CN105878225A - 氨基乙酰丙酸在脂肪肝治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及代谢综合征、特别是脂肪肝的预防、治疗。特别涉及氨基乙酰丙酸(以下称为“5-ALA”)或其衍生物、或它们的盐作为有效成分在预防、缓解和/或治疗脂肪肝中的功能和应用，及其在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝的药物中应用。

Description

氨基乙酰丙酸在脂肪肝治疗中的应用

技术领域

本发明涉及代谢综合征、特别是脂肪肝的预防、治疗。特别涉及氨基乙酰丙酸(以下称为“5-ALA”)或其衍生物、或它们的盐作为有效成分在预防、缓解和/或治疗脂肪肝中的功能和应用，及其在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝的药物中应用。

背景技术

代谢综合征是指人体的蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质发生代谢紊乱的病理状态，是一组复杂的代谢紊乱症候群，包括肥胖、高血糖、高血压、血脂异常、高尿酸、高脂肪肝发生率和高胰岛素血症，这些代谢紊乱是心、脑血管病变以及糖尿病的病理基础。

脂肪组织是重要的能量储存器官，随着过多能量的摄入，如果脂肪组织不能通过增生及分化形成新的脂肪细胞而扩大其容量，便会导致脂肪细胞肥大及过量的脂肪转移至肝脏、骨骼肌甚至胰腺β细胞导致脂肪异位沉积；更重要的是，如果组织内线粒体功能低下，脂肪酸氧化不能代偿性的增加，大量进入组织的脂肪便会堆积形成异位脂肪。

除了作为能量储存器官，新的研究表明脂肪组织还是重要的内分泌器官，分泌大量的细胞因子参与机体的能量代谢、免疫和炎症调控。研究发现肥胖人群病理性肥大的脂肪细胞可产生比正常脂肪细胞更多的炎症因子并引起炎症细胞浸润，多表现为巨噬细胞浸润、脂肪细胞因子如脂联素、肿瘤坏死因子α、瘦素、巨噬细胞炎性蛋白等表达增加，众多脂肪细胞因子广泛参与胰岛素信号通路的传导，进一步加重了外周组织的胰岛素抵抗。目前研究已经证实降低内脏脂肪含量后，脂肪组织的炎症状态得到明显改善，胰岛素的敏感性亦得到显著提高。

脂肪性肝病(FLD)是指肝脏甘油三酯的储积大于肝脏湿重的5％，或为光镜下每单位面积肝实质细胞脂肪变大于30％。1980年，Ludwig J等人在未饮酒的人群中发现了和酒精性脂肪肝炎相同的炎症特征，而且多伴有肥胖以及肥胖相关性疾病如2型糖尿病等，据此首次提出非酒精性脂肪肝炎的概念。

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)近年来发病率逐年增高，是一种严重威胁着人类健康的常见疾病，是在患者无过量饮酒史的情况下，发生的与酒精性肝病(ALD)相似的肝脏病理学变化，其病理生理改变主要是肝细胞发生炎症、坏死和凋亡，病程逐渐向脂肪性肝炎、肝纤维化，肝硬化发展。有一部分NAFLD患者可进一步发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

酒精性脂肪肝临床表现与肝脏脂肪浸润的程度成正比，在肝内过多的脂肪被移除后症状可消失。临床上以肝肿大为最常见体征，其次为肝区痛及压痛。少数病人可有轻度黄疸，实验室检查提示与胆道系统阻塞有关。重症患者可以有腹水和下肢水肿，偶见脾肿大。部分患者可以伴有维生素缺乏表现，如周围神经炎、舌炎、口角炎、皮肤瘀斑等。总之，酒精性脂肪肝缺乏特异性临床症状。

脂肪性肝病的发病机制目前多倾向于二次打击学说：第一次打击是肥胖、胰岛素抵抗等因素引起的，其中胰岛素抵抗是引起脂肪肝的关键致病因子，胰岛素抵抗导致血中游离脂肪酸水平升高，游离脂肪酸水平超过了肝脏β氧化能力及输出能力进而加重肝脏脂质沉积，从而启动第二次打击。“二次打击”的主要因子包括氧化应激、细胞因子，促炎症因子及线粒体功能障碍等，这些因子增加了肝细胞对凋亡和坏死的易感性，引起脂肪性肝炎及肝纤维化。

5-ALA作为体内合成血红素的前体物质，主要通过参与柠檬酸循环回路和血红素合成代谢调控血红蛋白和肌红蛋白数量，参与细胞色素P450合成，进而通过清除氧化活性物质延缓氧化应激水平。5-ALA具有众多的功能，研究发现5-ALA通过原卟啉IX(PpIX)持续性剪切激活可溶性的鸟苷酸环化酶，促进PKG相关的血管舒张刺激磷蛋白(VASP)的磷酸化，进而降低肺动脉高压。此外5-ALA作为体内合成血红素的前体物质，通过血红素调控细胞核受体Rev-Erbα及其辅抑制因子NCOR相互作用，介导饮食铁对生理性糖代谢的调控。5-ALA可以作为一种免疫调控因子通过适度的氧化应激刺激T细胞，调节免疫反应。5-ALA的中间代谢产物原卟啉IX具有强光敏作用，故5-ALA通常作为一种光敏剂用于肿瘤的诊断以及皮肤病的治疗。

田中彻等人(CN102164596A、CN103800310A)的研究发现5-ALA可以预防、改善例如选自代谢综合征、糖尿病、高脂血症、高血压、肝功能障碍、肾衰竭、肥胖、勃起功能障碍、更年期障碍、肩酸和腰痛的成人病，但其具体的作用机理并不清楚。而5-ALA能否用于其他代谢综合征的治疗也有待证实。

本发明通过对高脂喂养的肥胖小鼠作5-ALA灌胃处理，不仅发现5-ALA处理对肥胖小鼠体重、腹腔葡萄糖耐量(IPGTT)、胰岛素耐量(ITT)等有影响，还证实5-ALA可以显著改善脂肪肝状况。

发明概述

在一个方面中，本发明提供一种预防、缓解和/或治疗脂肪肝的组合物，其含有氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物或它们的盐。

在另一个方面中，本发明提供氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物或它们的盐在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝的组合物中的应用。

在一个实施方案中，可用于本发明的5-ALA衍生物选自具有酯基或酰基的衍生物，优选甲酯基、乙酯基、丙酯基、丁酯基或戊酯基；所述盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硝酸盐、硫酸盐、乙酸盐、丙酸盐、甲苯磺酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、乙醇酸盐、甲磺酸盐、丁酸盐、戊酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、钠盐、钾盐、钙盐或铵盐，优选盐酸盐、磷酸盐或硫酸盐。

在另一个实施方案中，可用于本发明的5-ALA或其衍生物或它们的盐的量按照5-ALA盐酸盐换算，成人每天2mg～800mg，优选为10mg～500mg，进一步优选为50mg～400mg。

在一个实施方案中，本发明的组合物含有金属化合物。

在另一个实施方案中，可用于本发明的金属化合物选自铁化合物、镁化合物或锌化合物。

在进一步的实施方案中，可用于本发明的铁化合物选自柠檬酸亚铁、柠檬酸亚铁钠、柠檬酸铁钠、柠檬酸铁铵、焦磷酸铁、血红素铁、葡聚糖铁、乳酸铁、葡糖酸亚铁、DTPA铁、二亚乙基三胺五乙酸铁钠、二亚乙基三胺五乙酸铁铵、乙二胺四乙酸铁钠、乙二胺五乙酸铁铵、三亚乙基四胺铁、二羧甲基谷氨酸铁钠、二羧甲基谷氨酸铵铁铵、乳铁蛋白铁、转铁蛋白铁、氯化铁、三氧化二铁、铁叶绿素钠、铁蛋白铁、富马酸亚铁、焦磷酸亚铁、含糖氧化铁、乙酸铁、草酸铁、琥珀酸亚铁、琥珀酸柠檬酸铁钠、硫酸铁和硫化甘氨酸铁中的一或多种。

在进一步的实施方案中，可用于本发明的铁化合物与5-ALA的摩尔比为0-70：1，优选0.5-5：1。

在一个实施方案中，本发明的组合物不含有铁化合物。

在一个实施方案中，本发明的组合物进一步含有药学上可接受的载体。

在一个实施方案中，所述脂肪肝是非酒精性脂肪性肝。

在另一个实施方案中，所述脂肪肝是酒精性脂肪性肝。

附图说明

图1：肥胖小鼠体重及肝脏和脂肪重量的检测。其中图1A：小鼠摄食监控，图1B：小鼠体重监控，图1C：小鼠肝脏重量检测，图1D：小鼠脂肪重量检测。

图2：肥胖小鼠糖代谢水平的检测。其中图2A：小鼠空腹血糖变化，图2B：小鼠葡萄糖耐受试验，图2C：胰岛素耐受试验。

图3：小鼠脂代谢水平的检测。其中图3A：对照组小鼠肝脏组织油红O染色，图3B：处理组小鼠肝脏组织油红O染色，图3C：小鼠肝脏组织中甘油三酯含量。

图4：小鼠肝脏脂肪酸氧化相关基因及内质网应激相关基因表达的检测。其中图4A：小鼠肝脏脂肪酸氧化相关基因Aox、CPT-1α的表达变化，图4B：小鼠肝脏组织内质网应激相关基因CHOP、ERDJ4的表达变化，图4C：小鼠脂肪组织内质网应激相关基因Bip、XBP-1的表达变化。

发明详述

在本发明的一个实施方案中，提供一种预防、缓解和/或治疗脂肪肝的组合物，其含有氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物或它们的盐。

本发明的组合物为含有由5-ALA或其衍生物或它们的盐构成的5-ALA类。其中，5-ALA的衍生物例如5-ALA的具有酯基和酰基的衍生物，优选5-ALA的甲酯基、乙酯基、丙酯基、丁酯基或戊酯基的衍生物。

5-ALA类中，5-ALA或其衍生物的盐例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硝酸盐、硫酸盐、乙酸盐、丙酸盐、甲苯磺酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、乙醇酸盐、甲磺酸盐、丁酸盐、戊酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、钠盐、钾盐、钙盐或铵盐，优选盐酸盐、磷酸盐或硫酸盐。而且，这些盐在使用时以溶液方式使用，优选为其作用与5-ALA的情况效果相同的盐。这些盐类还可以形成水合物或溶剂合物，此外可以单独使用任意一种或适当组合2种以上来使用。

在本发明的另一个实施方案中，提供氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物或它们的盐在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝的组合物中的应用。

本发明的组合物能以任何方便的方式(例如，肠内地或肠外地)进行给药。给药方法的实例包括口服或注射(例如，静脉内、肌内、皮下、以及腹膜内的)方式给药。本领域技术人员清楚本发明的组合物的给药途径可以根据实际需要进行相应调整。其他的可以接受的途径可以包括例如皮下植入以及舌下的、局部的、直肠的、阴道的、鼻内给药。作为经口给药的剂型，可以是粉末、颗粒、片剂、胶囊剂、糖浆剂、悬浮液等，作为静脉注射的剂型，可以是注射剂、点滴剂等。

如果制备了片剂形式的固体组合物，主要的活性成分可以与药用赋形剂混合，药用赋形剂的实例包括硅石、淀粉、乳酸、硬脂酸镁、以及滑石。这些片剂可以用蔗糖或别的适当的物质涂布或者它们可以被处理从而具有持续的或延迟的活性并且从而连续地释放预定量的活性成分。胶囊可以通过将活性成分与一种稀释剂混合并且将生成的混合物结合到软的或硬的胶囊里来获得。糖浆可以包含活性成分连同一种增甜剂(该增甜剂通常无卡路里)、一种防腐剂(例如，对羟苯甲酸甲酯和/或对羟苯甲酸丙酯)，一种调味剂，以及一种适当的着色剂。水可分散的粉末或颗粒可以包含与分散剂或湿润剂或与悬浮剂(例如聚乙烯吡咯酮)混合的活性成分，以及增甜剂或口味校正剂。使用栓剂可以影响直肠给药，这些栓剂在直肠温度处与粘合剂熔化来制备(例如，可可脂和/或聚乙二醇)。使用水性悬浮液、等渗盐溶液、或可注射的无菌溶液可以影响肠外给药，这些悬浮液或溶液包含药理学兼容的分散剂和/或湿润剂(例如，丙二醇和/或聚乙二醇)。该活性成分还可以被配制成微囊剂或微球，可任选地具有一种或多种载体或添加剂。该活性成分还能以与一种环糊精的络合物的形式存在，例如，α-、β-、或γ-环糊精，2-羟丙基-β-环糊精，和/或甲基-β-环糊精。

在本发明进一步的实施方案中，每日给予的本发明的组合物的剂量将因人而异并且在一定程度上由正在治疗的脂肪肝的严重性来确定。本发明的组合物的剂量还取决于所给予的组合物而变化。本发明的组合物的剂量的实例包括从大约0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.03mg/kg、0.04mg/kg、0.05mg/kg、0.06mg/kg、0.07mg/kg、0.08mg/kg、0.09mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、76mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、至100mg/kg哺乳动物体重。这些组合物中含有的5-ALA类的量按照5-ALA盐酸盐换算，成人每天2mg～800mg，优选为10mg～500mg，进一步优选为50mg～400mg。

本发明的组合物能以单次剂量或一段时间内的许多较小的剂量来给予。给予该组合物的时长因人而异，并且可以持续直到达到所希望的结果(即脂肪肝症状的减轻，或预防脂肪肝症状的发展)。因此，治疗可以从1天持续到数周、数月、或者甚至数年，这取决于正在接受治疗的受试者、所希望的结果、以及该患者对根据本发明的治疗的响应速度。

在本发明进一步的实施方案中，本发明的组合物含有金属化合物，其选自铁化合物、镁化合物或锌化合物，优选铁化合物作为有效成分。作为本发明中的铁化合物，若为在分子内具有铁的化合物则不特别限定，可以举出例如柠檬酸亚铁、柠檬酸亚铁钠、柠檬酸铁钠、柠檬酸铁铵、焦磷酸铁、血红素铁、葡聚糖铁、乳酸铁、葡糖酸亚铁、DTPA铁、二亚乙基三胺五乙酸铁钠、二亚乙基三胺五乙酸铁铵、乙二胺四乙酸铁钠、乙二胺五乙酸铁铵、三亚乙基四胺铁、二羧甲基谷氨酸铁钠、二羧甲基谷氨酸铵铁铵、乳铁蛋白铁、转铁蛋白铁、氯化铁、三氧化二铁、铁叶绿素钠、铁蛋白铁、富马酸亚铁、焦磷酸亚铁、含糖氧化铁、乙酸铁、草酸铁、琥珀酸亚铁、琥珀酸柠檬酸铁钠、硫酸铁和硫化甘氨酸铁，其中优选为柠檬酸亚铁、柠檬酸铁钠。这些铁化合物可以分别单独使用或混合2种以上来使用。本发明的组合物中含有的铁化合物通常相对于5-ALA的给药量，以摩尔比计为0-70：1即可，优选0.5-5：1。

在本发明的另一个实施方案中，本发明的组合物不含有金属化合物。

本发明证实，无需与金属化合物例如铁化合物联用的5-ALA同样能够实现预防、缓解和/或治疗脂肪肝的效果，由此可以减少或避免因长期、大量服用引起的例如体内铁负荷增加对肝脏、心脏、内分泌腺等造成的损害。

在本发明进一步的实施方案中，本发明的组合物还可以与其它预防、缓解和/或治疗脂肪肝的预防剂或改善剂或治疗剂组合使用。

在本发明的另一个实施方案中，本发明的组合物进一步含有药学上可接受的载体。

在本发明的另一个实施方案中，本发明的脂肪肝是非酒精性脂肪性肝。

在本发明的另一个实施方案中，本发明的脂肪肝是酒精性脂肪性肝。

5-ALA通常作为一个潜在的调控代谢、抗衰老的药物。本发明发现，5-ALA处理约9周后，处理组肥胖小鼠体重、肝脏和脂肪重量、葡萄糖耐量(IPGTT)、胰岛素耐量(ITT)等糖代谢指标有一定程度的改善。而尤其令人惊讶的是，5-ALA可以显著降低肥胖小鼠肝脏内的脂肪堆积，改善脂肪肝状况，而且针对脂肪肝的改善效果比对糖代谢的改善效果更为明显，这说明5-ALA对脂肪肝的改善可能存在直接的作用，而并非因对糖代谢改善所引起的伴随现象。这种较强的特异性作用提示脂肪肝可以作为5-ALA治疗的独立适应症。另外，5-ALA单独处理即可有效改善脂肪肝，由此可以减少或避免因长期、大量服用引起的例如体内铁负荷增加对肝脏、心脏、内分泌腺等造成的损害。

因此，本研究首次发现5-ALA能够显著改善脂肪肝，对今后的脂肪肝预防、缓解和/或治疗具有重要意义，但相关分子机制仍有待进一步的研究，以期寻找5-ALA的作用靶位点，为脂肪肝的临床治疗提供药理支持。

实施例

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但下述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施方式并不受下述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

实施例1、肥胖小鼠模型建立

1.实验动物：

10只8周龄健康c57BL/6J品系雄性小鼠，购自中科院上海实验动物中心，所有小鼠饲养于上海交通大学附属第六人民医院SPF级动物房中，动物实验许可证号：SYXK(沪)2007-0005。SPF清洁级饲养，室温(20±2℃)，相对湿度40％-70％，每日12h光照，昼夜循环，自由进水进食。

2.肥胖小鼠模型的建立：

8周龄小鼠以高脂饲料(45％高脂饲料，美国Research Diet公司，货号D12451)喂养3个月后，建立高脂诱导的肥胖小鼠模型。

实施例2、5-ALA处理的肥胖小鼠体重及肝脏和脂肪重量的检测

将成功造模的肥胖小鼠模型分为两组，一组(处理组)以约200ul 5-ALA(5mg/kg/天，苏州益安生物科技有限公司商业化产品)灌胃(n＝5)，另一组(对照组)以约200ul PBS灌胃(n＝5)。

1.小鼠体重、摄食监控

在小鼠生长的过程中，监控小鼠的体重以及小鼠的摄食。结果显示，与对照组相比，5-ALA在对小鼠摄食量没有显著影响的情况下(见图1A)，可以在一定程度上减轻小鼠的体重(见图1B)。

2.小鼠肝脏、脂肪重量检测

肥胖小鼠分别以5-ALA和PBS灌胃9周后，用戊巴比妥钠麻醉小鼠，完整分离小鼠的肝脏和脂肪并称重。结果显示，与对照组相比，5-ALA可以在一定程度上降低小鼠的肝脏、脂肪重量(见图1C，1D)。

实施例3、5-ALA处理的肥胖小鼠糖代谢水平的检测

1.小鼠空腹血糖变化

在小鼠生长的过程中，每周于空腹12小时后检测两组小鼠的空腹血糖，以监控其空腹血糖变化。结果显示，与对照组相比，5-ALA的长时间处理能够在一定程度上降低肥胖小鼠的空腹血糖水平(见图2A)。

2.葡萄糖耐受试验(GTT)

肥胖小鼠分别以5-ALA和PBS灌胃9周后，进行葡萄糖耐受试验。小鼠饥饿16小时后，腹腔注射葡萄糖(0.1g/kg体重)，用血糖试纸检测注射葡萄糖前和注射葡萄糖后15、30、60及90分钟的血糖值，观察小鼠葡萄糖的耐受能力是否有影响。结果显示，与对照组相比，5-ALA在一定程度上改善肥胖小鼠的葡萄糖耐量(见图2B)。

3.胰岛素耐受试验(ITT)

肥胖小鼠分别以5-ALA和PBS灌胃9周后，进行胰岛素耐受试验。小鼠饥饿6小时后，腹腔注射胰岛素(0.75U/kg体重)，用血糖试纸来检测注射胰岛素前和注射胰岛素后的血糖水平。结果显示，与对照组相比，5-ALA在一定程度上改善肥胖小鼠的胰岛素敏感性(见图2C)。

实施例4、5-ALA处理的小鼠脂代谢水平的检测

1.小鼠肝脏组织染色

喂养9周后，用戊巴比妥钠麻醉小鼠，分离完整小鼠的肝脏组织，冰冻切片，并用油红O染色。结果显示，与对照组(见图3A)相比，5-ALA明显减少肥胖小鼠肝脏中的脂质沉积(见图3B)。

2.小鼠肝脏脂质含量分析

喂养9周后，用戊巴比妥钠麻醉小鼠，分离小鼠的肝脏组织，按比例添加氯仿甲醇，匀浆后离心取上清液，再用甘油三酯(Tg)试剂盒测定肝脏组织中的甘油三酯含量。结果显示，与对照组相比，5-ALA显著降低肥胖小鼠肝脏中的甘油三酯含量(见图3C，**表示P<0.01)。

3.qPCR检测肝脏脂肪酸氧化相关基因Aox、CPT-1α的表达变化

3.1.RNA的提取以及逆转录

使用Qiagen公司RNeasy Plus Mini试剂盒提取小鼠肝脏RNA，得到RNA后检测纯度及浓度(总RNA的OD260/280>1.9)，再用TaKaRa公司的RNase-free DNase I试剂盒处理纯化得到总RNA(OD260/280>1.9)，同样取2μg RNA按照Invitrogen公司M-MLV reverse transcriptase逆转录系统提供的说明书，选用随机引物进行反转录，得到cDNA。使用r-Taq或者Ex-TaqDNA聚合酶进行常规PCR扩增。PCR反应条件：94℃首轮变性2分钟；94℃变性30秒，基因特异的退火温度复性30秒，72℃延伸30秒，约25个循环(检测XBP1基因时35个循环)；72℃延伸5分钟，4℃冷却。

3.2.Realtime-PCR(qRT-PCR)

使用Applied Biosystems公司的SYBR Green PCR system，以GAPDH为内参，使用10ul反应体系进行基因的实时荧光定量PCR，检测肝脏脂肪酸氧化相关基因Aox、CPT-1α的表达。实时荧光定量PCR时每一对引物扩增出来的PCR产物都均用熔解曲线进行分析，基本要求是：80℃左右熔解曲线为单峰，核酸胶电泳显示单条带。

结果显示，虽然对照组和5-ALA处理组小鼠中的肝脏脂肪酸氧化相关基因Aox的表达没有明显差异，但另一种肝脏脂肪酸氧化相关基因CPT-1α在5-ALA处理组小鼠中的表达与对照组相比显著升高(见图4A)。基因CPT-1α的表达水平代表了脂肪酸氧化能力，CPT-1α表达水平越高，表明脂肪肝症状越轻。

4.qPCR检测肝脏组织内质网应激相关基因CHOP、ERDJ4、Bip、XBP-1的表达变化

喂养9周后，用戊巴比妥钠麻醉小鼠，取小鼠的脂肪组织，针对其进行RNA的提取以及逆转录、Realtime-PCR(qRT-PCR)，方法同上。对肝脏组织CHOP、ERDJ4、Bip、XBP-1基因进行实时荧光定量PCR检测。结果显示，对照组和5-ALA处理组小鼠肝脏组织内质网应激相关基因CHOP、ERDJ4、Bip的表达没有显著差异；相比之下，5-ALA处理明显降低小鼠脂肪组织内质网应激相关基因XBP-1的表达(见图4B、4C，**表示P<0.01)。作为内质网应激的一个指标的基因XBP-1的表达显著降低，表示脂肪肝有所缓解。

5.统计学分析

以上统计学处理数据采用均数±s表示，组间比较采用Student’s t检验，P<0.05表示有统计学意义(图中以*表示P<0.05，以**表示P<0.01)。

Claims (9)

1.一种预防、缓解和/或治疗脂肪肝的组合物，其特征在于，含有氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物或它们的盐。

2.氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物或它们的盐在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝的组合物中的应用。

3.权利要求1或2的组合物或应用，其特征在于，所述5-ALA衍生物选自具有酯基或酰基的衍生物，优选甲酯基、乙酯基、丙酯基、丁酯基或戊酯基；所述盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硝酸盐、硫酸盐、乙酸盐、丙酸盐、甲苯磺酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、乙醇酸盐、甲磺酸盐、丁酸盐、戊酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、钠盐、钾盐、钙盐或铵盐，优选盐酸盐、磷酸盐或硫酸盐。

4.权利要求3的组合物或应用，其特征在于，所述5-ALA或其衍生物或它们的盐的量按照5-ALA盐酸盐换算，成人每天2mg～800mg，优选为10mg～500mg，进一步优选为50mg～400mg。

5.权利要求1-4任一项的组合物或应用，其特征在于，所述组合物含有金属化合物，优选地，所述金属化合物选自铁化合物、镁化合物或锌化合物，进一步优选地，所述铁化合物选自柠檬酸亚铁、柠檬酸亚铁钠、柠檬酸铁钠、柠檬酸铁铵、焦磷酸铁、血红素铁、葡聚糖铁、乳酸铁、葡糖酸亚铁、DTPA铁、二亚乙基三胺五乙酸铁钠、二亚乙基三胺五乙酸铁铵、乙二胺四乙酸铁钠、乙二胺五乙酸铁铵、三亚乙基四胺铁、二羧甲基谷氨酸铁钠、二羧甲基谷氨酸铵铁铵、乳铁蛋白铁、转铁蛋白铁、氯化铁、三氧化二铁、铁叶绿素钠、铁蛋白铁、富马酸亚铁、焦磷酸亚铁、含糖氧化铁、乙酸铁、草酸铁、琥珀酸亚铁、琥珀酸柠檬酸铁钠、硫酸铁和硫化甘氨酸铁中的一或多种，尤其优选地，所述铁化合物与5-ALA的摩尔比为0-70：1，优选0.5-5：1。

6.权利要求1-4任一项的组合物或应用，其特征在于，所述组合物不含有铁化合物。

7.权利要求1-6任一项的组合物或应用，其特征在于，所述组合物进一步含有药学上可接受的载体。

8.如权利要求1-6任一项的组合物或应用，其中所述脂肪肝是非酒精性脂肪性肝。

9.如权利要求1-6任一项的组合物或应用，其中所述脂肪肝是酒精性脂肪性肝。