CN105920368A - 一种抗肿瘤中药复方及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤中药复方及其制备方法，由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，65～75份；木通，25～35份；大血藤，45～55份；五倍子，20～30份；车前子，75～85份；巴戟天，35～45份；白头翁，5～15份；半边莲，20～30份；法半夏，25～35份；决明子，30～50份；吴茱萸和苦杏仁共50～70份，二者重量份之比为4～6:1。本发明提供的中药复方可以抑制肿瘤血管生成进而发挥抗肿瘤作用，可以开发成抗肿瘤的中药复方。本发明中药复方的这种作用可能与生药吴茱萸和苦杏仁的重量份之比有关。

Description

一种抗肿瘤中药复方及其制备方法
技术领域
本发明属于中药领域，涉及一种中药复方，具体涉及一种抗肿瘤中药复方及其制备方法。
背景技术
肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物。
根据新生物的细胞特性及对机体的危害性程度，又将肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类，而癌症即为恶性肿瘤的总称。要提请注意的是，癌症与癌是两个不同的概念，癌指的是上皮性的恶性肿瘤，如由大肠黏膜上皮形成的恶性肿瘤称为大肠黏膜上皮癌，简称大肠癌。由皮肤上皮形成的称皮肤上皮癌，简称皮肤癌等等。所以，若医生说某某人患的是癌症，即表明患者长的是恶性肿瘤；若说某某人患的是胃癌，意思是患者的胃黏膜上皮形成的癌症，若说患者得的是胃肉瘤，则表明这种恶性肿瘤不是由黏膜上皮细胞所形成的，可能由平滑肌细胞恶变引起，或是属于胃的恶性淋巴瘤等。但也可笼统地说他罹患了癌症。
抗癌新药的研发一直是研究热点，效果明显的中药复方寥寥无几。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种中药复方，用于抗肿瘤；
本发明的第二目的在于提供一种利用上述中药复方制备的中药活性成分浸膏；
本发明的第三目的在于提供一种抗肿瘤的中药复方制剂，含有上述的中药活性成分浸膏和药学上可以接受的辅料。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种抗肿瘤的中药复方，由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，65～75份；木通，25～35份；大血藤，45～55份；五倍子，20～30份；车前子，75～85份；巴戟天，35～45份；白头翁，5～15份；半边莲，20～30份；法半夏，25～35份；决明子，30～50份；吴茱萸和苦杏仁共50～70份，二者重量份之比为4～6:1。
进一步地，所述的中药复方由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，二者重量份之比为5:1。
进一步地，所述中药复方由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，65份；木通，25份；大血藤，45份；五倍子，20份；车前子，75份；巴戟天，35份；白头翁，5份；半边莲，20份；法半夏，25份；决明子，30份；吴茱萸和苦杏仁共50份，二者重量份之比为4:1。
进一步地，所述中药复方由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，75份；木通，35份；大血藤，55份；五倍子，30份；车前子，85份；巴戟天，45份；白头翁，15份；半边莲，30份；法半夏，35份；决明子，50份；吴茱萸和苦杏仁共70份，二者重量份之比为6:1。
一种抗肿瘤的中药活性成分浸膏，由上述中药复方制备而成，包括如下步骤：取配方量的生药用65～85％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩，喷雾干燥得浸膏粉。
进一步地，取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液。
进一步地，浓缩至密度为1.20～1.30。
进一步地，每克浸膏粉相当于生药4～6g。
一种抗肿瘤的中药复方制剂，含有上述中药活性成分浸膏和药学上可以接受的辅料，按照常规方法制备成制剂。
进一步地，所述制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、注射液、口服液。
本发明的优点：
本发明提供的中药复方经药理实验证明可以抗肿瘤；本发明提供的中药活性成分浸膏通过本发明提供的中药复方经提取、浓缩制备而成，可以显著抗肿瘤；本发明提供的中药复方制剂含有本发明提供的中药活性成分浸膏和药学上可以接受的辅料载体，可以用于抗肿瘤。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。本发明中涉及的生药基源与2015版中国药典一致。
实施例1：活性成分浸膏的制备
生药配方：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，二者重量份之比为5:1。
制备方法：取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.25，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药5g。
实施例2：活性成分浸膏的制备
生药配方：天麻，65份；木通，25份；大血藤，45份；五倍子，20份；车前子，75份；巴戟天，35份；白头翁，5份；半边莲，20份；法半夏，25份；决明子，30份；吴茱萸和苦杏仁共50份，二者重量份之比为4:1。
制备方法：取配方量的生药用65％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.20，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药4g。
实施例3：活性成分浸膏的制备
生药配方：天麻，75份；木通，35份；大血藤，55份；五倍子，30份；车前子，85份；巴戟天，45份；白头翁，15份；半边莲，30份；法半夏，35份；决明子，50份；吴茱萸和苦杏仁共70份，二者重量份之比为6:1。
制备方法：取配方量的生药用85％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.30，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药6g。
实施例4：活性成分浸膏的制备
生药配方：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，二者重量份之比为4:1。
制备方法：取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.25，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药5g。
实施例5：活性成分浸膏的制备
生药配方：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，二者重量份之比为6:1。
制备方法：取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.25，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药5g。
实施例6：实施例1对比，吴茱萸和苦杏仁重量份之比为3:1
生药配方：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，二者重量份之比为3:1。
制备方法：取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.25，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药5g。
实施例7：实施例1对比，吴茱萸和苦杏仁重量份之比为7:1
生药配方：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，二者重量份之比为7:1。
制备方法：取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩至密度为1.25，喷雾干燥得浸膏粉，每克浸膏粉相当于生药5g。
实施例8：抗肿瘤作用
1、材料与方法
人脐静脉血管内皮细胞系由湖北医药学院附属太和医院妇产科取得新鲜新生儿脐带，采用酶消化法分离人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)，传代培养，HUVECs 2～4代用于实验。
1.2试剂与样品
分别按实施例1～7方法制备活性成分浸膏1～7。酸性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、MTT：Sigma公司；肝素、胸苷：Sigma公司；胎牛血清(FBS)、M199：Gibco公司；DMEM/F12培养基：Invitrogen生命技术有限公司；0.25％胰蛋白酶：Invitrogen生命技术有限公司；EDTA：美国AMRESCO公司；二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)：美国SIGMA公司；青链霉素混合液：美国AMRESCO公司；链霉素：上海先锋药业公司。
1.3仪器
10mm圆形细胞培养皿及T-25cm2细胞培养瓶：康宁生命科学有限公司；6孔、12孔、24孔及96孔细胞培养板：北京赛因坦科技有限公司；15ml、50ml离心管、枪头、细胞计数板、盖玻片：康宁生命科学有限公司；酶联免疫测定仪：芬兰Thermo Labsystems公司；倒置光学显微镜及拍照系统：日本Olympus Corporation Transwell小室、1.5ml EP管、2ml冻存管：Coster公司；37℃恒温5％CO2细胞培养箱：美国Thermo Fisher公司；超净工作台：上海博迅实业公司；常温台式离心机：Beckman Coulter商贸有限公司；-4℃、-20℃恒温冰箱：西门子股份公司；电热恒温水浴箱：北京中西远大公司纯水机：瑞士Millipore公司；电子天平：上海天平仪器技术有限公司；液氮存储罐：美国Thermo Scientific公司；蛋白电泳及转移设备：美国Bio-Rad公司；移液器：美国Thermo Electron公司。
1.4实验分组
①对照组(control组)：用无血清、无生长因子的M199基础培养液。
②VEGF组(模型组)：在M199培养基中加入VEGF(20ng/ml)。
③活性成分浸膏1组：在VEGF组基础上加入活性成分浸膏1(150μg/ml)。
④活性成分浸膏4组：在VEGF组基础上加入活性成分浸膏4(150μg/ml)。
⑤活性成分浸膏5组：在VEGF组基础上加入活性成分浸膏5(150μg/ml)。
⑥活性成分浸膏6组：在VEGF组基础上加入活性成分浸膏6(150μg/ml)
⑦活性成分浸膏7组：在VEGF组基础上加入活性成分浸膏7(150μg/ml)
1.5MTT法检测HUVECs增殖
1.5.1所需试剂及其配制
①PBS缓冲液：NaCl 8.0g、KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.89g、KH2PO4 0.226g、双蒸水800ml，定容至1000ml。调整pH值至7.4，4℃冰箱保存备用。
②MTT溶液：电子天平称取100mg MTT，加入20mlPBS溶液中搅拌溶解，即达到目的浓度5mg/ml；待MTT完全溶解后，经0.22μm硝化纤维素滤膜过滤除菌，最后放置在锡箔纸包裹的避光环境中于4℃冰箱内保存(2周内有效)。
③无水二甲基亚砜(DMSO)。
1.5.2操作步骤
①取对数生长期HUVECs，调节细胞浓度为1×105个/ml后接种到96孔板上，每孔100μl，细胞贴壁后所有细胞换液为未添加aFGF的5％FBSM199基础培养液，放置于37℃，5％CO2培养箱中继续培养2天后按分组实验进行实验。
②除control组外，其余各实验组均加入VEGF(20ng/ml)，活性成分浸膏1～7组在加入VEGF基础上再加入活性成分浸膏1～7(150μg/ml)，同时设置凋零组(全为培养液不含细胞)，每组设5个复孔。
③37℃，5％CO2恒温箱培养24小时后，每孔加入5mg/mlMTT10μl，继续培养4h。
④弃上清，每孔加入DMSO 100μl，摇床混匀15min。
⑤在酶联免疫吸附试验检测仪上490nm处测定各孔光吸收值(OD值)，记录各组所得OD值结果。
1.6统计学处理
文中数据均采用均数±标准差差(x±s)表示。两组间数据的差异统计分析用student’s t检验或ANOVA进行比较分析，spss17.0软件计算P值，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2、实验结果
2.1对VEGF诱导的HUVECs增殖的影响
加入VEGF孵育24h后，VEGF明显促进HUVECs的增殖，VEGF组OD值较control组相比明显增高(P<0.01)。活性成分浸膏1～5明显抑制HUVECs增殖，与VEGF组比均有显著差异(P<0.01)。活性成分浸膏6、7无明显抑制作用，与VEGF组比无显著差异(P＞0.05)。结果见下表。
组别 OD值
正常对照组 0.170±0.03
VEGF组 0.435±0.05
活性成分浸膏1组 0.188±0.03
活性成分浸膏4组 0.195±0.02
活性成分浸膏5组 0.198±0.04
活性成分浸膏6组 0.424±0.05
活性成分浸膏7组 0.428±0.05
活性成分浸膏2、3与活性成分浸膏4、5作用效果基本一致。
通过抑制血管内皮细胞的增殖可以抑制肿瘤血管生成，进而发挥抗肿瘤作用。活性成分浸膏1～5均可以显著抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖，活性成分浸膏6、7不能明显抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖。
上述试验表明，本发明提供的中药复方可以抑制肿瘤血管生成进而发挥抗肿瘤作用，可以开发成抗肿瘤的中药复方。本发明中药复方的这种作用可能与生药吴茱萸和苦杏仁的重量份之比有关。
实施例9：颗粒剂的制备
按实施例1方法先制得活性成分浸膏，按其与赋形剂重量比为1:8的比例加入赋形剂，制成颗粒剂。
实施例10：片剂的制备
按实施例1方法先制得活性成分浸膏，按其与赋形剂重量比为1:8的比例加入赋形剂，制粒压片。
实施例11：注射液的制备
按实施例1方法先制得活性成分浸膏，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
实施例12：口服液的制备
按实施例1方法先制得活性成分浸膏，按常规口服液制法制成口服液。
实施例13：胶囊剂的制备
按实施例1方法先制得活性成分浸膏，按其与赋形剂重量比为1:8的比例加入赋形剂，制成胶囊剂。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。

Claims (10)

1.一种抗肿瘤的中药复方，其特征在于，由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，65～75份；木通，25～35份；大血藤，45～55份；五倍子，20～30份；车前子，75～85份；巴戟天，35～45份；白头翁，5～15份；半边莲，20～30份；法半夏，25～35份；决明子，30～50份；吴茱萸和苦杏仁共50～70份，吴茱萸和苦杏仁重量份之比为4～6:1。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药复方，其特征在于，由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，70份；木通，30份；大血藤，50份；五倍子，25份；车前子，80份；巴戟天，40份；白头翁，10份；半边莲，25份；法半夏，30份；决明子，40份；吴茱萸和苦杏仁共60份，吴茱萸和苦杏仁重量份之比为5:1。
3.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药复方，其特征在于，由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，65份；木通，25份；大血藤，45份；五倍子，20份；车前子，75份；巴戟天，35份；白头翁，5份；半边莲，20份；法半夏，25份；决明子，30份；吴茱萸和苦杏仁共50份，吴茱萸和苦杏仁重量份之比为4:1。
4.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药复方，其特征在于，由如下重量份比例的生药制备而成：天麻，75份；木通，35份；大血藤，55份；五倍子，30份；车前子，85份；巴戟天，45份；白头翁，15份；半边莲，30份；法半夏，35份；决明子，50份；吴茱萸和苦杏仁共70份，吴茱萸和苦杏仁重量份之比为6:1。
5.一种抗肿瘤的中药活性成分浸膏，由如权利要求1～4任一所述的中药复方制备而成，其特征在于，包括如下步骤：取配方量的生药用65～85％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液，浓缩，喷雾干燥得浸膏粉。
6.根据权利要求5所述的中药活性成分浸膏，其特征在于：取配方量的生药用75％乙醇热回流提取2～3次，合并提取液。
7.根据权利要求5所述的中药活性成分浸膏，其特征在于：浓缩至密度为1.20～1.30。
8.根据权利要求5所述的中药活性成分浸膏，其特征在于：每克浸膏粉相当于生药4～6g。
9.一种抗肿瘤的中药复方制剂，其特征在于：含有如权利要求5～8任一所述的中药活性成分浸膏和药学上可以接受的辅料，按照常规方法制备成制剂。
10.根据权利要求9所述的中药复方制剂，其特征在于：所述制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、注射液、口服液。
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