CN105838658A

CN105838658A - 一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法

Info

Publication number: CN105838658A
Application number: CN201510871119.0A
Authority: CN
Inventors: 吴重德; 何桂强; 黄钧; 周荣清
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2015-12-02
Filing date: 2015-12-02
Publication date: 2016-08-10
Anticipated expiration: 2035-12-02
Also published as: CN105838658B

Abstract

本发明公开了一种通过添加脯氨酸提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，属于生物工程技术领域。本发明采用添加脯氨酸提高了乳酸菌在高盐发酵培养基中的生物量。本发明方法简单、操作方便、能有效提高乳酸菌在高盐环境下的生长性能，为工业生物技术特别是盐胁迫下乳酸菌的高密度培养提供了可借鉴的方法。

Description

一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法

技术领域

本发明涉及一种添加脯氨酸提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，属于发酵工程技术领域。

背景技术

乳酸菌的代谢产物乳酸等小分子有机酸，不仅能通过缩合反应与醇类产生酯类组分，赋予产品独特的风味，而且能使体系的pH降低抑制有害微生物，如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等的生长。因此，乳酸菌已广泛应用于高盐发酵调味品（酱油、鱼露、豆酱）的生产中。不同类型发酵调味品生产中，其盐分有较大差异，波动范围也不同。高盐胁迫环境严重影响乳酸菌的正常生理代谢，致使其难以充分发挥作用。由此可见，提高其对环境胁迫的抗性，具有重要意义。

盐胁迫还阻碍菌体密度进一步提高, 造成高活性乳酸菌发酵剂制备及乳酸菌高密度培养更加困难。本发明通过添加脯氨酸提高乳酸菌在高盐条件下的生物量，为乳酸菌发酵生产及工业化应用提供了可借鉴的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，是向高盐发酵培养基中添加脯氨酸。

所述脯氨酸的添加量为0.5g/L。

菌株：嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)CGMCC 3792，实验室从酱油醪中分离，经形态、生理生化特性试验和16S rDNA测序鉴定，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological Culture CollectionCenter,CGMCC),保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所；保藏日期为2010年4月29日，保藏编号为CGMCC 3792，并分类命名为嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)。

种子培养方法：种子培养基为5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白东，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/L MgSO₄.7H₂O，19 g/Lβ-甘油磷酸钠，pH为7.0。取-80℃保藏的乳酸菌甘油管储存液以5%（V/V）的接种量接种于种子培养基中，30℃静置培养24 h。

发酵培养方法：高盐发酵培养基为5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白东，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/LMgSO₄ ^.7H₂O，19 g/L β-甘油磷酸钠，NaCl浓度分别调至为12%和18%，pH为7.0。取种子液以5%（V/V）的接种量接种于高盐发酵培养基中，30℃静置培养48 h。

生物量的测定：取一定量的菌悬液离心收集菌体，用无菌水洗涤3次后稀释合适的倍数，摇匀，用TU-1901双束光紫外可见分光光度计，于600 nm处比浊测定OD值的大小。

本发明的有益效果：本发明提供的在高盐发酵培养基（12%NaCl和18%NaCl）中添加脯氨酸后T. halophilusCGMCC 3792的生物量比对照组（未添加脯氨酸）具有更好的生长性能。本发明提供的方法简单易行，可以使用外源添加脯氨酸的方法提高乳酸菌抵抗高盐胁迫的能力。

具体实施方式

实例1：当发酵培养基中NaCl浓度为12%时，T.halophilusCGMCC 3792生长情况（表1）

取种子液以5%的接种量分别接种至添加0.5g/L脯氨酸的发酵培养基（添加组）和未添加脯氨酸的发酵培养基（对照组）中，NaCl浓度调至12%，pH为7.0。发酵48h后，测定OD₆₀₀值，添加脯氨酸的样品OD值比未添加脯氨酸的样品提高了34.7%。

实例2：当发酵培养基中NaCl浓度为18%时，T.halophilusCGMCC 3792生长情况（表1）

取种子液以5%的接种量分别接种至添加0.5g/L脯氨酸的发酵培养基（添加组）和未添加脯氨酸的发酵培养基（对照组）中，NaCl浓度调至18%，pH为7.0。发酵48h后，测定OD₆₀₀值，添加脯氨酸的样品OD值比未添加脯氨酸的样品提高了30.6%。

表1 高盐发酵培养基中菌体生物量

。

Claims

1.一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，包含以下步骤：

（1）制备一种添加脯氨酸的高盐发酵培养基；

（2）将乳酸菌种子液接入所述高盐发酵培养基中，发酵培养48 h。

2.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述乳酸菌为嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophilus）CGMCC 3792。

3.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述脯氨酸的添加量为0.5 g/L。

4.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述高盐培养基为含有12%-18%NaCl的培养基。

5.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述乳酸菌的接种量为5 %（V/V）。

6.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述乳酸菌种子液的制备，包含以下步骤：

（1）种子培养基为：5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白东，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/LMgSO₄ ^.7H₂O，19 g/L β-甘油磷酸钠，pH为7.0;

（2）取-80℃保藏的乳酸菌甘油管储存液；

（3）以5%（V/V）的接种量接种所述乳酸菌甘油管储存液于种子培养基中，30℃静置培养24 h。

7.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述高盐培养基的制备及发酵培养，包含以下步骤：

（1）高盐培养基为：5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白东，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/LMgSO₄ ^.7H₂O，19 g/L β-甘油磷酸钠，NaCl浓度分别调至为12%和18%，pH为7.0;

（2）以5%（V/V）的接种量接种所述种子培养液于高盐发酵培养基中，30℃静置培养48h。