CN105794638A - 一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法 - Google Patents

一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法。包括：外植体的灭菌、无菌苗获得培养基、继代培养基、生根培养基和移栽五个步骤。培养方法采用芽作为外植体，在B5培养基中添加细胞分裂素、生长素、维生素C、谷胱甘肽、苯甲酸钠、蔗糖和琼脂构成预防褐化培养基配方，实现了天女木兰组培过程中褐化的防控。本方法重复性好，芽褐化率低于10％，生根率 75％～80％，移栽成活率85％～90％，对于保护天女木兰种质资源及其开发利用具有重要意义。

Description

一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法
技术领域
本发明属于组织培养领域，涉及一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法。
背景技术
天女木兰(MagnoliasieboldiiK.Koch)是木兰科(Magnoliaceae)木兰属(Magnolia)的落叶小乔木，国家三级濒危树种。天女木兰兼有观赏、芳香和药用价值,是一种很有开发前景的珍稀野生木本植物资源。
天女木兰芽组织培养过程中，外植体褐化现象经常发生。褐化严重影响外植体的脱分化和再分化，造成培养失败，这已成为天女木兰组织培养中的棘手问题，同时也成为天女木兰快繁体系建立的一大障碍,目前还没有令人满意、有效防止天女木兰组培褐化现象的方法。
天女木兰褐化产生的机理与许多木本植物相同，褐化主要是多酚氧化酶（PPO）作用于天然底物酚类物质引起的；PPO是植物体中普遍存在的一种末端氧化酶，正常情况下细胞内的酚类物质和PPO呈区域性分布，酚类物质分布在液泡中，PPO分布在质体和细胞质中且与膜结合呈潜伏状态；当外植体被切割时，膜结构瓦解，PPO受到活化与酚类物质接触，将酚氧化成醌类物质产生褐化现象。醌类物质在酪氨酸酶的作用下，与外植体中的蛋白质发生聚合，引起其他酶系统失活，导致代谢紊乱，生长受阻。根据现有文献人们进行天女木兰组织培养通常采用B5培养基，其原因是B5培养基相对MS等其它类型培养基褐化较轻（杜凤国2007年）。目前预防天女木兰芽组培褐化现象，主要采取以下二种方法。1、培养基中添加抗氧化剂，比如：维生素C和半胱氨酸等抗氧化剂，其作用是防止外植体释放的酚类物质被氧化，对酚类物质具有保护作用；2、在培养基中加入吸附剂，比如：活性炭或聚乙烯比咯烷酮，其作用是把外植体体释放的酚类物质及氧化形成的醌类物质吸附，从而达到防止外植体褐化目的（王欢2012年）。尽管具有一定的预防褐化效果，但是对于不同月份取的芽进行组织培养，其防止褐化效果差异较大，结果还不能令人满意，至今还未有有效预防天女木兰芽组培褐化培养基的配方及方法。
发明内容
本发明目的针对天女木兰芽组培褐化严重问题，提出一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法。
本发明解决的技术问题采用如下技术方案：
在B5培养基中添加适量抗氧化剂(维生素C和谷胱甘肽)与多酚氧化酶抑制剂(苯甲酸钠),形成有效预防天女木兰芽组培褐化配方及方法。
配方分为无菌苗培养基（初代培养）、继代培养基和生根培养基配方。
一种天女木兰无菌苗培养基配方，其特征包括如下组分:在B5培养基中添加细胞分裂素6－苄基腺嘌呤（以下简称6－BA）0.5mg/L、生长素萘乙酸（以下简称NAA）0.3mg/L、维生素C（以下简称Vc）300～500mg/L、谷胱甘肽（以下简称GSH）50～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L和蔗糖30g/L，调pH5.6-5.8。
继代培养基配方,其特征包括如下组分：在培养基B5中添加细胞分裂素噻苯隆（以下简称TDZ）0.3mg/L、NAA0.3mg/L、Vc300～500mg/L、GSH100～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。
生根培养基配方，其特征包括如下组分：在1/2B5培养基中添加NAA0.5mg/L、维生素C300mg/L、GSH50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。
本发明的有益效果
（1）本方法采取添加抗氧化剂和多酚氧化酶抑制剂，从多条途代谢途径上预防天
女木兰芽组培褐化现象。本配方预防褐化效果显著，褐化率小于10%，预防了天女木兰芽组培褐化率高的问题。
（2）培养基中添加两种抗氧化剂维生素C和谷胱甘肽，具有以下优点：抗氧化能力强，对外植体释放的酚类物质具有较强保护作用；对植物生长及自然环境没有毒副作用；水溶性好、使用方便。配方中同时添加两种抗氧化剂，其预防褐化效果优于使用单一抗氧化剂。
（3）培养基中添加适量多酚氧化酶抑制剂苯甲酸钠，具有抑制多酚氧化酶活性强、水溶性好、使用方便等优点，不但能抑制多酚氧化酶活性，还能起到一定程度杀菌作用，减少培养基的杂菌污染几率。
具体实施方式
实施例1
（1）取材：于四月初取一年生枝条，在室内水培8～10d，待芽萌动后，取顶芽和侧芽（长度0.5～1.0cm），放入洗洁精溶液中浸泡20min,流水冲洗2h,然后在超净工作台上用质量分数为75%的乙醇对其表面消毒30s，用无菌水冲洗2～3次,然后用0.1%HgCl2处理7～8min,用无菌水冲洗5～6次，接种。
（2）无菌苗获得（初代培养）：将经步骤（1）消毒后的芽，接种于培养基中培养，在B5培养基中添加0.5mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、Vc300mg/L、GSH100mg/L、苯甲酸钠30mg/L和蔗糖30g/L，pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C光照强度1500～2000lx.培养30d,得无菌苗，褐化率小于10%。
（3）增殖培养（继代培养）：将步骤（2）得到的无菌苗接种于继代培养基中培养。培养基配方为B5培养基添加TDZ0.3mg/L、NAA0.3mg/L、VC300mg/L、GSH100mg/L、苯甲酸钠30mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d,获丛生芽，褐化率小于10%。
（4）生根培养:将步骤（3）获得的丛生芽分切成单芽进行生根培养，生根培养基配方为1/2B5培养基、NAA0.5mg/L、Vc300mg/L、GSH50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d生根，生根率75～80％，褐化率小于10%。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的生根试管苗的培养瓶盖打开，在培养势室内放置3d后，用镊子将组培苗取出，洗去粘附在根部的培养基，在温室内移栽至V（苔藓）：V(蛭石)＝1：1的基质中，移栽前将基质用质量分数为0.3％高锰酸钾溶液喷洒消毒。移栽后温度保持在18～20゜C,相对湿度在85～90％,炼苗过程中逐渐增强光照强度，两周后长出新不定根、新叶，移栽成活率85％。
实施例2
（1）取材：于五月中旬取当年生枝条，在实验室剪取顶芽和侧芽（长度0.5～1.0cm），放入洗洁精溶液中浸泡20min,流水冲洗2h,然后在超净工作台上用质量分数为75%的乙醇对其表面消毒30s，用无菌水冲洗2～3次,然后用0.1%HgCl2处理7-8min,用无菌水冲洗5～6次，接种。
（2）无菌苗获得（初代培养）：将经步骤（1）消毒后的芽，接种于培养基中培养，在B5培养基中添加0.5mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、维生素C300mg/L、GSH100mg/L、苯甲酸钠50mg/L和蔗糖30g/L，pH5.6-5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C光照强度1500～2000lx.培养30d,得无菌苗，褐化率小于10%。
（3）增殖培养（继代培养）：将步骤（2）得到的无菌苗接种于继代培养基中培养。培养基配方为B5培养基添加TDZ0.3mg/L、NAA0.3mg/L、Vc300mg/L、GSH100mg/L、苯甲酸钠50mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d,获丛生芽，褐化率小于10%。
（4）生根培养:将步骤（3）获得的丛生芽分切成单芽进行生根培养，生根培养基配方为1/2B5培养基、NAA0.5mg/L、Vc300mg/L、GSH50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d生根，生根率75～80％，褐化率小于10%。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的生根试管苗的培养瓶盖打开，在培养势室内放置3d后，用镊子将组培苗取出，洗去粘附在根部的培养基，在温室内移栽至V（苔藓）：V(蛭石)＝1：1的基质中，移栽前将基质用质量分数为0.3％高锰酸钾溶液喷洒消毒。移栽后温度保持在18～20゜C,相对湿度在85～90％,炼苗过程中逐渐增强光照强度，两周后长出新不定根、新叶，移栽成活率85％。
实施例3
（1）取材：于六月中旬取当年生枝条，在实验室剪取顶芽和侧芽（长度0.5～1.0cm），放入洗洁精溶液中浸泡20min,流水冲洗2h,然后在超净工作台上用质量分数为75%的乙醇对其表面消毒30s，用无菌水冲洗2～3次,然后用0.1%HgCl2处理7～8min,用无菌水冲洗5～6次，接种。
（2）无菌苗获得（初代培养）：将经步骤（1）消毒后的芽，接种于培养基中培养，在B5培养基中添加0.5mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、维生素C400mg/L、GSH100mg/L、苯甲酸钠50mg/L和蔗糖30g/L，pH5.6-5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C光照强度1500～2000lx.培养30d,得无菌苗，褐化率小于10%。
（3）增殖培养（继代培养）:将步骤（2）得到的无菌苗接种于继代培养基中培养。培养基配方为B5培养基添加TDZ0.3mg/L、NAA0.3mg/L、Vc400mg/L、GSH100mg/L、苯甲酸钠50mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d,获丛生芽，褐化率小于10%。
（4）生根培养:将步骤（3）获得的丛生芽分切成单芽进行生根培养，生根培养基配方为1/2B5培养基、NAA0.5mg/L、Vc300mg/L、GSH50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d生根，生根率75～80％，褐化率小于10%。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的生根试管苗的培养瓶盖打开，在培养势室内放置3d后，用镊子将组培苗取出，洗去粘附在根部的培养基，在温室内移栽至V（苔藓）：V(蛭石)＝1：1的基质中，移栽前将基质用质量分数为0.3％高锰酸钾溶液喷洒消毒。移栽后温度保持在18～20゜C,相对湿度在85～90％,炼苗过程中逐渐增强光照强度，两周后长出新不定根、新叶，移栽成活率85％。
实施例4
（1）取材：于七月中旬取当年生枝条，在实验室剪取顶芽和侧芽（长度0.5～1.0cm），放入洗洁精溶液中浸泡20min,流水冲洗2h,然后在超净工作台上用质量分数为75%的乙醇对其表面消毒30s，用无菌水冲洗2-3次,然后用0.1%HgCl2处理7～8min,用无菌水冲洗5～6次，接种。
（2）无菌苗获得（初代培养）：将经步骤（1）消毒后的芽，接种于培养基中培养，在B5培养基中添加0.5mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、Vc500mg/L、GSH150mg/L、苯甲酸钠50mg/L和蔗糖30g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C光照强度1500～2000lx.培养30d,得无菌苗，褐化率小于10%。
（3）增殖培养（继代培养）:将步骤（2）得到的无菌苗接种于继代培养基中培养。培养基配方为B5培养基添加TDZ0.3mg/L、NAA0.3mg/L、Vc500mg/L、GSH150mg/L、苯甲酸钠50mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d,获丛生芽，褐化率小于10%。
（4）生根培养:将步骤（3）获得的丛生芽分切成单芽进行生根培养，生根培养基配方为1/2B5培养基、NAA0.5mg/L、Vc300mg/L、GSH50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx.培养40～50d生根，生根率75～80％，褐化率小于10%。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的生根试管苗的培养瓶盖打开，在培养室内放置3d后，用镊子将组培苗取出，洗去粘附在根部的培养基，在温室内移栽至V（苔藓）：V(蛭石)＝1：1的基质中，移栽前将基质用质量分数为0.3％高锰酸钾溶液喷洒消毒。移栽后温度保持在18～20゜C,相对湿度在85～90％,炼苗过程中逐渐增强光照强度，两周后长出新不定根、新叶，移栽成活率85％。

Claims (4)

1.一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法，其特征包括以下步骤：
（1）取材：于春季和夏初取顶芽和侧芽，芽长度为0.5～1.0cm，放入洗洁精溶液中浸泡20min,流水冲洗2h,然后在超净工作台上用质量分数为75%的乙醇对其表面消毒30s，用无菌水冲洗2～3次,然后用0.1%HgCl2处理7～8min,用无菌水冲洗5～6次，接种；
（2）一种预防天女木兰无菌苗褐化培养基配方，其特征包括如下组分:在B5培养基中添加细胞分裂素6－苄基腺嘌呤0.5mg/L、生长素萘乙酸0.3mg/L、维生素C300～500mg/L、谷胱甘肽100～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L和蔗糖30g/L，调pH5.6～5.8；
（3）继代培养基配方,其特征包括如下组分：在B5培养基中添加细胞分裂素噻苯隆0.3mg/L、萘乙酸0.3mg/L、维生素C300～500mg/L、谷胱甘肽100～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8；
（4）生根培养基配方，其特征包括如下组分：在1/2B5培养基中添加萘乙酸0.5mg/L、维生素C300mg/L、谷胱甘肽50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8；
（5）炼苗移栽：获得的生根试管苗的培养瓶盖打开，在培养室内放置3d后，用镊子将组培苗取出，洗去粘附在根部的培养基，在温室内移栽至V（苔藓）：V(蛭石)＝1：1的基质中，移栽前将基质用质量分数为0.3％高锰酸钾溶液喷洒消毒；移栽后温度保持在18～20゜C,相对湿度在85～90％,炼苗过程中逐渐增强光照强度，两周后长出新不定根、新叶，移栽成活率85％～90％。
2.根据权利要求1所述的一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法，其特征在于，步骤2所述的预防天女木兰无菌苗褐化培养基配方成分为：在B5培养基中添加细胞分裂素6－苄基腺嘌呤0.5mg/L、生长素萘乙酸0.3mg/L、维生素C300～500mg/L、谷胱甘肽100～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L和蔗糖30g/L，调pH5.6～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法，其特征在于，步骤3所述的继代培养基配方包含如下组分：在B5培养基中添加细胞分裂素噻苯隆0.3mg/L、萘乙酸0.3mg/L、维生素C300～500mg/L、谷胱甘肽100～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法，其特征在于，步骤4所述的生根培养基配方包含如下组分：在1/2B5培养基中添加萘乙酸0.5mg/L、维生素C300mg/L、谷胱甘肽50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH5.6～5.8。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106577297A (zh) * 2016-12-24 2017-04-26 叶宗瑞 一种白玉兰组织培养基及其制备方法
CN106577295A (zh) * 2016-12-24 2017-04-26 叶宗瑞 一种马铃薯组织培养基及其制备方法
CN106718915A (zh) * 2016-12-23 2017-05-31 江西宜信堂医疗科技有限公司 一种马铃薯茎尖培养基、制备方法及其应用
CN115968787A (zh) * 2023-02-20 2023-04-18 广西农业职业技术大学 一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杜凤国: "天女木兰的组织培养", 《东北林业大学学报》 *
王欢: "天女木兰组织培养的抗褐化研究", 《湖北农业科学》 *
罗万春: "《昆虫酚氧化酶及其抑制剂》", 31 January 2010 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106718915A (zh) * 2016-12-23 2017-05-31 江西宜信堂医疗科技有限公司 一种马铃薯茎尖培养基、制备方法及其应用
CN106577297A (zh) * 2016-12-24 2017-04-26 叶宗瑞 一种白玉兰组织培养基及其制备方法
CN106577295A (zh) * 2016-12-24 2017-04-26 叶宗瑞 一种马铃薯组织培养基及其制备方法
CN115968787A (zh) * 2023-02-20 2023-04-18 广西农业职业技术大学 一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法

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