CN105797159B

CN105797159B - 包含多阴离子聚合物和亚精胺的超分子复合物的组合物用于牙周和受损口腔组织的用途

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Publication number: CN105797159B
Application number: CN201610149456.3A
Authority: CN
Inventors: C·吉赛尔伯蒂
Original assignee: Pereire Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Pereire Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2010-08-04
Filing date: 2011-08-01
Publication date: 2019-12-10
Anticipated expiration: 2031-08-01
Also published as: ES2704694T3; DK2898881T3; CN105797159A; RS58287B1

Abstract

本发明涉及一种由多阴离子聚合物和亚精胺形成的超分子复合物，其阴离子当量和阳离子当量的比例为10¹:1至10⁷:1eq/eq，更佳为10²:1至10⁴:1eq/eq，其各成分通过非共价、离子相互作用连接。所述超分子复合物的特征为有效刺激成纤维细胞增殖。本发明还涉及包含本发明超分子复合物的医学/美容组合物，该组合物用于受损和衰老状态结缔组织和粘膜的营养、维护、再生和修复。

Description

包含多阴离子聚合物和亚精胺的超分子复合物的组合物用于牙周和受损口腔组织的用途

发明领域

本发明涉及包含由多阴离子聚合物和亚精胺形成的超分子复合物的组合物用于口腔结缔组织和粘膜治疗、维护或修复的用途。

发明背景

亚精胺属于聚胺类(PA)的多阳离子化合物，它们与带负电的DNA、 RNA、蛋白质、磷脂和核苷三磷酸相连接。

这种能力可解释它们在细胞增殖和分化上的作用，见Heby O. Differentiation1981；19：1-20；和Cohen SS.A Guide to the Polyamines.New York：Oxford UniversityPress；1998；185-230。

然而，它们的生物学意义难以确切地定义。PA事实上是原癌基因c-myc 和c-fos转录所需要的。特别是，亚精胺优先刺激c-myc的转录和表达，而刺激c-fos则为腐胺(Tabib&Bachrach Int J Biochem Cell Biol 1999； 31：1289-95)。之前发现了它在细胞膜和细胞核之间信号转导上的作用(Tabib &Bachrach.Biochem Biophys Res Commun 1994；202：720-7)。在TGF-β信号转导上也有亚精胺的参与(Blachowski S等.，Int J Biochem 1994；26： 891-897)，它在细胞移行时TGF-β基因的正常表达上似乎是必须的。

已有几项专利要求保护各种治疗环境中的亚精胺和其它PA，即 WO97/014415和WO99/051213(局部止痛和湿疹)；US6555140(提高男性生育力和性欲)；US06252838(皮肤抗衰老)；US04242701(治疗酒精中毒)； WO9852552(抗癌)；和US5432202(抗高血压Ca拮抗剂)。

亚精胺典型的特性是与阴离子超分子相互作用产生超分子复合物，这些超分子复合物可调节例如酶/DNA相互作用(Isobe H等.Chem Commun (Camb).2005；28；(12)：1549-51)。

亚精胺和磷酸盐类形成的超分子复合物可改变DNA的压缩状态，保护其不受核酸酶活性的影响(D′Agostino L等.IUBMB Life.2006；58(2)：75-82)。类似的性质见于亚精胺超分子，据报告起保护因子作用的聚胺的自组装聚合物(D′Agostino L等.FEBS J.2009；276(8)：2324-35)。

WO2010049562公开了多阴离子聚合物与亚精胺或精胺以1∶0.1至1∶ 0.5w/w的比例(接近等摩尔)形成的超分子复合物。据称它们的用途是传送其它生物活性剂。

唯一已知的应用是Giuliani SpA(意大利米兰)以商标上市的抗脱发产品，产品包含亚精胺盐酸盐，其品牌商标为Biogenina和 Cronobiogenina。亚精胺盐酸盐的配方和抗脱发方法由Giuliani获得专利，见EP1469843、WO03063851和WO2010060729。

虽然对于可通过细胞增殖促进组织再生的疗法有明显的需求，但是至今尚无人尝试设计在这种特定组织上具有高效应的亚精胺复合物。

发明概述

本发明人出人意料地发现，某些多阴离子聚合物和亚精胺形成的超分子复合物在结缔组织再生上具有很高的效应。

一个方面，本发明涉及如下所述组合物用来制造用于牙周和受损口腔组织的药物的用途，所述组合物包含超分子复合物，所述超分子复合物的特征为阴离子当量(来自多阴离子聚合物)和阳离子当量(来自亚精胺)为 10∶1至10⁷∶1 eq/eq，其进一步特征为在再生治疗上有高效应。

另一个方面，所述超分子复合物较佳的比例为10²∶1至10⁴∶1 eq/eq。

本发明的这些特征和其它特征在下文作最好的描述。

附图的简要说明

图1显示用10∶1、10²∶1、10³∶1、10⁴∶1、10⁵∶1和10⁶∶1 eq/eq HA-亚精胺复合物处理后24小时(浅色)和48小时(深色)相对于未处理细胞的成纤维细胞增加百分率；前2栏是HA-亚精胺1∶1 eq/eq复合物(条形栏，在本发明范围外)；最后2栏是纯HA 0.1％w/v(点状栏，参考文献)。

图2显示用2×10∶1、2×10²∶1、2×10³∶1、2×10⁴∶1、2×10⁵∶1和2×10⁶∶1 eq/eq 海藻酸盐-亚精胺复合物处理后24小时(浅色)和48小时(深色)相对于未处理细胞的成纤维细胞增加百分率；前2栏是海藻酸盐-亚精胺2∶1 eq/eq 复合物(条形栏)；最后2栏是纯海藻酸盐0.1％w/v(点状栏，参考文献)。

图3显示用3×10∶1、3×10²∶1、3×10³∶1、3×10⁴∶1、3×10⁵∶1和3×10⁶∶1 eq/eq 多马来酸盐-亚精胺复合物处理后的成纤维细胞增加百分率，图中意义同图1 和图2。

图4显示用系列稀释的亚精胺3HCl处理后的成纤维细胞增加百分率。

图5显示超分子复合物的成纤维细胞增加百分率减去当量浓度亚精胺 3HCl所得值之差。

图6显示超分子复合物与当量浓度亚精胺3HCl相比较的效应比，即表示为成纤维细胞增加百分率之比。

发明详述

本说明书所用的术语“超分子复合物”描述一种多阴离子聚合物和亚精胺形成的多元酸/多元碱复合物，其特征为阴离子当量(来自多阴离子聚合物)和阳离子当量(来自亚精胺)之比为约10∶1至约10⁷∶1 eq/eq，更佳为约10²∶1至约10⁴∶1 eq/eq。

这些超分子复合物具有明显的增殖/再生活性，这种活性显著地优于亚精胺、多阴离子聚合物及其总和。

所述超分子复合物的特征是：多阴离子聚合物和亚精胺两者之比≥10∶1 e/eq，无论在其结构特征上和明显的对成纤维细胞的高增殖活性上都不同于两者接近等摩尔的复合物。

本说明书所用的术语“多阴离子聚合物和亚精胺接近等摩尔”表示来自多阴离子聚合物的阴离子当量与来自亚精胺的阳离子当量之比为约1∶3至 10∶1 eq/eq。

术语“多阴离子聚合物”，按本领域广义的理解，指每个分子包含多个阴离子基团的聚合材料或聚合物。它包括含有多个阴离子基团如羧基 (-COO-)、硫酸根(-OSO₃ ^-)、亚硫酸根(-SO₃ ^-)、磷酸根(-OPO₃ ^2-)、亚磷酸根 (-PO₃ ^2-)及其组合的天然/半合成聚合物和全合成聚合物。

术语“多阴离子聚合物”包括“多阴离子衍生而来的聚合物”，指以前不是多阴离子聚合物，由合适的衍生化反应物转变为多阴离子聚合物。衍生反应的例子有羧基的羧甲基化反应、琥珀酰化反应、或马来酰化反应；硫酸盐/磺酸盐的硫酸化反应/磺化反应/亚磺化反应(sulfinilation)；磷酸盐/膦酸盐的磷化反应/磷酰化反应。

并非打算以任何方式限制本发明的范围，有用的典型多阴离子聚合物包括阴离子植物多糖类、海藻多糖类和内源性多糖类；半合成和全合成多阴离子聚合物。

天然多阴离子聚合物可以是植物的和海藻的多糖类如海藻酸盐、琼脂、吉兰糖胶、印度树胶、卡拉亚胶、黄耆胶、韦兰胶(welan gum)、黄原胶、κ-、ι-和λ-角叉菜胶、硫酸木甘露聚糖、岩藻多糖和岩藻半乳聚糖 (fucogalactan)。

其它天然多阴离子聚合物可以是内源性多糖，如透明质酸盐、交联透明质酸盐及其它葡糖胺多糖，例如肝素、超硫酸化肝素和经修饰的肝素，如超硫酸化肝素、速避凝(fraxiparin)、磺达肝癸素(fondaparin)、艾卓肝素 (idraparin)、硫酸软骨素A、B和C，及K5衍生物。

合适的透明质酸盐(hyaluronate，又名hyaluranan(HA))可以是动物或微生物来源的，其分子量(MW)在5,000kDa至10MDa范围内。

半合成的多阴离子聚合物可以是羧甲基化多糖，如羧甲基纤维素、羧甲基淀粉、羧甲基葡聚糖、羧甲基壳聚糖、羧甲基甲壳素；硫酸化多糖，如硫酸鼠李多糖(rhamnansulfate)、硫酸葡聚糖、硫酸纤维素、硫代壳聚糖、硫酸凝胶多糖、硫酸罗望子胶(GP4324)，硫酸槐树豆胶(GP4327)，戊聚糖多硫酸酯(PPS)；及磷酸多糖，如磷酸纤维素和磷酸壳聚糖。

半合成的多阴离子聚合物也可以是HA衍生物，如Fidia公司的HA衍生物；或硫醇化多糖类，如硫醇化维素、硫醇化海藻酸盐、硫醇化壳聚糖、来自ThioMatrix-Green RiverPolymers GmbH(Insbruck，Austria)的硫醇化透明质酸盐，等等。

合成的多阴离子聚合物可以是聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯，它们的线性和交联均聚物和共聚物，如丙烯酸酯/丙烯酰胺类、丙烯酸酯/alchyl C10-C30丙烯酸酯类、丙烯酸酯/辛基丙烯酰胺类、Noveon-Lubrizol出产的 Carbopol^TM、Carbomer^TM和Pemulen^TM、丁基-聚丙烯酸、聚(丙烯酸酯-共- 丙烯酰胺丙磺酸酯)、聚(丙烯酸酯-共-丙烯基磺酸酯)和聚(丙烯酸酯-共- 丙烯基苯磺酸酯)共聚物；甲基丙烯醚/马来酸和其它马来酸盐(酯)共聚物，又名“polymaleates”，如Gantrez^TM型(ISP Corp.)；另外，如US2010172861 或US2003021793所描述的；以及聚(4-苯乙烯磺酸钠)、Y-ART-4、苏拉明、硫醇化卡波姆、硫醇化聚(甲基)丙烯酸，等等。

术语“多阴离子聚合物”还包括阴离子无机聚合物，如多磷酸盐(酯)；或如WO2002/077036所公开的重组聚合物。

为本发明目的所用的优选多阴离子聚合物是线性和交联透明质酸盐 (酯)、海藻酸盐(酯)、线性和交联聚丙烯酸酯和多马来酸盐(酯)。

按照本发明所使用的多阴离子聚合物，其分子量≥5000Da；和/或阴离子密度为0.1-18meq/g，较佳为1-14meq/g。

为所述目的所用的亚精胺(N-(3-氨基丙基)-1，4-丁二胺，或下文称作“Spd”)是分子式为NH₂(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH₂的物质本身或其盐，可适用于作合成原料，最好以干品计纯度≥99％。

所述超分子复合物通过酸碱交换进行制备，例如，通过多阴离子聚合物盐(典型的为钠盐)与亚精胺盐(如3HCl)结合，或通过酸形式的多阴离子聚合物与亚精胺游离碱结合。

复合物中多阴离子聚合物中多余的阴离子当量可以酸的形式存在，或以与诸如碱金属离子或碱土金属离子(如Na、K、Li、Ca和Mg)或胺类(如 NH₄ ⁺、一、二和三乙醇胺、缓血酸胺、异丙胺、赖氨酸、乙基环胺如哌嗪等) 部分中和的形式存在。

多阴离子聚合物与亚精胺的结合可在溶剂化状态中进行，较佳为在水中和/或水溶性溶剂(如低级醇等)中进行。这样形成的超分子复合物可通过诸如冷冻干燥、喷雾干燥、真空干燥等进行干燥；或直接以溶液形式使用，只要溶剂是生理学上可接受的并与所需的终端用途相容。

在一个实施方案中，在用于草药制造的罐式混合器中直接混合一种或几种多阴离子聚合物和亚精胺，形成超分子复合物。例如，通过将反应物的水溶液任选地与所选择的助溶剂、赋形剂、稀释剂、载体和佐剂混合来进行。

在另一个实施方案中，本发明的超分子复合物直接以固体状态进行制备，例如，将亚精胺溶液喷雾到聚合物上，或者混合或研磨干的或部分湿的各组分，及诸如此类的方法。

不论所使用的方法如何，获得的超分子复合物均可与其它赋形剂、稀释剂、载体和佐剂混合，制成适合于组织修复和维护的组合物。

所述超分子复合物在成纤维细胞及其祖代细胞上具有高度的再生活性，因此适于制备具有口腔再生/修复目的的医学和美容组合物。

按照本发明的一个方面，提供通过刺激/增强细胞增殖而使口腔结缔组织再生的组合物和方法。

本发明的另一个目的是用于再生或修复结缔组织和基于成纤维细胞的口腔组织的包含所述超分子复合物的医学或美容组合物。在几个分化型实施方案中，给予本发明的组合物以改善衰老或修复受损组织，包括：

-口腔粘膜，即口腔学用于治疗口腔炎、口内溃疡，及口腔干燥、口干和/或干燥综合症(Sjogren’s syndrome)；

-齿龈和牙周，即牙周病学上用于治疗齿龈炎/牙周炎。

本发明的组合物可包含10³-10⁷eq/eq比例的超分子复合物，其量为组合物总量的约0.01％至约10％w/w；及10-10²eq/eq比例的超分子复合物，其量为组合物总量的约0.0001％至约10％w/w。

组合物较佳设计为每单位剂量提供亚精胺的量约10μmol至0.1nmol，更佳为每单位剂量约1μmol至1nmol，甚至更佳为每单位剂量约100nmol 至10nmol。

在免冲洗组合物中推荐低剂量水平，其长时间接触足以释放治疗量的亚精胺到靶组织上。而在清洗组合物或其他短时间接触的组合物中推荐较高的剂量水平，以提供足够的亚精胺水平来促进组织再生。治疗量和治疗时间应根据靶组织和患者的病情加以确定，典型的为从30天到60或更多天，直至达到缓解，然后可不限期地停用、逐渐减少或减少。

值得注意的是，本发明的组合物不同于偶尔包含各自混合进去的多阴离子聚合物和亚精胺的组合物(如果有的话)，因此它们可能不或只是部分产生相应的超分子复合物。

为了提供较好的利益/风险比，可按已知技术与生理学上可接受的成分和载体(如那些INCI-CTFA Annex 93/35/ECC上或药典中所列出的)，制备用于本申请所述用途的本发明组合物。

口腔粘膜用组合物可以很多方式配制，如按ADA/PDR：Guide to DentalTherapeutics，4th Ed.’，配制成例如漱口液、口服溶液剂、喷雾剂、薄膜凝胶、牙膏、牙粉、牙科片剂、乳脂和凝胶、口香糖、咀嚼片和糖果、凝胶、薄膜、凝胶薄膜、颗粒剂、糊剂、可分散粉末，等等，直接或通过外部器械施用于口腔。

实施例

实施例1-6和比较例1-超分子复合物HA-Spd和成纤维细胞增殖

通过Spd.3HCl(Sigma-Aldrich)水溶液与HA钠水溶液(眼科用级别， Bioiberica，Barcelona，Spain)的反应来制备含阴离子当量比(HA～3meq/g) 和来自Spd的阴离子当量(3eq./mol)的超分子复合物HA-Spd，得到10∶1、 10²∶1、10³∶1、10⁴∶1、10⁵∶1 eq/eq系列复合物的0.1％w/v水溶液。

对这些超分子复合物进行试验以评估它们对人成纤维细胞(ATCC-CRL-2703)的刺激作用。将含受试样品(0.1％w/v)的培养基加到含处于细胞周期G0相的细胞的孔中，在37℃和5％CO₂中使细胞与各复合物接触24和48小时(培养基每24小时更换一次)。培养结束时进行MTT 染色，以评估细胞生存能力和增殖提高率(与未处理的对照细胞相比)。每一次测定进行6个试验。细胞与复合物接触后用200ml PBS洗涤，然后在每个培养孔中加入200μlMTT-培养基，于37℃和5％CO₂中培养4小时。然后除去MTT-培养基并加入200μl MTT溶解液(10％Triton X-100和 0.1N HCl，在干燥的异丙醇中)。在旋转盘上振摇20-30分钟以溶解结晶并使溶液搅匀，于570nm读出吸光度；于690nm读出本底。

结果表示为相对于未处理(对照)细胞的细胞增殖百分率，见表1。

表1

数据清楚地表明，HA和亚精胺之间的超分子缔合比已知的细胞生长促进剂HA平均高一个数量级。

此外，Spd-HA复合物的有丝分裂效应显著地高于单用Spd，后者呈现双峰型(见比较例4)。

将结果作成图1，显示Spd-HA复合物处理后24小时(浅色)和48h(深色) 相对于未处理细胞的增加百分率；前2栏是等摩尔Spd-HA复合物(条形栏，在本发明之外)；后2栏是纯HA0.1％w/v(点状栏，参照)。

实施例7-12和比较例2-超分子复合物海藻酸盐-Spd和成纤维细胞增殖

从海藻酸钠、Satialgine S 1100(Cargill)和Spd 3HCl水溶液获得超分子复合物，海藻酸盐-Spd复合物，浓度为0.1w/v。用实施例1-6中描述的方法测试所述复合物。结果见表II。

表II

数据表明，海藻酸盐-Spd复合物有很好的增殖效应，可有效地用于受损或衰老结缔组织的修复和维护。

将结果作成图2，表示为用海藻酸盐-Spd复合物0.1％w/v处理后24小时和48h相对于未处理细胞的增长百分率；前2栏是海藻酸盐-Spd2∶1 eq/eq 复合物(本发明之外)；后2栏是海藻酸盐0.1％w/v(点状栏)。

实施例13-18和比较例3-超分子复合物多马来酸盐-Spd和成纤维细胞增殖

用NaOH(1N)按每g8-9ml中和Gantrez S97BF(ISP Corp.)，从PVM/MA 共聚物得到多马来酸盐-Spd复合物，然后与Spd HCl反应并加水至 0.1％w/v。用实施例1-6中描述的方法进行测试。结果见表III和图3。

表III

在受试复合物中，多马来酸盐-Spd复合物的活性最高，接触长时间(48h) 与短时间(24h)相比，活性特别优越。

比较例4-亚精胺对成纤维细胞增殖的作用并与超分子复合物比较

用实施例1-6中所述的方法对系列稀释的Spd3HCl进行成纤维细胞增殖试验。结果见表IV。

表IV

纯物质(本发明之外)呈现双峰型：在mM浓度具有抑制效应，在μM 或nM浓度具有促进效应。尽管此双重模式有时并非预期的，然而相对于复合物来说并未显示明显的效应降低。

结果显示于图4，而图5显示的是复合物的增加百分率减去相等浓度 Spd3HCl数值的净差额。最后，图6中绘出了超分子复合物与单用亚精胺的效应增加％/％比值。

实施例19-在天然齿龈成纤维细胞上HA-Spd 50∶1 eq/eq的代谢模式

口腔手术中从前臼齿获得非炎性齿龈组织样品(6个女性，20-30岁)。每个活检样品用0.1M D-PBS洗涤并立即用灭菌剪刀剪碎。将组织碎片转移到25cm²Nunc培养瓶中，待附着后补充含10％BFS 100UI/ml青霉素、10 ng/ml链霉素和25μg/ml两性霉素B的5ml DMEM。将培养物维持于饱和水分的气氛(5％CO₂，37℃)中，用0.1％胰蛋白酶0.02％EDTA释放细胞后作常规传代培养。定时收集细胞培养上清液，成纤维细胞用PBS洗涤，胰蛋白酶化和离心收集(100xg，5min)。

处理：在1个时间点(24或48小时)用HA-Spd 10⁴∶1处理样品，4个剂量；而未处理样品作为对照。

用实时RT-PCR测定TGF-β1、LH2B、TIMP-1、TIMP-2和GAPDH的mRNA水平

用改良酰基硫氰酸胍-苯酚-氯仿法(Tri-Reagent，Sigma)分离总RNA。将1μg总RNA在20μl终体积的反应混合液(Biorad)中进行逆转录。靶基因的引物序列为BeaconDesigner 6.0Software(BioRad)。用GAPDH对每个样品中总RNA量的差异进行标准化。以每孔终体积20μl(含10μl的1x SYBR Green Supermix(BioRad)、2μl模板、300pmol各引物)进行扩增，以一式两份扩增，每个样品一式三份进行分析。用2^-ΔΔCt法计算相对于GAPDH的循环阈值和基因表达水平。

用印迹法测定COL-I和COL-III蛋白水平

为评估上颚和结节成纤维细胞分泌的COL-I和COL-III，用Centricon 10 柱(Amicon Y10，Millipore)将细胞培养基浓缩20倍。用比色法测定蛋白含量 (DC ProteinAssay，Bio Rad)；在Bio-Dot SF仪(Bio-Rad)的硝酸纤维素膜上点样，每个样品在终体积为200μl的Tris缓冲盐水(TBS)中，含100μg总蛋白。将膜用5％脱脂奶的TBST溶液(含0.05％tween-20的TBS)，pH8，封闭1小时，在抗COL-I抗体(1∶1000，在TBST中)(Sigma)或抗COL-III抗体(1∶2000，在TBST中)(Sigma)中室温培养1小时。洗涤后，在HRP- 结合的家兔抗小鼠血清(1∶80,000，在TBST中)(Sigma)中培养1小时。用 Amplified Opti-4CN基材(Bio Rad)显示免疫活性带并扫描(UVBand， Eppendorf)。

用Western印迹法测定MMP-1蛋白水平和活性

用SDS-样品缓冲液稀释浓缩的培养基(5μg总蛋白)，载于10％SDS- 聚丙烯酰胺凝胶上，在还原和变性条件下于80V进行分离，并于90V转移到硝酸纤维素膜(在0.025M Tris、192mM甘氨酸、20％甲醇(pH 8.3)中) 上。进行电印迹后，将膜晾干，封闭1小时。洗涤后，将膜在抗MMP-1单克隆抗体(1μg/ml TBST，Oncogene Research)中室温培养1小时，洗涤后，在HRP-结合的家兔抗小鼠血清(1∶40000稀释，Sigma-Aldrich)中室温培养1 小时。用Amplified Opti-4CN基材(Bio Rad)显示免疫活性带并扫描(UVBand，Eppendorf)。

用SDS-酶譜法测定白明胶酶(MMP-2和MMP-9活性)

将浓缩的培养基与样品缓冲液(含10％SDS)以3∶1混合。在无热变性的非还原条件下，样品(每份样品含5μg总蛋白)在与1mg/mL I型明胶共聚合的10％SDS-PAGE上展开。将凝胶于4℃展开。SDS-PAGE电泳后，用 2.5％Triton X-100洗涤凝胶两次，每次30分钟，在缓冲液中于37℃培养过夜。用Coomassie brilliant blue R250将凝胶染色后检测MMP凝胶分解活性，在蓝色背景上为透明的条带。

成纤维细胞计数

由细胞排斥台盼兰的能力来评估增殖效应，按照Patterson MK Jr在 Jacob&Pastan编著的Methods in Enzymology，vol.58.New York：Academic Press；1977：141中的方法进行。

结果揭示一种复合模式，即对降解酶如胶原酶和MMP的调控活性；及对TGF-β1、LH2B、TIMP-1/2和GAPDH的调制作用，这重现了先前Gagliano N等，J Periodontol 2005；76：443-9的发现。

实施例20-简易的HA-Spd凝胶

将10g HA钠(MW 1.2MDa)溶于800ml水直至完全水合，然后在搅拌下5分钟内加入10ml 1mM Spd，得到HA-Spd 10³∶1 eq/eq复合物。然后，混合0.9g苯甲醇并搅拌，补充纯水至最终体积为1升。将凝胶装入适合于口腔应用的60-ml PE管中。

实施例21-多马来酸盐-Spd凝胶

按如下表VI中所列的成分制备凝胶。

表VI

将ISP Corp(Wayne，NJ，USA)生产的一种多马来酸盐共聚物Gantrez S97BF分散于水和8ml 1N NaOH中。加入亚精胺溶液，搅拌5分钟，得到多马来酸盐-Spd 3x10⁴∶1 eq/eq复合物。混合其它成分，以得到适合于本说明书引用的大多数应用的均匀一致的凝胶为止。

实施例22-HA-Spd凝胶

按如下表VII中所列的成分制备凝胶。

表VII

将HA钠(MW，1.2Md)溶于水直至完全水合。然后加入亚精胺溶液并搅拌5分钟，得到HA-Spd 10⁴∶1 eq/eq复合物。加入剩余成分，混合，得到多用途凝胶，如口腔医学应用中所指明的。

实施例23-混合的多阴离子-Spd凝胶

按如下表VIII中所列的成分制备凝胶。

表VIII

将HA钠、Blanose 7HXF(CMC)和Noveon AA-1聚卡波菲尔溶于水直至完全水合，得到粘性凝胶。然后加入亚精胺溶液，搅拌15分钟。加入余下的成分，混合，得到用于粘膜修复的均匀绿色凝胶。

实施例24-25-含NAC和粘膜粘附抑制剂的多马来酸盐-Spd凝胶

按如下表V中所列的成分制备凝胶。

表V

将多马来酸盐(Gantrez S97BF)悬浮于水中，用1N NaOH滴定至pH 6。然后混合亚精胺，得到多马来酸盐-Spd 10³∶1 eq/eq复合物。

加入其它成分，到形成均匀的凝胶为止，该凝胶适合于具有辅助生物膜破坏活性的受损粘膜上使用。

还设计一种增强型制剂，加入5％至15％w/w D-甘露醇，提供对所处理粘膜上细菌粘附的抑制作用。

实施例26-卡波姆-Spd改良漱口液

将1g Carbopol Ultrez 20(Noveon-Lubrisol)溶于500ml市售漱口液 IodosanAntiplacca(Iodosan SpA，GSK group)。用1N NaOH调节pH至6.5。然后加5ml的1mM亚精胺3HCl，混合，直至得到适用于口腔保健、口腔科处理和齿龈炎(护理)的均匀一致的溶液。

实施例27-HA-Spd口香糖

将通过干磨各成分得到的含木糖醇、HA钠和亚精胺(100∶10∶1 w/w/w) 的混合物提供给Gum Base Co Srl(Lainate，Italy)，指令其生产含0.8％该混合物的口香糖。所得产品的特征是适用于齿龈治疗的令人愉快的风味。

实施例28-对口腔炎的体内评估(案例研究)

对一患有复发性口疮性溃疡的46岁女性给以实施例20的凝胶，嘱其每天至少使用2次。受试者在约1周内提交结果，而通常需要3-4周。除了可能由苯甲醇引起的苦味之外，产品耐受性好。

实施例29-CMC-Spd凝胶牙膏

按如下表XII中所列的成分制备牙膏。

表XII

除了最先将CMC溶于水和与亚精胺溶液一起加入外，按照生产牙膏的常规方法进行，然后掺入剩余成分，得到蓝色透明凝胶。

Claims

1.一种组合物用于制造药物的用途，所述药物用于维护和修复受损或衰老结缔组织，所述结缔组织选自口腔粘膜和牙周，所述组合物包含由至少一种多阴离子聚合物和亚精胺形成的超分子复合物，其中阴离子当量和阳离子当量的比例为10∶1至10⁶∶1eq/eq，所述超分子复合物的各成分紧密混合，这些成分之间没有任何共价键，其中所述多阴离子聚合物选自：海藻酸盐、线性或交联透明质酸盐、多马来酸盐。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述结缔组织是牙龈。

3.如权利要求1或2所述的用途，其中所述比例为10²∶1至10⁵∶1eq/eq。

4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物包含10³-10⁶eq/eq比例的超分子复合物，其量为组合物的0.01％至10％w/w。

5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物包含10-10²eq/eq比例的超分子复合物，其量为组合物的0.0001％至10％w/w。

6.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物用于口腔科治疗口腔炎、口腔溃疡和口腔干燥。

7.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物用于牙周病学治疗齿龈炎。

8.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物用于牙周病学治疗牙周炎。

9.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物是漱口液、口服溶液剂、喷雾剂、薄膜、牙膏、牙粉、牙科片剂、乳脂、凝胶、咀嚼片或糖果、颗粒剂、糊剂、可分散粉末。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述组合物是凝胶薄膜、口香糖。