CN105842350A - 利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法，他达拉非合成中间体含有(1R，3R)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐(式3所示化合物)和(1R，3R)-2-氯乙酰基卡琳-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯(式5所示化合物)，高效液相色谱：采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；采用乙腈作为流动相A；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B，其中，进样流速为0.90～1.10ml/min。该方法可以很好的分离式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体，并且灵敏度高，专属性强，从而可以实现对他达拉非的合成过程中的合成中间体进行严格监控。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体而言，本发明涉及一种利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法。
背景技术
他达拉非是环磷酸鸟苷(cGMP)特异性磷酸二酯酶5(PDE5)的选择性可逆抑制剂，临床用于治疗男性勃起功能障碍和肺动脉高血压。他达拉非是采用D-色氨酸甲酯盐酸盐(式1所示化合物)和胡椒醛(式2所示化合物)作为起始原料反应制备得到的。然而为了提高他达拉非原料药的质量和产率，需要在他达拉非的合成过程中严格监控每一步合成中间体的纯度，以便使他达拉非终产品的质量和产率得到一个满意的结果。其中，两个中间体及其异构体分别为(1R，3R)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐(式3所示化合物)、(1R，3S)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐(式4所示化合物，其为式3所示化合物的异构体)、(1R，3R)-2-氯乙酰基卡琳-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯(式5所示化合物)和(1R，3S)-2-氯乙酰基卡琳-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯(式6所示化合物，其为式5所示化合物的异构体)。
现有技术中报道两个中间体式3所示化合物、式5所示化合物的检测方法中采用苯基柱进行测定，然而检测的结果式3所示化合物峰型较差、拖尾现象严重且与其异构体未达到基线分离。因此，建立一套科学的分析方法，对于更有效、更全面的控制产品质量，具有重要的应用价值。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法，该方法可以很好的分离式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体，并且灵敏度高，专属性强，从而可以实现对他达拉非的合成过程中的合成中间体进行严格监控，进而显著提高他达拉非终产品的质量和产率。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法，所述他达拉非合成中间体含有(1R，3R)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐(式3所示化合物)和(1R，3R)-2-氯乙酰基卡琳-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯(式5所示化合物)，所述高效液相色谱：
采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；
采用乙腈作为流动相A；以及
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B，
其中，进样流速为0.90～1.10ml/min。
由此，根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法可以很好的分离式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体，并且灵敏度高，专属性强，从而可以实现对他达拉非的合成过程中的合成中间体进行严格监控，进而显著提高他达拉非终产品的质量和产率。
另外，根据本发明上述实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，检测波长为282～286nm。由此，可以显著提高检测灵敏度。
在本发明的一些实施例中，所述色谱柱的柱温为35～42摄氏度。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述色谱柱的柱温为40摄氏度。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述色谱柱为Venusil ASB Ti C8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱，乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 25～35 | 75～65 |
| 10 | 25～35 | 75～65 |
| 13 | 45～55 | 55～45 |
| 30 | 60～70 | 40～30 |
其中，柱温为35～42摄氏度，检测波长为282～286nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为20μL。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB TiC8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 30 | 70 |
| 10 | 30 | 70 |
| 13 | 50 | 50 |
| 30 | 65 | 35 |
其中，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20μL。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
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其中，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20μL。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的异构体的分离效果。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是式3所示化合物的紫外扫描图；
图2是式5所示化合物的紫外扫描图；
图3是采用苯基色谱柱所得的式3所示化合物的HPLC图谱图；
图4是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法所得的式3所示化合物的HPLC图谱图；
图5是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法所得的式5所示化合物的HPLC图谱图；
图6是采用本发明一个实施例的利用高效液相分析他达拉非合成中间体的方法所得的式3所示化合物和式5所示化合物及杂质的HPLC图谱图。
具体实施方式
下面通过参考本发明的实施例对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。除非特殊说明，在实施例中所进行的操作均为按照《中华人民共和国药典》以及本领域中公知的方法进行的。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法。根据本发明的实施例，该他达拉非合成中间体含有(1R，3R)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐(式3所示化合物)和(1R，3R)-2-氯乙酰基卡琳-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯(式5所示化合物)。根据本发明的实施例，该高效液相色谱可以采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；采用乙腈作为流动相A；以及采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B，其中，进样流速为0.9～1.10ml/min。
发明人惊奇的发现，该方法中通过采用辛烷基键合硅胶柱色谱柱可以有效实现式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离，并且检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性，同时较传统的采用苯基色谱柱相比，采用本发明测定方法所得式3所示化合物的峰形好且没有拖尾现象，从而可以得到可靠的式3所示化合物和式5所示化合物检测数据，进而可以实现对他达拉非的合成过程中的合成中间体进行严格监控，进而显著提高他达拉非终产品的质量和产率。
根据本发明的实施例，利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法采用的检测波长并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，可以采用的检测波长为282～286nm。发明人通过大量实验意外发现，该检测波长下式3所示化合物与式5所示化合物具有最大吸收，且峰型较好。
根据本发明的又一个实施例，色谱柱的柱温并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，色谱柱的柱温可以为35～42摄氏度。发明人发现，该温度下式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离效果较好，从而提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。根据本发明的具体示例，色谱柱的柱温为40摄氏度。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的再一个实施例，色谱柱中填料的粒径并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，色谱柱中填料的粒径可以为4～6微米。发明人发现，该条件下可以显著提高式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离效果，从而进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。根据本发明的具体示例，色谱柱中填料的粒径可以为5微米。由此，可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，辛烷基键合硅胶柱的具体类型并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，辛烷基键合硅胶柱为VenusilASB Ti C8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱。发明人发现，选择Venusil ASB Ti C8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱较其他色谱柱可以显著提高式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离效果，从而进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，本发明的利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体(式3所示化合物或式5所示化合物)的方法可以采用以下步骤：
(1)将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液(以下简称乙腈水溶液)，取式3所示化合物(或式5所示化合物)适量，用乙腈水溶液振摇使溶解，配制成1ml含式3所示化合物(或式5所示化合物)0.2mg的供试品溶液；
(2)色谱条件：采用高效液相色谱法，配备紫外检测器；采用辛烷基键合硅胶柱作为色谱柱，采用乙腈作为流动相A，采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B，进行梯度洗脱，其中，梯度洗脱的条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 25～35 | 75～65 |
| 10 | 25～35 | 75～65 |
| 13 | 45～55 | 55～45 |
| 30 | 60～70 | 40～30 |
柱温为35～42摄氏度，检测波长为282～286nm，进样流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为20μL。
(3)取上述式3所示化合物(或式5所示化合物)样品20μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 25 | 75 |
| 10 | 25 | 75 |
| 13 | 45 | 55 |
| 30 | 60 | 40 |
其中，柱温为35摄氏度，检测波长为282nm，流速为0.90ml/min，进样体积为20μL。由此，该条件下可以显著提高式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离效果，从而进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 30 | 70 |
| 10 | 30 | 70 |
| 13 | 50 | 50 |
| 30 | 65 | 35 |
其中，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20μL。由此，该条件下可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 35 | 65 |
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其中，柱温为42摄氏度，检测波长为286nm，流速为1.10ml/min，进样体积为20μL。由此，该条件下可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
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其中，柱温为35摄氏度，检测波长为282nm，流速为0.90ml/min，进样体积为20μL。由此，该条件下可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
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其中，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20μL。由此，该条件下可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 10 | 35 | 65 |
| 13 | 55 | 45 |
| 30 | 70 | 30 |
其中，柱温为42摄氏度，检测波长为286nm，流速为1.10ml/min，进样体积为20μL。由此，该条件下可以进一步提高式3所示化合物、式5所示化合物检测数据的可靠性。
由此，采用本发明的分析条件可以有效实现式3所示化合物、式5所示化合物及其与二者的异构体的分离，并且检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性，同时较传统的采用苯基色谱柱相比，采用本发明测定方法所得式3所示化合物的峰形好且没有拖尾现象，从而可以得到可靠的式3所示化合物和式5所示化合物检测数据，进而可以实现对他达拉非的合成过程中的合成中间体进行严格监控，进而显著提高他达拉非终产品的质量和产率。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实验例1
检测波长的确定：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，然后取式3所示化合物和式5所示化合物分别与乙腈水溶液混合，得到浓度均为20μg/ml的式3所示化合物和式5所示化合物溶液，然后分别取式3所示化合物溶液和式5所示化合物溶液在紫外-可见分光光度计在190～400nm进行全扫描，式3所示化合物和式5所示化合物的紫外扫描图分别见图1和图2所示。由两图可知，式3所示化合物和式5所示化合物的最大吸收波长均为285±1nm，故选择285±1nm作为检测波长。
实验例2
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-phenyl柱，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：40℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(％v/v) | 流动相B(％v/v) |
| 0 | 23 | 77 |
| 15 | 40 | 60 |
| 30 | 55 | 45 |
实验步骤：
(1)取式3所示化合物适量，用体积比为1：1的乙腈水溶液溶解，得到含式3所示化合物的浓度为0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液。
(2)取上述(1)中得到的供试品溶液20μL，照上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，式3所示化合物测定的HPCL图谱如图3所示。
由图3可知，式3所示化合物的溶液与其异构体杂质(式4所示化合物)未达到基线分离，且杂质峰型对对称性较差。
实验例3
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：40℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 30 | 70 |
| 10 | 30 | 70 |
| 13 | 50 | 50 |
| 30 | 65 | 35 |
实验步骤：
(1)取式3所示化合物适量，用体积比为1：1乙腈水溶液溶解，得到含式3所示化合物的浓度为0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液。
(2)取上述(1)中得到的供试品溶液20μL，照上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，式3所示化合物测定的HPCL图谱如图4所示。
由图4可知，与图3相比，式3所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式4所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例4
色谱条件：同实验例3；
实验步骤：
(1)取式5所示化合物适量，用体积比为1：1乙腈水溶液溶解，得到含式5所示化合物的浓度为0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液。
(2)取上述(1)中得到的供试品溶液20μL，照上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，式5所示化合物测定的HPCL图谱如图5所示。
由图5可知，式5所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式6所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例5
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：40℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 30 | 70 |
| 10 | 30 | 70 |
| 13 | 50 | 50 |
| 30 | 65 | 35 |
实验步骤：同实施例3；
结果：式3所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式4所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例6
色谱条件：同实施例5；
实验步骤：同实施例4；
结果：式5所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式6所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例7
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：0.90mL/min；检测波长：282nm；柱温：35℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 25 | 75 |
| 10 | 25 | 75 |
| 13 | 45 | 55 |
| 30 | 60 | 40 |
实验步骤：同实施例3
结果：式3所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式4所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例8
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：1.10mL/min；检测波长：286nm；柱温：42℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 10 | 35 | 65 |
| 13 | 55 | 45 |
| 30 | 70 | 30 |
实验步骤：同实施例3
结果：式3所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式4所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例9
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：0.90mL/min；检测波长：282nm；柱温：35℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 25 | 75 |
| 10 | 25 | 75 |
| 13 | 45 | 55 |
| 30 | 60 | 40 |
实验步骤：同实施例4
结果：式5所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式6所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例10
色谱条件：
高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用乙腈作为流动相A；采用0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下表；流速：1.10mL/min；检测波长：286nm；柱温：42℃；进样体积：20μL；
| 时间(min) | 流动相A(V％) | 流动相B(V％) |
| 0 | 35 | 65 |
| 10 | 35 | 65 |
| 13 | 55 | 45 |
| 30 | 70 | 30 |
实验步骤：同实施例4
结果：式5所示化合物的色谱峰中主峰与其异构体杂质(式6所示化合物)可以达到良好的分离，且峰型好。
实验例11
色谱条件：同实验例3；
实验步骤：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，分别取式3所示化合物、式5所示化合物和各杂质(分别标记为杂质1(式1所示化合物)、杂质2(式2所示化合物)、杂质3(式4所示化合物)、杂质4(式6所示化合物)对照品适量，然后依次加入乙腈水溶液制成分别含式3所示化合物、式5所示化合物和各杂质2μg/ml的混合溶液作为供试品溶液，然后将供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图6所示。
由图6可知，该色谱图中式3所示化合物、式5所示化合物主峰与各杂质分离度均大于1.5，表明本发明的方法能够有效将式3所示化合物、式5所示化合物和各杂质分离。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (8)
1.一种利用高效液相色谱分析他达拉非合成中间体的方法，所述他达拉非合成中间体含有(1R，3R)-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐和(1R，3R)-2-氯乙酰基卡琳-1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氢-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯，其特征在于，所述高效液相色谱：
采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；
采用乙腈作为流动相A；以及
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相B，
其中，进样流速为0.90～1.10ml/min。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为282～286nm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为35～42摄氏度。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为40摄氏度。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辛烷基键合硅胶柱为Venusil ASB TiC8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱，乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
其中，柱温为35～42摄氏度，检测波长为282～286nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为20μL。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
其中，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20μL。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，采用乙腈为流动相A，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：
其中，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20μL。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108169395A (zh) * | 2017-11-21 | 2018-06-15 | 湖北生物医药产业技术研究院有限公司 | 他达拉非片有关物质的分析检测方法 |
| CN108627576A (zh) * | 2017-03-17 | 2018-10-09 | 武汉宏韧生物医药科技有限公司 | 一种人血浆中他达拉非的定量分析方法 |
| CN110243964A (zh) * | 2019-06-25 | 2019-09-17 | 西安建筑科技大学 | 一种水处理工艺中微生物体内鸟苷四磷酸的hplc检测方法 |
| CN111721874A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-29 | 南京赛尔健生物技术有限公司 | 一种分离他达拉非与其手性异构体的hplc方法 |
| CN115184527A (zh) * | 2022-07-13 | 2022-10-14 | 修正药业集团柳河制药有限公司 | 一种洋茉莉醛杂质的检测方法 |
| CN115728428A (zh) * | 2022-11-15 | 2023-03-03 | 山东省医药工业设计院有限公司 | 一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100430395C (zh) * | 2002-07-31 | 2008-11-05 | 利利艾科斯有限公司 | 改进的皮克特-施彭格勒反应和由该反应制备得到的产物 |
| CN103926336A (zh) * | 2013-12-18 | 2014-07-16 | 重庆市食品药品检验所 | 一种非法添加壮阳类化学成分的液-质多指标快速检测方法 |
| CN104557920A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-04-29 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种他达那非中间体的制备方法 |
-
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100430395C (zh) * | 2002-07-31 | 2008-11-05 | 利利艾科斯有限公司 | 改进的皮克特-施彭格勒反应和由该反应制备得到的产物 |
| CN103926336A (zh) * | 2013-12-18 | 2014-07-16 | 重庆市食品药品检验所 | 一种非法添加壮阳类化学成分的液-质多指标快速检测方法 |
| CN104557920A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-04-29 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种他达那非中间体的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| EUROPEAN DIRECTORATE FOR THE QUALITY OF MEDICINES & HEALTHCARE: "Tadalafil", 《EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0》 * |
| SARA E. KERN ET AL.: "Isolation and structural characterization of a new tadalafil analog (2-hydroxyethylnortadalafil) found in dietary supplement", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 * |
| THE UNITED STATES PHARMACOPEIAL CONVENTION: "Tadalafil", 《USP36-NF31》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108627576A (zh) * | 2017-03-17 | 2018-10-09 | 武汉宏韧生物医药科技有限公司 | 一种人血浆中他达拉非的定量分析方法 |
| CN108169395A (zh) * | 2017-11-21 | 2018-06-15 | 湖北生物医药产业技术研究院有限公司 | 他达拉非片有关物质的分析检测方法 |
| CN110243964A (zh) * | 2019-06-25 | 2019-09-17 | 西安建筑科技大学 | 一种水处理工艺中微生物体内鸟苷四磷酸的hplc检测方法 |
| CN111721874A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-29 | 南京赛尔健生物技术有限公司 | 一种分离他达拉非与其手性异构体的hplc方法 |
| CN115184527A (zh) * | 2022-07-13 | 2022-10-14 | 修正药业集团柳河制药有限公司 | 一种洋茉莉醛杂质的检测方法 |
| CN115184527B (zh) * | 2022-07-13 | 2024-01-30 | 修正药业集团柳河制药有限公司 | 一种洋茉莉醛杂质的检测方法 |
| CN115728428A (zh) * | 2022-11-15 | 2023-03-03 | 山东省医药工业设计院有限公司 | 一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法 |
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