CN105777882B - 一种植物耐逆相关蛋白TaWRKY35及其编码基因与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种植物耐逆相关蛋白TaWRKY35及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，命名为TaWRKY35蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列2氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由序列2衍生的蛋白质。编码所述TaWRKY35蛋白的基因(TaWRKY35基因)也属于本发明的保护范围。本发明还保护一种培育转基因植物的方法，是将所述TaWRKY35基因导入目的植物中，得到转基因植物；所述转基因植物耐盐能力高于所述目的植物。本发明对于培育抗盐农作物新品种具有重要的意义，适合于推广应用。

Description

一种植物耐逆相关蛋白TaWRKY35及其编码基因与应用
技术领域
本发明涉及一种植物耐逆相关蛋白TaWRKY35及其编码基因与应用。
背景技术
预计到2050年世界人口将达到92亿，伴随而来的气候变化将导致各种自然灾害频发，世界粮食生产面临前所未有的挑战。每年由于各种非生物逆境导致的粮食减产量约占世界粮食减产总量的一半以上，因此非生物逆境是制约世界粮食生产的最主要限制因素。提高农作物的抗逆性，减少粮食损失已经成为世界各国共同关注的焦点。
改良作物抗逆性对于提高农业生产力具有重大意义，已经受到世界各国的普遍重视，我国“十一.五”期间启动的转基因作物新品种培育重大专项就是最好的实证。研究植物的抗逆机理、克隆抗逆相关基因、通过基因工程改良作物抗逆性是培育抗逆农作物新品种的一条有效途径。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物耐逆相关蛋白TaWRKY35及其编码基因与应用。
本发明提供的蛋白质，获自小麦，命名为TaWRKY35蛋白，是如下(a)或(b)：
(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由序列2衍生的蛋白质。
为了使(a)中的TaWRKY35蛋白便于纯化和检测，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。
表1标签的序列
标签 残基 序列
Poly-Arg 5-6(通常为5个) RRRRR
Poly-His 2-10(通常为6个) HHHHHH
FLAG 8 DYKDDDDK
Strep-tag II 8 WSHPQFEK
c-myc 10 EQKLISEEDL
上述(b)中的TaWRKY35蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的TaWRKY35蛋白的编码基因可通过将序列表中序列1所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。
编码所述TaWRKY35蛋白的基因(TaWRKY35基因)也属于本发明的保护范围。
所述基因为如下(1)-(6)中任一所述的DNA分子：
(1)编码区如序列表中序列1自5′末端第69至1199位核苷酸所示的DNA分子；
(2)编码区如序列表中序列1自5′末端第69至1202位核苷酸所示的DNA分子；
(3)序列表中序列1自5′末端第61至1221位核苷酸所示的DNA分子；
(4)序列表中序列1所示的DNA分子
(5)在严格条件下与(1)或(2)或(3)或(4)限定的DNA序列杂交且编码与植物耐逆性相关蛋白的DNA分子；
(6)与(1)或(2)或(3)或(4)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物耐逆性相关蛋白的DNA分子。
上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。
含有所述TaWRKY35基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。
可用现有的植物表达载体构建含有TaWRKY35基因的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。使用TaWRKY35基因构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用TaWRKY35基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入在植物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因植物的安全性考虑，也可不加入任何筛选基因，直接通过逆境胁迫进行筛选。
所述重组表达载体具体可为将双元载体pCHF3的BamHI和Kpn I酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列1的自5′端第61-1221位核苷酸所示的DNA分子得到的重组质粒。所述双元载体pCHF3具体可为：在pPZP211载体的EcoRI和Kpn I位点之间插入CaMV 35S启动子(CaMV 35S启动子为如GenbankAccession NO.AB303068中第1035-1815位核苷酸)，得到双元表达载体pCHF3。所述重组表达载体具体可为将pPZP211载体的EcoRI和Kpn I位点之间插入CaMV 35S启动子(CaMV 35S启动子为如GenbankAccession NO.AB303068中第1035-1815位核苷酸)，同时将BamHI和KpnI酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列1的自5′端第61-1221位核苷酸所示的DNA分子得到的重组质粒。
本发明还保护所述TaWRKY35蛋白或其编码基因在调控植物耐逆性中的应用。
所述植物为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物可为山柑目植物。所述山柑目植物可为十字花科植物。所述十字花科植物可为南芥族植物。所述南芥族植物可为拟南芥属植物。所述所述拟南芥属植物具体可为拟南芥，例如哥伦比亚生态型拟南芥。
本发明还保护一种培育转基因植物的方法，是将编码所述TaWRKY35蛋白的基因导入目的植物中，得到转基因植物；所述转基因植物耐逆性高于所述目的植物。
所述方法中，所述TaWRKY35基因可以通过以上任一所述重组表达载体导入目的植物。所述重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。
所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物可为山柑目植物。所述山柑目植物可为十字花科植物。所述十字花科植物可为南芥族植物。所述南芥族植物可为拟南芥属植物。所述所述拟南芥属植物具体可为拟南芥，例如哥伦比亚生态型拟南芥。
以上任一所述耐逆性具体可为耐盐性。所述耐盐性高具体体现为：在盐胁迫环境中的白化率低和/或在盐胁迫环境中的存活率高和/或盐胁迫环境中的细胞膜稳定性高。
本发明还保护所述TaWRKY35蛋白、所述TaWRKY35基因、所述重组表达载体、所述表达盒、所述转基因细胞系、所述重组菌或以上任一所述方法在植物育种中的应用。
所述育种的目的为培育抗盐能力高的植物。
所述植物为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物可为山柑目植物。所述山柑目植物可为十字花科植物。所述十字花科植物可为南芥族植物。所述南芥族植物可为拟南芥属植物。所述所述拟南芥属植物具体可为拟南芥，例如哥伦比亚生态型拟南芥。
本发明提供了TaWRKY35蛋白及其编码基因，将TaWRKY35基因导入植物，可以显著提高植物的耐盐性。盐胁迫环境下，转入TaWRKY35基因的植物的存活率为75-80％，而未转入TaWRKY35基因的野生型植物的存活率只有50％。因此，本发明对于培育抗盐农作物新品种具有重要的意义，适合于推广应用。
附图说明
图1为TaWRKY35基因在不同逆境胁迫处理后的小麦中的表达情况。
图2为TaWRKY35基因在小麦发育不同时期、不同小麦器官中的表达情况。
图3为TaWRKY35蛋白在小麦原生质体中的定位情况。
图4为各个株系中TaWRKY35基因的相对表达量。
图5为各个株系的抗盐鉴定结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
旱选10号小麦：国家种质库(http：//www.cgris.net/)，编号：ZM009279。
pJIT163-GFP载体：参考文献：Mao，X.；Zhang，H.；Qian，X.；Li，A.；Zhao，G.；Jing，R.TaNAC2，a NAC-type wheat transcription factor conferring enhanced multipleabiotic stress tolerances in Arabidopsis.Journal of Experimental Botany(2012)，63(8)：2933-2946；公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。
pEASY-Blunt载体：北京全式金生物技术公司，目录号：CR101。
pPZP211载体：其核苷酸序列见GenBank Accession NO.U10490(VERSION：U10490.1，GI：506685)。
哥伦比亚生态型拟南芥：美国俄亥俄州立大学拟南芥种质资源库。
根癌农杆菌GV3101：参考文献：R.Berres，L.Otten.Transformation of vitistissue by different strains of Agrobacterium tumefaciens containing the T-6bgene.Plant Cell Reports，(1992)11：192-195；公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。
实施例1、TaWRKY35基因的克隆
1、按照文献(毛新国等，2005，用改进的Cap-trapper法构建拟斯卑尔脱山羊草全长cDNA文库.遗传学报，32(8)：811-817)中所述方法，利用旱选10号小麦构建小麦的全长cDNA文库。
2、对小麦全长cDNA进行序列分析、区段截取和功能验证，得到候选克隆，测序得到目标克隆的全长序列，如序列表中序列1所示，编码序列表的序列2所示的蛋白质。
将序列表的序列2所示的蛋白质命名为蛋白TaWRKY35，由377个氨基酸残基组成。将蛋白TaWRKY35的编码基因命名为TaWRKY35基因。TaWRKY35基因全长如序列表中序列1所示(1285bp)，其自5′末端第1-68位核苷酸为5′UTR(68bp)，第69-1202位核苷酸为开放阅读框(1134bp)，第1203-1285位核苷酸为3′UTR(83bp)。
实施例2、TaWRKY35基因的表达模式分析
一、TaWRKY35基因对不同逆境胁迫的应答情况
1、将生长状况一致的处于一叶一心期的旱选10号小麦植株分成五组，分别进行如下处理(前四组分别为不同的胁迫处理，最后一组为对照处理)：
(1)干旱胁迫：采用PEG-6000水溶液(渗透势为-0.5MPa)进行水培，培养条件为20℃、光暗交替(12小时光照/12小时黑暗)；
(2)高盐胁迫：采用250mMNaCl水溶液进行水培，培养条件为20℃、光暗交替(12小时光照/12小时黑暗)；
(3)低温胁迫：采用去离子水进行水培，培养条件为4℃、光暗交替(12小时光照/12小时黑暗)；
(4)外源ABA处理：采用去离子水进行水培(初始时刻用50μM ABA水溶液进行喷雾直至叶片全部湿润)，培养条件为20℃、光暗交替(12小时光照/12小时黑暗)；
(5)对照处理：采用去离子水进行水培，培养条件为20℃、光暗交替(12小时光照/12小时黑暗)。
分别在处理0、0.5、1、1.5、2、3、6、12、24、48和72小时采集叶片，液氮速冻，-80℃保存备用。
2、用TRIZOL法提取步骤1采集的小麦叶片的总RNA，以MMLV反转录试剂盒合成第一链eDNA(Invitrogen)，采用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR，qRT-PCR)的方法检测TaWRKY35基因对各种逆境胁迫的响应情况，用组成型表达的Actin基因作为内参。qRT-PCR的引物如表2所示。
表2 qRT-PCR引物
按照Livak and Schmi ttgen提出的公式计算：TaWRKY35基因在4种胁迫处理下相对表达量(N)，N＝2-ΔΔCT，ΔΔCT＝(CT(TaWRKY35，Time x)-CT(Actin，Time x))-(CT(TaWRKY35，Time O)-CT(Actin，Time 0))。其中，CT值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。PCR循环在到达CT值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期(对数期)，此时微小误差尚未放大，因此CT值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的CT值是恒定的。time x代表不同的处理时间点；time 0代表处理的零点。
实验设3次重复，结果取平均数，结果如图1所示。图1中，a为外源ABA处理不同时间点TaWRKY35基因相对表达量，b为低温胁迫处理不同时间点TaWRKY35基因相对表达量，c为高盐胁迫处理不同时间点TaWRKY35基因相对表达量，d为干旱胁迫处理不同时间点TaWRKY35基因相对表达量。结果表明，TaWRKY35基因参与对ABA、低温、高盐和干旱胁迫的应答。
二、TaWRKY35基因在小麦不同发育时期的表达量
分别取如下时期的如下材料：
在培养皿中用去离子水水培旱选10号小麦，芽期取根部(GR)、根基部(GRB)、芽(GB)；幼苗期取幼苗的根(SR)、根基部(SRB)和叶(SL)；拔节期取根(BR)、叶(BL)、茎节(BN)和幼穗(BE)。
将上述材料-80℃保存，用于目标基因的组织特异表达分析。
提取上述材料的总RNA，用MMLV反转录试剂盒合成第一链cDNA，采用qRT-PCR的方法检测TaWRKY35基因在不同发育时期不同幼嫩组织中的表达情况(以Actin基因为内参基因)，采用引物F1和引物R1组成的引物对检测Actin基因的表达，采用引物F2和引物R2组成的引物对检测TaWRKY35基因的表达。
实验设3次重复，相对表达量结果如图2所示。结果表明，TaWRKY35基因在小麦幼苗期根基部(SRB)表达量最高，其次是芽期根基部(GRB)、拔节期茎节(BN)、拔节期幼穗(BE)，而在幼苗期叶(SL)中表达量最低。
实施例3、TaWRKY35亚细胞定位
一、重组载体构建
1、提取旱选10号小麦的mRNA，以mRNA为模板，采用L和R组成的引物对进行RT-PCR，得到PCR产物。
L：5′-AGCTAGCCATGCAGGACGGTGCAG-3′；
R：5′-CAGTTCGTTCACAGAGCGT-3′；
2、以步骤1的PCR产物为模板，采用LF和LR组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
LF：5′-CCAAGCTTATGCAGGACGGTGCAGGAG-3′；
LR：5′-CGGGATCCCGCGTCTCTGTGTTGGCCATA-3′；
LF和LR中，下划线分别标注HindIII和BamH I酶切位点。
2、用限制性内切酶HindIII和BamH I双酶切步骤2的PCR扩增产物，回收酶切产物。
3、用限制性内切酶HindIII和BamH I双酶切pJIT163-GFP载体，回收约4.7kb的载体骨架。
4、将步骤3的酶切产物和步骤4的载体骨架连接，得到重组载体pJIT163-35S：：TaWRKY35：：GFP。根据测序结果，对重组载体pJIT163-35S：：TaWRKY35：：GFP进行结构描述如下：将pJIT163-GFP载体的HindIII和BamH I酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列1的自5′端第69-1199位核苷酸所示的DNA分子。重组载体pJIT163-35S：：TaWRKY35：：GFP表达TaWRKY35-GFP融合蛋白。
二、TaWRKY35在小麦原生质体中的定位
挑选籽粒饱满的旱选10号小麦种子，置于培养皿中，加入去离子水室温避光培养，待长至一叶一心时，取黄化幼苗叶片的中段制备原生质体，进行目标蛋白的亚细胞定位。依次按照如下步骤进行操作：
1、剪取一叶一心期长势良好的叶片(中段)，用刀片切成0.5-1mm宽的细条；
2、将切好的细条放入预先配置好的酶解液(酶解液配方见表3)中，使叶子完全浸入酶解液，60rpm黑暗下酶解3-5h，用等量的W5溶液稀释含有原生质体的酶液；
W5溶液组成：154mM NaCl、125mM CaCl2、5mM KCl、2mM MES(pH 5.7)。
3、用W5溶液润湿200-500目筛子，过滤除去未溶解的叶片，过滤后的含有原生质体的酶液收集到离心管中；
4、将离心管100g离心2min，弃上清，沉淀用5ml W5溶液重悬，再次100g离心2min，弃上清，沉淀用2ml W5溶液重悬后冰上静置30min；
5、100g离心2min使原生质体沉淀在管底；
6、在另一离心管中加入10μg的重组载体pJIT163-35S：：TaWRKY35：：GFP，缓慢吸取200μL原生质体，轻柔混匀，加入40％PEG转化液(体积为质粒和原生质体体积之和)，转化15-30min。
PEG转化液配方：4g PEG4000，3ml H2O，0.2M Mannitol，0.1M CaCl2。
7、室温下用W5溶液终止转化反应，100g离心2min，去除上清，重复操作一次；
8、用10％的BSA溶液清洗组织培养板一次，用200μLW5溶液培养原生质体(铝箔纸包裹，黑暗下培养16-48小时)；
9、在Zeiss LSM700激光共聚焦显微镜下观察TaWRKY35在小麦原生质体中的定位。
按照如上所述的相同方法，设置pJIT163-GFP载体作为重组载体
pJIT163-35S：：TaWRKY35：：GFP的对照。
结果如图3所示，GFP在细胞膜细胞核和细胞质中均有分布，而TaWRKY35-GFP融合蛋白只存在于细胞核中，说明TaWRKY35蛋白是典型的核定位蛋白。
表3酶解液配方
实施例4、TaWRKY35基因在提高植物抗逆性中的应用
一、重组表达载体构建
1、以pPZP211载体为原始载体，在pPZP211载体的EcoRI和Kpn I位点之间插入CaMV35S启动子(CaMV 35S启动子为如GenbankAccession NO.AB303068中第1035-1815位核苷酸)，得到双元表达载体pCHF3。
2、提取旱选10号小麦的mRNA，以mRNA为模板，采用F和R组成的引物对进行RT-PCR，得到PCR产物(经测序，为序列表序列1的自5′端第61-1221位核苷酸所示的DNA分子)。
F：5′-AGCTAGCCATGCAGGACGGTGCAG-3′；
R：5′-CAGTTCGTTCACAGAGCGT-3′；
3、以步骤1得到的PCR扩增产物为模板，采用TF1和TR1组成的引物对进行RT-PCR扩增，采用高保真酶Pfu扩增目标基因，得到PCR扩增产物。
TF1：5′-CTGGTACCAGCTAGCCATGCAGGACGGT-3′；
TR1：5′-CTGGATCCCAGTTCGTTCACAGAGCGT-3′；
TF1和TR1中，下划线分别标注Kpn I和BamH I酶切位点。
4、将步骤3获得的扩增产物连接到pEASY-Blunt载体上，得到携带目标片段的pEASY-Blunt载体，经测序结果显示，目标片段的核苷酸序列如序列表中序列1的自5′端第61-1221位所示。
5、用限制性内切酶KpnI和BamH I双酶切步骤4的携带目标片段的pEASY-Blunt载体，回收酶切产物。
6、用限制性内切酶Kpn I和BamHI双酶切双元载体pCHF3，回收约1170bp的载体骨架。
7、将步骤5的切产物和步骤6载体骨架连接，得到重组表达载体pCHF3-TaWRKY35。根据测序结果，对重组表达载体pCHF3-TaWRKY35进行结构描述如下：将双元载体pCHF3的Bam HI和Kpn I酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列1的自5′端第61-1221位核苷酸所示的DNA分子。
二、转基因植物的获得
1、将重组表达载体pCHF3-TaWRKY35转化根癌农杆菌GV3101，获得重组农杆菌。
2、采用花芽浸泡法(Clough and Bent，Floral dip：a simplified method forAgrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.Plant Journal，1998，16：735-743.)用步骤1得到的重组农杆菌侵染哥伦比亚生态型拟南芥，得到T1代种子。在含50mg/L卡那霉素的MS培养基平板上筛选T1代植株并进行T2代和T3代的分离比统计，然后采用引物F/R筛选转基因植株，在T3代得到转TaWRKY35基因拟南芥单拷贝纯合株系。
T2代表示T1代自交产生的种子及由它所长成的植株，T3代表示T2代自交产生的种子及由它所长成的植株。
3、随机选取5个步骤2得到的转TaWRKY35基因拟南芥单拷贝纯合株系作为待测株系。利用qRT-PCR检测各待测株系的T3代植株中TaWRKY35基因的相对表达量(以Actin基因为内参基因)，采用引物F1和引物R1组成的引物对检测Actin基因的表达，采用引物F2和引物R2组成的引物对检测TaWRKY35基因的表达，结果如图4所示，从表达量相对较高的株系中选取L2、L4和L5这3个转TaWRKY35基因株系进行下面抗逆性检测。
三、转空载体植物的获得
用双元载体pCHF3代替重组表达载体pCHF3-TaWRKY35进行步骤二，得到转空载体pCHF3拟南芥。
四、抗盐性鉴定
待测植株：哥伦比亚生态型拟南芥(WT)、L2株系的T3代植株、L4株系的T3代植株、L5株系的T3代植株、转空载体pCHF3拟南芥。
1、将待测植株的种子用10％次氯酸钠溶液消毒处理后，分别点播于MS固体培养基平板上，然后置于人工气候室中培养7天。
2、完成步骤1后，取幼苗，转移到含有250mMNaCl的MS固体培养基平板上，培养1周，然后观察表型。
进行四次重复试验，每次重复试验中每个株系10株幼苗。
结果如图5A所示。转TaWRKY35基因拟南芥(L2、L4和L5)幼苗的白化率约为20-50％，而哥伦比亚生态型拟南芥(WT)幼苗的白化率高达70％，转TaWRKY35基因拟南芥的耐盐性较哥伦比亚生态型拟南芥有明显的提高。转空载体pCHF3拟南芥的白化率与哥伦比亚生态型拟南芥无显著差异。
3、完成步骤1后，取幼苗，转移到底部带孔的长方形筛盘中(营养土∶蛭石＝1∶1)，培养三周。
4、完成步骤3后，将所述筛盘放在200mMNaCl水溶液中，直至土壤盐溶液饱和，跟踪观察转基因植株在盐胁迫下的表型，10天后计算植株存活率。
进行四次重复试验，每次重复试验中每个株系10株幼苗，结果取平均值。
结果如图5C所示。转TaWRKY35基因拟南芥(L2、L4和L5)的存活率平均为75-80％，而哥伦比亚生态型拟南芥(WT)存活率只有50％。转空载体pCHF3拟南芥的存活率与哥伦比亚生态型拟南芥无显著差异。
5、完成步骤1后，取幼苗，转移到含有250mmol L-1NaCl的MS固体培养基平板上，培养1周，然后利用煮沸法测定幼苗相对电导率，评价细胞膜稳定性(cell membranestability，CMS)。CMS(％)＝(1-煮前电导率/煮后电导率)×100％。CMS值越大，表明细胞膜稳定性越高，受盐伤害的程度越低。
进行三次重复试验，每次重复试验中每个株系10株幼苗，结果取平均值。
结果如图5B所示。转TaWRKY35基因拟南芥(L2、L4和L5)的细胞膜稳定性介于35-45％之间，而哥伦比亚生态型拟南芥(WT)仅有20％，转TaWRKY35基因拟南芥的细胞膜稳定性显著高于哥伦比亚生态型拟南芥。转空载体pCHF3拟南芥的细胞膜稳定性与哥伦比亚生态型拟南芥无显著差异。

Claims (7)

1.一种蛋白质，是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白质的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因为如下（1）-（4）中任一所述的DNA分子：
（1）编码区如序列表中序列1自5′末端第69至1199位核苷酸所示的DNA分子；
（2）编码区如序列表中序列1自5′末端第69至1202位核苷酸所示的DNA分子；
（3）序列表中序列1自5′末端第61至1221位核苷酸所示的DNA分子；
（4）序列表中序列1所示的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒或重组菌。
5.权利要求1所述蛋白质或权利要求2或3所述基因在调控植物耐逆性中的应用；所述耐逆性为耐盐性；所述植物为小麦或拟南芥。
6.一种培育转基因植物的方法，是将权利要求2或3所述基因导入目的植物中，得到转基因植物；所述转基因植物耐逆性高于所述目的植物；所述耐逆性为耐盐性；所述植物为小麦或拟南芥。
7.权利要求1所述蛋白质或权利要求2或3所述基因或权利要求6所述方法在植物育种中的应用；所述育种的目的为选育耐逆性高的植物；所述耐逆性为耐盐性；所述植物为小麦或拟南芥。
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