CN105770051A - 一种兽用药物组合物、饲料添加剂、饲料及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种兽用具有抗应激、免疫调节和促生长作用的药物组合物及其应用，该组合物由蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、炒制酸枣仁制备成注射液、口服液、颗粒剂和粉剂等兽药制剂或饲料添加剂。本发明四味药组成的方剂药理作用相辅相成，镇静、抗应激作用更强，改善机体免疫功能更明显，从而促进畜禽生长发育，改善生产功能，为畜禽养殖提供一种具有抗应激、改善免疫功能，促生长作用的保健药物或饲料添加剂的新选择。

Description

一种兽用药物组合物、饲料添加剂、饲料及其应用

技术领域

本发明涉及一种兽用具有抗应激、免疫调节和促生长作用的药物组合物，含有该药物组合物的饲料添加剂、饲料及其应用，属于中兽药领域。

背景技术

畜禽养殖过程中经常因捕捉、转群、运输、疫苗接种、断喙、断尾、换饲、甚至高温、寒冷等各种原因而产生应激，特别是对幼畜和雏禽危害很大，幼畜和雏禽免疫功能弱，自身调剂能力差，所以应激往往造成畜、禽特别是幼畜、雏禽的免疫功能降低，对各种疾病易感性增强，诱发各种疾病，进而影响生长发育及其他生产功能，从而造成养殖者的经济损失。

蜘蛛香又称马蹄香，是败酱科缬草属植物蜘蛛草的根，具有镇静，顺气，消食等作用，现代药理学研究证明蜘蛛香具有镇静、镇痛、抗焦虑作用、抗肿瘤、抗病毒等作用。牡丹皮具有清热凉血，活血化瘀的作用，现代药理学研究证明其具有抗菌消炎、抗惊厥、调节免疫、保肝等作用。黄芪具有补气升阳、益卫固表、托毒生肌、利水消肿等功效。现代药理学研究证明黄芪具有增强免疫功能、增强机体耐缺氧及抗应激能力、抗菌及抑制病毒、保肝、改善心功能，调节血糖、促进机体代谢等作用。酸枣仁是鼠李科枣属植物酸枣的干燥成熟种仁，具有补肝、宁心、敛汗、生津之功效，现代药理学研究证明酸枣仁具有镇静、镇痛、催眠、抗焦虑、抗惊厥作用、增强免疫功能、降血脂、降压、抗缺氧、抗心律失常，抗衰老、抗辐射等作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的兽用抗应激、免疫调节和/或促生长作用的药物组合物，以及在制备兽用保健药物及饲料添加剂或功能性饲料中的应用。从而解决畜禽养殖过程中各种应激所造成的畜禽特别是幼畜、雏禽免疫功能低下，生长发育受阻，生产性能降低，养殖成本增高等问题。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种兽用抗应激、免疫调节和促生长作用的药物组合物，该组合物含有活性成分，所述活性成分由蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、炒制酸枣仁制成。

优选的，按重量份计，所述活性成分由蜘蛛香15～80份、牡丹皮10～60份、黄芪10～80份、炒制酸枣仁10～60份制成。

进一步优选的，按重量份计，所述活性成分由蜘蛛香30～60份、牡丹皮20～40份、黄芪20～50份、炒制酸枣仁20～40份制成。

更进一步优选的，按重量份计，所述活性成分由蜘蛛香40份、牡丹皮30份、黄芪30份、炒制酸枣仁30份制成。

本发明的药物组合物可以制成本领域常规剂型，但为更好的达到本发明的效果，优选注射剂或口服制剂。

其中，所述的口服制剂为口服液、颗粒剂或粉剂。

本发明的药物组合物可按照常规的制剂制备方法处理各原料后制得，必要时可再加入适量的动物饲料或医学可接受的其他药用辅料。

其中，所述的辅料包括附加剂、填充剂（稀释剂）、助流剂、粘合剂、崩解剂、矫味剂等。

所述的附加剂包括：抑菌剂、增溶剂、助溶剂及pH调节剂及抗氧化剂等，附加剂可以是吐温80、卖泽40、泊洛沙姆188、苯甲醇、苯甲酸，尼泊金类、盐酸、枸橼酸或氢氧化钠（钾）、磷酸盐、枸橼酸盐、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、薄荷油、桂皮醛、桉叶油、乙醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇等中的一种、两种或两种以上混合。

所述的填充剂可以为乳糖、蔗糖粉、壳聚糖、甘露醇、木糖醇、甲壳胺、双歧糖、滑石粉、淀粉、羧甲基淀粉钠、糊精、β-环糊精、脱脂米糠、麦糠粉、麸皮、玉米芯粉、稻壳粉、小麦粗粉和大豆皮粉等中的一种、两种或两种以上混合。

所述的崩解剂可以为CMS-Na、微晶纤维素（MCC）、微粉硅胶、碳酸氢钠、枸橼酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸等、羟丙基淀粉等中的一种、两种或两种以上。

所述的助流剂为滑石粉、微粉硅胶的一种或两种混合。

所述的粘合剂为羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、糊精、聚乙二醇类辅料中的一种、两种或两种以上混合。

所述的矫味剂为茴香油、生姜挥发油、槟榔籽油和大葱油、牛奶香精、香橙粉、苹果香精、桔子香精、香蕉香精、柠檬香精、糖精钠、蔗糖、三氯蔗糖、乳糖、葡萄糖、甜菊甙、阿斯帕坦、甜菜碱、甜蜜素、蛋白糖、果糖、谷氨酸钠、柠檬油酪酸、乳酸丁酯、乳酸乙酯、碳酸氢钠、酒石酸、海藻酸钠、阿拉伯胶、琼脂、明胶、西黄蓍胶等中的一种、两种或两种以上混合。

本发明的兽用抗应激、免疫调节和促生长作用的药物组合物的注射剂和口服液的制备方法包括如下步骤：

1）将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、炒制酸枣仁分别粉碎，混合，加适量水浸泡后，煎煮0.5～2小时，过滤，再如此煎煮1～2次；合并煎液，浓缩，醇沉，冷藏，过滤回收乙醇，根据所得药液的澄明度情况，可适当再醇沉1～2次。将所得提取液冷藏备用；

2）将1）所制得的提取液过滤、然后用活性炭脱色后，加入适宜的助溶剂使溶液澄明，灭菌即得注射剂和口服液。

本发明的兽用抗应激、免疫调节和促生长作用的药物组合物颗粒剂的制备方法包括如下步骤：

1）将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、炒制酸枣仁，分别粉碎，混合，加适量水浸泡后，煎煮0.5～2小时，过滤，再如此煎煮1～2次；合并煎液，浓缩，喷雾干燥成干浸膏粉，或浓缩成膏后再减压真空烘干，粉碎成浸膏粉，或者将上述四味药分别提取制成浸膏粉；

2）将1）中制得的浸膏粉，可拌入适量的矫味剂、润湿剂、崩解剂及助流剂，置于混合机中搅拌制成软材；然后制粒，干燥，整粒，分装即得。

本发明的兽用抗应激、免疫调节和促生长作用的药物粉剂的制备方法可包括如下步骤：

粉剂制备方法（1）：将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪和炒制酸枣仁混合后粉碎或者分别粉碎后混合，过50目筛，分装，既得粉剂。

粉剂制备方法（2）：按照上述制备颗粒剂的制备方法制备浸膏粉，然后加入矫味剂、填充剂至全量，充分混匀，过50目筛，分装，即得。

本发明的兽用药物组合物具有抗应激、免疫调节和促生长作用，因此，本发明还提供所述的兽用药物组合物在制备抗应激、免疫调节和促生长药物中的应用。

本发明的兽用药物组合物可以作为饲料添加剂，或者添加到常规的饲料添加剂中，还可以添加到饲料，如预混料、浓缩料或配合料中，因此，本发明还提供含有所述兽用药物组合物的饲料添加剂、预混料、浓缩料或配合料。

本发明四味药组成的方剂药理作用相辅相成，镇静、抗应激作用更强，改善机体免疫功能更明显，从而促进畜禽生长发育，改善生产功能，为畜禽养殖提供一种具有抗应激、改善免疫功能，促生长作用的保健药物或饲料添加剂的新选择。该药物组合物原料成本低廉，降低了因动物发病给畜牧业、养殖户带来的经济损失；本发明的药物组合物毒副作用小，三倍剂量用药也未见毒副反应，而且在应用该组合物防治畜禽疾病或者作为饲料添加剂应用的过程中未发现明显不良反应。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香1500g、牡丹皮1000g、黄芪1000g、炒制酸枣仁1000g。

制备过程如下：

1）将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、切成饮片，酸枣仁粉碎，四味药物混合，加药材总量10倍量的水浸泡后0.5小时，煎煮1小时，过滤，再分别加入8倍量的水煎煮2次；合并3次煎液，浓缩至原药材总重量的0.5倍，加乙醇醇沉2次，分别使醇含量达60%、75%，每次沉淀12h，过滤，回收乙醇，即得提取液，冷藏备用。

2）将1）所制得的提取液过滤、加25g活性炭，加热80℃，搅拌30分钟，进行脱色除杂，加入2000ml聚乙二醇400搅拌使溶液澄明，加注射用水至10000ml，0.2μl微孔膜精滤，分装，封口，灭菌，即得注射液。

实施例2

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香1000g、牡丹皮2000g、黄芪2000g、炒制酸枣仁2000g。

制备过程如下：按照实施例1制备蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、炒酸枣仁混合提取液，提取液中加入抑菌剂苯甲酸50g，充分搅拌溶解，加入用适量水溶解2g糖精钠，加注射用水至10000ml，分装，封口，即得口服液。

实施例3

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香8000g、牡丹皮6000g、黄芪8000g、酸枣仁6000g。

制备过程如下：

1）按照实施例1提取方法制备蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、酸枣仁混合物煎煮浓缩液，喷雾干燥成干浸膏粉；

2）将1）中制得的浸膏粉拌入适量的乳糖、糊精和CMS-Na作为矫味剂、填充剂和崩解剂，使总量达到28000g，以适量80%乙醇为润湿剂，置于混合机中搅拌制成软材；然后制粒，低温干燥，整粒，分装即得颗粒剂。

实施例4

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香6000g、牡丹皮4000g、黄芪5000g、酸枣仁4000g。

制备过程如下：

1）将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、切成饮片，酸枣仁粉碎，分别提取，加药材10倍量的水浸泡后0.5小时，煎煮1小时，过滤，再分别加入8倍量的水煎煮2次；合并3次煎液，浓缩至药材重量的1倍，再减压真空烘干，粉碎成浸膏粉。

2）将1）中制得的四种浸膏粉混合后按照实施例3中制备颗粒剂的方法制备成颗粒剂。

实施例5

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香8000g、牡丹皮6000g、黄芪8000g、炒酸枣仁1000g。

制备过程如下：将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪和炒酸枣仁混合后粉碎，过50目筛，分装，既得粉剂。

实施例6

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香1500g、牡丹皮1000g、黄芪8000g、炒酸枣仁1000g。

制备过程如下：将蜘蛛香、牡丹皮、黄芪和酸枣仁分别粉碎后混合均匀，过50目筛，分装，既得粉剂。

实施例7

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香6000g、牡丹皮2000g、黄芪2000g、酸枣仁2000g。

制备过程如下：按照实施例3制备颗粒剂过程中制备浸膏粉的方法制备浸膏粉，然后加入香橙粉120克、葡萄糖3600g改善气味和口感，再加淀粉至填充剂至全量12000g，充分混匀，过50目筛，分装，即得粉剂。

实施例8

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香4000g、牡丹皮3000g、黄芪3000g、炒酸枣仁3000g。

制备过程如下：按照实施例4制备颗粒剂过程制备浸膏粉的方法分别制备蜘蛛香、牡丹皮、黄芪和酸枣仁浸膏粉，将四种浸膏粉充分混合，然后适量牛奶香精15克改善其气味、加入适量滑石粉改善其流动性。充分混匀，加入仔猪配合饲料中，经饲料加工工艺制成仔猪颗粒料。

实施例9

本实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香2000g、牡丹皮1500g、黄芪1500g、炒制酸枣仁1000g。

制备过程如下：按照实施例3制备颗粒剂过程制备浸膏粉的方法制备四味药物混合物浸膏粉，喷入茴香油1.5克改善其气味、加入适量滑石粉改善其流动性，加入适量玉米芯粉作为填充剂使其适当稀释。按照0.5%的添加量加入仔猪配合料中，经饲料加工工艺制成仔猪料。

实施例10

实施例药物由以下原料制得：蜘蛛香7000g、牡丹皮5000g、黄芪6000g、炒制酸枣仁5000g。

制备过程如下：将四味药物分别烘干，混合，粉碎成100目的粉末，加入适量微粉硅胶、滑石粉和苹果香精改善流动性和气味，加入脱脂米糠等填充剂适当稀释，即成预混料。

以下通过临床试验进一步说明本发明的有益效果：

试验例1　本发明药物对小鼠抗应激作用的试验研究。

1　试验材料与方法

1.1　试验药物实施例2制备的口服液为试验药物。

1.2　试验动物昆明种小白鼠，体重20-25g，北大第三医院动物实验中心提供。

1.3仪器250ml磨口广口瓶，250ml锥形瓶，恒温水浴锅（北京瑞成伟业仪器设备有限公司，型号：HH-ZKZ）超低温冰箱（美国NBS公司，型号：C340-86C），温度计，秒表。

1.4　试验方法

1.4.1本发明药物对小鼠耐缺氧试验

取40只小鼠，雌雄各半，随机分为4组，每组10只。即：生理盐水组，本发明药物低剂量组（2.5g生药/kg）,本发明药物中剂量组（7.5g生药/kg），本发明药物高剂量组（15g生药/kg）。各组分别给药相应稀释好的药物，均按0.2ml/10g剂量，每天灌胃给药2次，连续给药7天。末次给药30分钟后，将小鼠放入盛有10g钠石灰的磨口广口瓶中，每瓶1只，瓶口涂抹凡士林，密封容器，拧紧瓶塞，以最后一次呼吸为指标，记录小鼠在缺氧条件下的存活时间。

1.4.2本发明药物对小鼠耐高温试验

取40只小鼠，雌雄各半，分组与给药剂量同上。末次给药30min后，将小鼠放入250ml锥形瓶中，然后将锥形瓶置于温度为（42±0.5）℃的温水浴锅内，并用纱布将瓶口封住，记录小鼠在此条件下的存活时间。

1.4.3本发明药物对小鼠的耐低温试验

取40只小鼠，雌雄各半，分组与给药剂量同上。末次给药30min后，将小鼠置于-25℃的低温冰箱中，记录小鼠存活时间。

1.4.4本发明药物对小鼠的负重游泳试验：取40只小鼠，雌雄各半，分组与给药剂量同上。末次给药30min后，随机抽取小鼠，每只小鼠负重（10%体重），然后放入深23cm，温度为（25±1）℃的水中游泳。以小鼠游泳至头部深入水中15s不再浮起为结束，记录小鼠游泳持续时间。

2试验结果

2.1小鼠耐缺氧试验结果：见表1

表1本发明药物对小鼠缺氧条件下存活时间的影响（±s）

注:表示与空白对照比较(方差分析)，p<0.05

2.2小鼠耐高温试验结果：见表2

表2本发明药物对小鼠高温环境下存活时间的影响（±s）

注:表示与空白对照比较(方差分析)，*P<0.001，**p<0.05

2.3小鼠耐低温试验结果：见表3

表3本发明药物对小鼠低温环境下存活时间的影响（±s）

注:表示与空白对照比较(方差分析)，p<0.05

2.4小鼠游泳试验结果：见表4。

表4本发明药物对小鼠游泳持续时间的影响（±s）

注:表示与空白对照比较(方差分析)，*P<0.001，**p<0.05

本试验研究显示：本发明药物试验组小鼠在缺氧调节下存活时间明显比空白对照组延长(P<0.05)，表明本发明药物可以提高小鼠对缺氧的耐受能力,而且这种作用在较小的剂量时即显示出来；本发明药物低、中、高剂量试验组小鼠在高温环境的存活时间均明显和极明显比空白对照组延长(P<0.05和p<0.01),表明本发明药物能提高小鼠耐受高温的能力；本发明药物试验小鼠在低温环境的存活时间均明显比空白对照组延长(p<0.05),表明本发明药物能提高小鼠耐受低温的能力；本发明药物能显著和极显著延长小鼠的游泳时间(P<0.05和p<0.01),表明本发明药物能提高小鼠耐受疲劳的能力。以上结果均表明本发明药物能提高小鼠的抗应激能力，使机体对环境变化的适应能力增强。

试验例2　本发明药物对免疫功能的影响。

1试验材料与方法

1.1试验药物实施例3制备的颗粒剂为试验药物；注射用环磷酰胺。

1.2　试验动物昆明种小白鼠，体重20-25g，北大第三医院动物实验中心提供。

1.3仪器CO₂培养箱（深圳市澳德玛电子科技有限公司，型号：6100），离心机（ANKE公司，型号：TGL-16C），倒置显微镜（OlYMPUS公司，型号：CKS41型），超净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司，型号：SCB-1520），精密电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司，型号：ABL04-L）。96孔、24孔培养板。

1.4试验方法

1.4.1本发明药物对T、B淋巴细胞转化功能、NK细胞杀伤活性和脾细胞IL-2、TNF活性的影响

健康小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，分别为正常对照组、模型组、本发明药物小、中、大剂量组。正常对照组不给任何药物，模型组灌胃给予生理盐水，小、中、大剂量组则分别灌胃给予本发明药物1.5g/kg、3g/kg、6g/kg(相当于生药量各组均连续给予15日。给药第11天除正常对照组外各组一次给予腹腔注射环磷酰胺50mg/kg造模。

1.4.1.1观察及检测指标

停药次日小鼠眼眶取血处死，于超净台中无菌取出脾脏，置于盛有IMDM培养基的玻璃研磨器内，研磨成单细胞悬液，经200目尼龙网过滤至离心管中，1500rpm，离心5分钟，弃上清，同样方式洗涤细胞两次，最后用IMDM制备1×10⁷/ml脾细胞悬液。

（1）淋巴细胞转化试验

每只小鼠的脾细胞悬液均分为脾细胞悬液对照孔、加ConA孔及LPS孔，各设三复孔，于96孔板中每孔加脾细胞悬液100μl，然后于对照孔中加入100μlIMDM培养液，ConA孔中加入100μlConA（10μg/ml）溶液，LPS孔中加入100μlLPS（20μg/ml）溶液，于37oC5%CO₂孵箱中孵育40h。取出后每孔加入10μlMTT溶液，继续于37oC5%CO₂孵箱中孵育4h，取出后，小心吸去上清，每孔加入100μlDMSO，放置10分钟后测量570nm处的OD值，计算刺激指数（SI）。

SI=刺激孔OD值（加ConA或LPS孔）/对照孔OD值

（2）NK细胞活性测定

取上述浓度为1×10⁷/ml脾细胞悬液作为效应细胞，靶细胞取对数生长期的YAC-1细胞，调细胞浓度为2×10⁵/ml。将脾细胞悬液和YAC-1细胞悬液各100μl加入96孔培养板中混匀，并分别设靶细胞加培养液对照和效应细胞加培养液对照，每个样本做三个复孔。于37℃5%CO₂孵箱中孵育4h后。取出后每孔加入10μlMTT溶液，继续于37℃5%CO₂孵箱中孵育4h，取出后，小心吸去上清，每孔加入100μlDMSO，放置10分钟后测量570nm处的OD值。

杀伤率=[1-（ODE+T-ODE）/ODT]×100%。ODE为效应细胞孔的光密度值ODE+T为效应细胞加靶细胞的光密度值ODT为靶细胞孔的光密度值ODT为靶细胞孔的光密度值。

（3）IL-2生物活性测定

取上述脾细胞悬液，加入24孔培养板，500μl/孔，再加入ConA，500μl/孔，使其终浓度为5μg/ml，置37℃、5%CO₂培养箱中培养24小时，将培养的细胞振荡混匀后，移至离心管中，2000r/min离心20min；收集上清液，用0.22μm滤膜除去杂质，分装保存于-20℃冰箱，作为待测样品。取6-8周雄性C₅₇BL/2小鼠，眼眶取血处死，无菌条件下打开胸腔取出胸腺，用含5%小牛血清的Hank’s液清洗，移入含小量5%小牛血清的Hank’s液平皿内，在不锈钢网上研磨胸腺制成胸腺细胞悬液。悬液用5%小牛血清的Hank’s液洗两次，每次1000rpm离心10min，作活细胞计数。于第二次离心后，弃上清，用IMDM培养液配制1×10⁷/ml的胸腺细胞液。

将待测样品按1：8稀释后加入96孔培养板中，每孔100μl，每孔中加胸腺细胞悬液100μl及30μg/mlConA液20μl，同时设相应浓度的ConA对照，设三复孔。将培养板置于37℃，5%CO₂培养箱中至少培养72小时，取出培养板后每孔加入10μlMTT（5mg/ml）溶液，继续于37oC5%CO₂孵箱中孵育4h，取出后，小心吸去上清，每孔加入100μlDMSO，放置10分钟后测量570nm处的OD值。

（4）TNF-α的生物活性测定

将对数生长期的L929细胞用IMDM调浓度为2×10⁵/ml，加入96孔培养板，100μl/孔，置37℃、5%CO₂培养箱中培养24小时，吸去细胞培养上清后，各孔分别加入1：8稀释的待测样品，100μl/孔，并设培养液阴性对照。置37℃、5%CO₂培养箱中培养14小时，取出培养板后，翻板弃去上清，每孔加入10μlMTT（5mg/ml）溶液，继续于37oC5%CO₂孵箱中孵育4h,取出后，小心吸去上清,板上仍贴壁者为未被吞噬的L929细胞，每孔加入100μlDMSO进行裂解，放置10分钟后测量570nm处的OD值。

1.4.1.2统计学分析

采用SPSS11.5forwindows统计软件包分析数据，所有数据均表示为均值±标准差(±S),采用t检验法进行显著性检验，P<0.05认为差异具有统计学意义，P<0.01差异具有显著统计学意义。

1.4.2本发明药物对环磷酰胺免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响

健康小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，分别为正常对照组、模型组、本发明药物大、中、小剂量组。正常对照组不给任何药物，模型组灌胃给予生理盐水，小、中、大剂量组则分别灌胃给予本发明药物1.5g/kg、3.0g/kg、6.0g/kg(相当于生药量各组均连续给予15日。给药第11天除正常对照组外各组一次给予腹腔注射环磷酰胺50mg/kg造模。给药第12日每只小鼠腹腔注射巨噬细胞诱导剂2ml（3%营养肉汤培养基）。

1.4.2.1观察及检测指标第16日处死小鼠，腹腔内注入5ml培养液，轻揉腹部，用无菌吸管吸出腹腔内液体，1500转离心5分钟，弃上清，Hank’s液洗1次，用含10%血清IMDM培养液悬浮细胞，调整浓度为2×10⁶/ml，于96孔板内加入100μl，于37℃、5%CO₂培养箱中贴壁72小时，用温Hank’s液洗板，底部贴壁的细胞为巨噬细胞，每孔加入0.075%中性红100μl，于37℃、5%CO₂培养箱中培养30分钟后，以100μlpH7.4PBS清洗3次，然后每孔加100μl溶解剂，以4℃，放置过夜，在波长492nm处测定光密度OD值。

1.4.2.2统计学分析采用SPSS11.5forwindows统计软件包分析数据，所有数据均表示为均值±标准差(±S),采用t检验法进行显著性检验，P<0.05认为差异具有统计学意义，P<0.01差异具有显著统计学意义。

1.5试验结果

1.5.1本发明药物对免疫低下小鼠淋巴细胞转化功能的作用

一次给予环磷酰胺50mg/kg能抑制小鼠T、B淋巴细胞转化功能，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.05，P<0.01），表明模型制备成功。本发明药物能明显提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠的脾淋巴细胞转化功能，与模型组比较有显著性差异（P<0.05，P<0.01），结果见表5。

表5本发明药物对免疫低下小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响(±s，n=10)

与正常对照组比较^*P<0.05^**P<0.01；与模型组比较^#P<0.05^##P<0.01

1.5.2本发明药物对免疫低下小鼠NK细胞活性的作用

环磷酰胺50mg/kg能抑制小鼠NK细胞杀伤活性，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01），本发明药物能明显提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠的NK细胞活性，与模型组比较有显著性差异（P<0.05，P<0.01），结果见表6。

表6本发明药物对免疫低下小鼠NK细胞活性的影响(±s，n=10)

与正常对照组比较^**P<0.01；与模型组比较^#P<0.05，^##P<0.01

1.5.3本发明药物对免疫低下小鼠IL-2和TNF-α生物活性的作用

本发明药物能明显提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠的IL-2和TNF-α生物活性，与模型组比较有显著性差异（P<0.05，P<0.01），结果见表7。

表7本发明药物对免疫低下小鼠IL-2和TNF-α生物活性的影响(±s，n=10)

组别	剂量（g/kg）	IL-2 OD	TNF OD
				正常对照组	--	0.18±0.15	0.18±0.07
模型组	--	0.89±0.14**	0.28±0.06**
				大剂量组	6.0	0.19±0.13##	0.18±0.05##
中剂量组	3.0	0.18±0.11##	0.17±0.04##
				小剂量组	1.5	0.15±0.12#	0.23±0.07

与正常对照组比较^*P<0.05^**P<0.01；与模型组比较^#P<0.05，^##P<0.01

1.5.4本发明药物对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

环磷酰胺（50mg/kg）能使小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能降低，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01），表明模型制备成功。本发明药物能明显增强环磷酰胺所致免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能，与模型组比较有显著性差异（P<0.05），结果见表8。

表8本发明药物对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

与正常对照组比较^**P<0.01；与模型组比较^#P<0.05，^##P<0.01

1.6结论

上述试验表明，本发明药物在体液免疫、细胞免疫、细胞因子等方面均具有免疫增强作用。

试验例3　本发明药物对仔猪促生长效果的试验

1试验动物及饲养管理本试验于2012年2月10日—2012年3月15日在北京玉田大北农合作试验猪场进行，每天饲喂4次，每次喂料量以有少量剩余为标准，自由饮水、自由采食。试验期间腹泻仔猪不用药物治疗。

2试验药物按照10个实施例所述的组方量配比制备出10种仔猪颗粒料

3试验设计选择健康无病的28日龄断奶仔猪(杜洛克×长白×大约克)360头,随机分组设计,按窝、性别、日龄、体重相似原则分成12组,每组30头，饲喂基础日粮制备的仔猪颗粒料空白对照组、添加抗生素(每吨饲料添加500g硫酸粘菌素)的仔猪颗粒料即抗生素对照组、试验组投喂上述10种组方配比制备的仔猪料。预饲期7d,正试期28d。

3测试项目分别于仔猪35、42、49、56、63日龄的早晨空腹称重,测定每周仔猪的采食量(投喂量减去剩料量),记录各组每天腹泻仔猪数。

4数据统计试验数据采用SAS单因素K水平设计Duncan氏多重比较统计软件模型进行数据处理。

5试验结果

试验结果见表9

表9饲喂含本发明药物的仔猪颗粒料的断奶仔猪生长性能

与空白对照组比较^*P<0.05，^*P<0.01

本发明药物对仔猪采食量、日增重的影响由表9可见，试验组的结束体重和日增重显著比对照组高(P>0.05)，与抗生素对照组差异不显著。

由于断奶应激的影响，仔猪腹泻的发生主要集中在试验开始的第1周(2012年2月17日—2012年2月24日)。从表9可见，空白对照组腹泻率最高，试验组和抗生素组次之，试验组和抗生素组均极显著低于空白对照组(P<0.01)。说明本发明药物对早期断奶仔猪的腹泻具有明显的防治效果,且防治效果略优于硫酸粘杆菌素。

试验例4本发明药物应用于猪、鸡的毒副作用

1试验材料与方法

1.1试验药物试验药物为上述实施例1制备注射剂和实施例5制备的粉剂。

1.2试验动物健康仔猪80头，平均体重为34±0.37公斤。健康10日龄雏鸡160只。

1.3试验方法将仔猪随机分为4组，每组20头。第1、2、3组为试验组，分别肌内注射本发明药物实施例1制备的注射剂0.4ml/kg、0.8ml/kg、1.2ml/kg，每天1次，连用3天；第4组为空白对照组，不给药，正常饲养。对所有试验仔猪用药后观察15天，记录不良反应、饮食欲、精神状态及体重变化等情况。

将雏鸡随机分为4组，每组40只。第1、2、3组为试验组，将本发明药物实施例5制备的粉剂分别按照1.5g：1kg、3g：1kg、6g：1kg的比例拌料，分别给前3组雏鸡自由采食，每天先喂药料，药料吃完后添加正常饲料，连喂3天；第4组为对照组，不给药，正常饲养。对所有试验雏鸡用药后观察15天，记录不良反应、饮食欲、精神状态及体重变化等情况。

2试验结果与分析

与未用药的对照组比较，前3组用药的仔猪均未发生明显不良反应，饮食欲、精神状态均正常，平均体重增长差异也不大。

与未用药的对照组比较，前3组用药的雏鸡均未发生明显不良反应，饮食欲、精神状态均正常，平均体重增长差异也不大。

上述试验结果说明，本发明药物毒副作用小，应用后不会影响动物的生长发育。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种兽用药物组合物，其特征在于，其含有活性成分，所述活性成分由蜘蛛香、牡丹皮、黄芪、炒制酸枣仁制成。

2.根据权利要求1所述的兽用药物组合物，其特征在于：按重量份计，所述活性成分由蜘蛛香15～80份、牡丹皮10～60份、黄芪10～80份、炒制酸枣仁10～60份制成。

3.根据权利要求2所述的兽用药物组合物，其特征在于：按重量份计，所述活性成分由蜘蛛香30～60份、牡丹皮20～40份、黄芪20～50份、炒制酸枣仁20～40份制成。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：按重量份计，所述活性成分由蜘蛛香40份、牡丹皮30份、黄芪30份、炒制酸枣仁30份制成。

5.权利要求1～4任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为注射剂或口服制剂。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的口服制剂为口服液、颗粒剂或粉剂。

7.权利要求1～4任一项所述的兽用药物组合物在制备抗应激、免疫调节和/或促生长药物中的应用。

8.含有权利要求1~4任一项所述的兽用药物组合物的饲料添加剂、预混料、浓缩料或配合料。