CN105830912B - 一种高产、持久穗瘟抗性水稻的育种方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高产、持久穗瘟抗性水稻的育种方法，包括：亲本选择：对水稻材料进行稻瘟病抗性基因的鉴定，根据以下原则组配优势组合：至少有一个亲本含有累计推广面积在500万亩以上主推品种的亲缘；符合抗稻瘟病多基因聚合模式“Pita+Pib+Pi54+Pb1”，抗性基因互补；适度拓宽双亲遗传距离，使F1产量超亲优势在8％‑15％，F1的株高和播始历期超中亲优势均小于3％；根据育种目标，进行聚合育种，获得高产和持久穗瘟抗性水稻品种；育种目标至少包括高产、聚合“Pita+Pib+Pi54+Pb1”和抗穗颈瘟。利用本发明方法选育的品系在产量和抗性得到较好的协调，在穗瘟的抗谱及持久抗性水平得到了显著提高。

Description

一种高产、持久穗瘟抗性水稻的育种方法
技术领域
本发明涉及水稻育种，尤其涉及一种高产、持久穗瘟抗性水稻的育种方法。
背景技术
稻瘟病是全世界公认的影响水稻生产的三大病害之一，是限制水稻高产稳产 和稻米品质的重要因子，尤以穗颈瘟危害为重。稻瘟病的发生具有间歇性和突发 性的特点，我国每7-10年就会发生一次规模较大的稻瘟病灾害，受害面积高达 300-600万公顷，稻谷损失在70-125万吨。随着稻草全量(半量)还田技术的推 广，稻田微生态环境中病原菌基数加大，增加该病害暴发的频率；感病品种在生 产上推广应用，存在着灾害性隐患。
培育和推广抗稻瘟病育种的高产品种，是解决稻瘟病最有效最经济的途径， 已成共识。然而，高产抗稻瘟病育种进展缓慢。据国家水稻数据中心显示： 2011-2014年期间，国家审定共水稻品种162个，但达到抗性以上的品种仅6个， 仅占3.70％；在江苏省2010-2015年三批主推品种目录中共46品种，其中达中 抗以上仅5个，仅占10.8％。
关于抗稻瘟病育种的难度，主要原因：①稻瘟病的生理小种复杂且变异程度 高。根据江苏省农科院植保所2011-2014年监测，与(2001-2010年)监测结果相比， 江苏省水稻稻瘟病菌优势小种虽仍为ZG，但次优势小种由ZB演化成ZC；且稻 瘟病菌毒力发生变化，病菌与主栽品种之间具有较高的亲和性，大多品种推广 3-5年后，抗性将丧失或退化。②强抗性与高产存在一定的矛盾。据有关文献研 究表明：抗病机制的运行，是要消耗一定的能量(ATP)，即高抗(多抗)品种 往往与其产量有一定程度的负相关。③稻瘟病鉴定难度大，易受温度、湿度等环 境因子影响。
因此，抗稻瘟病与高产的结合，是培育具有突破性品种的关键。
发明内容
发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种高产、持久穗瘟抗 性水稻的育种方法，利用本发明方法选育的品系在产量和抗性得到较好的协调， 对穗瘟的广谱及持久抗性水平却得到了显著提高。
技术方案：一种高产、持久穗瘟抗性水稻的育种方法，包括：
(1)亲本选择：对水稻材料进行稻瘟病抗性基因的鉴定，在水稻材料中根据 以下配组原则组配优势组合：
至少有一个亲本含有累计推广面积在500万亩以上的主推品种的亲缘；
符合抗稻瘟病多基因聚合模式“Pita+Pib+Pi54+Pb1”，抗性基因互补；
根据双亲系谱和形态差异，适度拓宽双亲遗传距离，使F1产量超亲优势在 8％-15％，F1的株高和播始历期超中亲优势均小于3％；
(2)根据育种目标，对亲本材料进行聚合育种，获得高产和持久穗瘟抗性水 稻品种；所述的育种目标至少包括高产、聚合“Pita+Pib+Pi54+Pb1”和抗穗颈 瘟。
本发明通过对不同遗传背景的育种材料进行抗稻瘟基因型分析，在丰富遗传 背景的基础上适度拓宽双亲遗传距离增强非F1杂种优势，并可进一步借助抗病 基因功能标记辅助选择(MAS)和设施病圃(或病区)鉴定，选育高产持久抗 穗瘟水稻品种。利用本发明方法选育的品系在产量和抗性得到较好的协调，对穗 瘟的抗谱及持久抗性水平得到了显著提高。
步骤(1)中，符合抗稻瘟病多基因聚合模式“Pita+Pib+Pi54+Pb1”，抗性基 因互补，即父本和母本杂交后的配子含有Pi54、Pita、Pib和Pb1基因。
具体的，步骤(1)中，其中一个亲本含抗性基因Pib、Pb1和Pi54，另一个亲 本含抗性基因Pita、Pib和Pi54。但是并不局限于本发明所列举的组配方式，只 要父本和母本杂交后的配子含有Pi54、Pita、Pib和Pb1基因就可实施。
优选的，亲本中，母本为镇稻18号，父本为镇稻16号。两者具有优良的遗 传背景，以镇稻18号和镇稻16号为亲本，可选育出高产、持久穗瘟抗性水稻镇 稻448。
步骤(1)中，稻瘟病抗性基因采用功能标记鉴定；步骤(2)中，聚合育种中采 用功能标记辅助选择含稻瘟病抗性基因的水稻植株。功能标记操作简单，准确易 行，大幅提高育种效率。
Pi54、Pita、Pib的分子标记可采用文献中所报道的，Pb1的分子标记为包含 Pb1基因编码区上游926bp～1085bp的DNA片段。
所述Pb1的分子标记如SEQ ID NO.3所示，或为包含SEQ ID NO.3所示序 列的DNA片段。SEQ ID NO：3为本发明引物扩增出的159bp片段，扩增区域 为Pb1基因编码区上游926bp～1085bp。
所述Pb1的功能标记正向引物的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物 的碱基序列如SEQ ID NO.2所示
所述Pb1的分子标记的检测方法，包括：
(1)根据所述的稻瘟病抗性基因Pb1功能特异性分子标记的核苷酸序列设计 引物；
(2)以被检测水稻的基因组DNA作为模板进行PCR扩增；
(3)判断PCR扩增产物中是否存在所述的分子标记。
一种实施方式，所述Pb1的分子标记的引物包括：
正向引物：ATCAACGCTACCTTCCC；
反向引物：GTGCCATCACAATTTCTTC。
采用上述引物时，PCR扩增的体系为：1.5μl基因组DNA，0.5μl 2mM上 游引物，0.5μl 2mM下游引物，1.2μl 10×Taq Buffer，0.3μl 1mM dNTP，0.1μl 1000U Taq DNA聚合酶，ddH2O补足至10μl。PCR扩增的程序为：95℃预变性5 min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，运行33个循环；最后72℃ 10min。
F1超亲优势是指杂种(F1)的某一性状平均值减去高值亲本(HP)同一性状平 均值所得的差除以高值亲本(HP)，F1超中亲优势是指杂种(F1)的某一性状平均 值减去双亲同一性状平均值(MP)所得的差除以双亲均值(MP)，均以百分比表 示；本申请中，F1产量超亲优势在8％-15％，进一步为9-11％，常规稻选育主要 利用加性效应，增幅过大，往往是是显性效应和上位性效应(常规稻选育难以利 用的效应)；同时，F1的株高和播始历期(播种期至始穗期相隔天数)超中亲优 势均小于3％。
步骤(2)为：根据育种目标，亲本材料进行杂交，杂交后代筛选出含 “Pita+Pib+Pi54+Pb1”、农艺性状优良的个体连续自交，直至抗性基因纯合；对 稳定株系进行田间穗瘟病抗性评价和综合农艺性状评价，筛选出聚合 “Pita+Pib+Pi54+Pb1”且农艺性状优良的水稻株系；所述的育种目标至少包括 高产、聚合“Pita+Pib+Pi54+Pb1”和抗穗颈瘟。
田间穗瘟病抗性评价包括：通过在高氮肥高湿度(每亩施用纯氮22Kg、 RH>80％)设有诱发品种的设施病圃，采用稻瘟病不同生理小种的混合液于孕穗 期(具体可以为抽穗前3-4天)进行穗瘟的人工接种鉴定，混合液中，品种目标 区域的优势小种和次优势小种占比为70～80％；或/和不同生态区稻瘟病重发区的 自然诱发鉴定。
综合农艺性状评价包括：根据高产、优质、抗倒等育种目标，当选综合农艺 性状突出的个体。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
1.多基因聚合“Pita+Pib+Pi54+Pb1”，较好地应对生理小种复杂且变异程 度高的现象。Pi54非专化性基因，是激活了水稻的复杂防卫机制，可以较有效 解决生理小种复杂且变异程度高的问题，延长抗性使用品种使用年限。申请人对 具有不同抗性基因的参试品种对江苏不同生理小种的抗性等级分析，结果表明：Pita与种群B和C的抗性等级呈显著负相关(抗)；Pib对种群D、E、F的抗性 等级呈显著负相关(抗)。Pi54+Pita+Pib较好地结合植物体的水平抗性和垂直 抗性。
2.穗期抗病基因Pb1的利用，较好地协调高产与抗病的矛盾。在植物病害 系统中，病原菌往往通过产生效应子克服寄主植物防卫反应，而植物进化(生产) 出相应的识别受体R蛋白，来识别和防御这些效应子而启动特异性的防卫反应 (垂直抗性)。所以，抗病机制的运行，是要消耗一定的能量(ATP)，即高抗(多 抗)品种往往与其产量有一定负相关。抗病基因Pb1非组成型表达，仅在穗期以 后(产量形成最为关键时期)增强表达，是一个“节能型”抗性基因，有利于高 产与抗性的结合。此外，Pb1基因来源于抗源Modan，在日本成功应用了30多 年，未出现抗性退化，是持久抗穗瘟基因。
3.丰富的遗传背景，是实现高产高抗的遗传基础。亲本中含有推广面积在 500万亩以上的主推品种的亲缘，育种的品种的基因组可能存在着主要病害的复 杂防卫机制的遗传背景，延长抗性基因的使用年限；在此基础适度拓宽双亲的遗 传距离，增强杂种优势，保障抗性能量(ATP)消耗，实现高产与高抗有机结合。
4.关于Pb1分子标记。现有技术中，日本研究者已经开发了与Pb1连锁的 RFLP标记。但存在三个不足：①实验操作繁琐，检测效率低。由于RFLP标记 需要用限制性内切酶酶切DNA、凝胶电泳分开DNA片段、转移滤膜及用放射性 标记的探针杂交显示特定的DNA片段等步骤，实验操作繁琐，检测周期长，成 本高昂，不适于大规模的分子育种。②选择有误差，准确率不高。由于此标记位 于抗性基因Pb1的侧翼，与目标基因存在着一定的物理距离，在减数分裂过程 中选择标记与目标基因可能发生交换，容易出现错选的情况，选择准确率不高。 ③连锁标记应用有局限性。连锁标记可能受到遗传背景的限制，在不同的群体中 选择，需对亲本的多态性进行检测；限制了标记在非多态群体的使用。在随后利 用抗性基因Pb1的研究，也有报道SSR标记RM26998作为连锁标记，虽实验操 作简便，但选择效率不高和应用局限性仍未得到解决。
本发明分子标记可特异性检测Pb1基因。因Pb1基因位于一个以60-kb为单 位的串联重复序列中，Pb1与抗病基因P5紧密连锁，且Pb1基因与P5基因编 码的蛋白只有一个谷氨酸的差异，而Pb1发挥功能取决于基因编码区上游 1-2056bp序列，申请人发现P5和Pb1含1-1016bp序列，而Nip(感病品种日本 晴，无Pb1基因)无；Pb1和Nip均含1017-2056bp序列，而P5无，因此在Nip 和P5序列的边界处设计引物，可特异扩增Pb1片段，检测的准确性高。本发明 设计的引物特异性好，采用该引物扩增出的SEQ ID NO：3所示分子标记片段大 小为159bp，可直接用8％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目标条带，成本低，操作简 便，适合于大规模的分子育种。
5、采用分子标记辅助选择，可提高育种效率。
附图说明
图1为Pb1与P5基因编码区上游1-1016bp序列比对(框代表后引物位置)；
图2为Pb1基因编码区上游1017-2056bp与对应的Nip基因组序列比对(框 代表前引物位置)；
图3为镇稻88系谱图；
图4为镇稻11号、15号、18号系谱图；
图5为江苏省审定品种中Pb1基因检测电泳图；
图6为镇稻448系谱图(高产高抗稻瘟病新品系镇稻448系谱图)，备注：a 为推广面积500万亩以上的品种，b为超级稻，c为正在扩大推广品种，1为日 本亲缘，2为太湖流域亲缘，3为杭嘉糊亲缘，4、东北稻亲缘，5为籼稻交后代。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明。
实施例1抗穗瘟基因Pb1的功能标记的开发
一、引物设计
Pb1基因：genebank登录号为AB570371.1；P5基因：genebank登录号 AB570370.1。
Pb1位于一个以60kb为单位的串联重复序列中，且Pb1位于第二个重复序 列中，与第一个重复序列中的P5相对应。P5编码的蛋白只比Pb1多了一个谷氨 酸，Pb1与P5都具有穗瘟抗性，但Pb1抗穗瘟能力显著高于P5，两个基因抗穗 瘟的差异并不是这个谷氨酸的差异造成的，而是Pb1的基因表达水平明显高于 P5。通过比对Pb1与P5基因编码区上游启动子区发现，基因编码区上游1016bp 的启动子序列完全匹配(图1)，而感病品种(以Nip即日本晴为例)不含这段序列； 基因编码区上游1017bp-2056bp处，Pb1与Nip序列大部分匹配(图2)，而P5不 含这段序列。1-1016bp和1017-2056bp序列同时存在，Pb1才能发挥功能。因此， 我们将前引物SEQ ID NO：1设计在1017-2056bp之间，后引物SEQ ID NO：2 设计在1-1016bp之间，能够特异检测Pb1基因。
正向引物(即前引物)：ATCAACGCTACCTTCCC
反向引物(即后引物)：GTGCCATCACAATTTCTTC
二、Pb1检测的实验流程
对江苏省审定品种中镇稻88、镇稻11号、武育粳23、镇稻15号、宁9108、 镇稻19号、镇稻18号、镇稻14号进行检测。
步骤一、DNA提取(SDS法)：
1、将2cm长的叶片剪碎置2ml的离心管中，加上钢珠，然后放入装液氮的 保温瓶中速冻，快速捞取放在48孔模具上，盖好盖子置于磨样机上震动30s， 取下离心管，倒出钢珠。
2、在含有液氮磨碎的叶片的2ml离心管中，加入SDS(0.1M Tris-Hcl,PH 8.0；0.025M EDTA,PH 8.0；29.25g/l Nacl；12g/l SDS)600μl，放置65℃水浴锅中， 30min。
3、加入150μl KAc(PH 4.8)，放置-20℃冰箱，30min。
4、加入与SDS等体积的氯仿：异戊醇(体积比为24：1)溶液，放置振荡器 充分摇匀，20min。
5、离心，12000rpm，4min，转移200μl上清液置1.5ml离心管中。
6、在上清液中加入2倍体积-20℃预冷的无水乙醇，置于-20℃冰箱，20min。
7、离心，12000rpm，4min，弃上清，风干，加入200μl ddH2O溶解，此为 DNA母液。
8、将母液稀释10倍即为DNA工作液。
9、取1.5μl用于PCR扩增反应。
步骤二、PCR扩增：
PCR扩增反应在PCR扩增仪上进行。
1、反应体系如下：
总体积：10μl。DNA 1.5μl；2mM SEQ ID NO：1上游引物0.5μl；2mM SEQ ID NO：2下游引物0.5μl；10×Taq Buffer(GENERAY，捷瑞公司)1.2μl，1mM dNTP 0.3μl，1000U TaqDNA聚合酶(GENERAY)0.1μl，加ddH2O补足至10μl。
2、PCR的扩增程序如下：
步骤三、PCR产物检测：
用8％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，取扩增好的PCR产物2μl，以DNA Marker(100bp-ⅠDNA ladder)作为分子量对照，在240V恒压下电泳1小时。银 染显示DNA条带，通过比对DNA Marker找到目标条带，根据片段大小判断抗 感基因：用引物对SEQ ID NO：1和SEQID NO：2检测，159bp为含Pb1，不 含Pb1则扩增不出条带。
结果如图5，样品顺序(从左到右)为：镇稻88、镇稻11号、武育粳23、镇 稻15号、宁9108、镇稻19号、镇稻18号、镇稻14号，M代表Marker。在这 8个水稻品种中，镇稻88、镇稻11号、镇稻15号和镇稻18号检测到Pb1基因， 其余水稻品种未检测到Pb1基因。
三、江苏省审定品种Pb1基因检测
Pb1基因来自籼稻品种Modan，而镇稻88由Modan衍生而来(图3)，镇稻 88田间穗瘟抗性好，通过Pb1基因的功能标记检测发现其含有Pb1。而镇稻11 号、15号、18号皆由镇稻88衍生而来(图4)，这三个品种也检测到了Pb1基因， 与其田间抗穗瘟表型相一致。
实施例2Pi54、Pita、Pib功能标记及引物
Pita、Pib、Pi54功能标记及引物均采用现有技术中已经公开的分子标记及 引物序列(表1)。利用Pi-ta引物检测到1042bp片段，同时Npi-ta引物扩增 不出目的片段，这样的材料含有Pita基因；利用Pi-b引物检测到365bp片段， 同时Npi-b引物扩增不出目的片段，这样的材料含有Pib基因，而Pib不能扩增 出目的片段，但是Npi-b引物扩增803bp片段，携带感病基因；抗病基因Pi54 功能标记为共显性标记，扩增片段216bp(抗)/359bp(感)。
表1引用的功能标记引物及其扩增片段
抗性基因Pita、Pib、Pi54检测的实验流程按照参考文献(范方军，王芳权， 刘永峰，等.Pi-b、Pi-ta、Pikm和Pi54对水稻穗颈瘟的抗性评价[J].华北农 学报，2014，29(3):221-226)，略作修改：Pita、Pib基因的两对标记的扩增程 序中，72℃延伸用的是1min，Pita是用4％的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
实施例3镇稻448的选育
以江苏丘陵地区镇江农业科学研究所培育的迟熟中粳新品系镇稻448为例：
亲本的选择：采用实施例1的分子标记对现有的一些水稻材料进行检测，确 定水稻稻瘟病抗性基因类型，最终选择携带抗性基因Pib、Pb1和Pi54的镇稻18 号以及携带抗性基因Pita、Pib和Pi54的镇稻16号作为亲本。
1.选育经过：
1)、2009年正季，以镇稻18号(抗性基因Pib+Pb1+Pi54)为母本，以镇稻 16号(抗性基因Pita+Pib+Pi54)做父本，得F0种子34粒；
2)、2009年冬在海南种植F1 20株，去杂后混收；
3)、2010年正季种植F2代1206株，根据丰产性(单株产量在>35克)、熟 期(抽穗期在8月22日至8月28日)、外观品质(垩白率<25％)性状进行初 筛，利用抗稻瘟病基因Pita、Pb1功能标记检测，当选含Pita+Pb1迟熟中粳15 株；
4)、2011年正季种植F3代15个株系，当选5个株系，共获含Pita+Pb1基 因11株；
5)、2011年冬在海南种植F4代11个株系，当选8个含Pita+Pb1基因株系， 按株系混收；
6)、2011年在句容种植F5代8个株系，当选3个含Pita+Pb1基因株系共10 株，此时四个抗性基因已经纯合；
7)、2013年在句容种植F6代10个株系，同时在高氮肥(每亩施用纯氮22Kg)、 高湿度水平(RH>80％)下进行人工接种穗颈瘟鉴定和产量鉴定试验，选留2个 表现为抗穗颈瘟和抗倒伏株系；人工接种穗颈瘟于孕穗期(具体为抽穗期3-5天) 用注射器注射1mL孢子悬浮液；孢子悬浮液在已配成10×10倍显微镜下每视野 30-40个孢子的生理小种，按生理小种体积比 (ZG1:ZB27:ZC15:ZD7:ZE3:ZF1＝40:20:15:9:8:8)混合而成。
8)、2014年在句容进行品比试验，表现优质高产、尤抗穗颈瘟，上年代号 6448，暂定名镇稻448(含抗性基因Pita+Pib+Pb1+Pi54)。
2.特征特性
对镇稻448的特征特性如稻瘟病抗性、农艺性状进行鉴定，鉴定为本领域通 用方法。
1)稻瘟病抗性突出，综合抗性好。
镇稻448参加江苏省迟熟中粳预试，抗性表现突出；据江苏省植保所抗性 鉴定表明：该品系对六个稻瘟病生理小种ZB27、ZC15、ZD7、ZE3、ZF1、ZG1分 别为0级、0级、0级、1级、0级、0级，稻瘟病综合指数3.5；穗颈瘟最高损 失率仅9.5％，为3级，抗性评价：中抗。在本所高氮肥自然诱发鉴定圃中，穗 瘟发生轻，明显好于生产主推品种。此外，对白叶枯病、稻曲病、纹枯病和条纹 叶枯病均具有较好的抗性。
2)穗粒结构协调，产量潜力大。
镇稻448在江苏省2015年迟熟中粳预备试验中，平均产量折合亩产723.2kg， 产量变幅为669.0-771.0kg，较对照(武运粳24号)增产6.68％。每亩有效穗22.8 万，每穗总粒数133.8粒，结实率97.26％，千粒重31.75克；亩颖花量大，产量 潜力大，稳产性好。
3)综合农艺性状突出。
镇稻448全生育期150.6天，比对照短(武运粳24号)1.6天，株高适中(94.0cm 左右)，比对照矮1.9cm，株型紧凑，倒性强。稻米品质国标3级。
镇稻448的日产量比母本和父本的分别提高3.37和4.48个百分点，抗性等 级比母本和父本的分别提高1.4和0.5个等级。在预试中表现为高产稳产、稻瘟病 抗性突出、熟期早、耐肥抗倒，进入江苏省2016年迟熟中粳区试。
表2镇稻448与亲本镇稻18号、镇稻16号的主要农艺的比较(2015，江苏句容)
3.优异特性的成因分析。
1)镇稻448具有丰富的遗传背景。融合了大面积500万亩以上主推品种武 运粳7号、武育粳3号、镇稻88和武粳15的遗传背景，具有日本亲缘、太湖流 域亲缘、杭嘉湖亲缘、东北稻亲缘和籼稻亲缘，具有丰富的遗传背景(图6)， 为聚合高产稳产高抗稻瘟病奠定了丰富的遗传基础。F1产量超亲优势在9.6％，F1 的株高和播始历期超中亲优势分别为2.5％和-1.3％。
2)“Pita+Pib+Pi54”多基因聚合，实现不同抗病防御机制的有机结合。Pi54 为非专化性基因，是激活了水稻的复杂防卫机制；Pita和Pib是完全抗性基因， Pi54+Pita+Pib的组合，产生基因的加性效应，拓宽了抗谱；穗期开始启动的部分 抗性基因Pb1，在水稻抗性脆弱时期也是产量形成的关键时期，起到阶段性加强 抗性的作用，大大降低了感病的风险。
3)“节能型”持久抗性基因Pb1的利用，有利于高产与抗性的结合。抗病 机制的运行，是要消耗一定的能量(ATP)，即高抗(多抗)品种往往与其产量 有一定负相关。Pb1基因来源于抗源Modan，在日本成功应用了30多年，未出 现抗性退化；其表达量仅在抽穗期始逐步加大，保障水稻在抗性脆弱时期即产量 形成的关键时期对病原菌提高抗性，而在其它非关键时期不表达，减少能量消耗， 有利于高产与抗性的结合。

Claims (8)

1.一种高产、持久穗瘟抗性水稻的育种方法，其特征在于，包括：
(1)亲本选择：对水稻材料进行稻瘟病抗性基因的鉴定，在水稻材料中根据以下配组原则组配优势组合：
至少有一个亲本含有累计推广面积在500万亩以上的主推品种的亲缘；
符合抗稻瘟病多基因聚合模式“Pita+Pib+Pi54+Pb1”，抗性基因互补；
根据双亲系谱和形态差异，适度拓宽双亲遗传距离，使F1产量超亲优势在8％-15％，F1的株高和播始历期超中亲优势均小于3％；
(2)根据育种目标，亲本材料进行杂交，杂交后代筛选出含“Pita+Pib+Pi54+Pb1”、农艺性状优良的个体连续自交，直至抗性基因纯合；对稳定株系进行田间穗瘟抗性评价和综合农艺性状评价，筛选出聚合“Pita+Pib+Pi54+Pb1”且农艺性状优良的水稻株系；所述的育种目标至少包括高产、聚合“Pita+Pib+Pi54+Pb1”和抗穗瘟。
2.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，步骤(1)中，稻瘟病抗性基因采用分子标记鉴定；步骤(2)中，聚合育种中采用分子标记辅助选择含稻瘟病抗性基因的水稻植株。
3.根据权利要求2所述的育种方法，其特征在于，Pb1的分子标记为包含Pb1基因编码区上游926bp～1085bp的DNA片段。
4.根据权利要求2所述的育种方法，其特征在于，Pb1的分子标记如SEQ ID NO.3所示，或为包含SEQ ID NO.3所示序列的DNA片段。
5.根据权利要求4所述的育种方法，其特征在于，Pb1的分子标记引物包括：
正向引物：ATCAACGCTACCTTCCC；
反向引物：GTGCCATCACAATTTCTTC。
6.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，步骤(1)中，其中一个亲本含抗性基因Pib、Pb1和Pi54，另一个亲本含抗性基因Pita、Pib和Pi54。
7.根据权利要求6所述的育种方法，其特征在于，母本为镇稻18号，父本为镇稻16号。
8.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，田间穗瘟抗性评价包括：建立设施病圃，采用稻瘟病不同生理小种的混合液于孕穗期进行人工接种鉴定，混合液中，品种目标区域的优势小种和次优势小种占比为70～80％；或/和不同生态区穗瘟重发区的自然诱发鉴定。
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