CN105779649A - 一种检测禽白血病病毒的免疫pcr试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒。所述试剂盒包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、Fast Master混合液和Universal qPCR反应液。本发明利用生物素标记的抗禽白血病病毒特异性抗体以及商品化邻位连接试剂，通过免疫PCR检测样品中禽白血病病毒抗原。实现不用对样品进行繁琐的核酸提取过程，通过PCR方法对禽白血病病毒抗原进行快速高通量检测。这一检测禽白血病病毒免疫PCR试剂盒将应用于禽白血病病毒临床检测与净化中，将填补国内外相关技术空白。

Description

一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒。
背景技术
禽白血病病毒属于反转录病毒科。根据其抗原特性和宿主范围，鸡ALV可以分为6个亚群，包括A，B，C，D，E和J亚群。其中A，B，C，D和J亚群为外源性病毒，E亚群为内源性病毒。禽白血病主要通过垂直和水平传播，以造血细胞恶性增生为主的一类传染病，包括淋巴细胞白血病、成红细胞白血病、成髓细胞白血病和髓细胞样白血病。由于目前没有ALV的有效疫苗或者抗ALV的药物，检测并净化是目前控制ALV的主要措施。为有效净化ALV，开发出高灵敏、高特异及高通量的检测方法至关重要。目前已有多种检测ALV的方法，但是这些方法不是基于PCR就是基于免疫反应，本发明结合PCR以及免疫反应技术，建立了一种新的基于邻位连接技术检测ALV的的免疫PCR方法。与传统的检测ALV的PCR技术相比，本研究建立的免疫PCR方法可以直接用于临床样品的检测，而不用对样品进行繁琐的样品DNA或者RNA的提取等；同时，与传统ELISA比较，本发明建立的检测ALV的免疫PCR中，对样品只需2μl的量即可进行检测。因此，该检测ALV的免疫PCR试剂盒具有ELISA免疫反应的特异性以及PCR检测的灵敏性，在ALV临床检测及净化中具有良好的应用价值。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒，通过PCR扩增实现对禽白血病病毒抗原的快速高灵敏检测。本发明的原理和最核心的关键技术是科学地利用抗禽白血病病毒P27蛋白特异性单克隆抗体以及邻位连接技术，将抗原抗体免疫反应与PCR技术进行了有机结合，通过连接反应产生PCR可扩增的检测信号，建立高通量快捷检测禽白血病病毒的方法(如图1)。
一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒,其特征在于包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、FastMaster混合液和UniversalqPCR反应液。
所述抗体寡核苷酸探针为生物素标记抗体与链霉素标记寡核苷酸的偶联物。
所述生物素标记抗体为生物素标记的杂交瘤细胞株CGMCCNo.7106及CGMCCNo.7107分泌获得的抗禽白血病病毒P27蛋白特异性单克隆抗体5D3以及4F12。
本发明所述抗体寡核苷酸探针通过下述方法制备：用生物素标记的抗P27单抗与邻位连接技术KIT(TaqMan)中标有链霉素的3’和5’寡核苷酸同时进行亲和偶联，先制备成固定邻位探针，随后进行连接及定量PCR以检测生物素标记抗体的标记效果。用阴性对照组平均Ct-探针组平均Ct得ΔCt，若当ΔCt≥8.5时，表明抗体生物素标记良好，能适合用于随后的检测实验。当固定邻位探针检测合格后，两个生物素标记单抗分别与3’和5’寡核苷酸亲和反应制备成两条抗体寡核苷酸探针。
利用本发明的试剂盒进行检测禽白血病病毒的免疫PCR方法。检测的特异性表明，该免疫PCR方法仅与禽白血病病毒反应，而与测试的H9N2禽流感病毒(H9N2)，新城疫病毒(NDV)，传染性支气管炎病毒(IBV)，传染性法氏囊病毒(IBDV)，小鹅瘟病毒(GPV)，禽传染性贫血病毒(CAV)以及传染性喉气管炎病毒(ILTV)等病毒不反应(如图3A)。灵敏性试验表明，该免疫PCR可检测到ALV的最低检测量为0.5TCID50(如图3B)。与其它禽白血病病毒检测方法对临床样品的比较检测中发现，本发明免疫PCR方法与IDEXX公司ELISA的符合率为92.73％(如表1)。97.73％的免疫PCR的阴性样品在IDEXX公司ELISA中为阴性，而88.89％的IDEXX公司ELISA检测到的阳性样品(8/9)在免疫PCR也均为阳性。提示免疫PCR具有更高的灵敏度。这些检测效果证明本发明建立的检测禽白血病病毒的免疫PCR方法具有良好的应用前景。
表1不同禽白血病病毒检测方法的比较
本发明利用生物素标记的抗禽白血病病毒特异性抗体以及商品化邻位连接试剂，通过免疫PCR检测样品中禽白血病病毒抗原。实现不用对样品进行繁琐的核酸提取过程，通过PCR方法对禽白血病病毒抗原进行快速高通量检测。这一检测禽白血病病毒免疫PCR试剂盒将应用于禽白血病病毒临床检测与净化中，将填补国内外相关技术空白。
附图说明
图1检测禽白血病病毒的免疫PCR原理步骤图例。步骤①，纯化的特异性单抗的生物素酶标；步骤②，用生物素酶标单抗与5’，3’寡核苷酸分别制备探针A与B；步骤③，用制备的探针A、B检测样品，并进行连接反应；步骤④，qPCR定量分析连接的寡核苷酸，从而对样品中靶抗原进行检测分析。
图2抗禽白血病病毒P27蛋白单抗纯化效果。泳道1为纯化的单抗4F12；泳道2为预染色的蛋白Marker；泳道3为纯化的5D3。
图3免疫PCR检测禽白血病的特异性及灵敏度试验A为免疫PCR检测禽白血病的特异性分析；B为免疫PCR检测禽白血病的灵敏度分析。
具体实施方式
实施例
1)单克隆抗体的生物素标记
首先利用蛋白纯化柱proteinG对两株抗禽白血病病毒P27蛋白的单抗(杂交瘤细胞株ALVP27-5D3(保藏号：CGMCCNo.7106)及ALVP27-4F12(保藏号：CGMCCNo.7107)分泌获得的抗禽白血病病毒P27蛋白特异性单克隆抗体5D3以及4F12。)
进行纯化(如图2)，然后根据Biotin-XXMicroscaleProteinLabelingKit的说明书对两株单抗进行生物素标记，并在4℃用PBS(PH7.4)进行透析去除游离的生物素。所述的杂交瘤细胞株ALVP27-5D3(保藏号：CGMCCNo.7106)及ALVP27-4F12(保藏号：CGMCCNo.7107)已在CN103163299A中公开。
2)抗体寡核苷酸探针的制备
邻位连接技术KIT(TaqMan)中标有链霉素的3’和5’寡核苷酸(购于ThermoFishScientific)，将透析后的两株抗体稀释到0.03mg/ml，分别取2μl抗体与2μl混合3’、5’寡核苷酸作用；室温下反应60分钟之后加入396μl的AssayProbeDilutionBuffer反应30分钟，得到固定邻位探针。取4μl探针与96μl连接反应溶液作用，37℃先反应10分钟，随后4℃反应10分钟。之后，取9μl以上产物与11μl的qPCR溶液进行荧光定量PCR反应。PCR程序为：先95℃20s，随后95℃3s和60℃30s重复40个循环数。最后用ΔCt值评估抗体生物素标记效率：用阴性对照组平均Ct-探针组平均Ct得ΔCt，若当ΔCt≥8.5时，表明抗体生物素标记良好，能适合用于随后的免疫PCR实验。如表1，两株生物素标记抗体4F12和5D3的ΔCt值分别达到10.19和10.56，均大于8.5。这一结果表明该生物素标记抗体效率好，且适合随后免疫PCR试验。当固定邻位探针检测合格后，两个生物素标记单抗分别与3’、5’寡核苷酸反应连接，标记为探针A和探针B，例如：取2.5μl的标记透析后4F12抗体与2.5μl的3’或5’寡核苷酸作用连接，混匀后室温下孵育60分钟，之后加入45μl试验探针保存试剂，室温下继续孵育20分钟，最后将探针-20℃保存。
3)免疫PCR反应
取等量的探针A和探针B混匀，用PBS(PH7.4)1：50稀释，制备成邻位连接探针。取2μl以上探针与2μl样品37℃反应60分钟，阴性对照组使用样品稀释液代替样品；之后加入96μl连接反应溶液，37℃先反应10分钟，随后4℃作用10分钟；然后加入2μl的蛋白酶进行终止连接，37℃反应10分钟后，95℃反应5分钟，并于4℃保存。最后取9μl以上产物与11μl的qPCR溶液进行荧光定量PCR反应。PCR条件为95℃20s，随后进行95℃3s和60℃30s重复40个循环数。在整个试验中，设立阴性对照组，且每个样品做三个重复。最后计算ΔCt＝阴性对照组的Ct平均值-样品的Ct平均值，该ΔCt差值代表了高于背景的连接情况，当ΔCt≥3.0时，判定为阳性。
4)免疫PCR反应特异性测试
为进一步评估建立的免疫PCR特异性，用以上两个探针分别与ALV，H9N2，NDV，IBV，IBDV，GPV，CAV和ILTV反应。取等量的探针A和探针B混匀，用PBS(PH7.4)1：50稀释，制备成邻位连接探针。取2μl以上探针分别与2μ以上各个病毒37℃反应60分钟，阴性对照组使用样品稀释液代替样品；之后加入96μl连接反应溶液，37℃先反应10分钟，随后4℃作用10分钟。最后取9μl以上产物与11μl的qPCR溶液进行荧光定量PCR反应。PCR条件为95℃20s，随后进行95℃3s和60℃30s重复40个循环数。最后计算ΔCt＝阴性对照组的Ct平均值-样品的Ct平均值。H9N2，NDV，IBV，IBDV，GPV，CAV和ILTV与探针反应的ΔCt值均小于3.0，而探针与ALV-J反应的ΔCt值却达到6.62。由于样品ΔCt≥3.0判定为阳性，因此本实验中只有禽白血病病毒为阳性，其他病毒均为阴性。
5)免疫PCR方法的灵敏度测试
为了进一步检测该免疫PCR的灵敏度，对ALV进行倍比稀释后进行了检测，稀释倍数分别为：100倍、1000倍、2000倍、4000倍、8000倍、16000倍。取等量的探针A和探针B混匀，用PBS(PH7.4)1：50稀释，制备成邻位连接探针。取2μl以上探针分别与2μ以上各个梯度的病毒37℃反应60分钟，阴性对照组使用样品稀释液代替样品；之后加入96μl连接反应溶液，37℃先反应10分钟，随后4℃作用10分钟。最后取9μl以上产物与11μl的qPCR溶液进行荧光定量PCR反应。PCR条件为95℃20s，随后进行95℃3s和60℃30s重复40个循环数。最后计算ΔCt＝阴性对照组的Ct平均值-样品的Ct平均值。探针与ALV反应的ΔCt值明显与ALV的量相关。依据本研究的阳性判定值，获知探针的灵敏度达到约257.5TCID50/ml。由于本试验只需要2μl的样品量，因此该免疫PCR检测ALV的最低检测量为0.5TCID50。
6)临床样品比较检测
为进一步评估该免疫PCR在检测ALV临床样品方面的效果，用该免疫PCR以及IDEXX公司ELISA方法对鸡泄殖腔棉拭子样品进行了比较检测。数据显示，该免疫PCR可以用于ALV临床样品的检测。在总共55份的检测样品中，免疫PCR检测到11份阳性样品，44份阴性样品；IDEXX公司ELISA检测到9份阳性样品，46份阴性样品。本发明免疫PCR方法与IDEXX公司ELISA的符合率为92.73％(如附表1)。97.73％的免疫PCR的阴性样品在IDEXX公司ELISA中为阴性，而88.89％的IDEXX公司ELISA检测到的阳性样品(8/9)在免疫PCR也均为阳性。不同检测方法中出现的差异样品可能与不同检测方法的灵敏度等有关。

Claims (3)

1.一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒,其特征在于包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、FastMaster混合液和UniversalqPCR反应液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体寡核苷酸探针为生物素标记抗体与链霉素标记寡核苷酸的偶联物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体为生物素标记的杂交瘤细胞株CGMCCNo.7106及CGMCCNo.7107分泌获得的抗禽白血病病毒P27蛋白特异性单克隆抗体5D3以及4F12。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108226530A (zh) * 2017-11-27 2018-06-29 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108220390A (zh) * 2017-11-27 2018-06-29 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测Cys C含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108267596A (zh) * 2017-11-27 2018-07-10 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测rbp含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108342450A (zh) * 2017-11-27 2018-07-31 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测NT-proBNP含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108387737A (zh) * 2017-11-27 2018-08-10 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测h-fabp含量的试剂盒、制备及使用方法
CN110607402A (zh) * 2019-10-11 2019-12-24 扬州大学 猪传染性胃肠炎病毒pla检测试剂盒
CN112986573A (zh) * 2019-12-13 2021-06-18 深圳汇芯生物医疗科技有限公司 外泌体多组学标志物的定量检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102636644A (zh) * 2012-04-18 2012-08-15 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 检测禽白血病群特异性抗原的双抗体夹心elisa试剂盒
CN102943127A (zh) * 2012-10-26 2013-02-27 四川农业大学 禽白血病j亚群病毒pcr检测用引物及检测试剂盒
CN103163299A (zh) * 2013-02-05 2013-06-19 扬州大学 禽白血病双抗体夹心elisa抗原检测试剂盒
CN103698506A (zh) * 2013-12-31 2014-04-02 杭州爱贝亚检测技术有限公司 利用直接免疫pcr检测样品中污染物含量的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102636644A (zh) * 2012-04-18 2012-08-15 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 检测禽白血病群特异性抗原的双抗体夹心elisa试剂盒
CN102943127A (zh) * 2012-10-26 2013-02-27 四川农业大学 禽白血病j亚群病毒pcr检测用引物及检测试剂盒
CN103163299A (zh) * 2013-02-05 2013-06-19 扬州大学 禽白血病双抗体夹心elisa抗原检测试剂盒
CN103698506A (zh) * 2013-12-31 2014-04-02 杭州爱贝亚检测技术有限公司 利用直接免疫pcr检测样品中污染物含量的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
尹军霞等: "免疫PCR技术", 《绍兴文理学院学报》 *
洪泽辉等: "免疫PCR技术探讨及在乙肝表面抗原检测上的应用", 《东南大学硕士学位论文》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108226530A (zh) * 2017-11-27 2018-06-29 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108220390A (zh) * 2017-11-27 2018-06-29 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测Cys C含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108267596A (zh) * 2017-11-27 2018-07-10 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测rbp含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108342450A (zh) * 2017-11-27 2018-07-31 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测NT-proBNP含量的试剂盒、制备及使用方法
CN108387737A (zh) * 2017-11-27 2018-08-10 南京天纵易康生物科技股份有限公司 一种邻位连接技术用于定量检测h-fabp含量的试剂盒、制备及使用方法
CN110607402A (zh) * 2019-10-11 2019-12-24 扬州大学 猪传染性胃肠炎病毒pla检测试剂盒
CN110607402B (zh) * 2019-10-11 2023-01-03 扬州大学 猪传染性胃肠炎病毒pla检测试剂盒
CN112986573A (zh) * 2019-12-13 2021-06-18 深圳汇芯生物医疗科技有限公司 外泌体多组学标志物的定量检测方法

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