CN105695366B

CN105695366B - 一种芽孢杆菌及其应用

Info

Publication number: CN105695366B
Application number: CN201610199654.0A
Authority: CN
Inventors: 耿丽丽; 束长龙; 邵高祥; 张�杰; 彭琦; 宋福平
Original assignee: Institute of Plant Protection of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Plant Protection of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2016-04-05
Filing date: 2016-04-05
Publication date: 2019-09-27
Anticipated expiration: 2036-04-05
Also published as: CN105695366A

Abstract

本发明涉及芽孢杆菌技术领域，特别涉及一种耐盐芽孢杆菌。所述芽孢杆菌为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）；所述萎缩芽孢杆菌选自被定名为Ba10的菌株，且所述Ba10保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12053；和/或所述萎缩芽孢杆菌选自被定名为Ba27的菌株，且所述Ba27保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12054。其不但能够抑制多种病原菌的生长，而且具有较高浓度的耐盐性。

Description

一种芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及芽孢杆菌技术领域，特别涉及一种抗病耐盐的芽孢杆菌。

背景技术

真菌病害严重危及全球粮食安全，植物病害中有70%-80%是病原真菌的侵染所导致。水稻稻瘟病Pyriculariaoryae Cav.在全球85个国家中的爆发，造成了10%-35%的粮食损失，甚至一些真菌类病害还导致了严重的动植物死亡和灭绝。菌核菌能够侵害400余种植物，包括十字花科、豆科、茄科、菊科和繖形花科等，为油菜三大病害之首，产量损失严重时可达80%。化学防治是目前防治真菌病害最有效的措施，我国每年化学农药的使用量为50-60万吨，对环境和生态带来了严重的污染和危害，在一些国家和地区化学杀菌剂已经被限制使用。而生物防治因其见效快、杀菌谱广、环境友好和不易产生抗性等特点，具有广阔的应用前景。

用于生物防治的微生物种类主要有细菌、真菌、放线菌和病毒。然而，近年来，随着生防细菌的发掘和研究，寻找新的具有病原真菌拮抗作用的细菌难度越来越大，但是筛选新的具有病原真菌拮抗作用的细菌仍然具有重要的科学价值的实用价值。

发明内容

由于盐湖高盐、高渗透压的特殊环境，其中蕴含着丰富的耐盐微生物资源，我国有大小盐湖1000多个，而对盐湖中微生物资源的开发利用相对较少。本研究针对上述问题，结合我国的种植资源，从茶卡盐湖采集的淤泥和湖水样品中分离得到了51株细菌，并对这51株细菌的16S rDNA、gyrB基因、病原真菌拮抗能力和耐盐能力等进行检测分析，旨在获得高效广谱的耐盐生防菌，以期为植物真菌病害的防治及生防菌在高盐地区的应用提供材料。

因此，本发明提供了一种芽孢杆菌（Bacillus），所述芽孢杆菌为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）；所述萎缩芽孢杆菌选自被定名为Ba10的菌株，且所述Ba10保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 12053；和/或所述萎缩芽孢杆菌选自被定名为Ba27的菌株，且所述Ba27保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 12054。

一种如本发明的芽孢杆菌的应用。

在本发明中，所述芽孢杆菌用于防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯萎病、水稻稻瘟病、草莓炭疽病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花黄萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和柑橘疮痂病中的至少一种。

在本发明中，所述芽孢杆菌用于保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选用于保护1-15%的高盐环境下生长的植物，更优选用于保护1-5%的高盐环境下生长的农作物。所述农作物例如可以是：白菜（Brassica pekinensis Rupr.）、水稻（Oryza sativa）、西瓜（Citrullus lanatus）、油菜（Brassica campestris）、小麦（Triticum aestivum）、棉花（Gossypium spp）、辣椒（Capsicum annuum L.）、苹果（Malus pumila Mill.）和草莓（Fragaria ananassa Duch.）等中的至少一种。

一种对本发明上述两种的芽孢杆菌分别进行遗传改良后得到的工程菌。其中，由于该工程菌是以本发明的芽孢杆菌为靶标，而且采取的手段一般是向其中转入和/或敲除特定的基因和/或序列等，因此，该工程菌仍然为芽孢杆菌或者说仍为萎缩芽孢杆菌。另外，所述工程菌可以为提高了对上述病害活性的工程菌。还可以为兼具其他病虫害活性的工程菌株。

一种如本发明的工程菌的应用。

在本发明中，所述工程菌用于防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯萎病、水稻稻瘟病、草莓炭疽病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花黄萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和柑橘疮痂病中的至少一种。

在本发明中，所述工程菌用于保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选用于保护1-15%的高盐环境下生长的植物，更具体地是用于保护1-5%的高盐环境下生长的农作物。所述农作物例如可以是：白菜（Brassica pekinensis Rupr）、水稻（Oryza sativa）、西瓜（Citrullus lanatus）、油菜（Brassica campestris）、小麦（Triticum aestivum）、棉花（Gossypium spp）、辣椒（Capsicum annuum L.）、苹果（Malus pumila Mill.）和草莓（Fragaria ananassa Duch.）等中的至少一种。

一种包含如本发明的芽孢杆菌的组合物。其中的芽孢杆菌可以包括本发明的野生菌株Ba10和/或Ba27，也可以包括对本发明的野生菌株Ba10和/或Ba27进行遗传改良后得到的工程菌。所述组合物可以为固态形式，也可以为液态形式。所述组合物还可以包含与本发明的芽孢杆菌具有增效作用的其他物质，该物质可以是微生物来源杀虫物质，也可以是杀虫化合物。所述组合物进一步可以包括与本发明的芽孢杆菌相配合的辅剂、增稠剂和/或分散剂，例如所述辅剂可以选自棉子油、蓖麻油、桐油、液体石蜡、豆油、A1、A2、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二丁酯等；增稠剂有膨润土、硬脂酸铝、QH凝胶、龙胶粉、F1、黄原胶等：分散剂有拉开粉、NNO、LFS、B1、碳黑等。

一种如本发明的组合物的应用。

一种如本发明所述的组合物在防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯萎病、水稻稻瘟病、草莓炭疽病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花黄萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和柑橘疮痂病中的至少一种中的应用。

一种如本发明所述的组合物在保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选在保护1-15%的高盐环境下生长的植物，更优选在保护1-5%的高盐环境下生长的农作物中的应用。所述农作物例如可以是：白菜（Brassica pekinensis Rupr）、水稻（Oryza sativa）、西瓜（Citrullus lanatus）、油菜（Brassica campestris）、小麦（Triticum aestivum）、棉花（Gossypium spp）、辣椒（Capsicum annuum L.）、苹果（Malus pumila Mill.）和草莓（Fragaria ananassa Duch.）等中的至少一种。

一种包含如本发明的芽孢杆菌的农药制剂。其中的芽孢杆菌可以包括本发明的野生菌株Ba10和/或Ba27，也可以包括对本发明的野生菌株Ba10和/或Ba27进行遗传改良后得到的工程菌。

一种如本发明的农药制剂的应用。

一种如本发明所述的农药制剂在防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯萎病、水稻稻瘟病、草莓炭疽病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花黄萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和柑橘疮痂病中的至少一种中的应用。

一种如本发明所述的农药制剂在保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选在保护1-15%的高盐环境下生长的植物，更优选在保护1-5%的高盐环境下生长的农作物中的应用。所述农作物例如可以是：白菜（Brassica pekinensis Rupr）、水稻（Oryza sativa）、西瓜（Citrullus lanatus）、油菜（Brassica campestris）、小麦（Triticum aestivum）、棉花（Gossypium spp）、辣椒（Capsicum annuum L.）、苹果（Malus pumila Mill.）和草莓（Fragaria ananassa Duch.）等中的至少一种。

在本发明中，术语“保护”的意思是通过预防和/或治疗靶标生物产生的病虫害等，从而使靶标生物免于或减轻遭受所述病虫害的为害。例如通过使用所述芽孢杆菌预防和/或治疗白菜的白菜黑斑病。

附图说明

图1为基于gyrB基因序列构建的系统进化树。

图2为筛选到的菌株Ba10、Ba27及对照菌株B916、Bs168和Ba10316在LB培养基上的生长曲线。

图3为筛选到的菌株Ba10、Ba27及对照菌株B916、Bs168和Ba10316在含10%NaCl的LB培养基上的生长曲线。

图4为筛选到的菌株Ba10、Ba27及对照菌株B916、Bs168和Ba10316在含15%NaCl的LB培养基上的生长曲线。

图5为耐盐生防菌Ba10和Ba27以及对照菌株在高盐PDA培养基中的抑菌能力检测图。

菌种保藏

本发明筛选的一株芽孢杆菌被定名为Ba10，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 12053，保藏日期为2016年01月15日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。其系统分类为Bacillus atrophaeus。

本发明筛选的另一株芽孢杆菌被定名为Ba27，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 12054，保藏日期为2016年01月15日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。其系统分类为Bacillus atrophaeus。

具体实施方式

以下通过优选的实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不构成对本发明的限制。

实施例1

1.1材料

病原菌：14种供试病原真菌白菜黑斑病菌Alternaria brassicae Berk.Saxc、水稻纹枯病菌Thanatephorus cucumeris Frank Donk、苹果轮纹病菌Botryospuaeria berengerianaf.sp. Piricola、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum、水稻稻瘟病菌Pyricularia oryzae Cavara、草莓炭疽病菌Colletotrichum fragariae Brooks、苹果腐烂病菌Cytospora mandshurica、油菜菌核病菌S.sclerotiorum(Lib.) de Bary、小麦赤霉病菌FusaHum graminearum Sehw、棉花黄萎病菌Verticillium dahlia Kleb、辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici和苹果根腐病菌Fusariumspp.、柑橘疮痂病菌Sphaceloma fewcetti和黄瓜黑星病菌Cladosporium cucumerinum由武汉科诺公司提供。

供试菌株：生防菌B916为已经商业化的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）生防菌，对水稻纹枯病菌、蚕豆枯萎病菌等8种病原菌均具有较强的抑菌活性；菌株Bs168为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）模式菌株，常作为表达宿主菌被广泛使用；萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）Ba10316（ATCC 9372）为萎缩芽孢杆菌globigii亚种（B. atrophaeus subsp. globigii），因其产生的芽孢能对热、紫外线、电离辐射和某些化学物质产生很强的抗性，因此该菌株被广泛地应用于芽孢形成、芽孢萌发机制、芽孢耐热机理的研究中。湖水及淤泥样品随机采集自茶卡盐湖（东经99°18′，北纬36°41′），样品置于4°C冰箱保存，待分离。

培养基：样品中菌株分离及培养使用LB液体培养基（胰蛋白胨10.0 g/L，酵母提取物5.0 g/L，NaCl 10.0 g/L，121°C灭菌20 min），LB固体培养基（LB液体培养基加琼脂15 g/L）。拮抗菌耐盐实验使用NaCl含量为10%和15%的液体及固体LB培养基。病原菌对峙实验使用PDA固体培养基，购自BD公司。

引物由Sangon Biotech北京合成部合成，测序由中国农业科学院农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程开放实验室完成，生化及分子生物学试剂均为市售分析纯。

1.2 盐湖中芽孢杆菌的分离

将盐湖淤泥及湖水样品，用灭菌超纯水分别稀释至10^-1和10^-2，取200 μL稀释液均匀涂布于LB固体培养基表面，每个浓度三个重复，30°C培养24 h后挑取所有菌落，在LB固体培养基上画线纯培养。

1.3 抑菌谱的测定

使用平板对峙培养法进行盐湖细菌抑菌谱的测定，将纯化好的细菌接种在LB液体培养基中，30°C，220 r/min震荡活化12 h。供试病原真菌在固体PDA平板上活化生长10 d后，打直径为7 mm的圆形菌饼放置于90 mm PDA固体培养平板中央，在平板对称位置距离菌饼20 mm处放置四个直径为6 mm的无菌滤纸片，加5 μL待测菌液，PDA平板置于28°C培养箱培养，观察有无抑菌圈产生。有抑菌能力菌株进行复筛，每个处理三个重复，测量抑菌半径。

1.4 盐湖中芽孢杆菌的鉴定

分别提取筛选到的细菌的基因组，方法参照《分子克隆指南》。使用16S rDNA通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3′）（SEQ ID NO. 1）和1492R（5′-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3′）（SEQ ID NO. 2），gyrB基因扩增引物UP1F（5′-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3′）（SEQ ID NO. 3）和UP2R（5′-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3′）（SEQ ID NO. 4）对所有细菌进行分子生物学鉴定。PCR扩增反应体系（30 μL）：2×Taq Mix 15 μL，引物各1 μL，模板DNA 1 μL，超纯水12μL。PCR扩增反应条件：95°C预变性5 min；94°C变性1 min，54°C（16S rDNA）或58°C（gyrB基因）退火1min，72°C延伸2 min，30个循环；72°C延伸10 min。PCR产物用0.7%琼脂糖凝胶140V电泳检测，产物送交测序。将测序获得的序列，上传NCBI进行BlastN比对分析，使用MEGA 5.10软件构建系统发育进化树（见图1）。

1.5 拮抗菌耐盐性测定

初测：将盐湖分离得到的所有菌株分别于含10%和15% NaCl的LB固体培养基上划线，30°C培养，观察菌株能否生长。

生长曲线测定：将菌株B916、Bs168、Ba10316、Ba10和Ba27接种于5 mL液体LB培养基试管中，220 r/min，30°C培养12 h，取500 μL相同吸光值（OD_600nm=0.6）菌液分别接种于NaCl含量为10%和15%的50mL液体LB培养基中，30°C，220r/min培养，每隔4 h取1 mL菌液以液体LB培养基为对照，测定OD_600nm的吸光值，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制生长曲线。每个样品三个重复。

2. 结果与分析

2.1 菌株分离及16S rDNA-gyrB基因序列分析鉴定

对从涂布盐湖水和淤泥样品的LB平板上获得菌株分别提取基因组DNA。利用上述1.4中的引物分别进行16S rDNA及gyrB基因的扩增。即，扩增16S rDNA序列（扩增产物的长度约1.5kb）的引物对为：27F如SEQ ID NO. 1，1492R如SEQ ID NO. 2；扩增gyrB序列（扩增产物的长度约1.2kb）的引物对为：UP1F如SEQ ID NO. 3，UP2R如SEQ ID NO. 4。扩增得到的PCR产物送交测序。测序后序列比对结果显示，Ba10的16S rDNA（SEQ ID NO. 5）与萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）Y19的16S rDNA（Genebank No. KF641809.1）的序列相似性为99%，Ba10的gyrB（SEQ ID NO. 6）与萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）UCMB-5137的gyrB（GenebankNo. CP011802.1）的序列相似性为99%；Ba27的16S rDNA（SEQ ID NO. 7）与萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）BKS1-45的16S rDNA（Genebank No. HM585062.1）序列相似性为100%，Ba27的gyrB（SEQ ID NO. 8）与萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）LSSC3的gyrB（Genebank No.GU994861.1）的序列相似性为99%。

2.2 芽孢杆菌抑菌谱测定

使用危害程度较强的14种病原真菌利用平板对峙法对菌株Ba10和Ba27进行抑菌能力测定，结果显示这两株菌对14种供试病原真菌均有抑菌活性。菌株Ba10和Ba27对苹果轮纹、水稻稻瘟、棉花黄萎和柑橘疮痂病原菌的抑菌能力与生防菌B916相当；除菌株Ba10对白菜黑斑病原菌的抑菌能力与标准菌株Ba10316相比无明显差异外，菌株Ba10和Ba27对病原菌的抑菌半径极显著高于菌株Ba10316（P<0.01）（表1）。

表1 生防菌Ba10和Ba27 抑菌能力对比结果

注：数据为平均值±标准误，同行数据后不同大写字母表示达到P<0.01的极显著水平。

2.3 广谱拮抗菌株16s rDNA序列及gyrB序列系统进化树的构建

使用广谱拮抗菌株Ba10和Ba27的gyrB基因序列及一些代表性菌株序列构建系统进化树（图1），结果显示，菌株Ba10和Ba27与萎缩芽孢杆菌B. atrophaeus聚集成簇。结合上述2.1的鉴定结果，判断菌株Ba10和Ba27均属于萎缩芽孢杆菌B. atrophaeus。

2.4 菌株Ba10和Ba27耐盐及生防能力检测

将菌株Ba10和Ba27分别在NaCl含量为10%和15%的LB固体培养基上进行培养，结果显示菌株Ba10和Ba27能够在含有15% NaCl的固体LB培养基上生长。并绘制了耐高盐的拮抗菌株Ba10和Ba27、商业化生防菌B916、枯草芽孢杆菌标准菌株Bs168和萎缩芽孢杆菌Ba10316在高盐环境中的生长曲线，结果表明除Bs168，各菌株在LB液体培养基中的生长速率基本保持一致（图2）；在含10%NaCl的LB液体培养基中菌株Ba10和Ba27的生长速率明显比菌株B916、Bs168和Ba10316高，进入稳定期早于其他菌株，并且稳定期菌株浓度也相对较高（图3）；而上述现象在含有15%NaCl的LB液体培养基中更为明显（图4）；尽管两株菌在高盐溶液中稳定期OD_600nm值都有明显下降，但仍然表现出了较强的适应性。

高盐PDA培养基（NaCl浓度为5%）中的对峙试验结果显示（图5），菌株Ba10和Ba27在高盐PDA培养基上依然能够抑制油菜菌核菌生长。

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 一种芽孢杆菌及其应用

<130> P1602IPP

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 27F

<400> 1

AGAGTTTGATCATGGCTCAG；

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213>人工序列

<220>

<223> 1492R

<400> 2

TACGGYTACCTTGTTACGACTT；

<210>3

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> UP1F

<400> 3

GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA；

<210> 4

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223>UP2R

<400> 4

AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT；

<210> 5

<211> 1503

<212> DNA

<213> 萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）Ba10

<220>

<223> 16SrDNA序列

<400> 5

CCACCTCCGGACTATGTTATAAAGAGGCAGGGGTGCTATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGCTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACACCCCTAGAGATAGGGCTTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAGACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGACGAAGGTCCTTCGCCCCGGCGCCCTCGTTTGC；

<210> 6

<211> 1210

<212> DNA

<213> 萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）Ba10

<220>

<223> gyrB基因序列

<400> 6

AAATAATGTAGGGGAATCGAGGAGCGGTTATAAAGTGTCCGGAGGATTGCATGGTGTGGGTGCCTCTGTCGTAAACGCACTTTCAACGACCCTGGATGTGACCGTTCACCGTGACGGAAAAATTCATTACCAGGCATATGAACGCGGAGTTCCTATGGCTGATGTTGAAGTGATTGGTGAAACAGATACAACCGGAACCATTACTCACTTTGTTCCGGATCCTGAGATTTTTACCGAAACGACGGTATATGATTATGATTTGCTTTCTAGCCGTGTCCGTGAGCTTGCATTCTTAACAAAGGGCGTTAAAATCACGATTGAAGATAAACGCGAAGAAAAAGAACAAAAAAATGAATACTGCTATGAAGGCGGAATTAAAAGCTATGTTGAGTATTTAAACCGTTCGAAAGAAGTCGTTCATGAGGAACCAATTTACATTGAGGGCACAAAGGACGGAATTACGGTTGAAGTCGCTTTGCAATACAACGACAGCTATACAAGCAACATCTATTCATTCGCCAACAATATCAACACATACGAAGGCGGTACACATGAAGCAGGCTTTAAAACAGGTCTGACCCGTGTAATCAATGACTATGCCAGAAAAAAAGGTATTTTCAAAGAAAGTGATCCGAATTTAAGCGGAGATGATGTTAGGGAAGGCTTAACAGCGATTATTTCCATCAAACATCCCGACCCGCAGTTTGAGGGCCAAACCAAAACGAAGCTTGGCAACTCTGAAGCTCGGACAATTACAGATGCGCTATTCTCAGAAGCGCTCGAAACATTTTTGTTTGAAAACCCTGATTCTGCACGAAAAGTGATTGATAAAGGCCTTATGGCTGCCAGAGCACGTATGGCGGCAAAAAAAGCACGTGAGCTGACACGAAGAAAAAGTGCGCTTGAAATTTCAAACTTGCCGGGTAAATTGGCAGACTGTTCATCAAAAGATCCGAGTATTTCTGAACTGTACATCGTAGAGGGAGACTCTGCGGGCGGTTCAGCAAAACAAGGACGCGACCGTCATTTCCAAGCGATTCTGCCGCTCAGAGGTAAAATTCTGAATGTAGAAAAAGCGAGACTTGATAAAATTCTCTCAAATAATGAGGTTCGTTCGATGATCACCGCGCTCGGAACCGGCATAGGCGAAGATTTCAATCTTGAAAAAGCCCGTTACCATAAAGTCGTCATAGACGATCCAAAAGGCCCC；

<210>7

<211> 1462

<212> DNA

<213> 萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）Ba27

<220>

<223> 16SrDNA序列

<400> 7

AGAAAATTGCCGGCGTGCCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGCTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACACCCCTAGAGATAGGGCTTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAGACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGTGACCAGAAGGG；

<210> 8

<211> 1194

<212> DNA

<213> 萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）Ba27

<220>

<223> gyrB基因序列

<400> 8

TCGACGGAGCGGTTATAAGTGTCCGGAGGATTGCATGGTGTGGGTGCCTCTGTCGTAAACGCACTTTCAACGACCCTGGATGTGACCGTTCACCGTGACGGAAAAATTCATTACCAGGCATATGAACGCGGAGTTCCTATGGCTGATGTTGAAGTGATTGGTGATACAGATACAACTGGAACCATTACTCACTTTGTTCCGGATCCTGAGATTTTTACCGAAACGACGGAATATGATTATGATTTGCTTTCTAACCGTGTCCGTGAGCTTGCATTCTTAACAAAGGGCGTTAAGATCACGATTGAAGATAAACGCGAAGAAAAAGAGCGAAAAAATGAATACTGCTATGAAGGCGGAATTAAAAGCTATGTTGAGTATTTAAACCGTTCGAAAGAAGTCGTTCATGAGGAACCAATTTACATTGAGGGCACGAAGGACGGAATTACGGTTGAAGTTGCTTTGCAATACAACGACAGCTATACAAGCAACATCTATTCATTCGCCAACAATATCAACACATACGAAGGCGGTACACATGAAGCAGGCTTTAAAACAGGTCTGACCCGTGTAATCAATGACTATGCCAGAAAAAAAGGTATTTTCAAAGAAAGTGATCCGAATTTAAGCGGAGATGATGTTAGGGAAGGCTTAACAGCGATTATTTCCATCAAACATCCCGACCCGCAGTTTGAGGGCCAAACCAAAACGAAGCTTGGCAACTCTGAAGCTCGGACAATTACAGATGCGCTATTCTCAGAAGCGCTCGAAACATTTTTGTTTGAAAATCCTGACTCTGCACGAAAAGTGATTGATAAAGGCCTTATGGCTGCCAGAGCACGTATGGCGGCAAAAAAAGCACGTGAGCTGACACGAAGAAAAAGTGCGCTTGAAATTTCAAACTTGCCGGGTAAATTGGCAGACTGTTCATCAAAAGATCCGAGTATTTCTGAACTGTACATCGTAGAGGGAGACTCTGCGGGCGGTTCAGCAAAACAAGGACGCGACCGACATTTCCAAGCGATTCTGCCGCTCAGAGGTAAAATTCTGAATGTAGAAAAAGCGAGACTTGATAAAATTCTCTCAAACAATGAGGTTCGTTCGATGATCACCGCGCTCGGAACCGGCATAGGCGAAGATTTCAATCTTGAAAAAGCCCGTACCATAAAGTCGTATATGACGATGCCGGATTCCCCG。

Claims

1.一种芽孢杆菌(Bacillus)，所述芽孢杆菌为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)；所述萎缩芽孢杆菌选自被定名为Ba10的菌株，且所述Ba10保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12053；或所述萎缩芽孢杆菌选自被定名为Ba27的菌株，且所述Ba27保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12054。

2.一种对权利要求1所述的芽孢杆菌进行遗传改良后得到的工程菌。

3.一种组合物，所述组合物包含如权利要求1所述的芽孢杆菌或如权利要求2所述的工程菌。

4.一种农药制剂，所述农药制剂包含如权利要求1所述的芽孢杆菌或如权利要求2所述的工程菌。

5.如权利要求1所述的芽孢杆菌、如权利要求2所述的工程菌、如权利要求3所述的组合物或如权利要求4所述的农药制剂的应用；

所述芽孢杆菌用于防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯萎病、水稻稻瘟病、草莓炭疽病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和柑橘疮痂病中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述芽孢杆菌用于保护10-15％的高盐环境下生长的农作物；所述农作物包括白菜、水稻、西瓜、油菜、小麦、黄瓜、辣椒、苹果和草莓中的至少一种。