CN105713074A - 一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法 - Google Patents

一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105713074A
CN105713074A CN201610168114.6A CN201610168114A CN105713074A CN 105713074 A CN105713074 A CN 105713074A CN 201610168114 A CN201610168114 A CN 201610168114A CN 105713074 A CN105713074 A CN 105713074A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polymyxin
sulfate
organic solvent
purification process
process according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610168114.6A
Other languages
English (en)
Inventor
常国栋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HEBEI SHENGXUE DACHENG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
HEBEI SHENGXUE DACHENG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HEBEI SHENGXUE DACHENG PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical HEBEI SHENGXUE DACHENG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN201610168114.6A priority Critical patent/CN105713074A/zh
Publication of CN105713074A publication Critical patent/CN105713074A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C07K7/60—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation occurring through the 4-amino group of 2,4-diamino-butanoic acid
    • C07K7/62—Polymyxins; Related peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，涉及医药技术领域。本发明包括以下步骤：(a)将硫酸多粘菌素E用水溶解，上样于凝胶介质；(b)待步骤(a)完成后用有机溶剂洗脱，分段收集、合并含硫酸多粘菌素E2和E1的洗脱液；(c)取步骤(b)中合并后的洗脱液，去除有机溶剂后用硫酸调节pH值；(d)待步骤(c)完成后喷雾干燥，即得硫酸多粘菌素E2组分和E1组分的纯化物。本发明中利用凝胶进行操作，由于其属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，对多粘菌素E2和E1组分不造成任何破坏，所以最大程度的保护了多粘菌素E2和E1组分，其纯化物含量可达90％。

Description

一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地涉及硫酸多粘菌素E组分纯化方法。
背景技术
多粘菌素E是一个由多种组份组成的多肽类抗生素，主要由E2和E1组成。在20世纪50年代，多粘菌素E就应用于临床，主要用于革兰氏阴性菌引起的感染，特别是由多重耐药绿脓杆菌、鲍氏不动杆菌等引起感染的治疗。
自上世纪80年代开始因高发的肾脏毒性和神经毒性，多粘菌素E的应用受到限制，并几乎被临床弃用。但是近年来，由于革兰氏阴性菌耐药株尤其是多耐药菌株感染病例的出现以及新药开发有限的情况下多粘菌素E再次引起了全球医疗界的重视。同样如何提高多粘菌素E的抗菌活性、降低其毒性从而扩大临床适用人群也成为了药学研究者所面临的技术难点。
众所周知多组份药物制剂的稳定性较难控制，特别是对于注射剂而言多组分药物的理化稳定性、渗透压、澄明度、酸碱度等方面因易受组分间相互作用，不容易形成稳定的药物制剂，并且由于储存、温度、光照等因素多组份药物制剂更容易出现变色、沉淀、分解等变化。此外，多组分药物的有效性和潜在的安全性也存在一定的缺陷。另外，多组份药物由于组份间的化学结构差异会导致它们在体内的药代动力学行为的差异，增加了药代动力学研究的难度，从而对设计安全的药物剂量以及合理的给药方式带来技术障碍。因此，发明一种纯化多粘菌素E的方法，获得E1和E2组分纯化物是非常必要的。
凝胶技术是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。凝胶介质是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，旨在根据多粘菌素E2和E1分子量的不同，利用凝胶技术得到硫酸多粘菌素E2组分和E1组分纯化物，纯化含量大于等于80％，甚至可以大于等于90％。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：
(a)将硫酸多粘菌素E用水溶解，上样于凝胶介质；
(b)待步骤(a)完成后用有机溶剂洗脱，分段收集、合并含硫酸多粘菌素E2和E1的洗脱液；
(c)取步骤(b)中合并后的洗脱液，去除有机溶剂后用硫酸调节pH值；
(d)待步骤(c)完成后喷雾干燥，即得硫酸多粘菌素E2组分和E1组分的纯化物。
进一步的技术方案在于，所述凝胶介质采用葡聚糖凝胶，型号为G-10、G-15、G-25中的一种或多种。
进一步的技术方案在于，所述凝胶介质的载样量为30g/L-60g/L。
进一步的技术方案在于，所述凝胶介质的载样量为优选为30g/L-40g/L。
进一步的技术方案在于，所述有机溶剂为甲醇、氯仿或乙腈，其浓度为20-45％。
进一步的技术方案在于，所述有机溶剂为甲醇溶液，其浓度为30-40％。
进一步的技术方案在于，所述步骤(b)的具体步骤为：待步骤(a)完成后用配置好的有机溶剂，以0.8～1.2BV/h的流速进行洗脱，当用0.25％的磷钨酸滴定有白色沉淀时开始收集，每1小时的出样收集为一组出样小组，直至用0.25％的磷钨酸滴定无白色沉淀；每组出样小组均进行液相检测，将含硫酸多粘菌素E2的组分含量以及含硫酸多粘菌素E1的组分含量均大于85％的出样小组进行合并。
进一步的技术方案在于，所述步骤(c)具体步骤为：取步骤(b)中合并后的洗脱液，采用真空薄膜蒸发法去除有机溶剂，其温度为40-60℃；然后用硫酸溶液调节pH值为3.4-4.4。
进一步的技术方案还在于，步骤(d)中喷雾干燥进风温度130-190℃，出风温度90-110℃。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明中利用凝胶进行操作，由于其属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，对多粘菌素E2和E1组分不造成任何破坏，所以最大程度的保护了多粘菌素E2和E1组分，其纯化物含量可达90％。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明实施例中的硫酸多粘菌素E2分析结果；
图2是本发明实施例中的硫酸多粘菌素E1分析结果。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
本发明包括以下步骤：
(a)将硫酸多粘菌素E用水溶解，上样于凝胶介质；
(b)待步骤(a)完成后用有机溶剂洗脱，分段收集、合并含硫酸多粘菌素E2和E1的洗脱液；
(c)取步骤(b)中合并后的洗脱液，去除有机溶剂后用硫酸调节pH值；
(d)待步骤(c)完成后喷雾干燥，即得硫酸多粘菌素E2组分和E1组分的纯化物。
优选的，所述凝胶介质采用葡聚糖凝胶，型号为G-10、G-15、G-25中的一种或多种。
优选的，所述凝胶介质的载样量为30g/L-60g/L。
优选的，所述凝胶介质的载样量为优选为30g/L-40g/L。
优选的，所述有机溶剂为甲醇、氯仿或乙腈，其浓度为20-45％。
优选的，所述有机溶剂为甲醇溶液，其浓度为30-40％。
优选的，所述步骤(b)的具体步骤为：待步骤(a)完成后用配置好的有机溶剂，以0.8～1.2BV/h的流速进行洗脱，当用0.25％的磷钨酸滴定有白色沉淀时开始收集，每1小时的出样收集为一组出样小组，直至用0.25％的磷钨酸滴定无白色沉淀；每组出样小组均进行液相检测，将含硫酸多粘菌素E2的组分含量以及含硫酸多粘菌素E1的组分含量均大于85％的出样小组进行合并。
优选的，所述步骤(c)具体步骤为：取步骤(b)中合并后的洗脱液，采用真空薄膜蒸发法去除有机溶剂，其温度为40-60℃；然后用硫酸溶液调节pH值为3.4-4.4。
优选的，步骤(d)中喷雾干燥进风温度130-190℃，出风温度90-110℃。
实施例1.
(a)称取适量硫酸多粘菌素E，加水溶解成100g/L浓度的溶液，按照30g/L的载样量上样于G-10凝胶介质；
(b)用35％甲醇溶液对其进行洗脱，流速0.8BV/h，当用0.25％的磷钨酸滴定有白色沉淀时开始收集，定时每30min收集一组出样小组，分别用分析型HPLC分析、色谱条件参见欧洲药典8.0中关于多粘菌素E的纯度测定，将硫酸多粘菌素E2纯度在90％以上且硫酸多粘菌素E1纯度在90％以上的洗脱液进行合并；
(c)将上步骤中合并的洗脱液用真空薄膜蒸发去除有机溶剂，温度50℃，再用硫酸调节pH值4.0；
(d)喷雾干燥，进风温度190℃，出风温度110℃。结果得到15g硫酸多粘菌素E2和8g硫酸多粘菌素E1，它们的HPLC分析图见图1和图2，含量均在90％以上。
实施例2.
(a)称取适量硫酸多粘菌素E，加水溶解成100g/L浓度的溶液，按照60g/L的载样量上样于G-25凝胶介质；
(b)用20％氯仿溶液洗脱，流速0.8BV/h，定时每30min收集一组出样小组，分别用分析型HPLC分析、色谱条件参见欧洲药典8.0中关于多粘菌素E的纯度测定，将硫酸多粘菌素E2纯度在90％以上且硫酸多粘菌素E1纯度在90％以上的洗脱液进行合并；
(c)将上步骤中合并的洗脱液用真空薄膜蒸发去除有机溶剂，温度40℃，再用硫酸调节pH值4.2；
(d)喷雾干燥，进风温度130℃，出风温度90℃。结果得到12g硫酸多粘菌素E2和5g硫酸多粘菌素E1，含量均在90％以上。
实施例3.
(a)称取适量硫酸多粘菌素E，加水溶解成100g/L浓度的溶液，按照40g/L的载样量上样于G-15凝胶介质；
(b)用45％乙腈溶液洗脱，流速0.8BV/h，定时每30min收集一组出样小组，分别用分析型HPLC分析、色谱条件参见欧洲药典8.0中关于多粘菌素E的纯度测定，将硫酸多粘菌素E2纯度在90％以上且硫酸多粘菌素E1纯度在90％以上的洗脱液进行合并；
(c)将上步骤中合并的洗脱液用真空薄膜蒸发去除有机溶剂，温度60℃，再用硫酸调节pH值3.8；
(d)喷雾干燥，进风温度180℃，出风温度90℃。结果得到18g硫酸多粘菌素E2和10g硫酸多粘菌素E1，含量均在90％以上。
实施例4.
(a)称取适量硫酸多粘菌素E，加水溶解成100g/L浓度的溶液，按照35g/L的载样量上样于G-10和G-25混合凝胶介质；
(b)用35％甲醇溶液洗脱，流速0.8BV/h，定时每30min收集一组出样小组，分别用分析型HPLC分析、色谱条件参见欧洲药典8.0中关于多粘菌素E的纯度测定，将硫酸多粘菌素E2纯度在90％以上且硫酸多粘菌素E1纯度在90％以上的洗脱液进行合并；
(c)将上步骤中合并的洗脱液用真空薄膜蒸发去除有机溶剂，温度50℃，再用硫酸调节pH值4.2；
(d)喷雾干燥，进风温度180℃，出风温度90℃。结果得到20g硫酸多粘菌素E2和9g硫酸多粘菌素E1，含量均在90％以上。
本发明中纯化物含量大于等于80％，甚至大于等于90％。本发明中凝胶技术工艺，操作条件比较温和，对多粘菌素E2和E1组分不造成任何破坏。

Claims (9)

1.一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：
(a)将硫酸多粘菌素E用水溶解，上样于凝胶介质；
(b)待步骤(a)完成后用有机溶剂洗脱，分段收集、合并含硫酸多粘菌素E2和E1的洗脱液；
(c)取步骤(b)中合并后的洗脱液，去除有机溶剂后用硫酸调节pH值；
(d)待步骤(c)完成后喷雾干燥，即得硫酸多粘菌素E2组分和E1组分的纯化物。
2.根据权利要求1所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述凝胶介质采用葡聚糖凝胶，型号为G-10、G-15、G-25中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述凝胶介质的载样量为30g/L-60g/L。
4.根据权利要求3所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述凝胶介质的载样量为优选为30g/L-40g/L。
5.根据权利要求1所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、氯仿或乙腈，其浓度为20-45％。
6.根据权利要求5所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇溶液，其浓度为30-40％。
7.根据权利要求1所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述步骤(b)的具体步骤为：待步骤(a)完成后用配置好的有机溶剂，以0.8～1.2BV/h的流速进行洗脱，当用0.25％的磷钨酸滴定有白色沉淀时开始收集，定时收集一组出样小组，直至用0.25％的磷钨酸滴定无白色沉淀；每组出样小组均进行液相检测，将含硫酸多粘菌素E2的组分含量以及含硫酸多粘菌素E1的组分含量均大于85％的出样小组进行合并。
8.根据权利要求1所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：所述步骤(c)具体步骤为：取步骤(b)中合并后的洗脱液，采用真空薄膜蒸发法去除有机溶剂，其温度为40-60℃；然后用硫酸溶液调节pH值为3.4-4.4。
9.根据权利要求1所述的一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，其特征在于：步骤(d)中喷雾干燥的进风温度130-190℃，出风温度90-110℃。
CN201610168114.6A 2016-03-23 2016-03-23 一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法 Pending CN105713074A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610168114.6A CN105713074A (zh) 2016-03-23 2016-03-23 一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610168114.6A CN105713074A (zh) 2016-03-23 2016-03-23 一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105713074A true CN105713074A (zh) 2016-06-29

Family

ID=56157894

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610168114.6A Pending CN105713074A (zh) 2016-03-23 2016-03-23 一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105713074A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111100823A (zh) * 2020-01-17 2020-05-05 黄石曼菲特生物科技有限公司 一种硫酸多黏菌素b生产菌株、硫酸多粘菌素b的制备方法及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55124746A (en) * 1979-03-19 1980-09-26 Kayaku:Kk Colistin salt cyclodextrin complex and preparation thereof
US20090081733A1 (en) * 2007-07-20 2009-03-26 Joy Doran-Peterson Methods for producing and using polymyxins
CN102190711A (zh) * 2010-01-22 2011-09-21 上海医药工业研究院 多黏菌素e组合物及其制备方法和用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55124746A (en) * 1979-03-19 1980-09-26 Kayaku:Kk Colistin salt cyclodextrin complex and preparation thereof
US20090081733A1 (en) * 2007-07-20 2009-03-26 Joy Doran-Peterson Methods for producing and using polymyxins
CN102190711A (zh) * 2010-01-22 2011-09-21 上海医药工业研究院 多黏菌素e组合物及其制备方法和用途
CN102190712A (zh) * 2010-01-22 2011-09-21 上海医药工业研究院 多黏菌素e1组合物及其制备方法和用途
CN102190710A (zh) * 2010-01-22 2011-09-21 上海医药工业研究院 多黏菌素e2组合物及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴梧桐: "《生物制药工艺学》", 31 August 2015, 中国医药科技出版社 *
陈海英 等: "Paenibacillus polymyxa CP7 菌抗革兰氏阴性菌活性组分的分离和结构分析", 《中国农业科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111100823A (zh) * 2020-01-17 2020-05-05 黄石曼菲特生物科技有限公司 一种硫酸多黏菌素b生产菌株、硫酸多粘菌素b的制备方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ikai et al. Immobilized-type chiral packing materials for HPLC based on polysaccharide derivatives
CN102596987B (zh) 用于纯化粘菌素的方法和纯化的粘菌素组分
Silva et al. Multi-milligram resolution and determination of absolute configuration of pentedrone and methylone enantiomers
CN103539831B (zh) 山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途
CN103539833B (zh) 高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途
Oda et al. Avidin protein-conjugated column for direct injection analysis of drug enantiomers in plasma by high-performance liquid chromatography
CN102167777B (zh) 一种分子印迹聚合物的制备方法及应用
CN102174148A (zh) 三嗪类除草剂分子印迹固相萃取材料的制备
Zhang et al. Tartaric acid-based ionic liquid-type chiral selectors: Effect of cation species on their enantioseparation performance in capillary electrophoresis
CN102928526A (zh) 高效液相色谱法分析蛹虫草中腺苷和虫草素含量的方法
CN102407098A (zh) 一种免疫亲和层析介质的制备方法及在纯化河豚毒素中的应用
CN101261203B (zh) 碱溶性香菇多糖提取、分离、纯化及分子量的测定
CN105713074A (zh) 一种硫酸多粘菌素e组分纯化方法
CN101434679A (zh) 分子印迹聚合物的制备及用其分离盐酸克伦特罗的方法
CN103030567A (zh) 一种普萘洛尔药物对映体拆分方法
CN108514864A (zh) 一种甲壳素/氧化石墨烯复合海绵及其制备方法与应用
CN1935176B (zh) 含有总红花黄色素的红花提取物的制备方法
CN103940932A (zh) 一种非生物学筛选抗病毒中药有效成分的方法
CN108129545B (zh) 一种制备雷公藤甲素的方法
Armstrong The evolution of chiral stationary phases for liquid chromatography
CN102311486B (zh) 使用大孔弱酸性阳离子树脂分离提取恩拉霉素的方法
CN106226426A (zh) 一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法
CN103788232A (zh) 一种硫酸乙酰肝素十糖及其制备方法和应用
CN102565414A (zh) 一种用于测定多肽药物与血浆蛋白结合的方法
CN104558125A (zh) 一种纯化多肽类pdgf受体抑制剂的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160629

RJ01 Rejection of invention patent application after publication