CN105838764A - 一种酶法制备藏羊血多肽的方法 - Google Patents

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杜万立
杨晓玲
李明艳
叶英
任姝
吴海燕
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Qinghai University
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    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

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Abstract

一种酶解制备藏羊血多肽的方法，涉及藏羊血液制备多肽产品的领域，包括以下步骤：（1）将柠檬酸钠溶解于蒸馏水迅速加入藏羊血液中；（2）上述混合物过滤、喷雾干燥既得藏羊血粉；（3）将所述藏羊血粉溶解为浓度3.5%‑4.5%，搅拌均匀调温至40‑50℃，加浓度3500‑4500 U/g的木瓜蛋白酶，HCl调节pH值至10.45‑10.55，NaOH使pH值变化在+0.05范围内，酶解5‑7h后，HCl调节pH值至4.5，离心；（4）取上清液，加入百分比1‑3%活性炭，调节pH值3‑7，在温度30℃‑70℃下脱色0.5‑3h，取脱色液，测得吸光值和多肽损失率；（5）最后经超滤、浓缩及干燥制得成品。

Description

一种酶法制备藏羊血多肽的方法
技术领域
本发明涉及藏羊血液制备多肽产品的领域，尤其涉及一种酶法制备藏羊血多肽的方法。
背景技术
藏羊血是一种资源丰富的工业副产品，同时是营养丰富的蛋白质资源。血中的血红蛋白占全血蛋白质总量的2/3 以上，是藏羊血中的重要营养成份，已有研究证明，藏羊血红蛋白多肽具有降血压、抗氧化、抗菌和增强免疫力等多种生物活性。血红素或血红素肽则是一种优良的补铁剂。与硫酸亚铁补铁剂相比，血红素铁的生物利用率高出 23%。欧美将动物血用于饲料及其它重要领域已有数十年历史，大量的科学证据和应用实例已经证明其营养价值和特殊的生物活性，以动物血为原料制成的产品已经进入饲料、食品、保健、医药等产业，成为其中重要的一种成分。我国在2002年开始起步建立动物血初级加工生产线，只生产普通血浆蛋白粉和血球蛋白粉。近两年，国内已有企业开始采用纳滤浓缩技术，生产低灰分血浆蛋白粉和利用酶解技术生产珠蛋白肽产品。
目前，随着酶法水解技术的兴起，利用生物酶水解蛋白制备蛋白肽的研究越来越多。酶法制备的优点在于可以避免酸碱水解血红蛋白时出现的生产周期长、腐蚀设备和污染环境等缺陷，而且扩大了水解产物的应用范围。血红蛋白在被降解成多肽的同时，释放出血红素或血红素肽，而适当的酶解能够释放出血红素/多肽氮比率高、酸溶性好和消化利用率高的富血红素多肽。因此，通过酶解藏羊血红蛋白生产富血红素多肽，能够变废为宝，具有巨大的经济价值和重大的环保意义，国内外正掀起利用酶法水解猪血红蛋白制备富血红素多肽的研究热潮。血红素的提取和富血红素多肽的研究来源是从藏羊血、牛血中提取血红素。
因此，本发明人采用酶法制备藏羊血液多肽，通过对酶解过程中对多肽损失率及脱色效果的影响因素的研究确定最佳工艺条件。
发明内容
本发明目的在于提供一种酶法制备藏羊血多肽的方法，旨在实现用酶法水解技术生产藏羊血多肽。改善藏羊血这一资源副产品的品质，提高其利用率，可避免酸碱水解血红蛋白生产周期长、腐蚀设备和污染环境的缺陷，能够变废为宝，具有较好的经济价值。
为解决上述问题，本发明所述的一种酶法制备藏羊血多肽的方法，包括以下步骤：
（1）选择现宰的新鲜的藏羊血液，将质量50g柠檬酸钠溶解于1000mL蒸馏水，迅速加入收集的新鲜藏羊血液中进行抗凝；
（2）将上述抗凝混合物过滤后，在进风温度为160℃，蠕动泵进料速度为45mL/h条件下喷雾干燥既得藏羊血粉；
（3）将所述藏羊血粉加水溶解，溶解底物浓度达到3.5%-4.5%，搅拌均匀，调节恒温水浴锅至40℃-50℃，加入酶浓度为3 500 U/g-4500 U/g的木瓜蛋白酶，用6mol/L HCl调节酶解液pH值至10.45-10.55范围内，连续搅拌并不断加入6mol/L NaOH，维持pH值的变化在规定的+0.05的范围内，酶解5h -7h时间，酶解完成后，用6 mol/L HCl调节溶液pH值至4. 5，并升温至90℃维持20 min，迅速冷却至室温，置于离心管中，在4000r/min下离心20 min，倒出上清液，记录总体积；
（4）将上述100mL上清液，加入百分比1%-2.5%活性炭量，调节溶液pH值至3-7，在温度范围30℃-70℃下脱色0.5h-3h，分别取出10mL脱色液，用蒸馏水定容到100mL，测得其吸光值，计算其吸光值、多肽损失率；
（5）最后进行超滤、浓缩及干燥，制得藏羊血多肽。
本发明的有益效果：
（1）依据本发明方法制备的藏羊血多肽，产品得率高，脱色效果好。
（2）与现有技术相比，产品得率提高了20.5%，脱色率提高了25.3%。
（3）解决了酸碱水解血红蛋白生产周期长，腐蚀设备和污染环境的缺陷。
具体实施方式
实施例1 一种酶法制备藏羊血多肽的方法，包括以下步骤：
（1）选择现宰的新鲜的藏羊血液，将质量50g柠檬酸钠溶解于1000mL蒸馏水，迅速加入收集的新鲜藏羊血液中进行抗凝；
（2）将上述抗凝混合物过滤后，在进风温度为160℃，蠕动泵进料速度为45mL/h条件下喷雾干燥既得藏羊血粉；
（3）将所述藏羊血粉加水溶解，溶解底物浓度达到3.5%，搅拌均匀，调节恒温水浴锅至40℃，加入酶浓度为3500 U/g的木瓜蛋白酶，用6mol/L HCl调节酶解液pH值至10.45范围内，连续搅拌并不断加入6mol/L NaOH，维持pH值的变化在规定的+0.05的范围内，酶解5h时间，酶解完成后，用6mol/L HCl调节溶液pH值至4. 5，并升温至90℃维持20 min，迅速冷却至室温，置于离心管中，在4000 r/min下离心20 min，倒出上清液，记录总体积；
（4）将上述100mL上清液，加入百分比1%活性炭量，调节溶液pH值至3，在温度30℃下脱色0.5h，分别取出10mL脱色液，用蒸馏水定容到100mL，测得其吸光值，计算其吸光值、多肽损失率；
（5）最后进行超滤、浓缩及干燥，制得藏羊血多肽。
该参数酶解制备藏羊血多肽后，酶解液脱色效果较好，多肽损失变化也较平稳。
实施例2 一种酶法制备藏羊血多肽的方法，包括以下步骤：
（1）选择现宰的新鲜的藏羊血液，将质量50g柠檬酸钠溶解于1000mL蒸馏水，迅速加入收集的新鲜藏羊血液中进行抗凝；
（2）将上述抗凝混合物过滤后，在进风温度为160℃，蠕动泵进料速度为45mL/h条件下喷雾干燥既得藏羊血粉；
（3）将所述藏羊血粉加水溶解，溶解底物浓度达到4%，搅拌均匀，调节恒温水浴锅至45℃，加入酶浓度为4000 U/g的木瓜蛋白酶，用6mol/L HCl调节酶解液pH值至10.5范围内，连续搅拌并不断加入6mol/L NaOH，维持pH值的变化在规定的+0.05的范围内，酶解6 h时间，酶解完成后，用6 mol/L HCl调节溶液pH值至4. 5，并升温至90℃维持20 min，迅速冷却至室温，置于离心管中，在4000 r/min下离心20 min，倒出上清液，记录总体积；
（4）将上述100mL上清液，加入百分比2%活性炭量，调节溶液pH值至5，在温度50℃下脱色2h，分别取出10mL脱色液，用蒸馏水定容到100mL，测得其吸光值，计算其吸光值、多肽损失率；
（5）最后进行超滤、浓缩及干燥，制得藏羊血多肽。
该参数酶解制备藏羊血多肽后，酶解液的颜色为浅黄色，达到了预期的脱色效果。
实施例3 一种酶法制备藏羊血多肽的方法，包括以下步骤：
（1）选择现宰的新鲜的藏羊血液，将质量50g柠檬酸钠溶解于1000mL蒸馏水，迅速加入收集的新鲜藏羊血液中进行抗凝；
（2）将上述抗凝混合物过滤后，在进风温度为160℃，蠕动泵进料速度为45mL/h条件下喷雾干燥既得藏羊血粉；
（3）将所述藏羊血粉加水溶解，溶解底物浓度达到4.5%，搅拌均匀，调节恒温水浴锅至50℃，加入酶浓度为4500 U/g的木瓜蛋白酶，用6mol/L HCl调节酶解液pH值至10.55范围内，连续搅拌并不断加入6mol/L NaOH，维持pH值的变化在规定的+0.05的范围内，酶解7h时间，酶解完成后，用6 mol/L HCl调节溶液pH值至4. 5，并升温至90℃维持20 min，迅速冷却至室温，置于离心管中，在4000 r/min下离心20 min，倒出上清液，记录总体积；
（4）将上述100mL上清液，加入百分比2.5%活性炭量，调节溶液pH值至7，在温度70℃下脱色3h，分别取出10mL脱色液，用蒸馏水定容到100mL，测得其吸光值，计算其吸光值、多肽损失率；
（5）最后进行超滤、浓缩及干燥，制得藏羊血多肽。
该参数酶解制备藏羊血多肽后，脱色率的增加幅度逐渐减小，而多肽损失率的增加幅度逐渐增大，说明在该范围内酶解液脱色效果较差，多肽损失较多。

Claims (1)

1.一种酶法制备藏羊血多肽的方法，该方法包括以下步骤：
（1）选择现宰的新鲜的藏羊血液，将质量50g柠檬酸钠溶解于1000mL蒸馏水，迅速加入收集的新鲜藏羊血液中进行抗凝；
（2）将上述抗凝混合物过滤后，在进风温度为160℃，蠕动泵进料速度为45mL/h条件下喷雾干燥既得藏羊血粉；
（3）将所述藏羊血粉加水溶解，溶解底物浓度达到3.5%-4.5%，搅拌均匀，调节恒温水浴锅至40℃-50℃，加入酶浓度为3 500 U/g-4500 U/g的木瓜蛋白酶，用6mol/L HCl调节酶解液pH值至10.45-10.55范围内，连续搅拌并不断加入6mol/L NaOH，维持pH值的变化在规定的+0.05的范围内，酶解5h -7h时间，酶解完成后，用6 mol/L HCl调节溶液pH值至4. 5，并升温至90℃维持20 min，迅速冷却至室温，置于离心管中，在4000r/min下离心20 min，倒出上清液，记录总体积；
（4）将上述100mL上清液，加入百分比1%-2.5%活性炭量，调节溶液pH值至3-7，在温度范围30℃-70℃下脱色0.5h-3h，分别取出10mL脱色液，用蒸馏水定容到100mL，测得其吸光值，计算其吸光值、多肽损失率；
（5）最后进行超滤、浓缩及干燥，制得藏羊血多肽。
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