CN105749586A - 苯硼酸亲和整体柱的制备方法 - Google Patents

苯硼酸亲和整体柱的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105749586A
CN105749586A CN201510412585.2A CN201510412585A CN105749586A CN 105749586 A CN105749586 A CN 105749586A CN 201510412585 A CN201510412585 A CN 201510412585A CN 105749586 A CN105749586 A CN 105749586A
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
phenylboric acid
integral material
solvent
acid functionalization
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510412585.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105749586B (zh
Inventor
赵艳艳
张丽媛
董佩佩
彭金咏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Medical University
Original Assignee
Dalian Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Medical University filed Critical Dalian Medical University
Priority to CN201510412585.2A priority Critical patent/CN105749586B/zh
Publication of CN105749586A publication Critical patent/CN105749586A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105749586B publication Critical patent/CN105749586B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

本发明属于分析化学领域，更具体地涉及一种苯硼酸亲和整体柱的制备方法。具体步骤如下：(1)将功能单体4-(3-烯丁基砜)苯硼酸(SPBA)与交联剂溶于溶剂中，涡旋、超声混合均匀；(2)经涡旋、超声混合均匀后，加入适量引发剂，再次涡旋、超声混合均匀，将该均匀溶液灌注到离心管、毛细管柱或高效液相色谱常规柱中，将模具密封，在50℃～90℃的温度下，恒温反应6-36小时，反应结束后，将产物采用甲醇索氏提取的方法提取，或将毛细管柱或高效液相色谱柱接入到注射泵或高效液相色谱体系中，用甲醇等有机溶剂冲洗整体材料，即得本发明的亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料。

Description

苯硼酸亲和整体柱的制备方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体地涉及一种苯硼酸亲和整体柱的制备方法。
背景技术
众所周知，蛋白质的组成在生物体内是极其复杂并且不断变化，即使在相同物种的不同细胞或是相同细胞的不同时期，蛋白质的组成都存在显著差异，因此，蛋白质组学逐渐成为大家关注的焦点。在蛋白质组学中，糖蛋白作为一类重要的翻译后修饰蛋白，在信号转导、免疫及肿瘤发生等生物学过程中发挥着重要的作用。因此，糖蛋白和糖肽的发现与鉴定在疾病的诊断和蛋白质组学领域意义重大。目前，用于N连接糖肽富集的主要方法有凝集素、酰肼、亲水作用色谱、硼酸亲和色谱等。对于具有1,2-顺式二醇化学结构的糖型，苯硼酸可以与其形成可逆的五元或者六元环的酯。此方法步骤简便快捷，避免了糖链结构的破坏，且富集产物与质谱兼容，对于研究糖蛋白糖基化位点信息及糖型结构归属较为方便。因此，苯硼酸在糖肽和糖蛋白的选择性富集领域受到了人们的关注。
然而，生物样品的复杂性和多样性对现有分离技术提出了严峻的挑战。仅就色谱技术在分离科学研究中的应用而言，人们已在微柱液相色谱、毛细管电色谱及其色谱固定相等方面做了大量的改进，其核心部件是毛细管色谱柱。传统的毛细管填充柱存在背压大、装填困难、需要制备柱塞等缺点，无法满足快速、高效、高通量、高选择性分离的要求。
整体柱作为继多聚糖、交联与涂渍、单分散之后的第四代分离介质，正是应对复杂样品体系的快速、高效、高通量分析需要而发展起来的一种新型多孔微分离介质(Iberer.G,Hahn.R,Jungbauer.A,LC-GC,1999,17:998)。与传统的填充柱相比，整体柱采用原位聚合，具有制备简单、易于改性、高容量、传质快、柱效高以及试剂耗量少等优点，特别适合于来源宝贵的微量生物样品，是当前微分离分析领域的研究热点(Sykora.D,Svec.F,Frechet.J.M,J.Chromatogr.A,1999,852:297)。毛细管整体柱按其基质不同可分为无机整体柱和有机聚合物整体柱。以硅胶为基质的无机整体柱具有快速、低压、机械强度好等优异特性，适合小分子物质的高效快速分离，但制备繁琐、需高温老化、抗溶剂性能差、适用的pH范围较小。而有机聚合整体柱制备方法简单、pH适用范围宽、单体及交联剂选择面广、能够实现对生物大分子的高效、快速、高通量分离等优点，但其溶胀效应会影响固定相的稳定性和机械性能。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，具体步骤如下：
(1)将功能单体4-(3-烯丁基砜)苯硼酸(SPBA)与交联剂溶于溶剂中，涡旋、超声混合均匀；
(2)经涡旋、超声混合均匀后，加入适量引发剂，再次涡旋、超声混合均匀，将该均匀溶液灌注到离心管、毛细管柱或高效液相色谱常规柱中，将模具密封，在50℃～90℃的温度下，恒温反应6-36小时，反应结束后，将产物采用甲醇索氏提取的方法提取，或将毛细管柱或高效液相色谱柱接入到注射泵或高效液相色谱体系中，用甲醇等有机溶剂冲洗整体材料，即得本发明的亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料。
在本发明的一个实施方案中，步骤1中所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)；溶剂为聚乙二醇200(PEG-200)与正丙醇的混合物。
在本发明的另一个实施方案中，所述PEG-200与正丙醇的重量比为10:0.1～0.3，优选为10:0.2。
在本发明的又一个实施方案中，SPBA、交联剂与溶剂的重量比为1：1～3：5～10，优选为1：1.5：6。
在本发明再一个实施方案中，步骤(2)中所述引发剂过氧化苯甲酰，SPBA与引发剂的重量比为12：1，反应温度优选为65℃，反应时间为12小时。
具体实施方式
下面将进一步的来举例说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
实施例1
(1)取大小适宜的离心管，将60mgSPBA与90mgEDMA溶于360mg的溶剂(PEG-200与正丙醇的重量比为10:0.2)中，5mg的过氧化苯甲酰，涡旋超声15分钟，密封，放入恒温水浴锅中于65℃反应12小时；
(2)然后将整体材料取出，切成小块，放入索氏提取器中，加入甲醇于110℃温度下，提取24小时，以除去未反应的单体，交联剂；
(3)将上述材料置于真空干燥箱中，在100℃下干燥12小时，即可得到亲水性苯硼酸功能化整体材料。
实施例2
(1)毛细管的预处理，首先用0.1MNaOH溶液冲洗毛细管空柱1小时，再用去离子水冲洗毛细管至流出液体pH值为7.0，接着用0.1MHCl溶液冲洗毛细管2小时，再用去离子水冲洗毛细管至流出液体pH为7.0，然后用甲醇溶液冲洗毛细管30分钟，并用氮气吹干。往毛细管中注入甲醇与甲基丙烯酰氧丙基-三甲氧基硅烷的混合物。在20℃至70℃的温度下反应5-24小时。再用甲醇冲洗，最后用氮气吹干待用。
(2)将60mgSPBA与90mgEDMA溶于360mg的溶剂(PEG-200与正丙醇的重量比为10:0.2)中，5mg的过氧化苯甲酰，涡旋超声15分钟，制得聚合液；
(3)将所配制的聚合液用氮气压入活化吹干后的毛细管中，氮气的压力控制在0.03-0.1Mpa；
(4)将毛细管两端用硅橡胶封口，然后放入50-90℃水浴中，恒温反应12个小时；
(5)取出毛细管，接在高压液相色谱泵上，以甲醇为流动相冲去未反应完全的聚合单体和制孔剂等，即可得到亲水性苯硼酸功能化多孔整体材料。
实施例3
以邻苯二酚和对苯二酚考察实施例2制备的整体柱的柱效。毛细管整体柱总长度为45cm，有效长度为40cm，出口端施加负电压。色谱条件为:进样体积600nl，分流比15:1；分流前流速0.09ml/min，用硫脲作为死时间标记物，检测系统为紫外检测器，波长设定为214nm。流动相，30mM磷酸盐缓冲溶液，15min切换为100mM醋酸；计算柱效。并且以甲醇为流动相以0.03ml/min检测无进样状态下的毛细管柱柱压
另外，本发明还设定了以下对比例，具体如下：
对比例1：溶剂中不添加正丙醇，其他同实施例2；
对比例2：溶剂中PEG-200与正丙醇的重量比为10:0.5，其他同实施例2；
对比例3：SPBA、交联剂与溶剂的重量比为1：3：6，其他同实施例2；
对比例4：SPBA、交联剂与溶剂的重量比为1：1：6，其他同实施例2；
对比例5：交联剂为PEGDA，其他同实施例2；
对比例6：交联剂为MBAA，其他同实施例2。
结果表明，实施例制备的整体柱对对苯二酚无保留，具体柱效及柱压详见下表：
实施例4
以邻苯二酚和OVA作为测试物，测定实施例2制备的整体柱的最大吸附量，采用前沿色谱法测定整体柱上的突破曲线，并以此计算整体柱的最大吸附量Q。
计算公式为：
Q＝(VD-Vblank)×C/m
式中，VD为溶质在柱上流出体积，Vblank为系统滞留体积，C为药物浓度，m为整体柱干重；色谱条件参见实施例3；pH条件为7.0。
具体结果见下表：
本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims (7)

1.一种亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，具体步骤如下：
(1)将功能单体4-(3-烯丁基砜)苯硼酸(SPBA)与交联剂溶于溶剂中，涡旋、超声混合均匀；
(2)经涡旋、超声混合均匀后，加入适量引发剂，再次涡旋、超声混合均匀，将该均匀溶液灌注到离心管、毛细管柱或高效液相色谱常规柱中，将模具密封，在50℃～90℃的温度下，恒温反应6-36小时，反应结束后，将产物采用甲醇索氏提取的方法提取，或将毛细管柱或高效液相色谱柱接入到注射泵或高效液相色谱体系中，用甲醇等有机溶剂冲洗整体材料，即得亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料。
2.根据权利要求1所述的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)。
3.根据权利要求1所述的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，其特征在于，步骤1中溶剂为聚乙二醇200(PEG-200)与正丙醇的混合物，PEG-200与正丙醇的重量比为10:0.1～0.3。
4.根据权利要求3所述的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，其特征在于，步骤1中溶剂为聚乙二醇200(PEG-200)与正丙醇的混合物，PEG-200与正丙醇的重量比为10:0.2。
5.根据权利要求1所述的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，其特征在于，步骤1中SPBA、交联剂与溶剂的重量比为1：1～3：5～10。
6.根据权利要求5所述的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，其特征在于，步骤1中SPBA、交联剂与溶剂的重量比为1：1.5：6。
7.根据权利要求1所述的苯硼酸功能化多孔整体材料的制备方法，其特征在于，步骤2中所述引发剂过氧化苯甲酰，SPBA与引发剂的重量比为12：1，反应温度优选为65℃，反应时间为12小时。
CN201510412585.2A 2015-07-14 2015-07-14 苯硼酸亲和整体柱的制备方法 Active CN105749586B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510412585.2A CN105749586B (zh) 2015-07-14 2015-07-14 苯硼酸亲和整体柱的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510412585.2A CN105749586B (zh) 2015-07-14 2015-07-14 苯硼酸亲和整体柱的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105749586A true CN105749586A (zh) 2016-07-13
CN105749586B CN105749586B (zh) 2018-06-12

Family

ID=56341764

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510412585.2A Active CN105749586B (zh) 2015-07-14 2015-07-14 苯硼酸亲和整体柱的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105749586B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102059103A (zh) * 2010-12-08 2011-05-18 南京大学 一种亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料及其制法和应用
CN102516458A (zh) * 2011-12-13 2012-06-27 南京大学 一种专一结合指定糖蛋白的分子印迹聚合物及其制法和应用
CN102558463A (zh) * 2012-01-04 2012-07-11 福州大学 一锅合成苯硼酸聚合磁性纳米复合材料及制备方法和应用
CN104610498A (zh) * 2015-02-12 2015-05-13 厦门大学 一种基于硼亲和作用多孔整体萃取介质的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102059103A (zh) * 2010-12-08 2011-05-18 南京大学 一种亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料及其制法和应用
CN102516458A (zh) * 2011-12-13 2012-06-27 南京大学 一种专一结合指定糖蛋白的分子印迹聚合物及其制法和应用
CN102558463A (zh) * 2012-01-04 2012-07-11 福州大学 一锅合成苯硼酸聚合磁性纳米复合材料及制备方法和应用
CN104610498A (zh) * 2015-02-12 2015-05-13 厦门大学 一种基于硼亲和作用多孔整体萃取介质的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105749586B (zh) 2018-06-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102225249B (zh) 一种有机-无机杂化毛细管整体柱的制备方法
Kłodzińska et al. Monolithic continuous beds as a new generation of stationary phase for chromatographic and electro-driven separations
Núñez et al. Preparation of high efficiency and highly retentive monolithic silica capillary columns for reversed-phase chromatography by chemical modification by polymerization of octadecyl methacrylate
CN102059103A (zh) 一种亲水性的苯硼酸功能化多孔整体材料及其制法和应用
CN104148030A (zh) 富含有机苯硼酸的聚乙烯亚胺修饰的二氧化硅微球及其制备方法和应用
CN104028007A (zh) 一种咪唑离子液体毛细管整体柱及其制备和应用
CN101768238A (zh) 一种桔青毒素分子印迹材料及其制备方法与应用
Wang et al. Preparation of an internal surface reversed-phase restricted-access material for the analysis of hydrophobic molecules in biological matrices
CN101816927A (zh) 温敏型蛋白质分子印迹整体柱及其制备方法和应用
CN104316628B (zh) 分子拥挤试剂和离子液体为致孔剂制备印迹整体柱的方法
CN102626609A (zh) 有机-无机杂化蛋白质分子印迹毛细管整体柱
CN106334343A (zh) 一种琼脂糖键合硅胶杂化整体柱的制备方法及其应用
CN105542076A (zh) 嗜硫多孔材料及其制备方法和应用
CN108187367B (zh) 巯基衍生化l-脯氨酸型有机-无机杂化整体柱及其制备方法
CN105749586B (zh) 苯硼酸亲和整体柱的制备方法
CN101851318B (zh) 安石榴甙分子印迹聚合物微球的制备方法
CN103990298B (zh) 一种外表面亲水性大孔有机-无机杂化整体柱的制备方法
CN102507820A (zh) 一种同时检测敌百虫和久效磷的方法
CN106000363B (zh) 一种苯硼酸亲水硅胶材料的制备方法
CN105879851B (zh) 氧化石墨烯型在线净化固相萃取整体柱及制备方法和用途
CN106008982B (zh) 一种硼酸硅胶前处理材料的制备方法
CN102921392B (zh) 磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法
CN103551134A (zh) 一种聚合物接枝硅胶色谱固定相的制备方法
CN102389645A (zh) 离子交换型固相萃取搅拌棒及其制备方法
CN106525990B (zh) 雷米普利分子印迹整体柱及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant