CN105899231A

CN105899231A - 用于在具有升高水平的tlr4配体和其它生物标记的患者中诊断和治疗病症的方法和组合物

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Publication number: CN105899231A
Application number: CN201480070143.8A
Authority: CN
Inventors: C.德敏; L.商; E.蒙内; G.埃尔森; E.哈特雷尔
Original assignee: Novimmune SA
Current assignee: Novimmune SA
Priority date: 2013-10-22
Filing date: 2014-10-22
Publication date: 2016-08-24
Also published as: US20170298140A1; WO2015059168A1; JP2021006592A; US9688769B2; US20150110811A1; AU2020230333A1; JP2016539925A; AU2014338991A1; CA2928317A1; US10556960B2; AU2014338991B2; EP3060250A1; JP2019048895A

Abstract

本发明总体上涉及用于诊断和治疗与Toll‑样受体4 (TLR4)配体和其它生物标记的水平升高有关的病症的方法和组合物。本发明还涉及使用干扰或者以其它方式拮抗TLR4信号传导的药剂，包括中和性抗‑TLR4抗体，治疗与TLR4配体和其它生物标记的水平升高有关的病症、延迟其进展或者以其它方式改善其症状的方法。

Description

用于在具有升高水平的TLR4配体和其它生物标记的患者中诊断和治疗病症的方法和组合物

相关申请

本申请要求2013年10月22日提交的美国临时申请号61/894,042的权益。该申请的内容通过引用以其整体结合到本文中。

发明领域

本发明总体上涉及用于诊断和治疗与升高水平的Toll-样受体4 (TLR4)配体和其它生物标记有关的病症的方法和组合物。本发明还涉及使用干扰或者以其它方式拮抗TLR-4信号传导的药剂，包括中和性抗-TLR4抗体，在具有升高水平的TLR4配体和其它生物标记的患者中治疗病症、延迟其进展或者以其它方式改善其症状的方法。

发明背景

Toll受体，首先在果蝇(Drosophila)中发现，是具有在蛋白的胞外部分中的富含亮氨酸重复序列(LRR)和一个或者两个富含半胱氨酸结构域的I型跨膜蛋白。果蝇Toll受体的哺乳动物同源物被称为“Toll-样受体” (TLR)。TLR通过识别微生物颗粒和针对这些微生物颗粒源激活免疫细胞而在先天性免疫中起作用。在人中，已经鉴定了11种Toll-样受体，TLR1-11，并通过它们的胞内结构域与IL-1受体的胞内结构域的同源性和通过胞外富含亮氨酸重复序列的存在进行表征。不同类型的TLR被不同类型的微生物颗粒激活。例如，TLR4主要被脂多糖(LPS)激活。TLR4已经显示与辅助蛋白骨髓样分化蛋白-2 (MD-2)有关。已经发现该蛋白与TLR4直接相互作用，和MD-2具有能够翻译后修饰TLR4以及促进其运输至细胞表面的能力。TLR4和MD-2在细胞表面上形成复合物。

TLR4牵涉到许多病症；并且正在开发抗-TLR4剂作为治疗剂。并非所有的患者对目前的护理疗法标准有反应。因此，对用于鉴定可能为特定治疗(例如用特定抗-TLR4疗法治疗)的候选者的患者的组合物和方法存在需要。

发明简述

本文提供的组合物和方法可用于鉴定或者以其它方式精修患有病症的患者群，其中所述患者具有升高水平的一种或多种TLR4配体或者其它TLR4-相关生物标记。这些患者被鉴定为用干扰或者以其它方式拮抗TLR4信号传导和中和TLR4的至少一种生物活性(单独或者在辅助蛋白MD-2的情况下作为TLR4/MD-2复合物)的药剂(例如，抗体或者其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂和其衍生物)治疗的合适的候选者。

在患有或者疑似患有病症的一些患者中，流体和其它生物样品包含升高水平的TLR4配体和其它生物标记。这些TLR4配体和其它生物标记刺激细胞产生促-炎性细胞因子。然而，本文表明，使用干扰、抑制、降低或者以其它方式拮抗TLR4信号传导的抗-TLR4拮抗剂，例如中和性抗-TLR4抗体或者其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂和其衍生物，在来自对一种或多种TLR4配体和/或其它生物标记显示升高表达水平的患者的样品中阻断该刺激。因此，所述组合物和方法可通过给予对一种或多种TLR4配体和/或其它生物标记显示升高表达水平的患者抗-TLR4拮抗剂，例如中和性抗-TLR4抗体或者其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂和其衍生物，用于治疗病症、延迟其进展或者以其它方式改善其症状，所述病症依赖于TLR4信号传导、异常(例如升高)的TLR4配体表达和/或活性、异常的促-炎性细胞因子产生和/或其组合，受其驱动，与其有关或者以其它方式受其影响。可能是用抗-TLR4拮抗剂，例如中和性抗-TLR4抗体例如本文描述的那些治疗的合适的候选者的患者，通过检测一种或多种TLR4配体或者其它生物标记的水平来鉴定。在一些实施方案中，不具有升高水平的一种或多种TLR4配体或者其它生物标记的患者可仍用抗-TLR4拮抗剂，包括本文描述的任何中和性抗-TLR4抗体或者其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂和其衍生物治疗。

用于鉴定可能候选者的这些方法中的合适TLR4配体和其它生物标记包括抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、瓜氨酸化蛋白、在免疫复合物中的瓜氨酸化蛋白(例如在与IgG蛋白(cFb-IC)或者IgE蛋白的免疫复合物中的瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb))、HMGB1、S100A8/A9、生腱蛋白C、LPS、热休克蛋白(HSP)、纤连蛋白、透明质烷、Der P2、呼吸合胞病毒F (RSV) F蛋白、表面活性蛋白A、柯萨奇病毒B4 (CSV B4)、CXCL10、抵抗素、胎球蛋白A、饱和脂肪酸(SFA)、二聚糖、修饰的低密度脂蛋白(mLDL)、高级糖化末端产物(AGE)和其组合。在一些实施方案中，瓜氨酸化蛋白是瓜氨酸化纤维蛋白原、瓜氨酸化纤维蛋白、瓜氨酸化波形蛋白、瓜氨酸化组蛋白(例如瓜氨酸化组蛋白2b)、瓜氨酸化烯醇酶或者瓜氨酸化趋化因子(例如瓜氨酸化CXCL10)。在一些实施方案中，检测TLR4配体和/或其它生物标记的组合，例如检测至少两种TLR4配体和/或其它生物标记，检测至少三种TLR4配体和/或其它生物标记，检测至少四种TLR4配体和/或其它生物标记，检测至少五种TLR4配体和/或其它生物标记，检测至少六种TLR4配体和/或其它生物标记，检测至少八种TLR4配体和/或其它生物标记，检测至少九种TLR4配体和/或其它生物标记，或者检测至少十种或更多种TLR4配体和/或其它生物标记。

在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是cFb-IC。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是HMGB1。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9和ACPA的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、cFb-IC和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA、HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、cFb-IC、ACPA和HMGB1的组合。

在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是对暴露于抗-TLR4剂例如抗-TLR4 mAb例如NI-0101的单核细胞反应的预测物。在一些实施方案中，对抗-TLR4治疗的单核细胞反应的预测物是S100A8/A9。在一些实施方案中，对抗-TLR4治疗的单核细胞反应的预测物是ACPA。在一些实施方案中，对抗-TLR4治疗的单核细胞反应的预测物是HMGB1。在一些实施方案中，对抗-TLR4治疗的单核细胞反应的预测物是cFb-IC。

在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是对暴露于抗-TLR4剂例如抗-TLR4 mAb例如NI-0101的成纤维细胞反应的预测物。在一些实施方案中，对抗-TLR4治疗的成纤维细胞反应的预测物是cFb-IC。

在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是对暴露于抗-TLR4剂例如抗-TLR4 mAb例如NI-0101的单核细胞和成纤维细胞反应的预测物。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是cFb-IC。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是HMGB1。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9和ACPA的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、cFb-IC和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA、HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、cFb-IC、ACPA和HMGB1的组合。

具有升高水平的一种或多种这些标记的患者被鉴定为用本文描述的一种或多种抗-TLR4拮抗剂例如中和性抗-TLR4抗体治疗的合适的候选者。如本文所用，词语“升高的表达水平”是指高于在来自未患有或者未疑似患有病症的患者的样品或者其它对照样品中TLR4配体或者其它生物标记的基线表达水平的表达水平。通过非限制性实例的方式，几种TLR4配体的基线水平显示在图2A-2E中。例如，ACPA表达的基线水平小于约2000 Ul/ml，例如小于约1500 Ul/ml、小于约1000 Ul/ml和/或小于约750 Ul/ml (图2A、表1)。cFb-IC的基线水平，当使用标准ELISA测量时(用50 µL/孔的1µg/mL的小鼠抗-人瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)抗体3D1 (抗-cFb，克隆3D1, # AM32004PU-N, Acris)/PBS包被板；添加50 µL的1/10稀释的(在PBS中)来自RA患者的滑液样品；检测与抗-人 IgG-Fc-HRP的结合(SIGMA, #A0170), 1/10000在PBS中，在所有孔中50µL/孔，接着50 µL/孔的TMB)，为例如1.5或者更小的OD 450nM读数，例如1.0或者更小的OD 450nM读数，和/或0.5或者更小的OD 450nM读数(图2B、表1)。HMGB1的基线水平小于约100 ng/ml，例如小于约75 ng/ml、小于约50 ng/ml和/或小于约25 ng/ml (图2C、表1)。S100A8/A9的基线水平小于约500 ng/ml，例如小于约400 ng/ml、小于约300 ng/ml、小于约200 ng/ml和/或小于约100 ng/ml (图2D、表1)。生腱蛋白C的基线水平小于约100 ng/ml，例如小于约75 ng/ml、小于约50 ng/ml、小于约25 ng/ml和/或小于约10 ng/ml (图2C、表1)。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记的升高的表达水平是显著的升高水平。

与各标记的截止水平相比，根据标记的检出水平，具有一定检测水平的一种或多种这些标记的患者被鉴定为“有反应者”或者“无反应者”。通过非限制性实例的方式，几种TLR4配体的截止水平显示在实施例5中。例如，对于滑液样品中的单核细胞反应评分，具有大于或者等于387 ng/ml的检测水平的S100A8/A9的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有小于387 ng/ml的检测水平的S100A8/A9的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有大于或者等于1000 Ul/ml的检测水平的ACPA的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的‘‘有反应者”，而对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有小于1000 Ul/ml的检测水平的ACPA的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有大于或者等于50 ng/ml的检测水平的HMGB1的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有小于50 ng/ml的检测水平的HMGB1的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有大于或者等于1.2的检测的cFb-IC OD450nm读数的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的单核细胞反应评分具有小于1.2的检测的cFb-IC OD450nm读数的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。

对于滑液样品中的成纤维细胞反应评分具有大于或者等于1.2的检测的cFb-ICOD 450nm读数的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的成纤维细胞反应评分具有小于1.2的检测的cFb-IC OD450nm读数的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的成纤维细胞反应评分具有大于或者等于1000 Ul/ml的检测水平的ACPA的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的成纤维细胞反应评分具有小于1000 Ul/ml的检测水平的ACPA的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。

对于滑液样品中组合的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)具有大于或者等于0.55的检测的cFb-IC OD 450nm读数的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的cMFRS具有小于0.55的检测的cFb-IC OD 450nm读数的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的cMFRS具有大于或者等于330 Ul/ml的检测水平的ACPA的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的cMFRS具有小于330 Ul/ml的检测水平的ACPA的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的cMFRS具有大于或者等于45 ng/ml的检测水平的HMGB1的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的cMFRS具有小于45 ng/ml的检测水平的HMGB1的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。对于滑液样品中的cMFRS具有大于或者等于387 ng/ml的检测水平的S1008A8/A9的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的cMFRS具有小于387 ng/ml的检测水平的S1008A8/A9的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。

对于滑液样品中组合的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)具有大于或者等于0.55的检测的cFb-IC OD 450nm读数和对于滑液样品中的cMFRS具有大于或者等于387ng/ml的检测水平的S1008A8/A9的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的“有反应者”，而对于滑液样品中的cMFRS具有小于0.55的检测的cFb-ICOD 450nm读数和对于滑液样品中的cMFRS具有小于387 ng/ml的检测水平的S1008A8/A9的患者被鉴定为对用抗-TLR4疗法治疗的“无反应者”。

所述样品为例如血液或者血液组分，例如血清、血浆。在一些实施方案中，样品为尿。在一些实施方案中，所述流体为滑液。在一些实施方案中，所述流体为支气管肺泡液。在一些实施方案中，所述流体为脑脊液。在一些实施方案中，所述流体为唾液。

除了检测一种或多种这些TLR4配体和/或生物标记的水平之外，用抗-TLR4拮抗剂治疗的合适的患者还可通过评价许多其它生物和临床参数的任一种来鉴定，所述参数将改进用于鉴定或者以其它方式精修患者群的生物标记的灵敏度和特异性。或者，这些其它生物和临床参数可单独用作鉴定为用抗-TLR4拮抗剂或者其它合适的疗法治疗的合适候选者的患者的工具。通过非限制性实例的方式，这些生物和临床参数包括以下任一种：类风湿因子水平、C反应蛋白(CRP)水平、血液细胞计数、血细胞亚群中TLR4受体的存在、TLR4多态性、人白细胞抗原(HLA)多态性、肽基精氨酸脱亚氨酶(PAD)酶和PAD酶多态性、Fcγ受体IIa(FcγIIa)多态性、MD-2水平、可溶性CD14水平、基线患者人口统计学数据(例如体重指数(BMI)、性别、年龄等)和/或患者病史(例如诊断时的失能评价表(DAS 28)、治疗开始时的DAS 28、疾病持续时间、疾病发生时的年龄、对基于DAS28的先前治疗的反应、美国风湿病学会(ACR)和/或欧洲风湿病防治联合会(EULAR)反应标准等)。

可用于本发明的组合物和方法的病症包括其中TLR4表达和/或活性异常例如升高以及TLR4/MD-2活化异常和/或TLR4配体活性异常(例如，促-炎性细胞因子产生的刺激异常例如IL-6、TNFα和/或IL-8产生的刺激异常)的任何病症。例如，一些TLR4配体被认为与多种病症有关。通过非限制性实例的方式，LPS已知与病症例如脓毒症、急性肺损伤和/或RA有关；生腱蛋白C已知与病症例如关节炎、肝脏和/或心脏缺血性再灌注有关；HMGB1已知与病症例如RA、骨关节炎(OA)、缺血/再灌注、1型糖尿病、胰岛移植、狼疮和/或脓毒症有关；S100A8/A9已知与病症例如RA、OA、青少年特发性关节炎(JIA)、糖尿病、移植排斥、狼疮、动脉粥样硬化、脓毒症和/或癌症有关；瓜氨酸化纤维蛋白原已知与病症例如RA和动脉粥样硬化有关；ACPA已知与病症例如RA、银屑病关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、斯耶格伦氏综合征、阿尔茨海默病和/或动脉粥样硬化有关。

通过非限制性实例的方式，本文提供的方法和组合物合适用于诊断和/或治疗病症例如自身免疫和/或炎性病症。通过非限制性实例的方式，合适的自身免疫和/或炎性病症包括与TLR4信号传导异常有关的自身免疫和/或炎性病症、与TLR4配体表达和/或活性异常例如升高有关的自身免疫和/或炎性病症、与促-炎性细胞因子产生异常有关的自身免疫和/或炎性病症和其组合。

在一些实施方案中，所述病症是关节炎病况，通过非限制性实例的方式，包括RA、骨关节炎(OA)、银屑病关节炎或者青少年特发性关节炎(JIA)。在一些实施方案中，病症是类风湿性关节炎(RA)。在一些实施方案中，病症是癌症。在一些实施方案中，病症是炎性肠病(IBD)。在一些实施方案中，病症是动脉粥样硬化。在一些实施方案中，病症与缺血性再灌注(通过非限制性实例的方式，包括肝脏和/或心脏缺血/再灌注)有关。在一些实施方案中，病症是脓毒症。在一些实施方案中，病症是急性肺损伤。在一些实施方案中，病症是1型糖尿病。在一些实施方案中，病症与胰岛移植有关。在一些实施方案中，病症是狼疮。在一些实施方案中，病症与移植排斥或者与细胞、组织和/或器官移植物有关的其它病症有关。在一些实施方案中，病症是系统性红斑狼疮(SLE)。在一些实施方案中，病症是斯耶格伦氏综合征。在一些实施方案中，病症是阿尔茨海默病。

一旦患者被鉴定为具有升高水平的一种或多种TLR4配体或者其它生物标记，则他们用抗TLR4拮抗剂治疗。例如，抗TLR4拮抗剂是中和性抗TLR4抗体或者其免疫活性(例如抗原结合)片段。合适的中和性抗TLR4抗体包括本文描述的任何抗-TLR4抗体和具有对Fc受体(FcR)增加的亲和力和/或通过与FcR相互作用对细胞表面结合增加的亲合力的其它抗体。

在一些实施方案中，结合TLR4的抗体或者其免疫活性片段包含可变重链互补决定区1 (VH CDR1)，其包含与氨基酸序列GGYSWH (SEQ ID NO: 1)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列；VH CDR2区，其包含与氨基酸序列YIHYSGYTDFNPSLKT (SEQ ID NO: 2)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列；和VH CDR3区，其包含与氨基酸序列KDPSDAFPY (SEQ ID NO: 3)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列；可变轻链互补决定区1(VL CDR1)区，其包含与氨基酸序列RASQSISDHLH (SEQ ID NO: 4)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列；VL CDR2区，其包含与氨基酸序列YASHAIS(SEQ ID NO: 5)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列；和VL CDR3区，其包含与氨基酸序列QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合TLR4的抗体或者其免疫活性片段还包含与重链可变氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列和与轻链可变氨基酸序列EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 8)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合TLR4的抗体或者其免疫活性片段还包含与重链氨基酸序列MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 9)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列和与轻链氨基酸序列MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 10)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段是或者源自2005年6月14日提交和作为WO 20071110678公布的PCT/IB2005/004206中描述的抗体，其内容通过引用以其整体结合到本文中。

在一些实施方案中，抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段是或者源自2008年5月14日提交和作为WO 2009/101479公布的PCT申请PCT/IB2008/003978中描述的抗体，其内容通过引用以其整体结合到本文中。

在一些实施方案中，抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段是或者源自称为HTA125的抗-TLR4抗体，其描述于例如Shimazu等, J. Exp. Med., val. 189:1777-1782 (1999);Nijhuis等, Clin Diag. Lab. Immunol., val. 10(4): 558-63 (2003);和Pivarcsi等,Intl. Immunopharm., vol. 15(6):721-730 (2003)，其各自的内容通过引用以其整体结合到本文中。

在一些实施方案中，抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段是或者源自结构域抗体，例如2009年5月15日提交和作为WO 2009/13848公布的PCT申请PCT/EP2009/055926中描述的结合TLR4的结构域抗体，其内容通过引用以其整体结合到本文中。

在一些实施方案中，抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段是或者源自识别细胞表面上表达的人和/或猕猴(cynomolgus monkey) TLR4/MD-2受体的单克隆抗体。所述抗体能够阻断，例如中和，受体活化，和随后胞内信号传导诱导的TLR4配体，例如LPS或者本文描述的任何其它TLR4配体。本发明的抗体包括结合人和猕猴TLR4/MD-2受体复合物和还不依赖于MD-2的存在而结合TLR4的抗体。

在一些实施方案中，抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段干扰或者以其它方式拮抗经过细胞表面上表达的人和/或猕猴TLR4/MD-2受体的信号传导，例如通过阻断受体活化和随后LPS诱导的胞内信号传导。这些实施方案的示例性的单克隆抗体包括：1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1C12、1D10、1E11、1E11 N103D、1G12、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4、1E11.E5、1E11.C2E1、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5。

这些抗体具有不同的特异性。一些抗体显示对人和猕猴TLR4两者和/或人和猕猴TLR4/MD-2受体复合物两者的特异性，和它们已经表明抑制受体活化和随后通过LPS的胞内信号传导。例如，1C12、1E11、1E11 N103D、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.C2E1、1E11.C2E2、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5不依赖于人或者猕猴MD-2的存在而结合人和猕猴TLR4两者。1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1D10和1G12不依赖于猕猴MD-2的存在仅结合猕猴TLR4。1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4和1E11.E5不依赖于人MD-2的存在仅结合人TLR4。

本发明的人源化抗体包含具有本文所示的氨基酸序列的重链可变区。本发明的人源化抗体包含具有本文所示的氨基酸序列的轻链可变区。

三个重链CDR包括与选自G(F/Y)PI(R/G/W)(Y/F/G)GYS (SEQ ID NO: 14)、GYSITGGYS (SEQ ID NO: 15)、GFPIRYGYS (SEQ ID NO: 16)、GYPIRFGYS (SEQ ID NO:17)、GYPIRHGYS (SEQ ID NO: 18)、GFPIGQGYS (SEQ ID NO: 19)、GYPIWGGYS (SEQ ID NO:20)和GYPIGGGYS (SEQ ID NO: 21)的可变重链互补决定区1 (VH CDR1，在本文亦称为CDRH1)氨基酸序列；IHYSGYT (SEQ ID NO: 22)的可变重链互补决定区2 (VH CDR2，在本文亦称为CDRH2)氨基酸序列；和选自ARKDSG(N/Q/D/E)X₁X₂PY. (SEQ ID NO: 23)其中X₁和X₂各自独立地是任何疏水氨基酸、ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)、ARKDSGRLLPY (SEQ IDNO: 25)、ARKDSGKWLPY (SEQ ID NO: 26)、ARKDSGHLMPY (SEQ ID NO: 27)、ARKDSGHNYPY(SEQ ID NO: 28)、ARKDSGKNFPY (SEQ ID NO: 29)、ARKDSGQLFPY (SEQ ID NO: 30)、ARKDSGHNLPY (SEQ ID NO: 31)、ARKDSGDYFPY (SEQ ID NO: 32)和ARKDSGRYWPY (SEQ IDNO: 33)的可变重链互补决定区3 (VH CDR3，在本文亦称为CDRH3)氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列。三个轻链CDR包括与QSISDH(SEQ ID NO: 34)的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1，在本文亦称为CDRL1)氨基酸序列；YAS (SEQ ID NO: 35)的可变轻链互补决定区2 (VL CDR2，在本文亦称为CDRL2)氨基酸序列；和选自QQG(Y/N)(D/E)(F/Y)PXT (SEQ ID NO: 36)其中X是任何疏水氨基酸、QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)、QQGNDFPVT (SEQ ID NO: 37)、QQGYDEPFT (SEQ ID NO: 38)、QQGYDFPFT(SEQ ID NO: 39)、QQGYDYPFT (SEQ ID NO: 40)和QQGYEFPFT (SEQ ID NO: 41)的可变轻链互补决定区3 (VL CDR3，在本文亦称为CDRL3)氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更多同一性的氨基酸序列。所述抗体结合人和猕猴TLR4/MD-2复合物，当未与人和猕猴MD-2复合时结合人和猕猴TLR4，结合人TLR4/MD-2复合物，当未与人MD-2复合时结合人TLR4，结合猕猴TLR4/MD-2复合物或者当未与猕猴MD-2复合时结合猕猴TLR4。

本发明的抗-TLR4抗体还包括包含与本文所示的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更多同一性的重链可变氨基酸序列和/或与本文所示的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更多同一性的轻链可变氨基酸的抗体。

在一些实施方案中，本文描述的抗-TLR4抗体还包括在例如Fc区或者其FcR结合片段内的至少一个特定的氨基酸置换(例如具有在IgG恒定结构域内的氨基酸置换的多肽)，以致与未改变的抗体相比，修饰的抗体引起抗原-依赖性效应器功能的改变，同时保留与抗原结合。例如，改变的抗体引起阻止促炎性介质释放。在优选的实施方案中，改变的抗体是人的，并具有IgG1同种型。

本发明的抗-TLR4抗体包括改变的抗体，其中抗体的Fc部分的恒定区中的至少一个氨基酸残基被修饰。例如，Fc部分的CH2结构域中至少一个氨基酸被替换为不同的残基，即氨基酸置换。在本文所述的改变的抗体中，与未改变的抗体相比，对应于残基325、326和328的一个或多个氨基酸残基被置换为不同的残基。在γ重链中残基的编号为EU索引的编号(参见Edelman, G.M.等, 1969; Kabat, E, A., T.T. Wu, H. M. Perry, K. S.Gottesman,和C. Foeller., 1991.Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. U.S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda, MD, NIHPublication n. 91-3242)。在优选的实施方案中，γ重链恒定区的EU氨基酸位置325被置换为丝氨酸，和γ重链恒定区的EU氨基酸位置328被置换为苯丙氨酸，以致改变的人IgG1抗体的γ重链恒定区的EU位置325至328包含氨基酸序列SKAF (SEQ ID NO: 137)。

本发明还提供通过鉴定合适于用中和性抗-TLR4剂例如中和性抗-TLR4抗体的疗法的患者和给予其中需要所述治疗或者预防的受试者药剂例如本发明的单克隆抗体(例如鼠单克隆或者人源化单克隆抗体)，治疗或者预防与TLR4/MD-2活化异常、TLR4信号传导异常、TLR4配体表达和/或活性异常例如升高、促-炎性细胞因子产生异常和其组合有关的病理的方法，或者减轻与所述病理有关的症状的方法。待治疗的受试者是例如人。单克隆抗体以足以治疗、预防或者减轻与所述病理有关的症状的量给予。足以治疗或者预防受试者的所述病理的单克隆抗体的量为，例如足以减少TLR4配体-诱导的一种或多种促-炎性细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)的产生的量。如本文所用，术语“减少”是指在存在本发明的单克隆抗体的情况下降低促-炎性细胞因子的产生，其中所述产生是例如，局部促-炎性细胞因子产生(例如在发炎组织的部位处)或者系统性促-炎性细胞因子产生。当在存在本发明的单克隆抗体的情况下促炎性细胞因子产生的水平比促-炎性细胞因子产生的对照水平(即在不存在单克隆抗体的情况下促-炎性细胞因子产生的水平)低大于或者等于5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、99%或者100%时，TLR4配体-诱导的促-炎性细胞因子的产生降低。测量促-炎性细胞因子产生的水平。本领域技术人员将理解，促-炎性细胞因子产生的水平可使用多种测定法测量，包括例如本文描述的方法以及市售可得的ELISA试剂盒。

本发明的药物组合物可包括本发明的抗TLR4抗体和载体。这些药物组合物可包括在试剂盒中，例如诊断试剂盒。

本发明还提供用于实施本文提供的任何方法的试剂盒。例如，在一些实施方案中，试剂盒包括对一种或多种TLR4配体或者其它生物标记有特异性的检测试剂和用于检测所述检测试剂的工具。

附图简述

图1是描述通过免疫复合的瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb-IC)的人血液-来源的巨噬细胞(HBDM)的活化，和依赖于TLR4的作用机制和部分贡献来自Fcγ受体的一系列图。如子图A中所示，cFb不诱导通过HBDM的促炎性细胞因子TNFα的分泌，而当作为与兔抗-纤维蛋白原多克隆抗体(Rb αFb pAb)的免疫复合物呈现时，cFb-IC激活。在存在HBDM、cFb-IC和抗-人TLR4 mAb (例如NI-0101)的情况下，活化可能性被显著阻断。在存在HBDM、cFb-IC和抗-人FcRII mAb的情况下，观察到部分减少。当加入两种mAb至HBDM和cFb-IC时，对抗-人TLR4mAb (例如NI-0101)未观察到另外的抑制。higG1与HBDM和cFb-IC一起用作同种型对照。如子图B中所示，当免疫复合物的来源是来自类风湿性关节炎患者的血清的纯化的人IgG时，这些刺激和阻断的结果得到重复。进行Student’s t检验。* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, ns：不显著。

图2是描述在健康受试者(N滑液)或者具有类风湿性关节炎的患者(RA滑液)的滑液中包含的抗瓜氨酸化蛋白抗体和不同的TLR4配体的水平的实例的一系列图。子图A，抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)；子图B，包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(cFb-IC)；子图C，高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)；子图D，S100A8/A9；子图E，生腱蛋白C。

图3是描述不同的类风湿性关节炎滑液(RASF)对自RA患者分离的滑液成纤维细胞的活化概况的实例和刺激对TLR4的依赖性的一系列图。子图A描述的确刺激RA滑液成纤维细胞以产生促炎性细胞因子IL-6的RASF (来自患者#1; RASF 1)。该刺激显著被抗-人TLR4mAb (例如, NI-0101)的存在阻断。相比之下，子图B描述不能自RA滑液成纤维细胞刺激IL-6产生的RASF样品(来自患者#2; RASF 2)和抗-TLR4 mAb在该情况下没有作用。higG1用作同种型对照。进行Student’s t检验。*** p<0.001, ns：不显著。

图4是描述不同的类风湿性关节炎滑液(RASF)对自RA患者分离的人单核细胞的活化概况的实例和刺激对TLR4的依赖性的一系列图。子图A、B和C描述RASF样品(来自患者#3;RASF 3)分别刺激来自RA患者分离的人单核细胞的促炎性细胞因子IL-6、IL8和TNFα的产生的能力。该刺激通过抗-人TLR4 mAb (例如, NI-0101)的存在而显著阻断。相比之下，子图D、E和F描述不能刺激来自RA患者分离的人单核细胞的IL-6、IL8和TNFα的产生的RASF样品(来自患者#4; RASF 4)和抗-TLR4 mAb在该情况下没有作用。hIgG1用作同种型对照。进行Student’s t检验。* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, ns：不显著。

图5是描述类风湿性关节炎滑液(RASF)中的抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)或者TLR4配体的表达水平和细胞刺激受抗-人TLR4 mAb抑制的能力之间的相关性的一系列图。TLR4配体包括包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(cFb-IC)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、S100A8/A9和生腱蛋白C。细胞类型包括RA患者滑液成纤维细胞(A)和RA患者单核细胞(B)。进行Student’s t检验。* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.00l, ns：不显著。

图6A和6B是在单核细胞(图6A)或者成纤维细胞(图6B)中通过对用抗-人TLR4mAb, NI-0101的治疗的细胞反应评分说明标记水平的一系列图。细胞反应评分：0、1或者2个细胞供体响应于类风湿性关节炎滑液(RASF)刺激，并通过用NI-0101治疗而被抑制。

图7是通过组合的对用抗-人TLR mAb, NI-0101治疗的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)说明标记水平的图。生物反应评分：0、1、2、3或者4个细胞供体响应于类风湿性关节炎滑液(RASF)刺激，并通过用NI-0101治疗而被抑制。

图8是说明ACPA /cFb-IC和S100A8/A9 / HMGB1形成独立的串列的图，所述串列显示测试的RASF样品中的相关性趋势。

图9是说明S100A8/A9和cFb IC的组合是对于组合的对用抗-人TLR mAb, NI-0101治疗的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)的预测物的图。

发明详述

本文提供的组合物和方法可用于鉴定或者以其它方式精修患有病症的患者群，其中所述患者具有升高水平的一种或多种TLR4配体或者其它生物标记。这些患者被鉴定为用干扰或者以其它方式拮抗TLR4信号传导和中和TLR4的至少一种生物活性(单独或者在辅助蛋白MD-2的情况下作为TLR4/MD-2复合物)的药剂(例如抗体或者其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂和其衍生物)治疗的合适的候选者。

在患有或者疑似患有病症的一些患者中，流体和其它生物样品包含升高水平的TLR4配体和其它生物标记。这些TLR4配体和其它生物标记刺激细胞以产生促-炎性细胞因子。然而，使用干扰或者以其它方式拮抗TLR4信号传导的抗-TLR4拮抗剂，例如中和性抗-TLR4抗体或者其它抗-TLR4剂，在本文表明在显示升高水平的一种或多种TLR4配体和/或其它生物标记的表达的患者中阻断该刺激。因此，所述组合物和方法通过给予显示升高水平的一种或多种TLR4配体和/或生物标记的表达的患者抗-TLR4拮抗剂，例如中和性抗-TLR4抗体或者其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂和其衍生物，可用于治疗病症、延迟其进展或者以其它方式改善其症状，所述病症依赖于TLR4信号传导、TLR4配体表达和/或活性异常例如升高、促-炎性细胞因子产生异常和/或其组合，受其驱动或者以其它方式与其相关。可能是用抗-TLR4拮抗剂例如中和性抗-TLR4抗体例如本文描述的那些治疗的合适候选者的患者，通过检测一种或多种TLR4配体或者其它生物标记的水平来鉴定。

之前的研究证实，免疫复合物(cFb-IC)中的瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)刺激促-炎性细胞因子的分泌，该刺激可通过抗-TLR4拮抗剂而被抑制。参见Sokolove等, “ImmuneComplexes Containing Citrullinated Fibrinogen Costimulate Macrophages viaToll-like Receptor 4 and Fcg Receptor,” Arthritis & Rheumatism, vol. 63, No.1, January 2011, pp 53-62。类似的研究使用本文所述的称为NI-0101的抗-TLR4抗体进行(图1)。人血液-来源的巨噬细胞(HBDM)被免疫复合的瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb-IC)活化，和作用机制依赖于TLR4和部分贡献来自Fcγ受体。如图1A中所示，cFb不诱导通过HBDM的促-炎性细胞因子TNFα的分泌，而当作为与兔抗-纤维蛋白原多克隆抗体(Rb α Fb pAb)的免疫复合物呈现时，cFb-IC活化。在存在HBDM、cFb-IC和抗-人TLR4 mAb (例如, NI-0101)的情况下，活化可能性被显著阻断。在存在HBDM、cFb-IC和抗-人FcRII mAb的情况下，观察到部分减少。当加入两种mAb至HBDM和cFb-IC时，对抗-人TLR4 mAb (例如, NI-0101)未观察到另外的抑制。

通过确定可用于鉴定可能是用抗-TLR4拮抗剂治疗的候选者的患者的另外的TLR4配体和其它生物标记，本文提供的研究建立于和扩充了这些起始研究中的发现结果。

用于鉴定可能候选者的合适TLR4配体和其它生物标记包括抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、瓜氨酸化蛋白、在免疫复合物中的瓜氨酸化蛋白，例如在与IgG蛋白(cFb-IC)或者IgE蛋白的免疫复合物中的瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)；HMGB1、S100A8/A9、生腱蛋白C、LPS、热休克蛋白(HSP)、纤连蛋白、透明质烷、Der P2、呼吸合胞病毒F (RSV) F蛋白、表面活性蛋白A、柯萨奇病毒B4 (CSV B4)、CXCL10、抵抗素、胎球蛋白A、饱和脂肪酸(SFA)、二聚糖、修饰的低密度脂蛋白(mLDL)、高级糖化末端产物(AGE)和其组合。在一些实施方案中，瓜氨酸化蛋白是瓜氨酸化纤维蛋白原、瓜氨酸化纤维蛋白、瓜氨酸化波形蛋白、瓜氨酸化组蛋白(例如瓜氨酸化组蛋白2b)、瓜氨酸化烯醇酶或者瓜氨酸化趋化因子(例如瓜氨酸化CXCL10)。除了检测一种或多种这些TLR4配体和/或生物标记的水平之外，用抗-TLR4拮抗剂治疗的合适患者还可通过评价许多另外的生物和临床参数中的任一种来鉴定，所述参数将提高用于鉴定或者以其它方式精修患者群的生物标记的灵敏度和特异性。或者，这些另外的生物和临床参数可单独用作鉴定为用抗-TLR4拮抗剂或者其它合适疗法治疗的合适候选者的患者的工具。通过非限制性实例的方式，这些生物和临床参数包括以下任一种：类风湿因子水平、C-反应蛋白(CRP)水平、血液细胞计数、血液细胞亚群中TLR4受体的存在、TLR4多态性、人白细胞抗原(HLA)多态性、肽基精氨酸脱亚氨酶(PAD)酶和PAD酶多态性、Fcγ受体IIa (FcγIIa)多态性、MD-2水平、可溶性CD14水平、基线患者人口统计学数据(例如体重指数(BMI)、性别、年龄等)和/或患者病史(例如诊断时的失能评价表(DAS 28)、治疗开始时的DAS 28、疾病持续时间、疾病发生时的年龄、对基于DAS28的先前治疗的反应、美国风湿病学会(ACR)和/或欧洲风湿病防治联合会(EULAR)反应标准等)。在一些实施方案中，检测TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数的组合，例如检测至少两种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少三种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少四种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少五种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少六种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少七种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少八种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，检测至少九种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数，或者检测至少十种TLR4配体、其它生物标记和/或另外的生物/临床参数或者更多。

在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是cFb-IC。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是HMGB1。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9和ACPA的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是HMGB1和cFb IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、cFb-IC和HMGB1的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是ACPA、HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是S100A8/A9、cFb-IC、ACPA和HMGB1的组合。

在一些实施方案中，TLR4配体或者其它生物标记是对暴露于抗-TLR4剂例如抗-TLR4 mAb例如NI-0101的单核细胞和成纤维细胞反应的预测物。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是cFb-IC。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是HMGB1。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9和ACPA的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、ACPA和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、ACPA和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、cFb-IC和HMGB1的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是ACPA、HMGB1和cFb-IC的组合。在一些实施方案中，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是S100A8/A9、cFb-IC、ACPA和HMGB1的组合。

本文提供的研究证实，中和TLR4活性例如TLR4-介导的信号传导的药剂有效地基本上或完全阻断通过在来自患有病症或者有病症风险的患者的样品中活化细胞的促炎性细胞因子产生。本文提供的研究还证实，仅靶向Fc区，例如通过使用中和Fc活性的药剂例如抗-CD32抗体，有效地部分阻断通过患有病症或者有病症风险的患者的活化细胞的促-炎性细胞因子产生。与在不存在与抗-TLR4拮抗剂相互作用例如结合的情况下通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生的水平相比，当在存在抗-TLR4的情况下通过活化细胞的促炎性细胞因子产生的水平降低至少95%、例如96%、97%、98%、99%或者100%时，抗-TLR4拮抗剂被认为完全阻断通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生。与在不存在与抗-TLR4拮抗剂相互作用例如结合的情况下通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生的水平相比，当在存在抗-TLR4的情况下通过活化细胞的促炎性细胞因子产生的水平降低至少50%、例如55%、60%、75%、80%、85%或者90%时，抗-TLR4拮抗剂被认为部分阻断通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生。与在不存在仅靶向Fc区的情况下例如在不存在与抗-Fc剂的相互作用例如结合的情况下通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生的水平相比，当在仅靶向Fc区后通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生的水平降低小于95%、例如10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、75%、80%、85%或者90%时,仅靶向Fc区，例如通过使用抗-Fc剂，被认为部分阻断通过活化细胞的促-炎性细胞因子产生。

可用于本发明的组合物和方法的病症包括任何病症，其中TLR4表达和/或活性异常例如升高，以及TLR4/MD-2活化异常和/或TLR4配体活性异常(例如促-炎性细胞因子产生的刺激异常，例如IL-6、TNFα和/或IL-8产生的刺激异常)。例如，认为一些TLR4配体与多种病症有关。

通过非限制性实例的方式，已知LPS与病症例如脓毒症、急性肺损伤和/或RA有关(参见例如，Opal, S.M. 2007. The host response to endotoxin,antilipopolysaccharide strategies, and the management of severe sepsis. Int.J. Med. Microbial. 297: 365-377；Wahamaa, H.等. High mobility group boxprotein 1 in complex with lipopolysaccharide or IL-1 promotes an increasedinflammatory phenotype in synovial fibroblasts. Arthritis Res. Ther. 13:R136)。

通过非限制性实例的方式，已知生腱蛋白C与病症例如关节炎、肝脏和/或心脏缺血性再灌注有关(参见例如，Kuriyama, N.等2011. Tenascin-c: A novel mediator ofhepatic ischemia and reperfusion injury. Hepatology；Midwood, K.等2009.Tenascin-C is an endogenous activator of Toll-like receptor 4 that isessential for maintaining inflammation in arthritic joint disease. Nat. Med.15: 774-780；Taki, J.等2010. Dynamic expression of tenascin-C after myocardialischemia and reperfusion: assessment by 125I-anti-tenascin-C antibodyimaging. J. Nucl. Med. 51: 1116-1122)。

通过非限制性实例的方式，已知HMGB1与病症例如RA、骨关节炎(OA)、缺血性再灌注、1型糖尿病、胰岛移植、狼疮和/或脓毒症有关(参见例如，Chen, J.等2011. Toll-likereceptor 4 regulates early endothelial activation during ischemic acutekidney injury. Kidney Int. 79: 288-299；Wahamaa, H.等High mobility group boxprotein 1 in complex with lipopolysaccharide or IL-1 promotes an increasedinflammatory phenotype in synovial fibroblasts. Arthritis Res. Ther. 13:R136)；Abdulahad, D. A.等2011. High mobility group box 1 (HMGB1) and anti-HMGB1 antibodies and their relation to disease characteristics in systemiclupus erythematosus. Arthritis Res. Ther. 13: R71；Chen, J.等2011. Earlyinterleukin 6 production by leukocytes during ischemic acute kidney injury isregulated by TLR4. Kidney Int. 80: 504-515；Huang, W.等2010. HMGB1, a potentproinflammatory cytokine in sepsis. Cytokine 51: 119-126；Jiang, W.和D. S.Pisetsky. 2008. Expression of high mobility group protein 1 in the sera ofpatients and mice with systemic lupus erythematosus. Ann. Rheum. Dis. 67:727-728；Li, M.等2012. Toll-like receptor 4 on beta cells senses expressionchanges in high-mobility group box 1 and contributes to the initiation oftype 1 diabetes. Exp. Mol. Med；Matsuoka, N.等2010. High-mobility group box 1is involved in the initial events of early loss of transplanted islets inmice. J. Clin. Invest 120:735-743；Nogueira-Machado, J. A.等2011. HMGB1, TLRand RAGE: a functional tripod that leads to diabetic inflammation. Expert.Opin. Ther. Targets. 15: 1023-1035；Schierbeck, H.等2011. Monoclonal anti-HMGB1 antibody protection in two experimental arthritis models. Mol. Med.Sep-Oct;17(9-10):1039-44. Epub 2011 Jun 7；Urbonaviciute, V.和R. E. Voll.2011. High-mobility group box 1 represents a potential marker of diseaseactivity and novel therapeutic target in systemic lupus erythematosus. J.Intern. Med. 270: 309-318；Wu, H.等2010. HMGB1 contributes to kidney ischemiareperfusion injury. J. Am. Soc. Nephrol. 21: 1878-1890)。

通过非限制性实例的方式，已知S100A8/A9与病症例如RA、OA、青少年特发性关节炎(JIA)、糖尿病、移植排斥、狼疮、动脉粥样硬化、脓毒症和/或癌症有关(参见例如Arai,K.等2008. S100A8 and S100A9 overexpression is associated with poorpathological parameters in invasive ductal carcinoma of the breast. Curr.Cancer Drug Targets. 8: 243-252；Bouma, G.等2004. Increased serum levels ofMRP-8114 in type 1 diabetes induce an increased expression of CD11b and anenhanced adhesion of circulating monocytes to fibronectin. Diabetes 53: 1979-1986；Frosch, M.等2009. The myeloid-related proteins 8 and 14 complex, a novelligand of toll-like receptor 4, and interleukin-1beta form a positivefeedback mechanism in systemic-onset juvenile idiopathic arthritis. ArthritisRheum. 60: 883-891；Ionita, M. G.等2009. High levels of myeloid-relatedprotein 14 in human atherosclerotic plaques correlate with thecharacteristics of rupture-prone lesions. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.29: 1220-1227；Jung, D. Y.等2008. Combined use of myeloid-related protein 8114and procalcitonin as diagnostic markers for acute allograft rejection inkidney transplantation recipients. Transpl. Immunol. 18: 338-343；Kawai, H.等2011. Prognostic impact of S100A9 overexpression in non-small cell lungcancer. Tumour. Biol. 32: 641-646；Loser, K.等2010. The Toll-like receptor 4ligands Mrp8 and Mrp14 are crucial in the development of autoreactive CD8⁺ Tcells. Nat. Med. 16: 713-717；Peng, W. H.等2011. Increased serum myeloid-related protein 8/14 level is associated with atherosclerosis in type 2diabetic patients. Cardiovasc. Diabetol. 10: 41；Schulze zur, W. A.等2004.Myeloid related proteins MRP8/MRP14 may predict disease flares in juvenileidiopathic arthritis. Clin. Exp. Rheumatol. 22: 368-373；Soyfoo, M. S.等 2009.Phagocyte-specific S100A8/A9 protein levels during disease exacerbations andinfections in systemic lupus erythematosus. J. Rheumatol. 36: 2190-2194；Sunahori, K.等2006. The S100A8/A9 heterodimer amplifies proinflammatorycytokine production by macrophages via activation of nuclear factor kappa Band p38 mitogen-activated protein kinase in rheumatoid arthritis. ArthritisRes. Ther. 8: R69；van Lent, P. L.等2010. S100A8 causes a shift towardexpression of activatory Fcgamma receptors on macrophages via toll-likereceptor 4 and regulates Fcgamma receptor expression in synovium duringchronic experimental arthritis. Arthritis Rheum. 62: 3353-3364；van Zoelen, M.A.等2009. Expression and role of myeloid-related protein-14 in clinical andexperimental sepsis. Am. J. Respir. Crit Care Med. 180: 1098-1106；Zreiqat, H.等2010. S100A8 and S100A9 in experimental osteoarthritis. Arthritis Res.Ther. 12: R16)。

通过非限制性实例的方式，已知瓜氨酸化纤维蛋白原与病症例如RA和动脉粥样硬化有关(参见例如，Kuhns, D. B.等2007. Induction of human monocyte interleukin(IL)-8 by fibrinogen through the toll-like receptor pathway. Inflammation 30:178-188；Smiley, S. T.等2001. Fibrinogen stimulates macrophage chemokinesecretion through toll-like receptor 4. J. Immunol. 167: 2887-2894；Sokolove,J.等2011. Immune complexes containing citrullinated fibrinogen costimulatemacrophages via Toll-like receptor 4 and Fcgamma receptor. Arthritis Rheum.63: 53-62)。

通过非限制性实例的方式，已知ACPA与病症例如RA、银屑病关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、斯耶格伦氏综合征、阿尔茨海默病和/或动脉粥样硬化有关(参见例如，NicholasAP. Dual immunofluorescence study of citrullinated proteins in Alzheimerdiseased frontal cortex. Neurosci Lett. 2013 Jun 17;545:107-11. Epub 2013 May3. PubMed PMID: 23648390)；Giles JT等Association of fine specificity andrepertoire expansion of anticitrullinated peptide antibodies with rheumatoidarthritis associated interstitial lung disease. Ann Rheum Dis. 2013 May 28.(Epub ahead of print) PubMed PMID: 23716070)；G6mara MJ, Haro I. Citrullinatedpeptides in the diagnosis of rheumatoid arthritis. Curr Top Med Chem. 2013;13(6):743-51. PubMed PMID: 23574523)；Dalmady S等Higher levels of autoantibodiestargeting mutated citrullinated vimentin in patients with psoriatic arthritisthan in patients with psoriasis vulgaris. Clin Dev Immunol. 2013;2013:474028.Mar 18. PubMed PMID: 23573111; PubMed Central PMCID: PMC3614022)；Herrera-Esparza R等Posttranslational Protein Modification in the Salivary Glands ofSjogren’s Syndrome Patients. Autoimmune Dis. 2013;2013:548064. Epub 2013 Mar5. PubMed PMID: 23533719; PubMed Central PMCID: PMC3603161)；和Cambridge G等Antibodies to citrullinated peptides and risk of coronary heart disease.Atherosclerosis. 2013 May;228(1):243-6. Epub 2013 Feb 18. PubMed PMID:23474125)。

在其它非限制性实例中，认为TLR4配体例如热休克蛋白(HSP)、HMGB1和/或S100A8/A9与缺血/再灌注损伤(I/R损伤)有关。通过非限制性实例的方式，认为TLR4配体例如HMGB1、S100A8/A9、纤连蛋白、瓜氨酸化纤维蛋白原和/或生腱蛋白C与关节炎有关。通过非限制性实例的方式，认为TLR4配体例如热休克蛋白(HSP)、透明质烷、Der P2、呼吸合胞病毒F (RSV) F蛋白、表面活性蛋白A和/或LPS与肺疾病有关。通过非限制性实例的方式，认为TLR4配体例如柯萨奇病毒B4 (CSV B4)、CXCL10、抵抗素、胎球蛋白A、饱和脂肪酸(SFA)、HMGB1和/或S100A8/A9与糖尿病有关。通过非限制性实例的方式，TLR4配体例如热休克蛋白(HSP)、透明质烷、Der P2、呼吸合胞病毒F (RSV) F蛋白、表面活性蛋白A和/或LPS与肺疾病有关。通过非限制性实例的方式，认为TLR4配体例如HMGB1、S100A8/A9二聚糖、修饰的低密度脂蛋白(mLDL)和/或高级糖化末端产物(AGE)与肾疾病有关。

本发明的中和性抗-TLR4抗体包括，例如下表2A所示的重链互补决定区(CDR)、表2B所示的轻链CDR和其组合。

表2A. 来自结合和中和TLR4的抗体克隆的VH CDR序列

表2B. 来自结合和中和TLR4的抗体克隆的VL CDR序列

本发明的TLR4抗体包括，例如具有下文所示的重链和轻链序列的组合的抗体。

本发明的示例性的抗体包括，例如2005年6月14日提交和作为WO 2007/110678公布的PCT/IB2005/004206中所述的抗-TLR4抗体、2008年5月14日提交和作为WO 2009/101479公布的PCT申请PCT/IB2008/003978中描述的抗-TLR4抗体，其各自的内容通过引用以其整体结合到本文中；和市售可得的抗体例如HTA125。

本发明的示例性的抗体包括，例如本文称为NI-0101的抗体，其在本文和附图中亦称为“hu15C1”，其结合人TLR4/MD2复合物和亦不依赖于MD-2的存在而结合TLR4。Nl-0101(hu15c1)抗体的序列显示在下文，其中VH和VL氨基酸序列中的CDR序列用下划线表示：

NI-0101重链核苷酸序列：

ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTACATTGCCAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGACGCCTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAATGCAAGGTCTCCAGTAAAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG (SEQ ID NO: 11)

NI-0101重链氨基酸序列：

MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 9)

NI-0101轻链核苷酸序列：

ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACTCCGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 12)

NI-0101轻链氨基酸序列：

MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 10)

NI-0101 (hu15c1)抗体包括具有序列GGYSWH (SEQ ID NO: 1)、YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQ ID NO: 2)和KDPSDAFPY (SEQ ID NO: 3)的VH CDR，和具有序列RASQSISDHLH (SEQID NO: 4)、YASHAIS (SEQ ID NO: 5)和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)的VL CDR。

抗-TLR4/MD2抗体的重链可变(VH)和轻链可变(VL)区的氨基酸和核酸序列显示在下文。包含如通过Chothia等1989、E.A. Kabat等1991定义的互补决定区(CDR)的氨基酸在下文用下划线和斜体字突出显示(参见Chothia, C等, Nature 342:877-883 (1989);Kabat, EA等, Sequences of Protein of immunological interest, 第五版, USDepartment of Health and Human Services, US Government Printing Office(1991))。

抗-TLR4抗体包括同时在审的2004年12月10日提交的美国申请11/009939和2004年6月15日提交的11/151916和2004年12月10日提交的WO 05/065015和2004年6月15日提交的PCT/US2005/020930中描述的抗体，其各自通过引用以其整体结合到本文中。几种示例性的抗体包括在本文称为18H10、1607、15C1和7E3的抗体。

抗-TLR4抗体包括同时在审的2004年6月15日提交的美国申请11/151916 (美国专利公开号US 2008-0050366 A1)和2004年6月15日提交的PCT/IB2005/004206 (PCT公开号WO 07/110678)中描述的抗体，其各自通过引用以其整体结合到本文中。几种示例性的抗体的序列在下文显示。

15C1 Hu V _H 型式4-28

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSIX₁GGYSWHWIRQPPGKGLEWX₂GYIHYSGYTDFNPSLKTRX₃TX₄SRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDGFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 42)

CDR 1: GGYSWH (SEQ ID NO: 1)

CDR 2: YIHYSGYTDFNPSLKT (SEQ ID NO: 2)

CDR 3: KDPSDGFPY (SEQ ID NO: 138)

其中X₁是Thr或者Ser

其中X₂是Ile或者Met

其中X₃是Val或者Ile

其中X₄是Met或者Ile

15C1 Hu V _H 型式3-66

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAX₁SGYSITGGYSWHWVRQAPGKGLEWX₂SYIHYSGYTDFNPSLKTRFTISRDNSKNTX₃YLQMNSLRAEDTAVYYCARKDPSDGFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 43)

CDR 1: GGYSWH (SEQ ID NO: 1)

CDR 2: YIHYSGYTDFNPSLKT (SEQ ID NO: 2)

CDR 3: KDPSDGFPY (SEQ ID NO: 138)

其中X₁是Ala或者Val

其中X₂是Val或者Met

其中X₃是Leu或者Phe

15C1 Hu VL型式L6

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISDHLHWYQQKPGQAPRLLIX₁YASHAISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQNGHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 44)

CDR1: RASQSISDHLH (SEQ ID NO: 4)

CDR2: YASHAIS (SEQ ID NO: 5)

CDR3: QNGHSFPLT (SEQ ID NO: 139)

其中X₁是Lys或者Tyr

15C1 Hu VL型式A26

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 45)

CDR1: RASQSISDHLH (SEQ ID NO: 4)

CDR2: YASHAIS (SEQ ID NO: 5)

CDR3: QNGHSFPLT (SEQ ID NO: 139)

18H10 Hu VH型式1-69

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDSYIHWVRQAPGQGLEWX₁GWTDPENVNSIYDPRFQGRVTITADX₂STSTAYX₃ELSSLRSEDTAVYYCARGYNGVYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 46)

CDR1: DSYIH (SEQ ID NO: 47)

CDR2: WTDPENVNSIYDPRFQG (SEQ ID NO: 48)

CDR3: GYNGVYYAMDY (SEQ ID NO: 49)

其中X₁是Met或者Ile

其中X₂是Lys或者Thr

其中X₃是Met或者Leu

18H10 Hu VL型式L6

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVIYMHWYQQKPGQAPRLLIYRTYNLASGIPARFSGSGSGTDX₁TLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSFPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:50)

CDR1: SASSSVIYMH (SEQ ID NO: 51)

CDR2: RTYNLAS (SEQ ID NO: 52)

CDR3: HQWSSFPYT (SEQ ID NO: 53)

其中X₁是Phe或者Tyr

7E3 Hu VH型式2-70

QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLX₁TYNIGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWNDNIYYNTVLKSRLTX₂SKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCX₃RMAEGRYDAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 54)

CDR1: TYNIGVG (SEQ ID NO: 55)

CDR2: HIWWNDNIYYNTVLKS (SEQ ID NO: 56)

CDR3: MAEGRYDAMDY (SEQ ID NO: 57)

其中X₁是Ser或者Thr

其中X₂是Ile或者Phe

其中X₃是Ile或者Ala

7E3 Hu VH型式3-66

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAX₁SGFSLTTYNIGVGWVRQAPGKGLEWX₂SHIWWNDNIYYNTVLKSRLTX₃SX₄DNSKNTX₅YLQMNSLRAEDTAVYYCX₆RMAEGRYDAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 58)

CDR1: TYNIGVG (SEQ ID NO: 59)

CDR2: HIWWNDNIYYNTVLKS (SEQ ID NO: 60)

CDR3: MAEGRYDAMDY (SEQ ID NO: 61)

其中X₁是Phe或者Ala

其中X₂是Val或者Leu

其中X₃是Ile或者Phe

其中X₄是Lys或者Arg

其中X₅是Leu或者Val

其中X₆是Ile或者Ala

7E3 Hu VL型式L19

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDX₁TLTISSLQPEDFATYX₂CQQGNTFPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 62)

CDR1: RASQDITNYLN (SEQ ID NO: 63)

CDR2: YTSKLHS (SEQ ID NO: 64)

CDR3: QQGNTFPWT (SEQ ID NO: 65)

其中X₁是Phe或者Tyr

其中X₂是Tyr或者Phe

抗-TLR4抗体包括2008年5月14日提交的PCT/IB2008/003978 (PCT公开号WO 2009/101479)中描述的抗体，其内容通过引用以其整体结合到本文中。这些抗-TLR4抗体经修饰以在CDR3部分中包括一个或多个突变。几种示例性的抗体的序列显示在下文。

15C1人源化VH突变体1氨基酸序列：

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7)

15C1人源化VH突变体1核酸序列：

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGACGCCTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 66)

15C1人源化VH突变体2氨基酸序列:

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSEGFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 67)

15C1人源化VH突变体2核酸序列:

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGAGGGATTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 68)

15C1人源化VL突变体1氨基酸序列:

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQNSHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 69)

15C1人源化VL突变体1核酸序列:

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGAATAGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 70)

15C1人源化VL突变体2氨基酸序列:

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 8)

15C1人源化VL突变体2核酸序列:

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 71)

15Cl人源化VL突变体3氨基酸序列:

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQNSSSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 72)

15Cl人源化VL突变体3核酸序列:

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGAATAGTAGTAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 73)

15Cl人源化VL突变体4氨基酸序列:

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 74)

15Cl人源化VL突变体4核酸序列:

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGAGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 75)

本发明的抗体干扰或者以其它方式拮抗通过人和/或猕猴TLR4和/或人和/或猕猴TLR4/MD-2复合物的信号传导。在一些实施方案中，所述抗体结合包括具有以下序列的人和/或猕猴TLR4上的一个或多个氨基酸残基的表位：

>人TLR4氨基酸序列

MMSASRLAGTLIPAMAFLSCVRPESWEPCVEVVPNITYQCMELNFYKIPDNLPFSTKNLDLSFNPLRHLGSYSFFSFPELQVLDLSRCEIQTIEDGAYQSLSHLSTLILTGNPIQSLALGAFSGLSSLQKLVAVETNLASLENFPIGHLKTLKELNVAHNLIQSFKLPEYFSNLTNLEHLDLSSNKIQSIYCTDLRVLHQMPLLNLSLDLSLNPMNFIQPGAFKEIRLHKLTLRNNFDSLNVMKTCIQGLAGLEVHRLVLGEFRNEGNLEKFDKSALEGLCNLTIEEFRLAYLDYYLDDIIDLFNCLTNVSSFSLVSVTIERVKDFSYNFGWQHLELVNCKFGQFPTLKLKSLKRLTFTSNKGGNAFSEVDLPSLEFLDLSRNGLSFKGCCSQSDFGTTSLKYLDLSFNGVITMSSNFLGLEQLEHLDFQHSNLKQMSEFSVFLSLRNLIYLDISHTHTRVAFNGIFNGLSSLEVLKMAGNSFQENFLPDIFTELRNLTFLDLSQCQLEQLSPTAFNSLSSLQVLNMSHNNFFSLDTFPYKCLNSLQVLDYSLNHIMTSKKQELQHFPSSLAFLNLTQNDFACTCEHQSFLQWIKDQRQLLVEVERMECATPSDKQGMPVLSLNITCQMNKTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI(SEQ ID NO: 76)

>猕猴TLR4氨基酸序列1

MTSALRLAGTLIPAMAFLSCVRPESWEPCVEVVPNITYQCMELKFYKIPDNIPFSTKNLDLSFNPLRHLGSYSFLRFPELQVLDLSRCEIQTIEDGAYQSLSHLSTLILTGNPIQSLALGAFSGLSSLQKLVAVETNLASLENFPIGHLKTLKELNVAHNLIQSFKLPEYFSNLTNLEHLDLSSNKIQNIYCKDLQVLHQMPLSNLSLDLSLNPINFIQPGAFKEIRLHKLTLRSNFDDLNVMKTCIQGLAGLEVHRLVLGEFRNERNLEEFDKSSLEGLCNLTIEEFRLTYLDCYLDNIIDLFNCLANVSSFSLVSVNIKRVEDFSYNFRWQHLELVNCKFEQFPTLELKSLKRLTFTANKGGNAFSEVDLPSLEFLDLSRNGLSFKGCCSQSDFGTTSLKYLDLSFNDVITMSSNFLGLEQLEHLDFQHSNLKQMSQFSVFLSLRNLIYLDISHTHTRVAFNGIFDGLLSLKVLKMAGNSFQENFLPDIFTDLKNLTFLDLSQCQLEQLSPTAFDTLNKLQVLNMSHNNFFSLDTFPYKCLPSLQVLDYSLNHIMTSNNQELQHFPSSLAFLNLTQNDFACTCEHQSFLQWIKDQRQLLVEAERMECATPSDKQGMPVLSLNITCQMNKTIIGVSVFSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGQHIFWRRLRKALLDGKSWNPEEQ (SEQ ID NO: 77)

本发明的抗体干扰或者以其它方式拮抗通过人和/或猕猴TLR4和/或人和/或猕猴TLR4/MD-2复合物的信号传导。在一些实施方案中，所述抗体结合包括人和/或猕猴TLR4上的在SEQ ID NO: 76 (人TLR4)和/或SEQ ID NO: 77 (猕猴TLR4)的残基289和375之间的一个或多个氨基酸残基的表位。例如，TLR4抗体特异性结合包括SEQ ID NO: 76 (人)和/或SEQ ID NO: 77 (猕猴)的残基349的表位。在一些实施方案中，表位还包括其它残基，例如选自SEQ ID NO: 76 (人)和/或SEQ ID NO: 77 (猕猴)的至少残基328和329；SEQ ID NO:76 (人)和/或SEQ ID NO: 77 (猕猴)的至少残基351；和SEQ ID NO: 76 (人)和/或SEQ IDNO: 77 (猕猴)的至少残基369至371；和其任何组合的残基。

在一些实施方案中，本发明提供特异性结合Toll-样受体4 (TLR4)的分离的抗体，其中所述抗体结合包括SEQ ID NO: 76的至少残基349的表位和包括SEQ ID NO: 76的至少残基349的表位。在一些实施方案中，所述抗体包括具有三个互补决定区(CDR)的重链，其包括可变重链互补决定区1 (CDRH1)氨基酸序列GYSITGGYS (SEQ ID NO: 15)；可变重链互补决定区2 (CDRH2)氨基酸序列IHYSGYT (SEQ ID NO: 22)；和可变重链互补决定区3(CDRH3)氨基酸序列ARKDSG(X₁)(X₂)(X₃)PY (SEQ ID NO: 14)，其中X₁是N、Q、D或者E，X₂是任何疏水氨基酸，和X₃是任何疏水氨基酸；和具有三个CDR的轻链，其包括可变轻链互补决定区1 (CDRL1)氨基酸序列QSISDH (SEQ ID NO: 34)；可变轻链互补决定区2 (CDRL2)氨基酸序列YAS (SEQ ID NO: 35)；和可变轻链互补决定区3 (CDRL3)氨基酸序列QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。在一些实施方案中，表位还包括SEQ ID NO: 76和SEQ ID NO: 76的至少残基328和329。在一些实施方案中，表位还包括SEQ ID NO: 76和SEQ ID NO: 76的至少残基351。在一些实施方案中，表位还包括在SEQ ID NO: 76和SEQ ID NO: 76的残基369至371之间的一个或多个残基。在一些实施方案中，表位还包括SEQ ID NO: 76和SEQ ID NO: 76的至少残基369至371。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合包括SEQ ID NO:76和SEQ IDNO: 76的至少残基328、329、349、351和369至371的表位。在一些实施方案中，所述抗体还包括在γ重链恒定区中在EU氨基酸位置325处的氨基酸置换和在EU氨基酸位置328处的氨基酸置换。在一些实施方案中，在EU氨基酸位置325处置换的氨基酸是丝氨酸，和其中在EU氨基酸位置328处置换的氨基酸是苯丙氨酸。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文所述的1E11抗体。如下文所示，1E11抗体包括由SEQ ID NO: 79所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)，和由SEQ ID NO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 79)

>1E11 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 78)

>1E11 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 80)

>1E11 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1A1抗体。如下文所示，1A1抗体包括由SEQID NO: 81所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 82)，和由SEQ ID NO: 80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1A1 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCCGGCCGCCTCCTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 81)

>1A1 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGRLLPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 82)

>1A1 VL核酸序列

>1A1 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1A1抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGRLLPY (SEQ ID NO: 25)。1A1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1A6抗体。如下文所示，1A6抗体包括由SEQID NO: 83所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 84)，和由SEQ ID NO: 80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1A6 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCAAGTGGTTGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 83)

>1A6 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGKWLPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 84)

>1A6 VL核酸序列

>1A6 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.IP.37 (2000) LIGM:230)定义。1A6抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGKWLPY (SEQ ID NO: 26)。1A6抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1B12抗体。如下文所示，1B12抗体包括由SEQ ID NO: 85所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 86)，和由SEQ ID NO: 80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1B12 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGGCACCTCATGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 85)

>1B12 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGHLMPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 86)

>1B12 VL核酸序列

>1B12 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1A6抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGHLMPY (SEQ ID NO: 27)。1Bl2抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1C7抗体。如下文所示，1C7抗体包括由SEQID NO: 87所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 88)，和由SEQ ID NO: 80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

> 1C7 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCCGGGCACAACTACCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 87)

>1 C7 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGHNYPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 88)

>1 C7 VL核酸序列

>1 C7 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1C7抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGHNYPY (SEQ ID NO: 28)。1C7抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1C10抗体。如下文所示，1C10抗体包括由SEQ ID NO: 89所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 90)，和由SEQ ID NO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1C10 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCAAGAACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 89)

>1C10 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGKNFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 90)

>1C10 VL核酸序列

>1C10 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1C10抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGKNFPY (SEQ ID NO: 29)。1C10抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1C12抗体。如下文所示，1C12抗体包括由SEQ ID NO: 91所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 92)，和由SEQ ID NO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1C12 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCCAGTTGTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 91)

>1C12 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGQLFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 92)

>1C12 VL核酸序列

>1C12 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1C12抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGQLFPY (SEQ ID NO: 30)。1C12抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1D10抗体。如下文所示，1D10抗体包括由SEQ ID NO: 93所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 94)，和由SEQ ID NO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

> 1D10 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCCACAACTTGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTcc (SEQ ID NO: 93)

> 1D10 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGHNLPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 94)

> 1D10 VL核酸序列

> 1D10 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.IP.37 (2000) LIGM:230)定义。1D10抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGHNLPY (SEQ ID NO: 31)。1D10抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11 N103D抗体。如下文所示，1E11N103D抗体包括由SEQ ID NO: 95所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 96)，和由SEQ ID NO: 80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11 N103D VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCGACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 95)

>1E11 N103D VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGDYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 96)

>1E11 N103D VL核酸序列

>1E11 N103D VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11 N103D抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS(SEQ ID NO:15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGDYFPY (SEQ ID NO: 32)。1E11N103D抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1G12抗体。如下文所示，1012抗体包括由SEQ ID NO: 97所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 98)，和由SEQ ID NO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1G12 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCCGGGCGGTACTGGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 97)

>1G12 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGRYWPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 98)

>1G12 VL核酸序列

>1G12 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1012抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQ IDNO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGRYWPY (SEQ ID NO: 33)。1E11 N103D抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E1l.C1抗体。如下文所示，1E11.C1抗体包括由SEQ ID NO: 99所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 100)，和由SEQ IDNO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11.C1 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTTCCCGATCCGCTACGGGTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 99)

>1E11.C1 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGFPIRYGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 100)

>1E11.C1 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.lP.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C1抗体的重链CDR具有以下序列: GFPIRYGYS (SEQID NO: 16); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2抗体。如下文所示，1E11.C2抗体包括由SEQ ID NO: 101所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 102)，和由SEQ IDNO: 8所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 80)。

>1E11.C2 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCGATCCGGTTCGGCTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 101)

>1E11.C2 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIRFGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 102)

>1E11.C2 VL核酸序列

>1E11.C2 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C2抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIRFGYS (SEQID NO: 17); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C3抗体。如下文所示，1E11.C3抗体包括由SEQ ID NO: 103所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 104)，和由SEQ IDNO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11.C3 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCCATCCGGCACGGGTACAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 103)

> 1E11.C3 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIRHGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 104)

> 1E11.C3 VL核酸序列

>1E11.C3 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C3抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIRHGYS (SEQID NO:18); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C4抗体。如下文所示，1E11.C4抗体包括由SEQ ID NO: 105所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 1 06)，和由SEQID NO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

> 1E11.C4 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTTCCCGATCGGCCAGGGGTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 105)

>1 E11.C4 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGFPIGQGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 106)

>1E11.C4 VL核酸序列

> 1E11.C4 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C4抗体的重链CDR具有以下序列: GFPIGQGYS (SEQID NO: 19); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C5抗体。如下文所示，1E11.C5抗体包括由SEQ ID NO: 107所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 108)，和由SEQ IDNO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11.C5 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCGATCTGGGGGGGCTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACC (SEQ ID NO: 107)

>1E11.C5 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIWGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 108)

>1E11.C5 VL核酸序列

>1E11.C5 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.IP.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C5抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIWGGYS (SEQID NO:20); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C6抗体。如下文所示，1E11.C6抗体包括由SEQ ID NO: 109所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 110)，和由SEQ IDNO:80所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11.C6 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCCATCGGCGGCGGCTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC (SEQ ID NO: 109)

>1E11.C6 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIGGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 110)

>1E11.C6 VL核酸序列

>1E11.C6 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C6抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIGGGYS (SEQID NO:21); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E1抗体。如下文所示，1E11.E1抗体包括由SEQ ID NO:77所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)，和由SEQ IDNO: 111所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 112)。

>1E11.E1 VH核酸序列

>1E11.E1 VH氨基酸序列

>1E11.E1 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGGAACGACTTCCCGGTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 111)

>1E11.E1 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGNDFPVTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 112)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.El抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQID NO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGNDFPVT(SEQ ID NO: 37)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E2抗体。如下文所示，1E11.E2抗体包括由SEQ ID NO:79所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)，和由SEQ IDNO: 113所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 114)。

>1E11.E2 VH核酸序列

>1E11.E2 VH氨基酸序列

>1E11.E2 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGGTACGACGAGCCGTTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 113)

>1E11.E2 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDEPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 114)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.E2抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQID NO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYDEPFT(SEQ ID NO: 38)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E3抗体。如下文所示，1E11.E3抗体包括由SEQ ID NO:79所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)，和由SEQ IDNO: 115所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 116)。

>1E11.E3 VH核酸序列

>1E11.E3 VH氨基酸序列

>1E11.E3 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 115)

>1E11.E3 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 116)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.E3抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQID NO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYDFPLT(SEQ ID NO: 39)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E4抗体。如下文所示，1E11.E4抗体包括由SEQ ID NO:79所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 79)，和由SEQ IDNO: 117所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 118)。

>1E11.E4 VH核酸序列

>1E11.E4 VH氨基酸序列

>1E11.E4 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 117)

>1E11.E4 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 118)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.E4抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQID NO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYDYPLT(SEQ ID NO: 40)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E5抗体。如下文所示，1E11.E5抗体包括由SEQ ID NO:79所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)，和由SEQ IDNO: 119所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 120)。

>1E11.E5 VH核酸序列

>1E11.E5 VH氨基酸序列

>1E11.E5 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGAGTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 119)

>1E11.E5 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYEFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 120)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.E5抗体的重链CDR具有以下序列: GYSITGGYS (SEQID NO: 15); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYEFPLT(SEQ ID NO: 41)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E1抗体。如下文所示，1E1l.C2E1抗体包括由SEQ ID NO: 101所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 102)，和由SEQ ID NO: 121所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 122)。

>1E11.C2E1 VH核酸序列

>1E11.C2E1 VH氨基酸序列

>1E11.C2E1 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGGAACGACTTCCCGGTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 121)

>1E11.C2E1 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGNDFPVTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 122)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C2E1抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIRFGYS(SEQ ID NO:17); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGNDFPVT (SEQ ID NO: 37)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E3抗体。如下文所示，1E11.C2E3抗体包括由SEQ ID NO: 101所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 102)，和由SEQ ID NO: 123所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 124)。

>1E11.C2E3 VH核酸序列

>1E11.C2E3 VH氨基酸序列

>1E11.C2E3 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 123)

>1E11.C2E3 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 124)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C2E3抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIRFGYS(SEQ ID NO:17); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYDFPLT (SEQ ID NO: 39)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E4抗体。如下文所示，1E11.C2E4抗体包括由SEQ ID NO: 101所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 102)，和由SEQ ID NO: 125所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 126)。

>1E11.C2E4 VH核酸序列

>1E11.C2E4 VH氨基酸序列

>1E11.C2E4 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 125)

>1E11.C2E4 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 126)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.1-A.l P.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C2E4抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYDYPLT (SEQ ID NO: 40)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E5抗体。如下文所示，1E11.C2E5抗体包括由SEQ ID NO: 101所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 102)，和由SEQ ID NO: 127所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 128)。

> 1E11.C2E5 VH核酸序列

> 1E11.C2E5 VH氨基酸序列

> 1E11.C2E5 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGAGTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 127)

>1E11.C2E5 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYEFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 128)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸通过M.P. Lefranc (参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.IP.37 (2000) LIGM:230)定义。1E11.C2E5抗体的重链CDR具有以下序列: GYPIRFGYS(SEQ ID NO:17); IHYSGYT (SEQ ID NO: 22);和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列: QSISDH (SEQ ID NO: 34); YAS (SEQ ID NO: 35);和QQGYEFPLT (SEQ ID NO: 41)。

在一些实施方案中，TLR4抗体呈IgG同种型的形式。在一些实施方案中，TLR4抗体呈IgG1同种型的形式。

示例性的IgG1-形式的抗体是IgG1-形式的1E11抗体，包含重链序列SEQ ID NO:130和轻链序列SEQ ID NO: 132，如下文所示：

>1E11重链氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ IDNO: 130)

>1E11轻链氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:132)

>1E11轻链核酸序列

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATGCCAGATGTGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA (SEQ ID NO: 131)

> 1E11重链核酸序列

ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACCAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGACGCCTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACAGTCTCGTGGAACTCAGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACTGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTATACCCTGCCCCCATCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACTTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTAA(SEQ ID NO: 129)

示例性的IgG1-形式的抗体是IgG1-形式的1E11.C11抗体，包含重链序列SEQ ID NO:134和轻链序列SEQ ID NO: 136，如下文所示：

>1E11.C1轻链氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:136)

> 1E11.C1重链氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGFPIRYGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:134)

> 1E11.C1轻链核酸序列

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATGCCAGATGTGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA (SEQ ID NO: 135)

> 1E11.C1重链核酸序列

ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACCAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTTCCCGATCCGCTACGGGTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACAGTCTCGTGGAACTCAGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACTGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTATACCCTGCCCCCATCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACTTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTAA (SEQ ID NO: 133)

在一些实施方案中，本发明的TLR4抗体特异性结合人和/或猕猴TLR4/MD-2复合物，其中所述抗体结合包括人和/或猕猴TLR4上在SEQ ID NO: 76 (人)和SEQ ID NO: 77 (猕猴)的残基325和374之间的一个或多个氨基酸残基的表位。或者，单克隆抗体是与1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1C12、1D10、1E11、1E11 N103D、1G12、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4、1E11.E5、1E11.C2E1、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5结合相同表位的抗体。

本发明的抗-TLR4抗体包括改变的抗体，其中所述抗体的Fc部分的CH2结构域中至少EU位置325的氨基酸残基和至少EU位置328的氨基酸残基已被修饰。例如，至少EU位置325的氨基酸残基已被丝氨酸置换，和至少EU位置328的氨基酸残基已被苯丙氨酸置换。

与未改变的抗体相比，这些具有修饰的Fc部分的抗-TLR4抗体引起改变的效应器功能，例如改变的Fc受体活性。例如，人Fc受体是CD32A。在一些实施方案中，与未改变的抗体相比，这些抗-TLR4抗体在与CD32A连接后引起防止促炎性介质释放。因此，这些抗-TLR4抗体引起改变的Fc受体活性，例如防止促炎性介质释放同时保留结合靶抗原的能力。在一些实施方案中，这些抗-TLR4抗体是中和性抗体，其中所述抗-TLR4抗体引起改变的Fc受体活性，同时保留中和靶抗原的一种或多种生物活性的能力。

例如，本发明的抗-TLR4抗体包括结合人TLR4/MD-2受体复合物的单克隆抗体。该受体复合物被脂多糖(LPS)活化，所述脂多糖是革兰氏阴性细菌的外膜的主要组分。本发明的抗-TLR4抗体抑制通过LPS的受体活化和随后的胞内信号传导。因此，抗-TLR4抗体中和TLR4/MD-2受体复合物的活化。具体而言，本发明提供识别细胞表面上表达的TLR4/MD-2受体复合物的抗TLR4抗体。这些抗-TLR4抗体阻断LPS-诱导的和其它TLR4配体-诱导的促-炎性细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)产生。此外，本发明的一些抗-TLR4抗体还识别当未与MD-2复合时的TLR4。改变的抗体是例如，人源化抗体。

定义：

除非另外定义，否则结合本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另外需要，否则单数术语应包括复数，和复数术语应包括单数。通常，结合本文描述的细胞和组织培养、分子生物学和蛋白质和寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交使用的命名法和其中的技术是本领域众所周知和常用的那些。对于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如电穿孔、脂转染)，使用标准技术。酶反应和纯化技术按照制造商的说明书或者按本领域通常实施的或者按本文描述的进行。前述技术和程序通常按照本领域众所周知的常规方法和按本说明全文中引用和论述的各种一般性和更具体参考资料中所述的进行。参见例如Sambrook等Molecular Cloning: A Laboratory Manual(第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989))。结合本文描述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学使用的命名法和其中的实验室程序和技术是本领域众所周知和常用的那些。对于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送以及患者的治疗，使用标准技术。

抗TLR4抗体的使用

将理解的是，根据本发明的治疗实体的给予将与合适的载体、赋形剂和其它掺入制剂的药剂一起给予，以提供改善的转移、递送、耐受等。许多合适的制剂可以见于所有药剂师已知的处方集：Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第15版, Mack PublishingCompany, Easton, PA (1975))，特别是其中Blaug, Seymour的第87章。这些制剂包括，例如，粉剂、糊剂、软膏、凝胶剂、蜡剂、油剂、脂质、包含脂质（阳离子或阴离子）的囊泡（如Lipofectin™）、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、聚乙二醇乳剂（各种分子量的聚乙二醇）、半固体凝胶以及包含聚乙二醇的半固体混合物。任何上述混合物可以适合于根据本发明的治疗和疗法，条件是在制剂中的活性成分不被制剂灭活并且制剂与给药途径在生理上是相容的和可耐受的。还参见，Baldrick P. “Pharmaceutical excipientdevelopment: the need for preclinical guidance.” Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. “Lyophilization and development of solid proteinpharmaceuticals.” Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000), Charman WN “Lipids,lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts.” J PharmSci. 89(8):967-78 (2000), Powell等“Compendium of excipients for parenteralformulations” PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)以及其中对于关于药剂师熟知的制剂、赋形剂和载体的额外信息的引用。

本发明的治疗制剂，其包括本发明的抗TLR4抗体，用于治疗或减轻与免疫相关病症相关的症状。本发明还提供了治疗或减轻与免疫相关病症相关的症状的方法。通过使用标准的方法鉴定受试者，例如，患有（或处于发展风险中）免疫相关病症的人患者来执行治疗方案。例如，本发明的抗TLR4抗体是在自身免疫性疾病和/或炎性病症的治疗中有用的治疗工具。在某些实施方案中，考虑使用调节，例如，抑制、中和或干扰TLR信号传导的抗TLR4抗体用于治疗自身免疫性疾病和/或炎性病症。

自身免疫性疾病包括，例如，获得性免疫缺陷综合症（AIDS，其是具有自身免疫成分的病毒性疾病）、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森氏病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病（AIED）、自身免疫性淋巴增生综合征（ALPS）、自身免疫性血小板减少性紫癜（ATP）、白塞氏病、心肌病、口炎性腹泻-疱疹样皮炎；慢性疲劳免疫功能障碍综合征（CFIDS）、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（CIPD）、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素病、CREST综合征、克罗恩氏病、Degos氏病、幼年型皮肌炎、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜（ITP）、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、幼年型慢性关节炎（Still氏病）、幼年类风湿性关节炎、梅尼埃氏病、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病关节炎、雷诺氏现象、莱特尔氏综合征、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病（进行性系统性硬化症（PSS），也被称为系统性硬化症（SS））、干燥综合征、僵人综合征、系统性红斑狼疮、多发性大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳肉芽肿。

炎性病症包括，例如，慢性和急性炎性病症。炎性病症的例子包括阿耳茨海默氏病、哮喘、特应性变态反应、变态反应、动脉粥样硬化、支气管哮喘、湿疹、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、溶血性贫血、骨关节炎、败血症、中风、组织和器官移植、血管炎、糖尿病性视网膜病和通气机诱导的肺损伤。

例如，抗TLR4抗体可用于治疗微生物产物（如LPS）诱导的急性炎症和脓毒症和由此急性炎症引起的加重，例如慢性阻塞性肺疾病和哮喘（参见O’Neill, Curr. Opin.Pharmacol. 3: 396-403 (2003)，通过引用以其整体在此并入）。这些抗体还可以用于治疗神经退行性自身免疫性疾病。(Lehnardt等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 8514-8519(2003), 由此通过引用以其整体并入)。

此外，本发明的抗体也可以用作治疗剂治疗疾病，例如骨关节炎，其由应激引起，例如，细胞应激，这反过来又诱导触发TLR4的内源性可溶的“应激”因子。内源可溶性应激因子包括，例如Hsp60（参见Ohashi等, J. Immunol. 164: 558-561 (2000))和纤连蛋白（参见Okamura等, J. Biol. Chem. 276: 10229-10233 (2001)）以及硫酸肝素、透明质酸、gp96、β-防御素-2或表面活性蛋白A（参见例如, Johnson 等, Crit. Rev. Immunol., 23(1-2):15-44 (2003)，其每个都由此通过引用以其整体并入）。本发明的抗体，还可以用于治疗各种与应激相关的疾病，例如，置于呼吸机、通气机和其它呼吸辅助装置的受试者和患者相关的细胞应激。例如，本发明的抗体还可用于治疗通气机诱导的肺损伤（“VILI”），也称为通气相关性肺损伤（“VALI”）。

其中抑制TLR4功能可能是有益的其它疾病领域包括，例如，慢性炎症（例如，与过敏性状况和哮喘相关的慢性炎症）、自身免疫性疾病（例如，炎性肠病）和动脉粥样硬化（参见O’Neill, Curr. Opin. Pharmacol. 3: 396-403 (2003)，在此通过引用以其整体并入本文）。

这些免疫相关病症相关的症状包括例如炎症、发热、全身不适、发热、疼痛、常常定位于发炎区域、快速脉搏、关节疼痛或酸痛（关节痛）、呼吸急促或其它异常呼吸模式、寒战、精神错乱、定向力障碍、躁动、头晕、咳嗽、呼吸困难、肺部感染、心力衰竭、呼吸衰竭、水肿、体重增加、粘液脓性复发、恶病质、喘鸣、头痛和腹部症状例如腹痛、腹泻或便秘。

结合用于诊断或治疗特定免疫相关病症的任何已知方法来确定治疗的功效。免疫相关病症的一种或更多种症状的减轻表明抗体赋予临床益处。

本发明的抗体，包括多克隆、单克隆、人源化和全人抗体，可以用作治疗剂。这样的试剂通常用于治疗或预防受试者中与给定靶的异常表达或激活相关的疾病或病理。抗体制剂，优选一种对其靶抗原具有高特异性和高亲和力的抗体制剂，给予受试者，并通常由于其与靶标结合而具有效果。抗体的给予可以废除或抑制或干扰靶的信号传导功能。抗体的给予可以废除或抑制或干扰靶与其天然结合的内源性配体的结合。例如，抗体结合靶并中和TLR4配体诱导的促炎性细胞因子的产生。

本发明的抗体的治疗有效量通常涉及实现治疗目标所需要的量。如上面所指出的，这可以是抗体和其靶抗原之间的结合相互作用，其在某些情况下，干扰靶发挥功能。给予所需的量将进一步取决于抗体对其特异性抗原的结合亲和力，并且也将取决于所给予的抗体从其给予的其它受试者的自由体积耗尽的速率。用于本发明的抗体或抗体片段的治疗有效给药的共同范围可以是，通过非限制性实例的方式，从约0.1mg/kg体重至约50mg/kg体重。共同给药频率范围可以为，例如，每天两次至每周一次。

可以以药物组合物的形式给予本发明的抗体或其片段，用于多种疾病和病症的治疗。例如在Remington: The Science And Practice Of Pharmacy第19版(Alfonso R.Gennaro等编辑) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement:Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood AcademicPublishers, Langhorne, Pa., 1994; 以及Peptide And Protein Drug Delivery(Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York中提供了在制备此类组合物中涉及的原则和考虑，以及组分选择中的指导。

药物组合物可连同给药说明书一起包括在容器、包装或者分配器中。

制剂还可包含一种以上活性化合物，例如所治疗的特定适应症需要的抗TLR4拮抗剂，优选未不利彼此影响的具有互补活性的那些。备选地或者另外，组合物可包含提高其功能的试剂，例如细胞毒性剂、细胞因子、化学治疗剂或者生长抑制剂。这样的分子合适以有效用于预期目的的量组合存在。

在一个实施方案中，活性化合物，例如抗-TLR4拮抗剂，在组合疗法中给予，即与可用于治疗病理病况或者病症(例如各种形式的癌症、自身免疫性病症和炎性疾病)的一种或多种其它药剂组合。在该背景中术语“组合”意指基本上同时(同时或者序贯)给予药剂。如果序贯给予，在开始给予第二种化合物时，两种化合物中的第一种优选在治疗部位处以有效浓度仍可检出。

例如，组合疗法可包括本发明的一种或多种中和性抗TLR4抗体，其与一种或多种另外的治疗剂，例如下文更详细描述的一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗-炎性药剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒性剂或者细胞生长抑制剂共配制和/或共给予。这样的组合疗法可有利地利用较低剂量的给予的治疗剂，从而避免与各种单一疗法有关的可能的毒性或者并发症。

与本发明的中和性抗-TLR4抗体组合使用的优选的治疗剂是在不同阶段干扰炎性反应的那些药剂。在一个实施方案中，本文描述的一种或多种中和性抗-TLR4抗体可与一种或多种另外的药剂例如其它细胞因子或者生长因子拮抗剂(例如可溶性受体、肽抑制剂、小分子、配体融合物)；或者结合其它靶标的抗体或者其抗原结合片段(例如结合其它细胞因子或者生长因子、其受体或者其它细胞表面分子的抗体)；和抗-炎性细胞因子或者其激动剂共配制和/或共给予。

在使用抗体片段时，特异性结合到靶蛋白的结合结构域的最小抑制性片段和/或干扰或以其它方式拮抗TLR4信号传导的最小抑制性片段是优选的。例如，基于抗体的可变区序列，可设计肽分子，其保留结合靶蛋白序列的能力。此类肽可以化学合成和/或通过重组DNA技术产生。(参见，例如Marasco 等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893(1993))。制剂还可以包含一种以上的对于被治疗的具体适应症所必需的活性化合物，优选不会不利地影响彼此的具有互补活性的那些。可选地，或另外地，所述组合物可包含增强其功能的药剂，例如细胞毒性剂、细胞因子、化疗剂或生长抑制剂。这类分子以对于预定目的有效的量适合地存在于组合中。

TLR4配体和其它生物标记的水平使用各种标准检测技术中的任一种来检测。检测试剂可用于检测样品中给定靶标(或其蛋白片段)的存在。在一些实施方案中，检测试剂包含可检测标记。在一些实施方案中，检测试剂是抗体(或其片段)或者探针。在一些实施方案中，所述试剂或者探针被标记。关于探针或抗体的术语“标记的”，旨在涵盖通过偶联（即物理连接）可检测物质至探针或抗体的探针或抗体的直接标记，以及通过与直接标记的另一种试剂的反应性的探针或抗体的间接标记。间接标记的实例包括使用荧光标记的第二抗体检测第一抗体，和用生物素末端标记DNA探针，使得它可以用荧光标记的链霉亲和素检测。

术语“生物样品”旨在包括从受试者分离的组织、细胞和生物流体，以及受试者内存在的组织、细胞和流体。因此包括在术语“生物样品”的使用内的是血液和血液的级分或成分，包括血清、血浆或淋巴。体液可以是自受试者的身体内的任何地方(优选外周位置)分离的流体，包括但不限于例如血液、血浆、血清、滑液、尿、痰、脊髓液、脑脊液、胸膜液；呼吸道、肠道和泌尿生殖道的流体；唾液、器官系统内流体、腹水、肿瘤囊液、羊水和其组合。生物样品还包括所有前述流体的实验分离的部分。生物样品还包括包含匀质化固体材料例如粪便、组织和生物活检样品的溶液或者混合物。本发明的检测方法可用于在体外和体内检测生物样品中的分析物mRNA、蛋白或基因组DNA。例如，用于检测分析物mRNA的体外技术包括Northern杂交和原位杂交。用于检测分析物蛋白的体外技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、Western印迹、免疫沉淀和免疫荧光。用于检测分析物基因组DNA的体外技术包括Southern杂交。用于进行免疫测定的方法描述于，例如“ELISA: Theory and Practice:Methods in Molecular Biology”, Vol. 42, J. R. Crowther (编辑) Human Press,Totowa, NJ, 1995; “Immunoassay”, E. Diamandis和T. Christopoulus, AcademicPress, Inc., San Diego, CA, 1996; 和“Practice and Theory of EnzymeImmunoassays”, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985。此外，用于检测分析物蛋白的体内技术包括将标记的抗分析物蛋白抗体引入受试者。例如，所述抗体可用放射性标记物标记，所述放射性标记物在受试者中的存在和位置可以通过标准成像技术来检测。

药物组合物

本发明的抗体或可溶性嵌合多肽（本文也称为“活性化合物”）及其衍生物、片段、类似物和同源物可以掺入适合于给药的药物组合物。此类组合物典型地包含抗体或可溶性嵌合多肽和药学上可接受的载体。如本文所用的，术语“药学上可接受的载体”旨在包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等，与药物给予相容。合适的载体描述于该领域中的标准参考文献最近版本的Remington’s PharmaceuticalSciences，在此通过引用并入。这些载体或稀释剂的优选实例包括，但不限于，水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。也可使用脂质体和非水性载体，如固定油。用于药学活性物质的这些介质和试剂的使用是本领域熟知的。除非在任何常规介质或试剂与活性化合物不相容的情况下，否则其在组合物中的使用是预期的。补充的活性化合物也可以掺入组合物。

本发明的药物组合物被配制成与其预期给药途径相容。给药途径的实例包括肠胃外，例如，静脉内、皮内、皮下、口服（例如，吸入）、经皮（即，局部）、经粘膜和直肠给药。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂诸如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂诸如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸（EDTA）；缓冲剂诸如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，和用于调整张度的试剂，诸如氯化钠或葡萄糖。pH可以用酸或碱，诸如盐酸或氢氧化钠调节。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

适于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液（其中水可溶）或分散体和用于无菌注射溶液或分散体的临时制备的无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、聚氧乙烯蓖麻油ELTM（BASF, Parsippany, N.J.）或磷酸缓冲盐水（PBS）。在所有情况下，组合物必须是无菌的，并且应该是达到存在易注射性程度的流体。它必须在制造和储存条件下是稳定的，并且必须防止微生物诸如细菌和真菌的污染作用下保存。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等），及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以保持适当的流动性，例如，通过使用包衣如卵磷脂，通过在分散体的情况下保持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂。防止微生物的作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来实现，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在许多情况下，在组合物中将优选包括等渗剂，例如糖类，多元醇诸如甘露醇、山梨醇，氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝和明胶来实现。

可通过在适当的溶剂中以所需量掺入活性化合物以及上面列举的成分之一或组合，根据需要，然后过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将活性化合物掺入到含有基本分散介质的和来自上述列举的那些所需其它成分的无菌媒介物来制备分散体。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从其先前无菌过滤的溶液获得活性成分加上任何额外所需成分的粉末。

口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以封装在明胶胶囊中或压成片剂。对于口服治疗性给药目的，活性化合物可以与赋形剂掺合并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。口服组合物也可以使用流体载体制备用作漱口水，其中在该流体载体中的化合物经口应用并涮洗及吐出或吞下。药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料可以包含作为组合物的一部分。所述片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任何以下成分或类似性质的化合物：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂如胶体二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙调味剂。

对于通过吸入给药，化合物从加压容器或分配器以气溶胶喷雾的形式递送，所述加压容器或分配器包含合适的推进剂，例如气体如二氧化碳，或喷雾器。

全身给药也可通过经粘膜或经皮方式。对于经粘膜或经皮给药，在制剂中使用对待渗透的障碍合适的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域已知的，并且包括，例如，用于经粘膜给药，去垢剂，胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给药可通过使用鼻喷雾剂或栓剂来实现。对于经皮给药，将活性化合物配制成如本领域通常已知的软膏、药膏、凝胶或乳膏。

所述化合物也可以以栓剂（例如，与常规的栓剂基质一起，例如可可脂和其它甘油酯）或滞留型灌肠剂的形式制备，用于直肠递送。

在一个实施方案中，与载体一起制备活性化合物，所述载体将保护化合物免于快速从体内消除，诸如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这类制剂的方法对于那些本领域技术人员将是显而易见的。该材料也可以从AlzaCorporation和Nova Pharmaceuticals, Inc.商购获得。脂质体悬浮液（包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向受感染细胞的脂质体）也可以用作药学上可接受的载体。可以根据本领域技术人员已知的方法制备这些，例如如描述于美国专利号4,522,811。

以剂量单位形式配制口服或胃肠外组合物以易于给药和使剂量均匀是特别有利的。如本文所用剂量单位形式是指适合作为单一剂量用于待治疗受试者的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的经计算与所需的药物载体联合以产生期望治疗效果的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格是由活性化合物的独特性质和要实现的特定治疗效果以及配制这种活性化合物用于个体治疗的领域中固有的限制来决定，并直接取决于活性化合物的独特性质和要实现的特定治疗效果以及配制这种活性化合物用于个体治疗的所述领域中固有的限制。

药物组合物可以连同给药说明书包括在容器、包装或分配器中。

本发明将在下面的实施例中进一步描述，其不限制权利要求中描述的本发明范围。

实施例

实施例1. 材料和方法

通过包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(cFb-IC)刺激的TLR4活化的阻断：两种方法用于制备免疫复合物。在第一种方法中，兔多克隆抗体用于制备免疫复合物。简言之，将体外瓜氨酸化抗原(纤维蛋白原)铺板和孵育过夜，然后洗涤和封闭，之后在37℃与50 ug/ml多克隆兔抗-纤维蛋白原抗体(Dako)一起孵育2小时，接着洗涤。然后，将50,000个人单核细胞来源的巨噬细胞(其用抗-TLR4拮抗剂例如NI-0101抗体或者抗-FcγRII抗体或者相关的同种型对照抗体预处理)添加到板中。最后，孵育16小时后，收获上清液，和通过ELISA测量促炎性细胞因子例如TNFα。

在第二种方法中，自类风湿性关节炎(RA)患者分离的IgG用于制备免疫复合物。简言之，将体外瓜氨酸化抗原(纤维蛋白原)铺板和孵育过夜，然后洗涤和封闭，之后在37℃与人RA-IgG (1mg/ml)一起孵育2小时，接着洗涤。然后，将50,000个人单核细胞来源的巨噬细胞(其用抗-TLR4拮抗剂例如NI-0101抗体、抗-FcγRII抗体或者相关的同种型对照抗体预处理)添加至板中。最后，孵育16小时后，收获上清液，和通过ELISA测量促炎性细胞因子例如TNFα。

测量包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(ICcFb)的水平：标准ELISA技术用于测定来自类风湿性关节炎(RA)患者的滑液样品中包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(IC-cFb)的水平。简言之，将小鼠抗-人瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)抗体3D1 (抗-cFb，克隆3Dl, # AM32004PU-N，来自Acris)铺板，孵育过夜，洗涤和封闭，然后与来自RA患者的滑液样品一起在三个重复孔中孵育。抗-人-IgG-Fc-HRP (SIGMA, #A0170)用于检测免疫复合物。

用来自RA患者的滑液刺激来自RA患者的滑液成纤维细胞：将RA成纤维细胞铺板，孵育两天，然后除去上清液，并加入新鲜的培养基。对于处理孔加入NI-0101或者同种型对照(60 µg/mL，在培养基中，40 µL/孔)，并将等体积的培养基加入未处理的对照孔。在孵育30分钟后，将来自RA患者的滑液加入各孔，至在最终测定混合物中2.5%的浓度(40 µL/孔的7.5%滑液)。作为阳性对照，将LPS加入至10 ng/mL (40 µL/孔的30 ng/mL LPS)。孵育24小时后，收集上清液和通过ELISA检测促-炎性细胞因子例如白介素-6 (IL-6)。

用来自RA患者的滑液刺激来自RA患者的外周血的单核细胞：CD14⁺单核细胞自RA患者的外周血使用MACS珠纯化和用新鲜的培养基调整至1.25x10⁶细胞/mL。然后将单核细胞铺板，并且对于处理孔，向处理孔中加入NI-0101或者同种型对照(60 µg/mL，在培养基中，40 µL/孔)，并将等体积的培养基加入未处理对照孔。孵育30分钟后，将来自RA患者的稀释的滑液加入至在最终测定混合物中20%、10%、5%或者2.5%的浓度。作为阳性对照，在三个重复孔中将LPS加入至10 ng/mL (40 µL/孔的30 ng/mL LPS)。孵育24小时后，收集上清液，和通过Luminex测定法检测促-炎性细胞因子例如白介素-6 (IL-6)、TNFα、IL-1β、GM-CSF和/或IL-8。

实施例2. 患者样品中升高水平的TLR4配体刺激细胞产生促-炎性细胞因子

检测健康受试者(N滑液)或者类风湿性关节炎患者(RA滑液)的滑液中包含的抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和不同的TLR4配体(cFb-IC、HMGB1、S100A8/A9和生腱蛋白C)的水平(图2A-2E)。在来自RA患者的样品中检测到升高水平的ACPA和TLR4配体。

实施例3. 使用抗-TLR4拮抗剂抑制促-炎性细胞因子的产生

测量和分析不同的类风湿性关节炎滑液(RASF)对自RA患者分离的滑液成纤维细胞的活化概况和刺激对这些样品中TLR4的依赖性。如图3A中所示，发现来自患者#1的RASF(RASF 1)刺激RA滑液成纤维细胞以产生促炎性细胞因子IL-6。该刺激通过存在抗-人TLR4mAb (例如NI-0101)而显著阻断。相比之下，图3B显示来自患者#2的RASF样品(RASF 2)不能刺激自RA滑液成纤维细胞的IL-6产生，和抗-TLR4 mAb在该情况下没有作用。因此，患者样品刺激促-炎性细胞因子的产生的能力可用作特定患者可能合适于用抗-TLR4拮抗剂例如中和性抗-TLR4抗体例如NI-0101治疗的指示剂。

进行类似的研究以检测和分析不同的类风湿性关节炎滑液(RASF)对自RA患者分离的人单核细胞的活化概况和刺激对TLR4的依赖性(图4)。图4A、4B和4C描述来自患者#3的RASF样品(RASF 3)分别刺激自RA患者分离的人单核细胞的促炎性细胞因子IL-6、IL8和TNFα的产生的能力。该刺激通过存在抗-人TLR4 mAb (例如NI-0101)而显著阻断。相比之下，图4D、4E和4F描述来自患者#4的RASF样品(RASF 4)不能刺激自RA患者分离的人单核细胞的IL-6、IL8和TNFα的产生，并且抗-TLR4 mAb在该情况下没有作用。再次，这些研究表明，患者样品刺激促-炎性细胞因子的产生的能力可用作特定患者可能合适于用抗-TLR4拮抗剂例如中和性抗TLR4抗体例如NI-0101治疗的指示剂。

实施例4. TLR4配体和其它标记的表达水平与被抗-TLR4拮抗剂抑制的细胞刺激的能力之间的相关性

图5是一系列图，其描述类风湿性关节炎滑液(RASF)中抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)或者TLR4配体的表达水平与被抗-人TLR4 mAb抑制的细胞刺激的能力之间的相关性。TLR4配体包括包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(cFb-IC)、高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)、S100A8/A9和生腱蛋白C。细胞类型包括RA患者滑液成纤维细胞(A)和RA患者单核细胞(B)。

表1概述和关联了14名患者的类风湿性关节炎滑液(RASF)中抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、包含瓜氨酸化纤维蛋白原的免疫复合物(cFb-IC)、高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)、S100A8/A9和生腱蛋白C的水平以及RASF诱导细胞因子产生的能力与RA血液单核细胞和RA滑液成纤维细胞中被抗-人TLR4 mAb例如NI-0101处理阻断的能力。

表1

表1中使用的阴影表示使用以下任意阈值对ACPA和TLR4配体阳性的RASF样品：ACPA (>2000 Ul/ml)，cFb-Ic (>1.5 OD)，HMGB1 (>100 ng/ml)，S100 (>500 nmg/ml)和生腱蛋白C(>100 ng/ml)。

实施例5. TLR4配体和其它生物标记的统计分析

使用递归划分和回归树(rpart)算法以得到最佳阈值，以便根据其分数来分类数据。各树的性能通过检查其混乱矩阵来评价。当可获得多个方案时，选择具有最低复杂性的树，即具有最小数量的节点和分裂的那些。三个重复的均值用作生物标记值。

对于用抗-TLR4抗体NI-0101治疗的单核细胞或者成纤维细胞反应评分，分析最佳个体分类器。对于单核细胞，发现包括ACPA、cFb-IC、HMGB1和S100A8/A9的几种标记物是单核细胞反应评分的优良预测物，其中S100A8/A9是最佳个体分类器。如果滑液中检测的S100A8/A9的水平设定在387 ng/ml，该标记物以80%准确率预测对NI-0101治疗的100%的无反应者和以89%准确率预测100%的有反应者。在试验样品中，36% (4/5)的鉴定的受试者不具有单核细胞中检测的大于或者等于387的S100A8/A9的水平，而64% (8/9)的受试者的确具有滑液中检测的大于或者等于387的S100A8/A9的水平。

对于成纤维细胞，发现cFb-IC是成纤维细胞反应的最佳个体预测物。如果滑液中检测的cFb-IC的水平(OD 450nm读数)设定为1.2，则该标记物以90%准确率预测对NI-0101治疗的100%的无反应者和以100%准确率预测80%的有反应者。在试验样品中，73% (10/11)的鉴定的受试者不具有成纤维细胞中检测的大于或者等于1.2的cFb-IC的水平，而27% (4/4)的受试者的确具有滑液中检测的大于或者等于1.2的cFb-IC的水平。

通过响应用NI-0101治疗的组合的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)的标记物水平按图7中所示进行评价。

进一步评价鉴定了标记物ACPA和cFb-IC显示RASF样品中的相关性趋势，类似地，标记物S100A8/A9和HMGB1显示RASF样品中的相关性趋势(图8)。发现这两种串列互不依赖。

还发现对于用抗-人TLR mAb NI-0101治疗的组合的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)，标记物ACPA、cFb-IC、HMGB1和S100A8/A9各自单独是优良的预测物。发现ACPA、cFb-IC和HMGB1的每一个显示相同的预测能力，其中发现每个标记物以100%准确率预测对NI-0101治疗的75%的无反应者和以91%准确率预测100%的有反应者。具体而言，在试验样品中，21% (3/3)的鉴定的受试者不具有滑液中检测的大于或者等于330 Ul/ml的ACPA的水平，而79% (10111)的受试者的确具有滑液中检测的大于或者等于330 Ul/ml的ACPA的水平。在试验样品中，21% (3/3)的鉴定的受试者不具有滑液中检测的大于或者等于0.55的cFb-IC的水平，而79% (10111)的受试者的确具有滑液中检测的大于或者等于0.55的cFb-IC的水平(OD 450nm读数)。在试验样品中，21% (3/3)的鉴定的受试者不具有滑液中检测的大于或者等于45 ng/ml的HMGB1的水平，而79% (10/11)的受试者的确具有滑液中检测的大于或者等于45的HMGB1的水平。

S100A8/A9和cFb-IC的组合提供用于预测对用抗-人TLR mAb NI-0101治疗的组合的单核细胞和成纤维细胞反应评分(cMFRS)的最佳分类器。如果发现滑液中检测的S100A8/A9的水平大于或者等于387 ng/ml并且发现滑液中检测的cFb-IC的水平大于或者等于1.2(OD 450nm读数)，发现该标记物组合以80%准确率预测对NI-0101治疗的100%的无反应者和以100%准确率预测90%的有反应者(图9)。尽管各单独标记物S100A8/A9和cFb-IC是cMFRS的优良的预测物，但两者的组合是最佳的预测物。

其它标记物组合是单核细胞和成纤维细胞反应的合适的预测物。例如，单核细胞和成纤维细胞反应的预测物是选自以下的组合：(i) S100A8/A9和HMGB1；(ii) S100A8/A9和cFb-IC；(iii) S100A8/A9和ACPA；(iv) ACPA和cFb-IC；(v) ACPA和HMGB1；(vi) HMGB1和cFb-IC；(vii) S100A8/A9、ACPA和HMGB1；(viii) S100A8/A9、ACPA和cFb-IC；(ix) S100A8/A9、cFb-IC和HMGB1；(x) ACPA、HMGB1和cFb-IC；和(xi) S100A8/A9、cFb-IC、ACPA和HMGB1。

其它实施方案

尽管本发明已经结合其详细描述进行了描述，但前述描述意欲说明而非限制本发明的范围，本发明的范围通过随附权利要求书的范围来定义。其它方面、优势和改变在随附权利要求书的范围内。

Claims

1.一种减轻病症的症状的方法，所述方法包括检测来自受试者的生物样品中一种或多种TLR4配体或者一种或多种其它生物标记的水平，将检测的一种或多种TLR4配体或者一种或多种生物标记的水平与对照表达水平相比较，和当检测的水平升高时，给予所述受试者足以减轻所述病症的症状的量的抗-TLR4拮抗剂。

2.权利要求1的方法，其中所述一种或多种TLR4配体或者一种或多种生物标记选自抗-瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、瓜氨酸化蛋白、HMGB1、S100A8/A9、生腱蛋白C和其组合。

3.权利要求2的方法，其中瓜氨酸化蛋白是瓜氨酸化纤维蛋白原、瓜氨酸化纤维蛋白、瓜氨酸化波形蛋白、瓜氨酸化组蛋白、瓜氨酸化烯醇酶或者瓜氨酸化趋化因子。

4.权利要求3的方法，其中瓜氨酸化组蛋白是瓜氨酸化组蛋白2b。

5.权利要求3的方法，其中瓜氨酸化趋化因子是瓜氨酸化CXCL10。

6.权利要求2的方法，其中瓜氨酸化蛋白在免疫复合物中。

7.权利要求6的方法，其中在免疫复合物中的瓜氨酸化蛋白是在与IgG蛋白的免疫复合物(cFb-IC)中的瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)。

8.权利要求1的方法，其中所述生物样品是血液或者源自血液。

9.权利要求1的方法，其中所述生物样品是尿或者源自尿。

10.权利要求1的方法，其中所述生物样品是滑液或者源自滑液。

11.权利要求1的方法，其中所述抗-TLR4拮抗剂是抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段。

12. 权利要求11的方法，其中所述抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段包含可变重链互补决定区1 (VH CDR1)，其包含氨基酸序列GGYSWH (SEQ ID NO: 1)；VH CDR2区，其包含氨基酸序列YIHYSGYTDFNPSLKT (SEQ ID NO: 2)；VH CDR3区，其包含氨基酸序列KDPSDAFPY(SEQ ID NO: 3)；可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)区，其包含氨基酸序列RASQSISDHLH(SEQ ID NO: 4)；VL CDR2区，其包含氨基酸序列YASHAIS (SEQ ID NO: 5)；和VL CDR3区，其包含氨基酸序列QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

13. 权利要求12的方法，其中所述抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段包含重链可变氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7)和轻链可变氨基酸序列EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 8)。

14. 权利要求13的方法，其中所述抗-TLR4抗体或者其免疫活性片段包含重链氨基酸序列MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 9)和轻链氨基酸序列MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 10)。

15.权利要求1的方法，其中所述受试者是人。

16.权利要求1的方法，其中所述病症是自身免疫病症或者炎性病症。

17.权利要求1的方法，其中所述病症与TLR4信号传导异常、TLR4配体表达或者活性升高、促-炎性细胞因子产生异常和其组合有关。

18.权利要求1的方法，其中所述病症是类风湿性关节炎(RA)。

19.权利要求1的方法，其中所述病症是动脉粥样硬化。

20.权利要求1的方法，其中所述病症与器官或组织移植有关。

21.权利要求1的方法，其中所述病症与急性肺损伤有关。

22.权利要求1的方法，其中所述病症与缺血/再灌注损伤有关。