CN105699346A - 一种快速检测冰鲜鸡肉中atp的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品领域，涉及一种快速检测冰鲜鸡肉中ATP的方法。该方法是将样品经充分匀浆处理，然后离心匀浆液取上清，利用手持式ATP荧光检测仪读数；再将读数根据预先拟合的标准曲线换算成n ATP的摩尔数，继而算出n ATP。本发明相比于其他测量肉中ATP含量的方法更为简单、快速、可靠，变异系数小。本发明方法可用于市场上流通冰鲜鸡肉产品的新鲜度和货架期评定。

Description

一种快速检测冰鲜鸡肉中ATP的方法

技术领域

本发明适用于食品领域。涉及一种快速检测冰鲜鸡肉中ATP的新方法。

背景技术

ATP(adenosinetriphosphate)三磷酸腺苷，被认为是一种在所有生物体生存和繁殖的细胞合成中必不可少的普遍能量来源，它是一种通用的能量“货币”。自1929年Lohmann从糖分解代谢旺盛的肌肉中首次发现并提取ATP以来，它已被证实在生命细胞的新陈代谢以及各种生化反应的能量供应中扮演着及其重要的角色。然而，动物机体死亡后ATP主要来源于糖酵解，合成少，新陈代谢消耗多，导致ATP不断降解，直至消失。利用鸡屠宰后不同时间肌肉组织中ATP含量，可以判断最初屠宰和加工的时间，从而鉴别鸡肉产品的货架期和新鲜程度。目前，ATP的检测方法可分为层析法，电泳法和光学分析法。其中，层析法中的高效液相色谱是应用最广泛的，但是样品处理繁琐，耗费时间长，而且ATP降解速度快，用色谱法经常检测不到目标峰，不适宜大规模、快速检测。ATP生物发光技术产生于20世纪70年代中期,迄今已经在细胞增殖、细胞毒性和生物量计数等方面得到广泛应用。近年来，很多医疗机构引入便携式ATP荧光仪监测物体表面、医疗器械和手皮肤上清洁度质量或细菌污染量，餐饮行业以此监测工作环境的卫生清洁情况，酒店以此监测客房的卫生状况，食品行业以此监测食品生产设备及环境的卫生安全状况，相比于传统的平板计数，这种方法简单快速，便于推广。然而这种方法一直用来检测表面微生物的数量，且存在变异系数大，结果不准确等问题。迄今为止，尚未发现ATP生物发光技术用于肉组织中ATP含量的检测，更没有一个统一的标准方法。

发明内容

本发明的目的是快速检测屠宰后鸡肉中ATP含量，从而方便鸡肉产品的货架期和新鲜程度。

本发明的技术方案是：将样品经充分匀浆处理，然后离心匀浆液

取上清，利用手持式ATP荧光检测仪读数；再将读数根据预先拟合的标准曲线换算成nATP的摩尔数，继而算出nATP。。该方法中要充分匀浆以使肉液更为均一、细胞破碎更为彻底，避免取样部位问题对实验结果造成的误差影响。本发明具体步骤是：

(1)称取0.5g肉，放于7ml匀质管中，按1:9的比例加4.5ml水，然后每个匀质管中加6粒磁珠。

(2)放冰上冰浴5min，然后6000r/min匀质4次(4min)，做成匀浆液。

(3)取1ml匀浆液，12000r/min离心3min。

(4)取上清10μl，打在预先解冻的ATP检测拭子上。

(5)按下上面的反应液，反应10s后放入手持式ATP荧光检测仪，10s后读RLU数值。

(6)将读的RLU数值乘以1000后再取Log值，然后根据拟合的标准曲线换算成nATP的摩尔数，继而算出nATP。

所述的标准曲线是以标准品ATP摩尔数的lg值为Y轴，ATP检测仪检测数据平均数的lg值为x轴。具体是取不同梯度的ATP标准品稀释液10μl，打在ATP拭子棉签上，装上外套，挤下上面的反应液，反应10s，然后放入手持式ATP检测仪，10s后读RLU数值。每个样品可测量多次，取平均数。然后以标准品ATP摩尔数的lg值为Y轴，ATP检测仪检测数据平均数的lg值为x轴作标准曲线，得出ATP标准品的回归方程式。

根据上述得出的ATP数据可评定冰鲜鸡肉新鲜程度与分级，如表3。

采用本发明方法检测屠宰后不同时段的肉样，实验结果表明，屠宰后鸡肉中ATP含量基本不断降低，与ATP降解规律基本一致。本发明相比于其他测量肉中ATP含量的方法更为简单、快速、可靠，变异系数小。本发明方法可用于市场上流通冰鲜鸡肉产品的新鲜度和货架期评定。

附图说明

图1是实施例一的ATP标准曲线

图2是6个时间段胸、腿肌中ATP含量的变化趋势图。注：X代表胸肌，T代表腿肌。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，以下结合实施例对本发明进一步说明，其中涉及的具体操作和数据不是对本发明的限制。

实施例一：

材料：冰鲜鸡。

试剂：ATP二钠盐水合物、磷酸盐缓冲液(1X)、灭菌水、ATP检测拭子。

仪器：手持式ATP荧光检测仪、Precelly24匀浆器。

(1)ATP标准曲线

ATP标样稀释：将ATP标样溶液用灭菌水逐级稀释成10^-6g/ml，10^-7g/ml，10^-8g/ml，10^-9g/ml，10^-10g/ml。取样10μl，则ATP的摩尔数分别为0.2×10^-11mol，0.2×10^-12mol，0.2×10^-13mol，0.2×10^-14mol，0.2×10^-15mol。

1.2.2ATP标准稀释样测定取不同梯度的ATP稀释液10μl，打在ATP拭子棉签上，装上外套，挤下上面的反应液，反应10s，然后放入便携式ATP检测仪，10s后读数。每个样品测量3次。

根据ATP标准稀释样的测定结果作出标准曲线，如图1所示。经曲线拟合，得出ATP标准品的回归方程式：Y＝0.9006x-15.037，R²＝0.9965，其中Y轴为标准品ATP摩尔数的lg值，x轴为ATP检测仪检测数据平均数的lg值。

注：此方程式不是通用的，每次测样前都要先做标准曲线拟合方程式。

(2)样品中ATP含量测定

冰鲜鸡样本处理：用三管切断法将鸡迅速宰杀，在鸡胴体表面喷75％酒精消毒3min，胸肌取胸大肌，腿肌取髂腓肌，置于无菌密封袋中，分别用X标胸肌，T标腿肌。3只鸡胸、腿肌分别标号X1，X2，X3；T1，T2，T3。整个过程时间控制在15min内，立即-20℃冷冻45min。然后放于4℃保存。分别于死后4h、8h、12h、24h、48h、72h各称取0.5g肉，放于7ml匀质管中，按1:9的比例加4.5ml水，然后每个匀质管中加6粒磁珠，放在冰上冰浴5min，然后6000r/min匀质4次(4min)，做成匀浆液。

样品中ATP含量测定：取匀浆液1ml，置于1.5ml小管中，12000r/min离心3min。取上清10μl，打在预先解冻的ATP检测拭子上。按下上面的反应液，反应10s后放入手持式ATP荧光检测仪，10s后读数。

结果显示：室温下宰杀，-20℃冷冻45min，然后放于4℃保存，在6个不同时间段分别取0.5g肉样,测量ATP含量3次，取平均值，再将3个个体数值平均，结果如下表1所示，

表16个时间段肉样中ATP含量测定结果(单位RLU)

注：X代表胸肌，其数值是X1，X2，X3三个个体的平均值，T代表腿肌，其数值是T1，T2，T3三个个体的平均值。

将0.5g肉中经稀释后的RLU值转化到1g肉中后，根据标准曲线的公式转化成n(ATP)，如下表2,

表26个时间段肉样中ATP含量测定结果(单位mol/g)

注：X代表胸肌，其数值是X1，X2，X3三个个体的平均值，T代表腿肌，其数值是T1，T2，T3三个个体的平均值。

对6个时间段胸、腿肌中ATP含量取对数值，做不同时间段的变化趋势图，如图2。

从上述图表中可以看出，屠宰后，胸肌和腿肌中ATP含量随时间延长，基本呈下降趋势，与ATP降解规律基本吻合。

本发明方法可用于市场上流通冰鲜鸡肉产品的新鲜度和货架期评定。

表3.冰鲜鸡肉新鲜程度与分级

注：因为胸肌和腿肌有很大的相关性，也可以根据实际将腿肌作为评定标准。

Claims (2)

1.一种快速检测冰鲜鸡肉中ATP的方法，其特征在于：将样品经充分匀浆处理，然后离心匀浆液取上清，利用手持式ATP荧光检测仪读数；再将读数根据预先拟合的标准曲线换算成nATP的摩尔数，继而算出nATP。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体步骤是：

(1)称取0.5g肉，放于7ml匀质管中，按1:9的比例加4.5ml水，然后每个匀质管中加6粒磁珠，

(2)放冰上冰浴5min，然后6000r/min匀质4次(4min)，做成匀浆液，

(3)取1ml匀浆液，12000r离心3min，

(4)取上清10μl，打在预先解冻的ATP检测拭子上，

(5)按下上面的反应液，反应10s后放入手持式ATP荧光检测仪，10s后读数

(6)将读的RLU数值乘以1000后再取Log值，然后根据预先拟合的标准曲线换算成nATP的摩尔数，继而算出nATP。