CN105777898A - 一种猪流感阳性血清的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种猪流感阳性血清的制备方法，其包括选择免疫验对象、免疫接种、收获血清，本发明通过猪流感灭活疫苗免疫鸡制备阳性血清，减小了用猪制备阳性血清因同源动物而引起的同源其他外源病毒污染的风险，本发明猪流感阳性血清可应用于毒株的鉴定、毒株纯净性检验以及紧急免疫。
Description
技术领域
本发明涉及兽用医药生物领域，特别涉及一种猪流感阳性血清的制备方法。
背景技术
猪流行性感冒（英文：swineinfluenza英文简称：swineflu）是猪的一种急性、传染性呼吸器官疾病，其特征为突发，咳嗽，呼吸困难，发热及迅速转归。猪流感是猪体内因病毒引起的呼吸系统疾病。猪流感由甲型流感病毒(A型流感病毒)引发，通常爆发于猪之间，传染性很高但通常不会引发死亡。猪流感多被辨识为丙型流感病毒(C型流感病毒)，或者是甲型流感病毒的亚种之一，该病毒可在猪群中造成流感暴发。
为了减少该病对养猪业造成的经济损失，猪流感疫苗的研制具有重大的意义，目前国内猪流感灭活疫苗还处于刚刚起步阶段，有厂家刚获得新兽药证书或还在申报审核阶段，而猪流感阳性血清的制备还处于空白阶段。
申请号CN201110356735.4的专利公开了鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清的制备，申请号CN201010237919.4公开了猪瘟阳性血清的制备，申请号CN201010532340.0公开了禽流感病毒H9亚型阳性血清的制备，目前，尚未见有猪流感阳性血清制备方法的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种猪流感阳性血清的制备方法，获得的猪流感阳性血清可应用于毒株的鉴定和紧急免疫。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种猪流感阳性血清的制备方法，其包括步骤如下：
1)选择2～4月龄，健康、精神状态良好的鸡；
2）用猪流感灭活疫苗对鸡进行多次免疫接种：对鸡采用皮下及肌肉多点注射方式免疫猪流感灭活疫苗，第1次免疫0.5-0.6mL，以后每隔14～15天免疫一次，每次免疫量为每只鸡每次依上次免疫量增加0.5-0.6mL，总共免疫4次以上；
从第3次免疫开始，每次免疫前1天，采少量免疫鸡的鸡血用0.5%鸡红细胞悬液进行HI试验（红细胞血凝抑制试验），检测HI抗体滴度，当检测到HI抗体滴度≥1:1024，用心脏采血法对免疫鸡进行无菌采血；
3）上述步骤采血得到的鸡血在37℃环境放置2～3h，然后将鸡血移入2～8℃冰箱12～24h；
4）上述鸡血以3000～3500r/min的转速离心10-15min，分离收获上清液，
5）将上清液于56℃下灭活30-35min，得到灭活后的血清，过滤，得到猪流感阳性血清。
进一步，所述步骤2），猪流感灭活疫苗的制备方法如下：将猪流感病毒毒株接种9-10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，35℃培养72h，将死胚弃去，余下的鸡胚置2-8℃冰箱保存12-24h，收取鸡胚尿囊液并经0.20-0.22微米滤膜过滤，然后将鸡胚尿囊液超滤浓缩至HA效价≥29，浓缩后的鸡胚尿囊液加入鸡胚尿囊液体积分数0.05%的β-丙内酯溶液，灭活后用常规方法乳化分装，得到猪流感灭活疫苗。
所述猪流感病毒毒株为H1N1株或H3N2株。
所述步骤7），灭活后的血清用0.20-0.22微米滤膜过滤，无菌分装，得到猪流感阳性血清。
收获的猪流感阳性血清按常规方法冻干后,抽样做无菌检验、支原体检验、HI效价测定。将无细菌、霉菌、支原体污染且HI效价≥1:1024的猪流感阳性血清-20℃以下低温保存。
本发明采用以上技术方案，通过猪流感灭活疫苗免疫2～4月龄鸡制备猪流感阳性血清，减小了用猪制备阳性血清因同源动物而引起的同源其他外源病毒污染的风险，此外，使用鸡作为实验动物跟猪相比，也降低了经济成本。本发明的猪流感病毒阳性血清（H1N1株）与（H3N2株）血清交叉反应HI效价≤1：4。
本发明猪流感阳性血清可应用于毒株的鉴定以及紧急免疫。1、毒株鉴定：样品与本发明方法制备的猪流感阳性血清进行HI测定，当HI效价>1：40表明该样品含本猪流感阳性血清对应的抗原株。
2、紧急接种：采病猪鼻腔或气管拭子样本，鉴定样本中感染的猪流感病毒毒株，用与病毒毒株对应的血清型进行免疫，每只猪免疫2～4ml。
具体实施方式
本发明猪流感阳性血清的制备方法，包括步骤如下：
1)选择2～4月龄，健康、精神状态良好的鸡；
2）用猪流感灭活疫苗对鸡进行多次免疫接种：对鸡采用皮下及肌肉多点注射方式免疫猪流感灭活疫苗，第1次免疫0.5-0.6mL，以后每隔14～15天免疫一次，每次免疫量为每只鸡每次依上次免疫量增加0.5-0.6mL，总共免疫4次以上；
从第3次免疫开始，每次免疫前1天，采少量免疫鸡的鸡血用0.5%鸡红细胞悬液进行HI试验（红细胞血凝抑制试验），检测HI抗体滴度，当检测到HI抗体滴度≥1:1024，用心脏采血法对免疫鸡进行无菌采血；
3）上述步骤采血得到的鸡血在37℃环境放置2～3h，然后将鸡血移入2～8℃冰箱12～24h；
4）上述鸡血以3000～3500r/min的转速离心10-15min，分离收获上清液，
5）将上清液于56℃下灭活30-35min，得到灭活后的血清，用0.20-0.22微米滤膜过滤，无菌分装，得到猪流感阳性血清。
进一步，所述步骤2），猪流感灭活疫苗的制备方法如下：将将猪流感病毒H1N1株或猪流感病毒H3N2株接种9-10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，35℃培养72h，将死胚弃去，余下的鸡胚置2-8℃冰箱保存12-24h，收取鸡胚尿囊液并经0.20-0.22微米滤膜过滤，然后将鸡胚尿囊液超滤浓缩至HA效价≥29，浓缩后的鸡胚尿囊液加入鸡胚尿囊液体积分数0.05%的β-丙内酯溶液，灭活后用常规方法乳化分装，得到猪流感灭活疫苗。
收获的猪流感阳性血清按常规方法冻干后,抽样做无菌检验、支原体检验、HI效价测定。将无细菌、霉菌、支原体污染且HI效价≥1:1024的猪流感阳性血清-20℃以下低温保存。
实施例1
一种猪流感阳性血清的制备方法，包括步骤如下：
1)选择2～4月龄，健康、精神状态良好的鸡；
2）用猪流感灭活疫苗对鸡进行多次免疫接种：对鸡采用皮下及肌肉多点注射方式免疫猪流感灭活疫苗，第1次免疫0.5mL，以后每隔14天免疫一次，每次免疫量为每只鸡每次依上次免疫量增加0.5mL，总共免疫4次；
从第3次免疫开始，每次免疫前1天，采少量免疫鸡的鸡血用0.5%鸡红细胞悬液进行HI试验（红细胞血凝抑制试验），检测HI抗体滴度，当检测到HI抗体滴度≥1:1024，用心脏采血法对免疫鸡进行无菌采血；
3）上述步骤采血得到的鸡血在37℃环境放置2.h，然后将鸡血移入2℃冰箱24h；
4）上述鸡血以3000r/min的转速离心10min，分离收获上清液，
5）将上清液于56℃下灭活30min，得到灭活后的血清，用0.22微米滤膜过滤，无菌分装，得到猪流感阳性血清。
其中，步骤2）猪流感灭活疫苗的制备方法如下：将将猪流感病毒H1N1株或猪流感病毒H3N2株接种9-10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，35℃培养72h，将死胚弃去，余下的鸡胚置2℃冰箱保存24h，收取鸡胚尿囊液并经0.22微米滤膜过滤，然后将鸡胚尿囊液超滤浓缩至HA效价≥29，浓缩后的鸡胚尿囊液加入鸡胚尿囊液体积分数0.05%的β-丙内酯溶液，灭活后用常规方法乳化分装，得到猪流感灭活疫苗。
本实施例收获的猪流感阳性血清按常规方法冻干后,抽样做无菌检验、支原体检验、HI效价测定。将无细菌、霉菌、支原体污染且HI效价≥1:1024的猪流感阳性血清-20℃以下低温保存。
实施例2
一种猪流感阳性血清的制备方法，包括步骤如下：
1)选择2～4月龄，健康、精神状态良好的鸡；
2）用猪流感灭活疫苗对鸡进行多次免疫接种：对鸡采用皮下及肌肉多点注射方式免疫猪流感灭活疫苗，第1次免疫0.5mL，以后每隔15天免疫一次，每次免疫量为每只鸡每次依上次免疫量增加0.5mL，总共免疫4次；
从第3次免疫开始，每次免疫前1天，采少量免疫鸡的鸡血用0.5%鸡红细胞悬液进行HI试验（红细胞血凝抑制试验），检测HI抗体滴度，当检测到HI抗体滴度≥1:1024，用心脏采血法对免疫鸡进行无菌采血；
3）上述步骤采血得到的鸡血在37℃环境放置3h，然后将鸡血移入8℃冰箱12h；
4）上述鸡血以3500r/min的转速离心15min，分离收获上清液，
5）将上清液于56℃下灭活35min，得到灭活后的血清，用0.20微米滤膜过滤，无菌分装，得到猪流感阳性血清。
其中，步骤2）猪流感灭活疫苗的制备方法如下：将将猪流感病毒H1N1株或猪流感病毒H3N2株接种9-10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，35℃培养72h，将死胚弃去，余下的鸡胚置8℃冰箱保存24h，收取鸡胚尿囊液并经0.20微米滤膜过滤，然后将鸡胚尿囊液超滤浓缩至HA效价≥29，浓缩后的鸡胚尿囊液加入鸡胚尿囊液体积分数0.05%的β-丙内酯溶液，灭活后用常规方法乳化分装，得到猪流感灭活疫苗。
本实施例收获的猪流感阳性血清按常规方法冻干后,抽样做无菌检验、支原体检验、HI效价测定。将无细菌、霉菌、支原体污染且HI效价≥1:1024的猪流感阳性血清-20℃以下低温保存。
实施例3
一种猪流感阳性血清的制备方法，包括步骤如下：
1)选择2～4月龄，健康、精神状态良好的鸡；
2）用猪流感灭活疫苗对鸡进行多次免疫接种：对鸡采用皮下及肌肉多点注射方式免疫猪流感灭活疫苗，第1次免疫0.6mL，以后每隔14天免疫一次，每次免疫量为每只鸡每次依上次免疫量增加0.6mL，总共免疫5次；
从第3次免疫开始，每次免疫前1天，采少量免疫鸡的鸡血用0.5%鸡红细胞悬液进行HI试验（红细胞血凝抑制试验），检测HI抗体滴度，当检测到HI抗体滴度≥1:1024，用心脏采血法对免疫鸡进行无菌采血；
3）上述步骤采血得到的鸡血在37℃环境放置2.5h，然后将鸡血移入4℃冰箱18h；
4）上述鸡血以3000r/min的转速离心15min，分离收获上清液，
5）将上清液于56℃下灭活30min，得到灭活后的血清，用0.22微米滤膜过滤，无菌分装，得到猪流感阳性血清。
其中，步骤2）猪流感灭活疫苗的制备方法如下：将将猪流感病毒H1N1株或猪流感病毒H3N2株接种9-10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，35℃培养72h，将死胚弃去，余下的鸡胚置6℃冰箱保存18h，收取鸡胚尿囊液并经0.22微米滤膜过滤，然后将鸡胚尿囊液超滤浓缩至HA效价≥29，浓缩后的鸡胚尿囊液加入鸡胚尿囊液体积分数0.05%的β-丙内酯溶液，灭活后用常规方法乳化分装，得到猪流感灭活疫苗。
本实施例收获的猪流感阳性血清按常规方法冻干后,抽样做无菌检验、支原体检验、HI效价测定。将无细菌、霉菌、支原体污染且HI效价≥1:1024的猪流感阳性血清-20℃以下低温保存。
本发明猪流感阳性血清可应用于毒株的鉴定以及紧急免疫。
应用例1
毒株鉴定：
将待检测的样品（样品如为鼻拭子，先1500r/min离心10min后再用微孔滤膜过滤后使用；样品如为血清，先1500r/min离心10min，56℃灭活30min再用微孔滤膜过滤后使用；如为其它样品则选择合适方法处理后使用）与本发明方法制备的猪流感阳性血清进行中和试验，操作方法如下：
①将处理后的样品与本方法制备的阳性血清进行中和，37℃60min；
②将中和后的样品接种9-10日龄鸡胚5个，每个0.2ml，此为中和组；
同时用未与血清中和的样品接种鸡胚5个，每个0.1ml，此为样品组；
③将鸡胚在35℃培养72h，其间若有死亡的鸡胚即时取出；
④72小时后逐个测定鸡胚的HA，如样品组有至少一个鸡胚HA≥1:8，而中和组全部鸡胚HA均为阴性，则表明该样品中含本阳性血清对应的抗原株。
应用例2
毒株纯净性检验：
将待检测的样品稀释至合适浓度（107.0-107.2TCID50/0.1mL)，与猪流感H1N1株或H3N2株阳性血清等量混合，37℃中和1小时。
①接种9-11日龄SPF鸡胚，腔接种10枚，膜接种10枚，每枚0.2mL，37℃培养7天，鸡胚均健活且鸡胚液HA阴性；
②接种MDBK,无BVDV特异性荧光，接种ST,无PPV特异性荧光，接种Vero、ST，无外源病毒所致的特异性CPE，接种Vero、ST，无红细胞吸附现象。
③以上检验结果均成立则判定样品无外源病毒污染，为纯净毒株。
应用例3
紧急接种
采病猪鼻腔或气管拭子样本，将样本1500r/min离心10min，再用微孔滤膜过滤后与猪流感病毒阳性血清进行反向HI试验，试验采用固定血清稀释病毒的方法进行，操作方法如下：
①在96孔血凝板上从第2列开始加入25微升0.1mol/LPBS，第11列做血清对照孔，12列做红细胞对照孔加50微升0.1mol/LPBS；
②将样品加入血凝板第1列及第2列孔内，每孔25微升；
③从第2列开始做倍比稀释至第10列；
④从第11列至第1列加入效价为1：40的猪流感阳性血清；
⑤混匀，室温放置30分钟左右；
⑥从第12列开始依次加入0.5%鸡红细胞悬液25微升；
⑦混匀，室温放置30-40min左右；
⑧判定结果，第12列红细胞完全沉积于孔底时判定。
如样品有2个孔出现完全凝集，则可用HI试验中的阳性血清型进行免疫，每只猪免疫2～4ml。
Claims (5)
1.一种猪流感阳性血清的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：
1)选择2～4月龄的鸡；
2）用猪流感灭活疫苗对鸡进行多次免疫接种：对鸡采用皮下及肌肉多点注射方式免疫猪流感灭活疫苗，第1次免疫0.5-0.6mL，以后每隔14～15天免疫一次，每次免疫量为每只鸡每次依上次免疫量增加0.5-0.6mL，总共免疫4次以上；
从第3次免疫开始，每次免疫前1天，采少量免疫鸡的鸡血用0.5%鸡红细胞悬液进行HI试验，检测HI抗体滴度，当检测到HI抗体滴度≥1:1024，用心脏采血法对免疫鸡进行无菌采血；
3）上述步骤采血得到的鸡血在37℃环境放置2～3h，然后将鸡血移入2～8℃冰箱12～24h；
4）上述鸡血以3000～3500r/min的转速离心10-15min，分离收获上清液，
5）将上清液于56℃下灭活30-35min，得到灭活后的血清，过滤，得到猪流感阳性血清。
2.根据权利要求1所述的一种猪流感阳性血清的制备方法，其特征在于：所述步骤1），选择健康、精神状态良好的鸡。
3.根据权利要求1所述的一种猪流感阳性血清的制备方法，其特征在于：所述步骤2），猪流感灭活疫苗的制备方法如下：将猪流感病毒毒株接种9-10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，35℃培养72h，将死胚弃去，余下的鸡胚置2-8℃冰箱保存12-24h，收取鸡胚尿囊液并经0.20-0.22微米滤膜过滤，然后将鸡胚尿囊液超滤浓缩至HA效价≥29，浓缩后的鸡胚尿囊液加入鸡胚尿囊液体积分数0.05%的β-丙内酯溶液，灭活后用常规方法乳化分装，得到猪流感灭活疫苗。
4.根据权利要求3所述的一种猪流感阳性血清的制备方法，其特征在于：所述猪流感病毒毒株为猪流感病毒H1N1株或猪流感病毒H3N2株。
5.根据权利要求1所述的一种猪流感阳性血清的制备方法，其特征在于：所述步骤7），灭活后的血清用0.20-0.22微米滤膜过滤，无菌分装，得到猪流感阳性血清。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN111184741A (zh) * | 2020-02-20 | 2020-05-22 | 张宏亮 | 用于治疗病毒感染者的生物制剂的制备方法、相关生物制剂和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102426258A (zh) * | 2011-11-11 | 2012-04-25 | 中国兽医药品监察所 | 鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品及制备方法 |
| CN102586196A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-18 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一株h1n1亚型猪流感病毒及其应用 |
| CN103468647A (zh) * | 2013-09-03 | 2013-12-25 | 华中农业大学 | 猪流感h1n1和h3n2亚型的二价灭活疫苗 |
-
2016
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102426258A (zh) * | 2011-11-11 | 2012-04-25 | 中国兽医药品监察所 | 鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品及制备方法 |
| CN102586196A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-18 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一株h1n1亚型猪流感病毒及其应用 |
| CN103468647A (zh) * | 2013-09-03 | 2013-12-25 | 华中农业大学 | 猪流感h1n1和h3n2亚型的二价灭活疫苗 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ROTT R.等: "The Significance of Influenza Virus Neuraminidase in Immunity", 《J. GEN. VIROL》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111184741A (zh) * | 2020-02-20 | 2020-05-22 | 张宏亮 | 用于治疗病毒感染者的生物制剂的制备方法、相关生物制剂和应用 |
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