CN105713089A - 一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体 - Google Patents

一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN105713089A
CN105713089A CN201610108163.0A CN201610108163A CN105713089A CN 105713089 A CN105713089 A CN 105713089A CN 201610108163 A CN201610108163 A CN 201610108163A CN 105713089 A CN105713089 A CN 105713089A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
ion channels
sensing ion
type
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610108163.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105713089B (zh
Inventor
曲志虎
杨光
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Shanghai for Science and Technology
Original Assignee
University of Shanghai for Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Shanghai for Science and Technology filed Critical University of Shanghai for Science and Technology
Priority to CN201610108163.0A priority Critical patent/CN105713089B/zh
Publication of CN105713089A publication Critical patent/CN105713089A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105713089B publication Critical patent/CN105713089B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了一种特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scFv?Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，Fc指的是恒定区。本发明所述抗体为通过筛选全人单链抗体噬菌体库得到，全人单链抗体库不含有鼠源或其他异源蛋白成分，有利于将获得的单链抗体改造成为全人源IgG抗体，使用抗原为ASICl通道蛋白。所述抗体能够特异性地识别细胞表面的人ASICl通道，并且对通道活性具有抑制作用。

Description

一种特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，涉及一种抗酸敏感离子通道I型(ASIC1)的单克隆抗体及其制备方法。具体而言本发明公开了一种能够特异识别酸敏感离子通道I型，并能抑制该离子通道活性的单克隆抗体。该抗体通过筛选全人单链抗体噬菌体展示库得到，具有特异的核苷酸和氨基酸序列。所述单克隆抗体可用于治疗疼痛，神经退行性疾病和精神疾病等ASIC1通道相关疾病。
背景技术
酸敏感离子通道(Acid sensing ion channels，ASICs)是质子门控型离子通道，在中枢和外周神经系统中广泛表达[1]。ASICs在学习记忆和感觉接收中起到重要作用[2]。在炎症，中风等伴随有局部组织酸中毒的病理情况下，神经元上的ASICs会被激活[3，4]。ASICs也和一些精神疾病相关。人ASIC家族中有四种亚基ASIC1，ASIC2，ASIC3和ASIC4，它们组成同/异多聚体发挥离子通道的功能[5]。研究人员提出阻断ASIC1通道作为策略，来治疗疼痛、神经退行性疾病和精神疾病等。因此，研发抗体作为ASIC1抑制剂，能够为以上疾病的治疗提供新手段。
参考文献：
1.Krishtal，O.，The ASICs：Signaling molecules？Modulators？Trends in Neurosciences，2003.26(9)：p.477-483.
2.Lingueglia，E.，Acid-sensing ion channels in sensory perception.Journal of Biological Chemistry，2007.282(24)：p.17325-17329.
3.Wemmie，J.A.，M.P.Price，and M.J.Welsh，Acid-sensing ion channels：advances，questionsand therapeutic opportunities.Trends in Neurosciences，2006.29(10)：p.578-586.
4.Xiong，Z.G.，et al.，Neuroprotection in ischemia：Blocking calcium-permeable acid-sensing ionchannels.Cell，2004.118(6)：p.687-698.
5.Deval，E.，et al.，Acid-Sensing lon Channels(ASICs)：Pharmacology and implication in pain.Pharmacology&Therapeutics，2010.128(3)：p.549-558.
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗酸敏感离子通道ASIC1的单克隆抗体，从而可以用于制备治疗ASIC1通道相关的疾病药物或者ASIC1相关诊断试剂盒。
为了达到上述目的，本发明提供了一种特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scFv-Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，Fc指的是恒定区。
优选地，所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体的序列为SEQ IDNO：4。
优选地，所述的恒定区包括CH2恒定区和CH3恒定区。
优选地，所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体特异识别ASIC1抗原的胞外区部分的70～427氨基酸之间。
本发明还提供了一种基因工程抗体，其特征在于，其与上述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体的单链抗体具有30％以上的同源序列。
优选地，所述的基因工程抗体包含Fab片段，F(ab)‘片段，Fd片段，Fv片段和Fc片段中的一种，上述各片段中两种以上的组合，或上述各片段中的至少一种与其它蛋白或肽链形成的衍生物。
优选地，所述的基因工程抗体的重链CDR 3区序列为DSFYGYSKGD，轻链CDR3区序列为SSYTSSSTYV。
本发明还提供了一种编码特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体的核苷酸序列，其序列为SEQ ID NO：1。
优选地，所述的核苷酸序列编码上述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体。
本发明还提供了上述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体或基因工程抗体在制备用于治疗与ASIC1相关的疼痛、神经退行性疾病和精神疾病的药物或试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种用于治疗疼痛、神经退行性疾病和精神疾病的药物，其包含上述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体或基因工程抗体作为活性成份。
本发明提供的单克隆抗体是一种单链抗体，通过筛选全人单链抗体噬菌体库得到，命名为Anti-ASIC1-scFv，经过检测该单链抗体对ASIC1选择性结合，并可特异性抑制酸敏感离子通道I型的活性。与目前临床应用常见IgG类抗体不同，Anti-ASIC1-scFv为重组单链抗体，因此具有不同于IgG的抗体结构、生化特性和生物学功能。本发明的实验证明，Anti-ASIC1-scFv单链抗体分子量大约100Kd，识别、结合靶抗原表位为ASIC1胞外区结构，特异识别过表达ASIC1蛋白的细胞系，且抗体与ASIC1在细胞表面共定位。功能实验显示Anti-ASIC1-scFv能够抑制ASIC1离子通道的活性。单独使用该抗体的免疫组化染色即可较为准确地诊断各种组织中人源ASIC1蛋白的表达情况。综上Anti-ASIC1-scFv单链抗体在疼痛，神经退行性疾病和精神疾病等的治疗方面和ASIC1诊断试剂方面有潜在的应用价值。
本发明所述抗体为通过筛选全人单链抗体噬菌体库得到，全人单链抗体库不含有鼠源或其他异源蛋白成分，有利于将获得的单链抗体改造成为全人源IgG抗体，使用抗原为ASIC1通道蛋白。所述抗体能够特异性地识别细胞表面的人ASIC1通道，并且对通道活性具有抑制作用。
附图说明
图1.ASIC1磷脂纳米盘噬菌体库筛选结果图；
图2.ASIC1抗体ELISA结果图；
图3.ASIC1抗体免疫荧光结果图；
图4.ASIC1抗体膜片钳实验结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1、单链抗体库筛选
1、所用材料：
(1)抗原生物素化试剂盒(购自赛默飞公司，货号21955)。(2)Nanodrop(赛默飞公司，型号Nano200)。(3)链霉亲和素化的磁珠购自赛默飞公司。(4)高吸附酶联免疫反应微孔板购自康宁公司。(5)Anti-M13 HRP抗体购自赛默飞公司。(6)辅助噬菌体购自Life Technologies，货号18311019。(7)XL1-Blue细菌购自Agilent Technologies，货号200228。(8)显影液ABTS溶液购自赛默飞公司，货号002024。
2、实验方法：
1)对ASIC1磷脂纳米盘(以下简称抗原，由上海维亚生物科技有限公司提供)和空载的磷脂纳米盘(以下简称空载抗原，由上海维亚生物科技有限公司提供)进行生物素标记。具体为将200ug抗原或空载抗原与1ul的生物素化试剂(生物素化试剂盒提供)混合，室温震荡30分，加入离心柱过柱(离心柱由生物素化试剂盒提供)，1000g离心收集流出液，用Nanodrop测定蛋白浓度为0.5微克/微升。
2)表达全人单链抗体的噬菌体展示库200微升(实验室自有，含有噬菌体粒1×1012个)与5微克空载抗原混合后室温孵育30分钟，再加入50微升的链霉亲和素化的磁珠。与空载抗原结合的噬菌体被链霉亲和素化的磁珠捕获，未结合的噬菌体保留在上清。再将上清与5微克抗原混合后室温孵育30分钟，再加入50微升的链霉亲和素化的磁珠。与抗原结合的噬菌体被链霉亲和素化的磁珠捕获，未结合的噬菌体经PBST漂洗后去除。用盐酸甘氨酸(pH 2.2)溶液将与磁珠稳定结合的噬菌体洗脱待用。接种XL1-Blue细菌(Agilent Technologies，货号200228)200毫升，待OD达到0.6后，加入上述洗脱的噬菌体与XL1-Blue细菌37℃静置30分钟，后在30摄氏度条件下过夜扩增，离心收集细菌后，加入30微升辅助噬菌体(含有辅助噬菌体粒1×1011个)扩增后进行下一轮淘选。重复上述筛选步骤3轮，将侵染噬菌体的XL1-Blue菌液经过充分稀释后涂10cm平板，每个板上有100-500个克隆，挑取单克隆，通过噬菌体酶联免疫反应对淘选后的各轮噬菌体库进行验证。
3)噬菌体酶联免疫反应步骤为，将侵染噬菌体的XL1-Blue单克隆菌接种进200微升的96孔板中，200rpm 37℃摇4-6小时，检测OD接近0.6后，加入1微升的辅助噬菌体，继续30℃摇过夜。第二天3000g离心取上清待用。取96低透平底微孔板，包被抗原过夜，同时设定对照板，对照板包被空载抗原、非相关抗原(AcroBiosystems公司，货号CD0-H82F2)。第二天加入上一步制备好的噬菌体上清，室温孵育2小时，再加入Anti-M13 HRP抗体孵育30分钟，后用PBST洗3次，加入50微升显影液ABTS。
结果：
由抗原的噬菌体酶联免疫反应结果可以看出随着淘选的进行，抗原组酶联免疫反应的信号不断升高，而空载抗原组和非相关对照组的信号仍然比较低，在第四轮淘选后，抗原的信号强度是对照抗原的多倍，说明经过4轮淘选，能够表达与抗原特异性结合抗体的噬菌体不断的被富集(如图1所示)。从淘选后的第四轮库中挑取单克隆，最后确定酶联免疫反应读值是对照两倍以上的克隆作为阳性克隆，阳性克隆测序分析，经过比对分析，确定6个不同的抗体序列有富集。如图2所示，其中得到的Ab6序列为本专利申请保护的抗体DNA序列(SEQ ID NO：1)。
实施例2、单链抗体蛋白表达纯化
1、所用材料：
(1)Sypro Orange染料购自赛默飞公司。(2)pFUSE表达载体pFUSE-hIGg1-FC2购自Invivogen公司，货号pfuse-hg1fc2。(3)HiTrapProtein AHP columns购自GE公司。(4)蛋白纯化仪购自GE公司。(5)实时定量PCR仪购自BioRad公司。(6)质粒抽提试剂盒购自Qiagen公司。(7)BCA蛋白定量试剂盒(PierceTM BCA Protein Assay kit，Pierce#23253)。(8)BamH1和BglII限制性内切酶购自NEB公司。
2、实验方法：
将实施例1得到的阳性序列(即SEQ ID NO：1)由全基因合成(南京金斯瑞生物公司)并在序列两端加入BamH1和BglII酶切位点，将得到的核酸序列经过参照NEB说明书在BamH1和BglII酶切后插入pFUSE-hIGg1-FC2表达载体(Invivogen公司，操作步骤请参照说明书)，将获得具有Fc段的单链抗体Anti-ASIC1-Fc的真核抗体表达质粒。利用293Fectin转染试剂(Invitrogen公司，货号12347500)与上述获得的真核抗体表达载体质粒按照体积质量比30微升：15微克的比例混合后加入30毫升的293Freestyle悬浮细胞(购自赛默飞公司)后，37℃1200rpm摇过夜，离心后收集上清，采用HiTrap Protein A HP columns在蛋白纯化仪上进行抗体蛋白纯化(Anti-ASIC1-Fc)，最后用BCA法蛋白定量试剂盒(Pierce，货号23252)参照说明书检测抗体浓度。
3、实验结果：
将实施例1得到的抗体的核酸序列(SEQ ID NO：1)经过酶切插入pFUSE-hIGg1-FC2表达载体，得到含有Fc段的Anti-ASIC1-Fc序列(SEQ ID NO：4)，其能够编码特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人单链抗体(Anti-ASIC1-Fc)，即所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，为重组免疫球蛋白，结构为scFv-Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链CDRL3区序列为SSYTSSSTYV，重链CDRH3区序列为DSFYGYSKGD，Fc指的是恒定区，所述的恒定区包括CH2恒定区和CH3恒定区，所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体的全序列为SEQID NO：4。
实施例3、酶联免疫反应检测单链抗体与ASIC1的结合
1、所用材料：
(1)CBS抗原固定溶液购自赛默飞公司。(2)Anti-Human Fc HRP二抗购自赛默飞公司。(3)显影底物ABST溶液购自Roche公司。(4)检测用96孔底透板购自康宁公司。
2、实验方法：
96孔底透板每孔加入50微升CBS抗原固定溶液稀释的抗原多肽，抗原每孔0.05微克，4℃过夜孵育，室温震荡孵育30分钟，PBS漂洗三次，含5％牛奶的PBST溶液，37℃条件下封闭60分钟。PBS漂洗三次，加入50微升(终浓度1微克/毫升)实施例2所得的Anti-ASIC1-Fc抗体，37℃条件下孵育60分钟。漂洗干燥后，加入Anti-Human Fc二抗，室温震荡孵育30分钟，PBS漂洗三次，最后加底物显色，酶标仪读值。
3、实验结果：
如图2所示，阴性对照孔酶联免疫反应读值OD值在0.2以下，而阳性孔OD值在0.4以上。根据结果Ab6抗体与抗原结合阳性。
实施例4、免疫荧光实验
1、所用材料：
(1)CHO-K1细胞株购自赛默飞公司。(2)IRES-DsRed报告基因质粒购买自Addgene公司。(3)荧光二抗Alexa Fluor 488 goat anti-human购自赛默飞公司。(4)DAPI细胞核染料购自赛默飞公司。(5)荧光共聚焦显微镜购自徕卡公司。
2、实验方法：
CHO-K1细胞用Lipofectin 3000试剂(赛默飞)参照说明书步骤转染质粒ASIC1-IRES-DsRed，该质粒可在细胞膜上表达人源ASIC1蛋白。培养48小时后，用2％甲醛固定细胞，室温条件下放置10分钟。漂洗后，加入含2％BSA的PBS溶液封闭细胞30分钟，1毫克/毫升实施例2获得的Anti-ASIC1-Fc抗体溶液用1％BSA/PBS以稀释比1∶500稀释后孵育细胞4～5小时，漂洗后，加入荧光AlexaFluor 488 goat anti-human二抗在溶液1％BSA/PBS中以1∶1000浓度稀释，室温条件下孵育60分钟后，加入DAPI(1微克/毫升)孵育5分钟，漂洗后，封片，激光共聚焦显微镜观察及拍照。
3、实验结果：
如图3所示，为ASIC1抗体免疫荧光结果图，结果显示抗体特异性识别ASIC1过表达细胞株。
实施例5、膜片钳技术检测抗体抑制ASIC1通道活性
1、所用材料：
(1)CHO-K1细胞株购自赛默飞公司(细胞培养方法请参照说明书)。(2)IRES-DsRed报告基因质粒购买自Addgene公司。(3)全自动膜片钳系统购自美国MDC公司。
2、实验步骤：
CHO-K1细胞用Lipofectin 3000试剂(赛默飞)参照说明书步骤转染质粒ASIC1-IRES-DsRed，该质粒可在细胞膜上表达人源ASIC1蛋白，将所得的转染ASIC1的CHO-K1细胞以104个每平方厘米的密度种在圆形玻片上，37度过夜培养。第二天用于全细胞膜片钳实验。胞内液(浓度为毫摩尔)为30mMNaCl，120mM KCl，0.5mM CaCl2，1mM MgCl2，5mM EGTA，2mM ATP，10mMHEPES(pH＝7.2)。胞外液(浓度为毫摩尔)为150mMNaCl，5mM KCl，2mMCaCl2，1mM MgCl2，10mM葡萄糖，10mM HEPES(pH＝7.4/6.0)。细胞在中性胞外液(pH＝7.4)中经过15分钟实施例2获得的Anti-ASIC1-Fc抗体孵育(抗体浓度200nM)后，切换到pH6.0酸性胞外液开始刺激，记录电流信号。
3、实验结果：
如图4所示，为抗体膜片钳实验结果图，结果显示200nM的抗体可以部分抑制ASIC1离子通道的活性。

Claims (10)

1.一种特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scFv-Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，Fc指的是恒定区。
2.如权利要求1所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，其特征在于，所述的恒定区包括CH2恒定区和CH3恒定区。
3.如权利要求1所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，其特征在于，其序列为SEQ ID NO：4。
4.如权利要求1所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体，其特征在于，所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体特异识别ASIC1抗原的胞外区部分的70～427氨基酸之间。
5.一种基因工程抗体，其特征在于，其与权利要求1-3中任一项所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体的单链抗体具有30％以上的同源序列。
6.如权利要求5所述的基因工程抗体，其特征在于，所述的基因工程抗体包含Fab片段，F(ab)‘片段，Fd片段，Fv片段和Fc片段中的一种，上述各片段中两种以上的组合，或上述各片段中的至少一种与其它蛋白或肽链形成的衍生物。
7.如权利要求5所述的基因工程抗体，其特征在于，所述的基因工程抗体的重链CDR 3区序列为DSFYGYSKGD，轻链CDR3区序列为SSYTSSSTYV。
8.一种编码特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体的核苷酸序列，其核酸序列为SEQ ID NO：1。
9.权利要求1-4中任一项所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体和权利要求4-6中任一项所述的基因工程抗体在制备用于治疗与ASIC1相关的疼痛、神经退行性疾病和精神疾病的药物或试剂盒中的应用。
10.一种用于治疗疼痛、神经退行性疾病和精神疾病的药物，其包含权利要求1-4中任一项所述的特异性抑制酸敏感离子通道I型的全人抗体和权利要求4-6中任一项所述的基因工程抗体作为活性成份。
CN201610108163.0A 2016-02-26 2016-02-26 一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体 Active CN105713089B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610108163.0A CN105713089B (zh) 2016-02-26 2016-02-26 一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610108163.0A CN105713089B (zh) 2016-02-26 2016-02-26 一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105713089A true CN105713089A (zh) 2016-06-29
CN105713089B CN105713089B (zh) 2019-08-06

Family

ID=56157192

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610108163.0A Active CN105713089B (zh) 2016-02-26 2016-02-26 一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105713089B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020243912A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Shanghaitech University AFFINITY-MATURATED ANTI-ASIC1a ANTIBODIES
WO2021012176A1 (en) * 2019-07-23 2021-01-28 Shanghaitech University Asic1 channel antagonist antibody
CN112469826A (zh) * 2018-04-27 2021-03-09 (株)爱恩德生物 通过磁珠附着至细胞进行的基于磁性的生物淘选方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104093738A (zh) * 2012-01-31 2014-10-08 瑞泽恩制药公司 抗asic1抗体及其使用
CN105073781A (zh) * 2013-01-11 2015-11-18 加州生物医学研究所 牛融合抗体

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104093738A (zh) * 2012-01-31 2014-10-08 瑞泽恩制药公司 抗asic1抗体及其使用
CN105073781A (zh) * 2013-01-11 2015-11-18 加州生物医学研究所 牛融合抗体

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112469826A (zh) * 2018-04-27 2021-03-09 (株)爱恩德生物 通过磁珠附着至细胞进行的基于磁性的生物淘选方法
CN112469826B (zh) * 2018-04-27 2024-02-09 (株)爱恩德生物 通过磁珠附着至细胞进行的基于磁性的生物淘选方法
EP3980456A4 (en) * 2019-06-04 2023-01-18 Shanghaitech University AFFINITY MATURED ANTI-ASIC1A ANTIBODIES
GB2598698A (en) * 2019-06-04 2022-03-09 Univ Shanghai Tech Affinity-maturated anti-ASICIa antibodies
CN114729034A (zh) * 2019-06-04 2022-07-08 上海科技大学 亲和力成熟的抗ASIC1a抗体
JP2022543182A (ja) * 2019-06-04 2022-10-11 シャンハイテック ユニバーシティ 親和性成熟抗ＡＳＩＣ１ａ抗体
WO2020243912A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Shanghaitech University AFFINITY-MATURATED ANTI-ASIC1a ANTIBODIES
CN114729034B (zh) * 2019-06-04 2024-01-12 上海科技大学 亲和力成熟的抗ASIC1a抗体
GB2600333A (en) * 2019-07-23 2022-04-27 Univ Shanghai Tech ASICI channel antagonist antibody
CN114867745A (zh) * 2019-07-23 2022-08-05 上海科技大学 Asic1通道拮抗剂抗体
JP2022547781A (ja) * 2019-07-23 2022-11-16 シャンハイテック ユニバーシティ Ａｓｉｃ１チャネルアンタゴニスト抗体
CN114867745B (zh) * 2019-07-23 2024-01-12 上海科技大学 Asic1通道拮抗剂抗体
WO2021012176A1 (en) * 2019-07-23 2021-01-28 Shanghaitech University Asic1 channel antagonist antibody

Also Published As

Publication number Publication date
CN105713089B (zh) 2019-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210095012A1 (en) Anti-semaphorin 3a antibody and treatment of alzheimer's disease and inflammatory immune diseases using same
JP6753946B2 (ja) 抗人ｐｄ−１人源化単クローン抗体及び応用
CN113264998B (zh) 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用
CN107847595A (zh) 特异性针对过度磷酸化τ蛋白的抗体及其使用方法
CN113150129B (zh) 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S2蛋白的单链抗体及其应用
CN104936984B (zh) 特异性结合人和小鼠l1cam的抗体及其用途
CN104105708A (zh) PDGF受体β结合多肽
CN108064168A (zh) 抗cd40l抗体和用于治疗cd40l相关疾病或病症的方法
US20210122818A1 (en) Humanized anti-bag3 antibodies
CN108712908A (zh) 自交联抗体
CN110573526B (zh) 蜂王浆主蛋白的抗体及其用途
JP2021517239A (ja) 神経変性を検出するためのアッセイ
CN107922499A (zh) 抗EphA4抗体
CN107531792A (zh) 用于表位选择的新方法
CN105713089A (zh) 一种特异性抑制酸敏感离子通道i型的全人抗体
KR20210031946A (ko) Ns1 단백질의 결합 단백질 및 응용
CN110494163A (zh) 凝血因子viii模拟蛋白及其用途
CN101062949B (zh) 重组抗人IgE单克隆抗体及其制备方法和用途
WO2020019222A2 (zh) 抗H7N9全人源单克隆抗体hIg311及其制法与应用
CN112094352B (zh) 一种抗IgM单克隆抗体
CN106687475A (zh) 用于预防和/或治疗亨廷顿氏病的物质和方法
CN105504062A (zh) 一种抗CD6单抗T1h的检测性抗体及应用
CN107074925A (zh) 用于预防和/或治疗亨廷顿氏病的物质和方法
CN110386973A (zh) 具有多种功能的蛋白多肽及其医药用途
JP2003130880A (ja) 異常型プリオン免疫測定用試薬及びキット並びにそれを用いた異常型プリオンの免疫測定方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant