CN105784818A - 一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素k1的快速检测方法 - Google Patents

一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素k1的快速检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其具体操作方法为：电极制备、利用电极进行测试、建立标准曲线、样品的制备和测定：本发明分别采用修饰电极和未修饰玻碳电极进行维生素K1的电化学反应，比较发现，修饰电极对维生素K1的电流响应远大于未修饰玻碳电极，这表明纳米二氧化钛对维生素K1的响应具有一定的增敏作用，这主要是由于纳米二氧化钛膜电极的多孔结构，使得其比表面积增大，从而吸附特性增强，可以富集更多的维生素K1。本发明涉及的修饰电极检测血清中维生素K1的方法中，血清不需要经过复杂的前处理，每个样品检测时间仅需100s，方便快捷，能充分满足大量血清样品检测的需求。

Description

一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法
技术领域
本发明涉及电化学分析领域，特别是涉及一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法。
背景技术
统计显示，新生儿维生素K缺乏的发病率为4/万～10/万活产儿，多发生在农村，以颅内出血最常见，约占60%～80%。晚发性维生素缺乏症多于2周龄～3月龄新生儿，尤其多见于1月龄左右的母乳喂养儿。另一方面，新生儿出生后1个月正好是接种乙肝疫苗第2剂，若对有维生素K缺乏症的婴儿接种乙肝疫苗，常会出现注射部位出血不止，最后可能出现颅内出血，治疗不及时造成婴儿死亡，相关新生儿接种乙肝疫苗后偶合晚发性维生素K缺乏病 并发颅内出血的病例屡见报道。除此以外，其他疫苗的注射也有可能因为维生素K的缺乏导致局部出血或注射部位流血，产生疫苗注射后耦合性出血。
新生儿出血症的临床表现多样，且多伴发其他新生儿疾病，故部分患儿在临床上往往难于诊断和鉴别，因此在疫苗注射前，对于维生素K的及时检测，对提前预防疫苗耦合性出血具有重要意义。
维生素K1又称凝血维生素，它的缺乏容易导致新生儿出血症，它的传统检测方法包括高效液相色谱法、紫外分光光度法、毛细管电泳法、电化学分析法等。传统电化学分析法的缺点，一是多采用汞电极，虽然重现性较好，但是汞蒸汽有毒，二是固体电极的富集量和重现性较差。
发明内容
根据以上技术问题，本发明提供一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其具体操作方法为：
（1）电极制备：所述电极采用纳米二氧化钛修饰玻碳电极，所述纳米二氧化钛修饰玻碳电极的制备方法为，将玻碳电极用0.1~0.2μm的三氧化二铝粉抛光，将纳米二氧化钛按照12g/L的浓度进行配置，纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间，选择超声法对二氧化钛溶液进行分散30min，形成乳白色分散液，选择15μl分散液作为最佳覆盖量，具体方法是将15μl上述分散液滴加在玻碳电极表面，室温下风干，重复两次；
（2）利用电极进行测试，制作10支修饰电极，检测浓度为1.0ng/ml的维生素K1标准液,得到的电流的平均值为7.597±0.14μA（n=10,RSD=1.85%），然后利用伏安法进行维生素K1检测；
（3）建立标准曲线：配制不同维生素K1含量的标准溶液，加入支持电解液中，通入高纯氮气除氧，用电化学工作站对每个标准溶液进行电压扫描，用标准溶液于-0.45V处的峰电流值与维生素K1含量建立标准曲线，维生素K1标准品的纯度为99%；
（4）样品的制备和测定：将4ml人血样品置7ml的塑料离心管中，高速离心10min,转速5000rpm，取上清液于35~40摄氏度水浴上用氮吹仪吹干，残余用5.0mol/LNaAc-HAc缓冲液2ml溶解，待用，将被测样品加入支持电解液中，样品液用氮气纯化10min,在与建立标准曲线相同的条件下测定其于-0.45V处的峰电流值，由标准曲线得到该峰电流值对应的维生素K1含量即为被测样品的维生素K1含量。
所述电极为玻碳电极，所述玻碳电极基体上包覆有一层纳米二氧化钛层。
所述纳米二氧化钛层的纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间。
所述纳米二氧化钛层的制备方法是，将玻碳电极用0.1~0.2μm的三氧化二铝粉抛光，选择超声法对二氧化钛进行分散30min，形成二氧化钛分散液，选择15μl，含纳米二氧化钛12g/L的乳白色分散液作为最佳覆盖量。具体方法是将15μl上述分散液均匀滴加在玻碳电极表面，室温下风干，重复两次。
所述电解液浓度为5.0mol/LNaAc-HAc，所述脉冲伏安法的扫描速度为30mV/s，富集电位为-0.45V，富集时间为100s，扫描起止电位-0.3V~-0.8V，脉冲高度0.05V，脉冲宽度0.04s，电位阶跃0.006V。
所述电化学工作站的工作特征是三电极体系，覆纳米二氧化钛玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极。
所述电极为工作电极，用于疫苗注射前血液中维生素K1含量的检测，应用于预防疫苗注射后由于维生素K缺乏所导致的耦合性出血症。
本发明的有益效果为：本发明分别采用修饰电极和未修饰玻碳电极进行维生素K1的电化学反应，比较发现，修饰电极对维生素K1的电流响应远大于未修饰玻碳电极，这表明纳米二氧化钛对维生素K1的响应具有一定的增敏作用，这主要是由于纳米二氧化钛膜电极的多孔结构，使得其比表面积增大，从而吸附特性增强，可以富集更多的维生素K1。本发明涉及的修饰电极检测血清中维生素K1的方法中，血清不需要经过复杂的前处理，每个样品检测时间仅需100s，方便快捷，能充分满足大量血清样品检测的需求。本发明中的电极为玻碳电极用于疫苗注射前血液中维生素K1含量的检测，应用于预防疫苗注射后由于维生素K缺乏所导致的耦合性出血症。
附图说明
图1表示本发明的二氧化钛修饰电极测定不同浓度的维生素K1的电流响应值的标准曲线。
图2表示不同膜厚度的二氧化钛修饰电极对维生素K1的电流响应值的影响变化曲线。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面结合实例对本发明做进一步详述，但本发明并不限于此。
实例中测定维生素K1含量测定的操作条件为：电化学工作站的工作特征是三电极体系，纳米二氧化钛修饰玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极。仪器操作参数为，（1）测定模式：脉冲伏安法；（2）扫描起止电位-0.3V~-0.8V；（3）脉冲高度：0.05V；（4）脉冲宽度0.04s；（5）电位阶跃0.006V；（6）阶跃时间0.1s；（7）扫描速度30mV/s；（8）富集时间100s。
实施例1
将玻碳电极用0.1~0.2μm的三氧化二铝粉抛光，将纳米二氧化钛按照12g/L的浓度进行配置，纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间，选择超声法对二氧化钛溶液进行分散30min，形成乳白色分散液，实验中，纳米二氧化钛膜的厚度对出峰电流有影响，如图1所示，当滴加的二氧化钛分散液由5μl逐渐增加到15μl时，溶出峰电流逐渐增加，但15μl以后，电流反而降低，因此选择15μl分散液液作为最佳覆盖量。具体方法是将15μl上述分散液滴加在玻碳电极表面，室温下风干，重复两次。将制得的二氧化钛膜修饰玻碳电极用于检测血清中维生素K1的含量。
实施例2
建立维生素K含量测定标准曲线并考察测定的范围。
取适量维生素K1标准贮存液，分别用5.0mol/LNaAc-HAc溶液配制成维生素K1含量为0.2ng/ml、0.4ng/ml、0.6ng/ml、0.8ng/ml、1.0ng/ml、1.2ng/ml、1.4ng/ml、1.6ng/ml的一系列不同维生素K1含量标准溶液。
取支持电解液5.0mol/LNaAc-HAc10~15ml加入测量杯中，通入高纯氮气吹10min除氧，对空白支持电解液在-0.3V~-0.8V电位范围内扫描，记录空白谱图。再向支持电解液中分别加入配置的不同浓度的标准溶液2ml，进行电位扫描并记录-0.45V处的峰电流值。
将各不同维生素K1含量的标准溶液产生的峰电流与对应的维生素K1含量相关联，建立标准曲线，如图2所示，其线性相关系数为0.9995，I=0.1714+7.3929C，在0.2~1.6ng/ml的范围内，维生素K1与峰电流值有很好的线性关系。
实施例3
考察本发明方法制备电极用于测定维生素K1含量的重复性。
以实例1的方法制作10只二氧化钛修饰玻碳电极，检测1.0ng/ml的维生素K1电流值，得到结果如表1所示，平均值为7.597±0.14μA（n=10,RSD=1.85%），表明利用本方法制备的二氧化钛修饰玻碳电极具有良好的制备稳定性和可重复性。
实施例4
采用实例二中建立的标准曲线，检测不同血清样品中的维生素K1的含量，每个血清样品重复5次，结果表明采用本发明的电极测量不同的血清样品，相对标准偏差均不超过4%，说明该方法具有良好的重现性。测量结果见表2
实施例5
考察血清样品基质对测量结果的影响及回收率。
取10ml人血样品置15ml的塑料离心管中，高速离心10min，转速5000rpm，取上清液于35~40摄氏度水浴上用氮吹仪吹干，残余用5.0mol/LNaAc-HAc缓冲液3ml溶解，平均分装到三个离心管中，三个离心管中分别加入0ng/ml，0.4ng/ml，0.8ng/ml维生素K1标准溶液1ml，配制成含维生素K1的血样。
取实例1中制作的二氧化钛修饰电极，测定三个样品的维生素K1含量，重复测定三次，维生素K1测定结果和回收率见表3
表3结果说明，所述回收率为测定值与理论值的百分比，显示平均回收率都在99%左右，说明发明方法准确性高，血清中的其他物质及离子对检测结果的影响微小，不同血清样品中维生素K1含量均可用本发明方法进行测定。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其具体操作方法为：
（1）电极制备：所述电极采用纳米二氧化钛修饰玻碳电极，所述纳米二氧化钛修饰玻碳电极的制备方法为，将玻碳电极用0.1-0.2μm的三氧化二铝粉抛光，将纳米二氧化钛按照12g/L的浓度进行配置，纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间，选择超声法对二氧化钛溶液进行分散30min，形成乳白色分散液，选择15μl分散液作为最佳覆盖量，具体方法是将15μl上述分散液滴加在玻碳电极表面，室温下风干，重复两次；
（2）利用电极进行测试，制作10支修饰电极，检测浓度为1.0ng/ml的维生素K1标准液,得到的电流的平均值为7.597±0.14μA（n=10,RSD=1.85%），然后利用伏安法进行维生素K1检测；
（3）建立标准曲线：配制不同维生素K1含量的标准溶液，加入支持电解液中，通入高纯氮气除氧，用电化学工作站对每个标准溶液进行电压扫描，用标准溶液于-0.45V处的峰电流值与维生素K1含量建立标准曲线，维生素K1标准品的纯度为99%；
（4）样品的制备和测定：将4ml人血样品置7ml的塑料离心管中，高速离心10min,转速5000rpm，取上清液于35~40摄氏度水浴上用氮吹仪吹干，残余用5.0mol/LNaAc-HAc缓冲液2ml溶解，待用，将被测样品加入支持电解液中，样品液用氮气纯化10min,在与建立标准曲线相同的条件下测定其于-0.45V处的峰电流值，由标准曲线得到该峰电流值对应的维生素K1含量即为被测样品的维生素K1含量。
2.按照权利要求1所述的一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其特征在于所述电极为玻碳电极，所述玻碳电极极基体上包覆有一层纳米二氧化钛层。
3.按照权利要求1所述的一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其特征在于所述纳米二氧化钛层的纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间。
4.按照权利要求1所述的一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其特征在于所述纳米二氧化钛层的制备方法是，将玻碳电极用0.1~0.2μm的三氧化二铝粉抛光，选择超声法对二氧化钛进行分散30min，形成二氧化钛分散液，选择15μl，含纳米二氧化钛12g/L的乳白色分散液作为最佳覆盖量，
具体方法是将15μl上述分散液均匀滴加在玻碳电极表面，室温下风干，重复两次。
5.按照权利要求1所述的一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其特征在于所述电解液浓度为5.0mol/LNaAc-HAc，所述脉冲伏安法的扫描速度为30mV/s，富集电位为-0.45V，富集时间为100s，扫描起止电位-0.3V~-0.8V，脉冲高度0.05V，脉冲宽度0.04s，电位阶跃0.006V。
6.按照权利要求1所述的一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其特征在于所述电化学工作站的工作特征是三电极体系，覆纳米二氧化钛玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极。
7.按照权利要求1所述的一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法，其特征在于所述电极为工作电极，用于疫苗注射前血液中维生素K1含量的检测，应用于预防疫苗注射后由于维生素K缺乏所导致的耦合性出血症。
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