组合标记物测量（使用床边测定(point of care assays)）过程中的组合的标记物水平可以用于进一步指导HF疗法，即用于进一步增加或降低在如上所述的相似探视和BNP/NT-proBNP测量环中的疗法强度。

如果主体没有实现组合标记物/参数靶目标但的确达到清楚的治疗限值，则主体将从几周随访环中移除并将在下一次排定的临床探视中看见。该主体在该排定的临床探视中就组合标记物水平和进一步滴定药物和调整治疗选项的机会进行再次评价。根据其他标记物和参数的额外分层的发明还为具有更高NT-proBNP目标例如3000 pg/mL的患者提供益处。具体而言，由于并非所有患者可以达到NT-proBNP目标≤1,000 pg/mL，因此可以使用更高的目标截止值，并且在这些水平上，其他的标记物和临床参数仍可以提供额外的风险分层、监测和疗法指导益处。

与现有技术和之前的生物标记物指导的HF方法比较，本发明提供超出BNP/NT-proBNP目标范围外的额外标记物和参数目标水平。本发明还改进了不会从BNP/NT-proBNP指导的HF疗法中最佳受益的患者的鉴定。

此外，标记物水平的关联、疗法改变和结果表明由上文不同参数所反映的剩余风险可以使用可用的疗法来改变。这种关联表明不同的标记物组合可应用于指导NT-proBNP以外的心力衰竭疗法。这些疗法关联的一个实例在下文显示：

NT-proBNP和肌酸酐的组合以指导β阻滞剂：用NT-proBNP和在6个月时高肌酸酐浓度指导的患者用高β阻滞剂剂量或增加β阻滞剂剂量经历良好的结果。

实施例2：测定

使用Roche的电化学发光ELISA夹心测试Elecsys proBNP II STAT (短周转时间)测定来测定NT-proBNP。该测试采用识别位于proBNP (1-108)的N末端部分（1-76）中的表位的两种单克隆抗体。

通过电化学发光免疫测定（ECLIA, Roche Diagnostics）测量IL-6（白介素-6）。使用来自Roche Diagnostics的Cobas E601 分析仪执行测试。测试是基于与生物素化的单克隆IL-6-特异性抗体的第一温育和与使用钌复合体标记的单克隆IL-6特异性抗体和链霉亲和素包被的微粒的第二温育。

使用来自Roche Diagnostics的颗粒增强免疫比浊测定(Tina-quant 心脏C-反应蛋白(乳胶)高敏)确定高敏（hs）CRP。在该测试中，乳胶微粒偶联的抗CRP抗体与样品中的抗原反应以形成抗原/抗体复合体。凝集后，将所述复合体进行比浊测量。

为了测定血清和血浆样品中GDF-15的浓度，采用Elecsys原型测试，使用来自R&DSystems (AF957)的多克隆、GDF-15亲和层析纯化的、山羊抗人GDF-15 IgG抗体。在每一实验中，用来自R&D Systems (957-GD/CF)的重组人GDF-15生成标准曲线。用新批次或重组GDF-15蛋白的结果在标准血浆样品中测试并且通过对该测定引入调节因子校正任何高于10％的偏差。来自相同患者的血清和血浆样品中的GDF-15测量结果产生对最终稀释因子校正后实际相同结果。测定的检测限为200 pg/ml。

对于人血清或血浆中IGFBP7的检测，使用夹心ELISA。对于捕获和检测抗原，将来自R&D Systems (目录号：AF 1334)的抗IGFBP7多克隆抗体的等分试样分别缀合至生物素和地高辛上。

将链霉抗生物素包被的96孔微量滴定板用100 pi的在1x PBS溶液中以1 pg/ml的生物素化的抗IGFBP7多克隆抗体孵育60 min。孵育后，将板用lx PBS + 0.02% Tween-20洗涤三次，用PBS + 1% BSA（牛血清白蛋白）封闭并随后用lx PBS + 0.02% Tween-20再次洗涤三次。将孔随后分别与作为标准抗原的重组IGFBP7的系列稀释或与来自患者或对照个体的经稀释的血清或血浆样品（1:50）孵育1.5小时。IGFBP7结合后，将板用lx PBS + 0.02%Tween-20洗涤三次。对于结合的IGFBP7的特异性检测，将孔用100 µl在lx PBS + 1% BSA中1 µg/ml的地高辛化的抗IGFBP7多克隆抗体孵育60 min。随后，将板洗涤三次以去除未结合的抗体。在下一步中，将板与在lx PBS + 1% BSA中的75 mU/ml 抗地高辛-POD缀合物(Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany, 目录号1633716)孵育60 min。将板随后用相同缓冲液洗涤六次。对于检测抗原-抗体复合物，将孔与100 µl ABTS溶液(RocheDiagnostics GmbH, Mannheim, Germany, 目录号11685767)孵育并在15 min后用ELISA读数器在405和492 nm处测量光密度（OD）。

通过使用BGM Galectin-3 测定(BG medicine, Waltham, MA, USA)测定Gal-3。其通过在微量滴定板平台上的酶联免疫吸附测定（ELISA）定量测量血清或EDTA-血浆中的半乳糖凝集素-3。测定利用针对半乳糖凝集素-3的两种单克隆抗体。将一种大鼠单克隆抗小鼠半乳糖凝集素-3抗体包被在微量滴定板中孔的表面上并用作捕获抗体来结合样品中的半乳糖凝集素-3分子，而另一种小鼠单克隆抗人半乳糖凝集素-3抗体提供在溶液中并作为用于检测结合至捕获抗体的半乳糖凝集素-3分子示踪剂抗体而起作用。

对于人血清或血浆中mimecan的检测，使用夹心ELISA。对于捕获和检测抗原，将来自R&D Systems (目录号: AF 2660)的抗mimecan多克隆抗体的等分试样分别缀合至生物素和地高辛上。将链霉抗生物素包被的96孔微量滴定板用100 µl的在Ix PBS溶液中以0.2[mu]g/ml的生物素化的抗mimecan多克隆抗体孵育60 min。孵育后，将板用lx PBS + 0.02%Tween-20洗涤三次，用PBS + 2% BSA（牛血清白蛋白）封闭45 min并随后用Ix PBS + 0.02%Tween-20再次洗涤三次。将孔随后分别与100 µl 作为标准抗原的重组mimecan的系列稀释或与来自患者或对照个体的经稀释的血清或血浆样品（1:5于1x PBS + 1%BSA中）孵育1小时。mimecan结合后，将板用Ix PBS + 0.02% Tween-20洗涤三次。对于结合的mimecan的特异性检测，将孔用100 µl在Ix PBS + 1% BSA中0.2 µg/ml的地高辛化的抗mimecan多克隆抗体孵育45 min。随后，将板洗涤三次以去除未结合的抗体。在下一步中，将孔与100 µl的在lx PBS + 1% BSA中的75 mU/ml 抗地高辛-POD缀合物(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim, Germany, 目录号1633716)孵育30 min。将板随后用如上的相同洗涤缓冲液洗涤六次。对于检测抗原-抗体复合物，将孔与100 µl ABTS溶液(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim, Germany, 目录号11685767)孵育并在15 min后用ELISA读数器在405和492 nm处测量光密度（OD）。

对于测量人血清或血浆中的内皮他丁，使用可商购的夹心ELISA (QuantikineHuman Endostatin Immunoassay, 目录号DNSTO, R&D Systems)。根据由制造商提供的说明书进行测量。

使用来自Critical Diagnostics (San Diego, CA, USA)的Presage™ ST2测定确定sST2。所述测定是以96孔板形式的定量夹心单克隆ELISA，用于在血清或血浆中测量ST2。将稀释的血浆加载于抗ST2抗体包被的板的合适的孔中并温育规定的时间。一系列将试剂从板洗涤的步骤后，将另外的试剂添加并随后洗除，最后将分析物通过比色试剂的添加进行检测，且在450nm下分光光度测量产生的信号。

如WO2011/012268中所述测定生物标记物mimecan。

使用ELECSYS免疫测定检测sFlt1，所述测定使用分别对sFlt1特异的两种抗体。所述测试可以使用不同的Roche分析仪自动实施，其包括ELECSYS 2010和cobra e411和cobrae601。

通过应用酶促比色法来测定尿酸。在该酶促反应中，过氧化物在过氧化物酶（POD）、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺 (TOOS)和4-氨基比林存在的情况下反应以形成醌-二亚胺染料。形成的红色的强度与尿酸浓度成比例并且光度测定。

通过体外测试测量尿素，用于在Roche/Hitachi cobas c系统上的人血清、血浆和尿液中尿素/尿素氮的定量确定。测试可以使用不同的分析仪自动实施，其包括cobas c311和cobas c 501/502。测定是尿素酶和谷氨酸脱氢酶的动力学测定。通过尿素酶将尿素水解以形成铵和碳酸盐。在第二反应中，2-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶（GLDH）和辅酶NADH存在的情况下与铵反应以产生L-谷氨酸盐。在该反应中，对于每摩尔水解的尿素，2摩尔NADH被氧化为NAD⁺。NADH浓度减少的速率与样本中尿素浓度成正比，且光度测量。

通过适配于Roche/Hitachi自动分析仪的设置速率空白(rateblanked)且补偿的Jaffe方法测量血浆样品中的肌酸酐(还参见Foster-Swanson 等人, Reference IntervalStudies of the Rate-Blanked Creatinine/Jaffé Method on BM/Hitachi Systems inSix U. S. Laboratories.Clin Chem 1994; Abstract No. 361)。该测定基于使用对于人血清、血浆和尿中的肌酸酐定量测定设置速率空白且补偿的动力学体外测试。将氢氧化钠和苦味酸添加到样品中以开始形成肌酸酐-苦味酸复合物。在碱性溶液中，肌酸酐与苦味酸形成黄橙色复合物。光度测量颜色强度，其与肌酸酐浓度成正比。

使用来自Roche/R-Biopharm的酶促测定测量血浆样品中的D葡萄糖 (还参见Schmidt, Die enzymatische Bestimmung von Glucose and Fructose nebeneinander,Klinische Wochenzeitschrift, 1961, 39, 1244-1247。标记物在酶己糖激酶（HK）和腺苷5'-三磷酸（ATP）的存在下磷酸化为D-葡萄糖-6-磷酸，同时形成腺苷-5'-二磷酸（ATP）。在酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶存在的情况下，D-葡萄糖-6-磷酸通过NADP氧化为D-葡萄糖酸磷酸，并形成还原的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）。该反应中形成的NADPH的量对于D-葡萄糖的量是化学计量的。NADPH通过光吸收来测量。

血浆钠通过施加离子选择性电极（ISE）使用血浆样本通过离子选择性电极来测量，所述ISE采用某些膜材料的独特性质来发生电势（电动势，EMF）用于测量溶液中的离子(COBAS Integra 400; Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany, Assay:“ISEindirect Na-K-Cl for Gen.2”)。

使用Reflotron® Hemoglobin测定来测量血红蛋白（Hb）。测试基于通过亚铁氰化钾(III) (Fe²⁺至Fe³⁺)氧化血红蛋白为高铁血红蛋白。血红蛋白水平与颜色强度成比例并且在37℃下以567 nm波长进行测量。

HbA1c (糖化血红蛋白，糖血红蛋白)通过使用Roche体外测试来测量，所述测试允许在Roche/Hitachi cobas c系统上定量测定HbA1c (Assay:“Tina-quant HemoglobinA1c Gen.3”, Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany)。

前白蛋白通过使用Roche体外测试来测量，所述测试允许在Roche/Hitachi cobasc系统(ACN 710, ACN 8710)上定量测定人样品中的前白蛋白。测定为免疫比浊测定。人前白蛋白与特定抗血清形成沉淀，将其比浊测定。

胱抑素C通过使用用于定量体外测定人血清和血浆中的胱抑素C的免疫比浊测定在Roche自动临床化学分析仪上测量 (Assay:Tina-quant Cystatin C, RocheDiagnostics GmbH, Mannheim, Germany)。在该测定中，人胱抑素C与包被有抗胱抑素C抗体的乳胶颗粒凝集。在546 nm处比浊测定聚集体。

结论：

NT-proBNP或BNP与其他标记物和临床参数的组合可以用于监测目的并作为除目前标准治疗的疗法的指导，以调节并滴定(titrate)HF患者（稳定后慢性的或急性的HF）中的疗法，优选在其中HF是由于受损的收缩功能的那些患者中。这些标记物和参数优选是肌酸酐、eGFR（从肌酸酐水平计算的）、BUN、葡萄糖、HbA1c、hsCRP、胱抑素C、IL-6、前白蛋白、sFlt-1、尿酸、GDF-15、sST2、半乳糖凝集素-3、内皮他丁、Mimecan、IGFBP-7、骨桥蛋白、钠、血红蛋白和血细胞比容，以及心率和QRS持续时间。具体地，向NT-proBNP或BNP加入这些测量连同目前的标准治疗能够对已通过NT-proBNP指导但可能需要更加强化的疗法和更密切观察的HF患者进行进一步风险分层。因此，本发明通过考虑利钠肽与其他标记物和/或临床参数的组合来优化NT-proBNP之外的心力衰竭疗法指导。

Claims

1.鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，所述方法包括步骤

(a) 测量来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中至少一种选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的标记物的水平，和

(b) 将（a）中测量的一种或多种标记物的一种或多种水平与一种或多种参考水平进行比较。

2.根据权利要求1的方法，其进一步包括鉴定是否适于强化心力衰竭疗法的患者的步骤（c）。

3.权利要求1或2的方法，其中所述患者展示低于BNP型肽的参考水平的所述BNP型肽的水平，所述参考水平指示心力衰竭疗法的强化。

4.权利要求1-4中任一项的方法，其中

i) 至少一种标记物选自肌酸酐、尿素、葡萄糖和HbA1c（糖化血红蛋白），并且其中来自患者的样品中至少一种标记物的一种或多种水平高于所述标记物的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或其中来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种或多种水平低于所述标记物的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法，和/或

ii) 至少一种标记物选自钠、血红蛋白和血细胞比容，并且其中来自患者的样品中至少一种标记物的一种或多种水平低于所述标记物的参考水平指示患者适于强化心力衰竭疗法，和/或其中来自所述患者的样品中至少一种标记物的一种或多种水平高于所述标记物的参考水平指示患者不适于强化心力衰竭疗法。

5.鉴定适于强化心力衰竭疗法的患者的方法，所述方法包括步骤

(b) 测量来自所述患者的样品中至少一种选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的标记物的水平，

(c) 将（a）中测量的BNP型肽水平与一种或多种参考水平进行比较，和

(d) 将（b）中测量的至少一种标记物的一种或多种水平与一种或多种参考水平进行比较。

6.权利要求5的方法，其中

i）所述至少一种标记物选自肌酸酐、尿素、葡萄糖、和HbA1c（糖化血红蛋白），并且其中

ii）所述至少一种标记物选自钠、血红蛋白和血细胞比容，并且其中

7.优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的方法，所述方法包括步骤

(a) 测量来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的疗法的患者的样品中至少一种选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的标记物的水平，和

(b) 将（a）中测量的一种或多种标记物的一种或多种水平与一种或多种参考水平进行比较，由此优化BNP型肽指导的疗法。

8.预测具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险的方法，所述方法包括步骤

（a）测量来自具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中至少一种选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的标记物的水平，和

（b）将（a）中测量的一种或多种标记物的一种或多种水平与一种或多种参考水平进行比较。

9.根据权利要求1-8中任一项的方法，其中所述患者具有根据ACC/AHA分类分类为阶段B或C的心力衰竭，和/或其中所述患者具有根据NYHA分类的II或III类的心力衰竭。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中所述样品为血液、血清或血浆样品，和/或其中所述患者为人。

11.根据权利要求1-10中任一项的方法，其中所述心力衰竭疗法为药物心力衰竭疗法，具体地其中所述心力衰竭疗法包括施用至少一种选自利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β阻滞剂和醛固酮拮抗剂的药物。

12.权利要求11的方法，其中所述心力衰竭疗法包括β阻滞剂和ACE抑制剂的组合施用。

13.根据权利要求1-12中任一项的方法，其中所述强化心力衰竭疗法包括增加之前施用的药物的剂量、施用另外的一种或多种药物、尤其是施用具有不同于之前施用的药物的作用方式的另外的一种或多种药物、装置疗法、生活方式改变、及其组合。

14.i）选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的至少一种标记物，和/或ii）选自选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的标记物组的标记物的至少一种检测试剂，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗和/或死亡的风险的用途，或用于优化BNP型肽指导的心力衰竭疗法的用途。

15.BNP型肽组合选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的至少一种标记物，和/或特异性结合BNP型肽的检测试剂组合选自选自肌酸酐、尿素、钠、葡萄糖、HbA1c（糖化血红蛋白）、血红蛋白和血细胞比容的标记物组的标记物的至少一种检测试剂，在具有心力衰竭并接受BNP型肽指导的心力衰竭疗法的患者的样品中，用于鉴定患者适于强化心力衰竭疗法的用途，或用于预测患者遭受心脏失代偿、住院治疗或死亡的风险的用途。