CN105726628A - 一种具有抗ev71病毒作用的复方浒苔多糖组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物及其制备方法。该药物组合物是以浒苔多糖为主要原料，与黄芩、薄荷和金银花复合提取物进行复配而成。浒苔多糖是通过将浒苔粉末热水浸提，乙醇沉淀及除蛋白后冷冻干燥获得；黄芩、薄荷和金银花复合提取物是通过将黄芩、金银花以及薄荷按2:2:1重量比混合，先经醇提制得醇提物；醇提得到的滤渣再经80~90℃水提制得水提物；最后将醇提物、水提物复合得到复合提取物。浒苔多糖与黄芩、薄荷和金银花复合提取物复配，产生协同增效作用，抗EV71病毒的功效显著增强。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域，具体为一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物及其制备方法。
背景技术
肠道病毒71型，简称为EV71，是引起手足口病的最主要的病原体之一，多发生于5岁以下幼儿，其中，1岁以下婴儿发病率最高。手足口病具有极高的传染性，目前关于治疗以及预防传染的方法较少。
申请号为CN201510340906.2的中国专利公开了一种海带/海带多糖提取物在制备抗EV71药物中的应用；申请号为CN201410108714.4的中国专利公开了一种马尾藻多糖在制备用于治疗或预防肠病毒71型感染的组合物中的用途；申请号为CN201310028254.X的中国专利公开了一种鱼腥草水提液及其制备方法和应用。现有技术中公开的这些提取物、多糖物质对研制抗EV71病毒药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。
然而如何提供一种高效抗EV71病毒的药物，仍然是一个急需解决的难题。
浒苔多糖具有抗病毒、抗菌、降血糖、降血脂等生物活性，还能增强免疫力和调节人体代谢过程。研究发现，浒苔多糖能实现抗EV71病毒的作用，而且安全无毒。
黄芩为唇形科多年生草本植物，以根入药，具有清热燥湿，泻火解毒功效，其所含的活性因子主要是黄酮类。薄荷为食药两用的多年生草本植物，具有疏散风热、清利头目、利咽、透疹、疏肝解郁之功效，其功效主要来源于所含有的挥发油和黄酮类物质。金银花是药食两用的草本植物，具有清热解毒、凉血化淤之功效，含有甾醇、芳香油等活性成分。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物及其制备方法。该药物组合物富含浒苔多糖，并且复配黄芩、金银花以及薄荷组合提取物，产生协同增效作用，能有效的抗EV71病毒，提高婴幼儿的自身免疫力。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，由以下重量份的组分组成：浒苔多糖45~65份，黄芩、金银花和薄荷的复合提取物20~25份；其中复合提取物中，原料黄芩、金银花以及薄荷的重量比为2:2:1。
所述的浒苔多糖的制备方法为：以浒苔为原料，经烘干、粉碎后，制得浒苔粉末；浒苔粉末经水提醇沉法制得提取物；提取物经纯净水复溶、除蛋白后，经旋转蒸发、冷冻干燥制得浒苔多糖。
所述的浒苔多糖的制备方法，具体步骤为：
（1）将浒苔清洗干净后，于55~65℃烘干，粉碎过20目筛，制得浒苔粉末，备用；
（2）取步骤（1）的浒苔粉末，加入纯净水，料液比为1g:30~40ml，80~90℃浸提3~5h，提取结束后，离心15~20min，取上清液备用；将离心的残渣重复提取2~3次，合并上清液；
（3）将步骤（2）的上清液在55~60℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/5~1/4；
（4）往步骤（3）浓缩的上清液中加入3~4倍体积的95%（v/v）乙醇，置于2~4℃条件下8~10h后，离心15~20min，所得沉淀物即为提取物；
（5）向步骤（4）所得提取物中加入纯净水，进行搅拌复溶，并除蛋白3~5次；所述的除蛋白的方法为：Sevag法、聚酰胺法、三氯乙酸法、酶解法中的一种或几种；
（6）将步骤（5）得到的浒苔多糖溶液在55~60℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/5~1/4，冷冻干燥，粉碎，过50~80目筛，得到浒苔多糖。
步骤（2）中、步骤（4）中所述的离心的转速均为3500~4500r/min。
步骤（5）中沉淀物与纯净水的比例为：1mg:2~5ml。
所述的复合提取物的制备方法为：将黄芩、金银花以及薄荷按2:2:1重量比混合，先经醇提制得醇提物；醇提得到的滤渣再经80~90℃水提制得水提物；最后将醇提物、水提物复合，即为复合提取物。
所述的复合提取物的制备方法，具体步骤为：
（1）将黄芩、金银花以及薄荷清洗干净后，分别于55~65℃烘干，粉碎过20目筛，制得粉末，备用；
（2）将黄芩、金银花和薄荷混匀，加入65%~80%（v/v）的乙醇溶液，料液比为1g:4~6ml，回流提取2~3h，过滤；滤渣重复提取2~3次，合并滤液，离心15~20min，取上清液，在50~65°C条件下减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥后粉碎过50~80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合醇提物；
（3）将步骤（2）醇提完成后得到的滤渣，加入蒸馏水，其中滤渣与蒸馏水的比例为1g:20ml，80~90℃水浴2~3h，用4~6层的纱布过滤，挤压滤干，用80~90℃蒸馏水洗脱滤渣2~3次，得到的上清液，离心15~20min，抽滤，于55~60℃进行旋转蒸发，浓缩至浸膏，冷冻干燥，粉碎，过50~80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合水提物；
（4）将步骤（2）的复合醇提物和步骤（3）的复合水提物混合，制得复合提取物。
步骤（2）、步骤（3）中所述的离心转速为：2500~4000r/min条件下。
本发明的有益效果在于：
1）浒苔多糖与中药黄芩、薄荷和金银花提取物复配的复合物，产生协同增效作用，经药效学实验，具有很强的抗肠道病毒71型的效果，防治效果好，可提高婴幼儿的自身免疫力；
2）工艺操作简便，成本价格低，安全可靠，适合工业规模化生产。
附图说明
图1为复方浒苔多糖药物体外抗肠道病毒71型试验效果图。
具体实施方式
本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
实施例1
一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，由以下重量份的组分组成：浒苔多糖45份，黄芩、金银花和薄荷的复合提取物25份；其中复合提取物中，原料黄芩、金银花以及薄荷的重量比为2:2:1。
所述的浒苔多糖的制备方法，具体步骤为：
（1）将浒苔清洗干净后，于60℃烘干，粉碎过20目筛，制得浒苔粉末，备用；
（2）取步骤（1）的浒苔粉末，加入纯净水，料液比为1g:35ml，85℃浸提4h，提取结束后，离心17min，取上清液备用；将离心的残渣重复提取3次，合并上清液；
（3）将步骤（2）的上清液在27℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/5；
（4）往步骤（3）浓缩的上清液中加入3倍体积的95%（v/v）乙醇，置于3℃条件下9h后，离心17min，所得沉淀物即为提取物；
（5）向步骤（4）所得提取物中加入纯净水，进行搅拌复溶，并除蛋白4次；所述的除蛋白的方法为：Sevag法；
（6）将步骤（5）得到的浒苔多糖溶液在57℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/4，冷冻干燥，粉碎，过80目筛，得到浒苔多糖。
步骤（2）中、步骤（4）中所述的离心的转速均为4000r/min。
步骤（5）中沉淀物与纯净水的比例为：1mg:4ml。
所述的复合提取物的制备方法，具体步骤为：
（1）将黄芩、金银花以及薄荷清洗干净后，分别于60℃烘干，粉碎过20目筛，制得粉末，备用；
（2）将黄芩、金银花和薄荷混匀，加入70%（v/v）的乙醇溶液，料液比为1g:5ml，回流提取2.5h，过滤；滤渣重复提取2次，合并滤液，离心17min，取上清液，在60°C条件下减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥后粉碎过80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合醇提物；
（3）将步骤（2）醇提完成后得到的滤渣，加入蒸馏水，其中滤渣与蒸馏水的比例为1g:20ml，85℃水浴2h，用5层的纱布过滤，挤压滤干，用80~90℃蒸馏水洗脱滤渣2次，得到的上清液，离心18min，抽滤，于57℃进行旋转蒸发，浓缩至浸膏，冷冻干燥，粉碎，过80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合水提物；
（4）将步骤（2）的复合醇提物和步骤（3）的复合水提物混合，制得复合提取物。
步骤（2）、步骤（3）中所述的离心转速为：3000r/min条件下。
实施例2
一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，由以下重量份的组分组成：浒苔多糖65份，黄芩、金银花和薄荷的复合提取物20份；其中复合提取物中，原料黄芩、金银花以及薄荷的重量比为2:2:1。
所述的浒苔多糖的制备方法，具体步骤为：
（1）将浒苔清洗干净后，于55℃烘干，粉碎过20目筛，制得浒苔粉末，备用；
（2）取步骤（1）的浒苔粉末，加入纯净水，料液比为1g:30ml，80℃浸提5h，提取结束后，离心15min，取上清液备用；将离心的残渣重复提取3次，合并上清液；
（3）将步骤（2）的上清液在55℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/4；
（4）往步骤（3）浓缩的上清液中加入4倍体积的95%（v/v）乙醇，置于4℃条件下8h后，离心20min，所得沉淀物即为提取物；
（5）向步骤（4）所得提取物中加入纯净水，进行搅拌复溶，并除蛋白3次；所述的除蛋白的方法为聚酰胺法；
（6）将步骤（5）得到的浒苔多糖溶液在55℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/4，冷冻干燥，粉碎，过80目筛，得到浒苔多糖。
步骤（2）中、步骤（4）中所述的离心的转速均为3500r/min。
步骤（5）中沉淀物与纯净水的比例为：1mg:5ml。
所述的复合提取物的制备方法，具体步骤为：
（1）将黄芩、金银花以及薄荷清洗干净后，分别于55℃烘干，粉碎过20目筛，制得粉末，备用；
（2）将黄芩、金银花和薄荷混匀，加入80%（v/v）的乙醇溶液，料液比为1g:6ml，回流提取3h，过滤；滤渣重复提取3次，合并滤液，离心20min，取上清液，在65°C条件下减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥后粉碎过80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合醇提物；
（3）将步骤（2）醇提完成后得到的滤渣，加入蒸馏水，其中滤渣与蒸馏水的比例为1g:20ml，90℃水浴2h，用4层的纱布过滤，挤压滤干，用90℃蒸馏水洗脱滤渣2次，得到的上清液，离心20min，抽滤，于55℃进行旋转蒸发，浓缩至浸膏，冷冻干燥，粉碎，过80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合水提物；
（4）将步骤（2）的复合醇提物和步骤（3）的复合水提物混合，制得复合提取物。
步骤（2）、步骤（3）中所述的离心转速为：4000r/min条件下。
实施例3
一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，由以下重量份的组分组成：浒苔多糖50份，黄芩、金银花和薄荷的复合提取物23份；其中复合提取物中，原料黄芩、金银花以及薄荷的重量比为2:2:1。
所述的浒苔多糖的制备方法，具体步骤为：
（1）将浒苔清洗干净后，于65℃烘干，粉碎过20目筛，制得浒苔粉末，备用；
（2）取步骤1）的浒苔粉末，加入纯净水，料液比为1g:40ml，80℃浸提3h，提取结束后，离心20min，取上清液备用；将离心的残渣重复提取3次，合并上清液；
（3）将步骤（2）的上清液在60℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/4；
（4）往步骤（3）浓缩的上清液中加入3倍体积的95%（v/v）乙醇，置于2℃条件下10h后，离心15min，所得沉淀物即为提取物；
（5）向步骤（4）所得提取物中加入纯净水，进行搅拌复溶，并除蛋白4次；所述的除蛋白的方法为三氯乙酸法；
（6）将步骤（5）得到的浒苔多糖溶液在57℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/4，冷冻干燥，粉碎，过80目筛，得到浒苔多糖。
步骤（2）中、步骤（4）中所述的离心的转速均为4000r/min。
步骤（5）中沉淀物与纯净水的比例为：1mg:2ml。
所述的复合提取物的制备方法，具体步骤为：
（1）将黄芩、金银花以及薄荷清洗干净后，分别于60℃烘干，粉碎过20目筛，制得粉末，备用；
（2）将黄芩、金银花和薄荷混匀，加入70%（v/v）的乙醇溶液，料液比为1g:5ml，回流提取3h，过滤；滤渣重复提取3次，合并滤液，离心20min，取上清液，在65°C条件下减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥后粉碎过80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合醇提物；
（3）将步骤（2）醇提完成后得到的滤渣，加入蒸馏水，其中滤渣与蒸馏水的比例为1g:20ml，90℃水浴2~3h，用6层的纱布过滤，挤压滤干，用90℃蒸馏水洗脱滤渣2次，得到的上清液，离心15min，抽滤，于55℃进行旋转蒸发，浓缩至浸膏，冷冻干燥，粉碎，过80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合水提物；
（4）将步骤（2）的复合醇提物和步骤（3）的复合水提物混合，制得复合提取物。
步骤（2）、步骤（3）中所述的离心转速为：3000r/min条件下。
应用实验例1
复方浒苔多糖组合物体外抗EV71病毒试验
将非洲绿猴肾（Vero）细胞铺于12孔板中，放于37°C孵箱内培养，待单层细胞铺满12孔板中每孔的80%~90%时，每孔内先用100μL的10mg/mL浓度的浒苔多糖、复方浒苔多糖组合物预处理细胞2h，将完全DMEM培养基倒掉，再加入EV71病毒（moi=0.5）的病毒液用正常方法感染Vero细胞，分别设置正常组、病毒对照组、浒苔多糖组及复方浒苔多糖组合物组，9h后观察药物对抑制EV71病毒诱导的细胞病变效应的效果。经试验结果发现，浒苔多糖组、复方浒苔多糖组合物组与病毒对照组相比，细胞病变明显减少，并且复方组合物抗病毒效果优于浒苔多糖处理组，说明复方浒苔多糖药物能有效抑制EV71病毒诱导的细胞病变效应。
Claims (8)
1.一种具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：由以下重量份的组分组成：浒苔多糖45~65份，黄芩、金银花和薄荷的复合提取物20~25份；其中复合提取物中，原料黄芩、金银花以及薄荷的重量比为2:2:1。
2.根据权利要求1所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：所述的浒苔多糖的制备方法为：以浒苔为原料，经烘干、粉碎后，制得浒苔粉末；浒苔粉末经水提醇沉法制得提取物；提取物经纯净水复溶、除蛋白后，经旋转蒸发、冷冻干燥制得浒苔多糖。
3.根据权利要求2所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：所述的浒苔多糖的制备方法，具体步骤为：
（1）将浒苔清洗干净后，于55~65℃烘干，粉碎过20目筛，制得浒苔粉末，备用；
（2）取步骤（1）的浒苔粉末，加入纯净水，料液比为1g:30~40ml，80~90℃浸提3~5h，提取结束后，离心15~20min，取上清液备用；将离心的残渣重复提取2~3次，合并上清液；
（3）将步骤（2）的上清液在55~60℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/5~1/4；
（4）往步骤（3）浓缩的上清液中加入3~4倍体积的95%（v/v）乙醇，置于2~4℃条件下8~10h后，离心15~20min，所得沉淀物即为提取物；
（5）向步骤（4）所得提取物中加入纯净水，进行搅拌复溶，并除蛋白3~5次；
（6）将步骤（5）得到的浒苔多糖溶液在55~60℃进行旋转蒸发，将上清液浓缩为原体积的1/5~1/4，冷冻干燥，粉碎，过50~80目筛，得到浒苔多糖。
4.根据权利要求3所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：步骤（2）中、步骤（4）中所述的离心的转速均为3500~4500r/min。
5.根据权利要求3所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：步骤（5）中提取物与纯净水的比例为：1mg:2~5ml。
6.根据权利要求1所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：所述的复合提取物的制备方法为：将黄芩、金银花以及薄荷按2:2:1重量比混合，先经醇提制得醇提物；醇提得到的滤渣再经80~90℃水提制得水提物；最后将醇提物、水提物复合，即为复合提取物。
7.根据权利要求6所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：所述的复合提取物的制备方法，具体步骤为：
（1）将黄芩、金银花以及薄荷清洗干净后，分别于55~65℃烘干，粉碎过20目筛，制得粉末，备用；
（2）将黄芩、金银花和薄荷混匀，加入65%~80%（v/v）的乙醇溶液，料液比为1g:4~6ml，回流提取2~3h，过滤；滤渣重复提取2~3次，合并滤液，离心15~20min，取上清液，在50~65°C条件下减压浓缩至浸膏状，冷冻干燥后粉碎过50~80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合醇提物；
（3）将步骤（2）醇提完成后得到的滤渣，加入蒸馏水，其中滤渣与蒸馏水的比例为1g:20ml，80~90℃水浴2~3h，用4~6层的纱布过滤，挤压滤干，用80~90℃蒸馏水洗脱滤渣2~3次，得到的上清液，离心15~20min，抽滤，于55~60℃进行旋转蒸发，浓缩至浸膏，冷冻干燥，粉碎，过50~80目筛，得到黄芩、金银花和薄荷的复合水提物；
（4）将步骤（2）的复合醇提物和步骤（3）的复合水提物混合，制得复合提取物。
8.根据权利要求7所述的具有抗EV71病毒作用的复方浒苔多糖组合物，其特征在于：步骤（2）、步骤（3）中所述的离心转速为：2500~4000r/min条件下。
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